常见病原微生物的检测 优秀课件
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食品中常检病原微生物的检验技术优秀课件
易挥发，影响试剂浓度。
思考题
• 1、进行沙门氏菌检验时为什么要进行前增菌和增菌？ • 2、沙门氏菌在三糖铁培养基上的反应结果如何？为什么？
第二节金黄色葡萄球菌 检测
学习目的与要求
1. 掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 2.掌握金黄色葡萄球菌的致病性。 3.掌握金黄色葡萄球菌的检验程序。
一、生物学特性 （一）培养特性
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染 中最常见的病原菌，临床表现多种多样， 可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、 伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、 脓毒症等全身感染。
• 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程 度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次 之。
• 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、 肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。
二、金黄色葡萄球菌检验
（一）检验所需器材与培养基
1、器材 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 恒温培养箱(36℃±1℃)，冰箱(2℃~5℃)，恒温水浴箱(37℃~65℃)， 天平(感量 0.1g)， 均质器，振荡器，无菌吸管：1mL（具 0.01mL 刻度）、（10 mL具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头，无菌锥形瓶 (容量 100mL、500mL)，无菌培养皿(直径90mm)，注射器(0.5mL)， pH计或 pH比色管或精密pH试纸。 2、培养基 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤，7.5%氯化钠肉汤，血琼脂平板， Baird-Parker琼脂平板，脑心浸出液肉汤(BHI)，兔血浆，稀释液 (磷酸盐缓冲液)，营养琼脂小斜面，革兰l)样品+225mL 75%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤，均质
思考题
• 1、进行沙门氏菌检验时为什么要进行前增菌和增菌？ • 2、沙门氏菌在三糖铁培养基上的反应结果如何？为什么？
第二节金黄色葡萄球菌 检测
学习目的与要求
1. 掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 2.掌握金黄色葡萄球菌的致病性。 3.掌握金黄色葡萄球菌的检验程序。
一、生物学特性 （一）培养特性
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染 中最常见的病原菌，临床表现多种多样， 可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、 伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、 脓毒症等全身感染。
• 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程 度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次 之。
• 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、 肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。
二、金黄色葡萄球菌检验
（一）检验所需器材与培养基
1、器材 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 恒温培养箱(36℃±1℃)，冰箱(2℃~5℃)，恒温水浴箱(37℃~65℃)， 天平(感量 0.1g)， 均质器，振荡器，无菌吸管：1mL（具 0.01mL 刻度）、（10 mL具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头，无菌锥形瓶 (容量 100mL、500mL)，无菌培养皿(直径90mm)，注射器(0.5mL)， pH计或 pH比色管或精密pH试纸。 2、培养基 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤，7.5%氯化钠肉汤，血琼脂平板， Baird-Parker琼脂平板，脑心浸出液肉汤(BHI)，兔血浆，稀释液 (磷酸盐缓冲液)，营养琼脂小斜面，革兰l)样品+225mL 75%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤，均质
常见病原微生物的检测共38页文档
常见病原微生物的检测
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯
Thank you
40、人类法律，事物有规律，这是不 容忽视 的。— —爱献 生
6、最大的骄傲于知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯
Thank you
40、人类法律，事物有规律，这是不 容忽视 的。— —爱献 生
6、最大的骄傲于知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
食品中常检病原微生物的检验技术PPT课件
智能化
标准化
借助人工智能、大数据等技术，实现食品 中病原微生物的智能检测和预警，提高食 品安全监管的效率和准确性。
随着检测技术的发展，未来将制定更加完 善的检测标准和规范，确保检测结果的准 确性和可靠性。
THANKS
感谢观看
分子生物学方法
基于核酸扩增和检测的原理，通过检测病原微生物的核酸片段，具 有高灵敏度、高特异性等优点，但操作复杂，成本较高。
未来食品中病原微生物检验技术的发展趋势
快速化
自动化
随着食品安全事件的频发，快速检测食品 中病原微生物的需求越来越高，未来将发 展更多快速、高效的检测技术。
为了提高检测效率和准确性，未来将发展 更多自动化检测设备和技术，减少人为误 差和操作时间。
病毒
病毒对宿主细胞有特殊的吸附和侵入 机制，采用细胞培养、电镜观察、免 疫学等方法进行检测。
根据食品种类和检验目的选择检验技术
肉制品
肉制品中常见的病原微生物有沙 门氏菌、大肠杆菌等，可采用微 生物培养、免疫学检测等方法进
行检测。
乳制品
乳制品中常见的病原微生物有金黄 色葡萄球菌、李斯特菌等，可采用 微生物培养、PCR等方法进行检测。
免疫学方法适用于各种食品中病原微生物的检测，如沙门氏菌、李斯特菌、弓形虫等。
分子生物学方法
总结词
详细描述
适用范围
分子生物学方法是利用分子杂交和聚 合酶链式反应（PCR）等技术，通过 检测病原微生物的基因序列，以确定 其存在。
分子生物学方法具有高灵敏度、高特 异性和快速等优点，适用于各种食品 中病原微生物的检测。常用的分子生 物学方法包括实时荧光定量PCR、巢 式PCR和基因芯片等。
培养法分类
根据培养基的不同，培养法可分为固体培养法和液体培养 法。固体培养法适用于分离和鉴别微生物，而液体培养法 则更适用于大量样本的快速检测。
常见病原微生物的检测PPT
2.最适温度为37℃，最适pH为7.2～7.4 3.在琼脂平板培养24小时，粗糙菌落。菌落呈毛玻璃状，边缘不整齐
，呈卷发状，有一个或数个小尾突起，这是本菌向外伸延繁殖所致。
5
第五页，共81页。
4.在5～10%绵羊血液琼脂平板上，菌落周围无明显的溶 血环，但培养较久后可出现轻度溶血。菌落有粘性，用 接种针钩取可拉成丝，称为“拉丝”现象。
55
第五十五页，共81页。
3.导致疾病
疯牛病：牛海绵状脑病。病牛临床表现为步态不稳、共济失调、搔 痒、烦躁不安等神经症状。
绵羊痒病：它是羊的一种慢性致死性疾病，病羊具有中枢神经系 统变性、剧痒、共济失调、高死亡率等特点。
克-雅氏病：人的一种中枢神经系统变性疾病。其临床症状和病理
组织学变化与疯牛病、绵羊痒病十分相似。
56
第五十六页，共81页。
共同特征：潜伏期长（可达数年至数十年），一旦发病即呈 慢性进行性发展，最终死亡。
副霍乱肠毒素Ace 肠段积液
侵袭力 鞭毛 菌毛
46
第四十六页，共81页。
CT的结构
由1个A亚单位和5个B亚单位构成
的多聚体，不耐热。
（前噬菌体基因编码）
B亚单位： 与小肠粘膜上皮细胞 GM1神经节苷脂受体结 合；
1A+5B
47
第四十七页，共81页。
霍乱典型临床特征
患者出现上吐下泻，泻出物呈“米 泔水样”。 并发症有血容量减少， 循环衰竭 及肾功能衰竭，导致尿闭、电解 质、酸碱平衡失调导致肌肉痉挛。
52
第五十二页，共81页。
一、生物学特性
（一）形态与结构
prion 是一种不含核酸和脂类的疏水性糖蛋白，分子量为 27～30×103，因此又称为 PrP27～30。大小30-50nm，电镜下
，呈卷发状，有一个或数个小尾突起，这是本菌向外伸延繁殖所致。
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第五页，共81页。
4.在5～10%绵羊血液琼脂平板上，菌落周围无明显的溶 血环，但培养较久后可出现轻度溶血。菌落有粘性，用 接种针钩取可拉成丝，称为“拉丝”现象。
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第五十五页，共81页。
3.导致疾病
疯牛病：牛海绵状脑病。病牛临床表现为步态不稳、共济失调、搔 痒、烦躁不安等神经症状。
绵羊痒病：它是羊的一种慢性致死性疾病，病羊具有中枢神经系 统变性、剧痒、共济失调、高死亡率等特点。
克-雅氏病：人的一种中枢神经系统变性疾病。其临床症状和病理
组织学变化与疯牛病、绵羊痒病十分相似。
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第五十六页，共81页。
共同特征：潜伏期长（可达数年至数十年），一旦发病即呈 慢性进行性发展，最终死亡。
副霍乱肠毒素Ace 肠段积液
侵袭力 鞭毛 菌毛
46
第四十六页，共81页。
CT的结构
由1个A亚单位和5个B亚单位构成
的多聚体，不耐热。
（前噬菌体基因编码）
B亚单位： 与小肠粘膜上皮细胞 GM1神经节苷脂受体结 合；
1A+5B
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第四十七页，共81页。
霍乱典型临床特征
患者出现上吐下泻，泻出物呈“米 泔水样”。 并发症有血容量减少， 循环衰竭 及肾功能衰竭，导致尿闭、电解 质、酸碱平衡失调导致肌肉痉挛。
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第五十二页，共81页。
一、生物学特性
（一）形态与结构
prion 是一种不含核酸和脂类的疏水性糖蛋白，分子量为 27～30×103，因此又称为 PrP27～30。大小30-50nm，电镜下
常见病原微生物的检测ppt课件
1 任何分离到A型流感病毒，用0.2mL1:10稀释的无菌尿囊液静 脉或肌肉注射8只4－8周龄易感鸡,10天内的死亡率不低于75%。
2.对所有低致病的H5、H7毒株,血凝素切割位点的氨基酸序列 与高致病性禽流感病毒一致。
3.H5、H7以外的A型流感病毒,可以致死1－5只鸡,在缺乏胰蛋 白酶的情况下,能在细胞上生长形成蚀斑。
可依鉴定项目确定是否为布氏杆菌。经一月培养无细
菌生长，可报告阴性。
编辑版ppt
27
（二）血清学检查
通常作凝集试验，判定凝集效价1： 50可疑，1：100以上为阳性。效价增高4 倍以上时，更有诊断价值。
编辑版ppt
28
第四节炭疽杆菌
炭疽杆菌（Bacillus anthraci）属于需氧 芽胞杆菌属，能引起羊、牛、马等动物 及人类的炭疽病。炭疽杆菌曾被帝国主 义作为致死战剂之一。平时，牧民、农 民、皮毛和屠宰工作者易受感染。皮肤 炭疽在我国各地还有散在发生，不能放 松警惕。
家畜患病没有治疗价值。应全部淘汰，消灭传染源。
编辑版ppt
26
四、微生物学检验
本菌传染性大，要注意防止实验室污染。
（一）分离培养
急性期采集血液，慢性期采取骨髓，接种于双相
肝浸液培养基（一半斜面，一半液体）置37℃
10%CO2环境中培养，每隔2天检查一次，如无细菌生 长则摇荡培养基，使液体浸过斜面上，有细菌生长，
常见病原微生物的检测
编辑版ppt
1
第一节 禽流感病毒
禽流感是禽流行性感冒（Avian Influenza，AI）的简称，这是一种由甲 型流感病毒的一种亚型引起的传染性疾 病综合征，被国际兽疫局定为Ａ类传染 病，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。
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2.对所有低致病的H5、H7毒株,血凝素切割位点的氨基酸序列 与高致病性禽流感病毒一致。
3.H5、H7以外的A型流感病毒,可以致死1－5只鸡,在缺乏胰蛋 白酶的情况下,能在细胞上生长形成蚀斑。
可依鉴定项目确定是否为布氏杆菌。经一月培养无细
菌生长，可报告阴性。
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27
（二）血清学检查
通常作凝集试验，判定凝集效价1： 50可疑，1：100以上为阳性。效价增高4 倍以上时，更有诊断价值。
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28
第四节炭疽杆菌
炭疽杆菌（Bacillus anthraci）属于需氧 芽胞杆菌属，能引起羊、牛、马等动物 及人类的炭疽病。炭疽杆菌曾被帝国主 义作为致死战剂之一。平时，牧民、农 民、皮毛和屠宰工作者易受感染。皮肤 炭疽在我国各地还有散在发生，不能放 松警惕。
家畜患病没有治疗价值。应全部淘汰，消灭传染源。
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26
四、微生物学检验
本菌传染性大，要注意防止实验室污染。
（一）分离培养
急性期采集血液，慢性期采取骨髓，接种于双相
肝浸液培养基（一半斜面，一半液体）置37℃
10%CO2环境中培养，每隔2天检查一次，如无细菌生 长则摇荡培养基，使液体浸过斜面上，有细菌生长，
常见病原微生物的检测
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1
第一节 禽流感病毒
禽流感是禽流行性感冒（Avian Influenza，AI）的简称，这是一种由甲 型流感病毒的一种亚型引起的传染性疾 病综合征，被国际兽疫局定为Ａ类传染 病，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。
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常见病原微生物的检测ppt课件
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三、介绍高致病性禽流感的其他知识
鉴定高致病性禽流感的标准: 最近国际上评价禽流感病毒致病力的经典方法是接种易感鸡。
按照国际标准，能引起接种鸡死亡75％以上的分离株，是高致病 性毒株。尽管接种鸡是确定致病的“黄金标准”，但它不能反应 致死率小于75%的H5或H7亚型病毒的潜在致病力。因此0IE(国际 兽疫局〉根据科学家的建议,推出新鉴定标准。
病原的分离和鉴定可以从活体或尸体分离病毒。
用棉拭子法常可从活体的气管和泄殖腔中分离到病毒， 可用不同大小的棉拭子擦取气管或泄殖腔，然后将拭 子放入灭菌的保存液〈25－50%甘油盐水、肉汤或 1000u/ml青霉素和10mg/mL链霉素的细胞维持液〉中。
病料的采取时间很重要,一般在感染初期或发病急性期 采取。如转为后期则因机体已形成足够的抗体而不易 分离到病毒.
潜伏期一般较短，通常为4－5天，体温急剧上升至
43.3－44.4.c，精神沉郁、拒食、病鸡很快陷于昏睡状
态，有些颈部出现向后扭转的神经症状。病鸡多呈急
性死亡，有的也可能出现呼吸道症状，咳嗽、打喷嚏，
气管出现咯音，流泪等症状，羽毛蓬松，产蛋率下降，
死亡率高低不等。
编辑版ppt
7
二、诊断 1、病原的分离
禽流感病毒具有A型抗原,属于A 型流感病毒,列为禽流感病毒类。 本病毒颗粒呈球形、杆状或长丝 状,为多形性。其直径为80－ 120nm,表面有一层棒状和蘑菇 状的纤突，有囊膜,囊膜下面有 一层膜蛋白,紧紧地包裹着呈螺 旋状对称的核衣壳。
编辑版ppt
3
2、禽流感病毒的分型
流感病毒分为三个不同的抗原型,即A、B、 C三型。其中B、C两型仅能对人致病,A型 可对人、猪、马和禽致病。
临床常见标本的微生物检验ppt课件
• 唾液中口咽部定植菌的浓度可达108 ～ 109/ml。
• 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在 唾液严重污染现象。
（一）采集指征
• 凡是发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性， 并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细 胞总数及中性粒细胞比例明显增高，X线检查提 示肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性 休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道 标本。
同时采集2~3套（不同部位）血培养标本。（即 双瓶双臂同时采集血培养标本。）
婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位） 血培养标本。
为什么要求多次采血？
• （1）菌血症有“持续性”和“暂时性”之分，多次采血可 提高阳性检出率，减少漏检； 两瓶或以上血培养以上血培养结果阳性，细菌鉴定结果相 同，判断为感染菌，作药敏并报告临床。 送检两瓶或以上血培养，仅1瓶结果为阳性，且为潜在的污 染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、气球菌、棒状杆菌等）， 一般作为污染菌。 出现多种细菌在排除污染可能后，可考 虑“复数菌”败血症的诊断。 仅送检1瓶血培养，且培养出上述潜在的污染菌。则其临床 意义不能确定，需与临床医生讨论其可能的临床价值。
经支气管镜抽吸法（支气管肺泡灌洗液、防污染样本毛刷等）
• 直接从肺部感染病灶采集高浓度的病原菌，较为安全，但不能避免咽喉部正 常菌群污染。
•
经人工气道吸引分泌物（导管吸痰、防污染灌洗等）
• 较为采用，但人工气道常有致病菌或定值菌存在，建议采集前先做细胞血筛 查。
•
经气管穿刺吸引物
• 采集到的下呼吸道标本不受上呼吸道污染，常用于厌氧菌培养，但患者不易 接受。
中，剧烈振荡5-10s，然后用接种环将沉淀于管底 的脓痰小片沾出，再放另一个无菌试管中，将同 样的方法反复2次。
• 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在 唾液严重污染现象。
（一）采集指征
• 凡是发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性， 并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细 胞总数及中性粒细胞比例明显增高，X线检查提 示肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性 休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道 标本。
同时采集2~3套（不同部位）血培养标本。（即 双瓶双臂同时采集血培养标本。）
婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位） 血培养标本。
为什么要求多次采血？
• （1）菌血症有“持续性”和“暂时性”之分，多次采血可 提高阳性检出率，减少漏检； 两瓶或以上血培养以上血培养结果阳性，细菌鉴定结果相 同，判断为感染菌，作药敏并报告临床。 送检两瓶或以上血培养，仅1瓶结果为阳性，且为潜在的污 染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、气球菌、棒状杆菌等）， 一般作为污染菌。 出现多种细菌在排除污染可能后，可考 虑“复数菌”败血症的诊断。 仅送检1瓶血培养，且培养出上述潜在的污染菌。则其临床 意义不能确定，需与临床医生讨论其可能的临床价值。
经支气管镜抽吸法（支气管肺泡灌洗液、防污染样本毛刷等）
• 直接从肺部感染病灶采集高浓度的病原菌，较为安全，但不能避免咽喉部正 常菌群污染。
•
经人工气道吸引分泌物（导管吸痰、防污染灌洗等）
• 较为采用，但人工气道常有致病菌或定值菌存在，建议采集前先做细胞血筛 查。
•
经气管穿刺吸引物
• 采集到的下呼吸道标本不受上呼吸道污染，常用于厌氧菌培养，但患者不易 接受。
中，剧烈振荡5-10s，然后用接种环将沉淀于管底 的脓痰小片沾出，再放另一个无菌试管中，将同 样的方法反复2次。
临床常见病原菌检验—需氧G+球菌检验(微生物检验课件)
（1）菌属鉴定试验： 触酶试验：PYR试验：肠球菌、A群链球菌、某些凝 固酶阴性葡萄球菌为（+） 胆汁七叶苷试验：+ 盐耐受试验：+（ 6.5%NaCl 生长试验）
3、鉴定试验
（2）菌属内种鉴定试验：表3-8、表3-9 临床主要鉴定粪肠球菌、屎肠球菌。
第一节 葡萄球菌属
(Staphylococcus)
45种，21个亚种，最常见、最重要的致病菌是 金黄色葡萄球菌
一、生 物 学 性状
（一）形态与染色
G+，球形，无鞭毛、无芽孢， 固体培养基：呈葡萄串状排列 液体培养基：成单、成双或
短链状排列（链球菌）
（二）培养特性
金黄色葡萄球菌金黄色脂溶性色素
表皮葡萄球菌在普通琼 脂平皿上的白色色素
其他鉴定试验
报告
（三）检验方法
1、直接涂片
适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液） 伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等
初步报告： “查见革兰阳性球菌,葡萄状排列，疑为
葡萄球菌”
2、分离培养
血液标本5ml
脑脊液、脓液、
穿刺液、咽拭、
50ml葡萄糖肉汤（增菌）
尿液
粪便、 呕吐物
无菌（7天）
浑浊
血平板
表皮葡萄球菌在血 平板上的白色色素
中等大小，圆形凸起，
不透明、有色、S型菌落。
葡萄球菌菌落形态 （普通琼脂平板）
液体：均匀浑浊生长
表皮葡萄球菌无 溶血环。
金黄色葡萄球菌 有透明溶血环。
耐盐：
10-15% g/L NaCl培养基中生长
选择性平板：
高盐甘露醇平板，致病菌可
分解甘露醇产酸使指示剂
呈淡黄色。
G-菌在此平板上不生长。
3、鉴定试验
（2）菌属内种鉴定试验：表3-8、表3-9 临床主要鉴定粪肠球菌、屎肠球菌。
第一节 葡萄球菌属
(Staphylococcus)
45种，21个亚种，最常见、最重要的致病菌是 金黄色葡萄球菌
一、生 物 学 性状
（一）形态与染色
G+，球形，无鞭毛、无芽孢， 固体培养基：呈葡萄串状排列 液体培养基：成单、成双或
短链状排列（链球菌）
（二）培养特性
金黄色葡萄球菌金黄色脂溶性色素
表皮葡萄球菌在普通琼 脂平皿上的白色色素
其他鉴定试验
报告
（三）检验方法
1、直接涂片
适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液） 伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等
初步报告： “查见革兰阳性球菌,葡萄状排列，疑为
葡萄球菌”
2、分离培养
血液标本5ml
脑脊液、脓液、
穿刺液、咽拭、
50ml葡萄糖肉汤（增菌）
尿液
粪便、 呕吐物
无菌（7天）
浑浊
血平板
表皮葡萄球菌在血 平板上的白色色素
中等大小，圆形凸起，
不透明、有色、S型菌落。
葡萄球菌菌落形态 （普通琼脂平板）
液体：均匀浑浊生长
表皮葡萄球菌无 溶血环。
金黄色葡萄球菌 有透明溶血环。
耐盐：
10-15% g/L NaCl培养基中生长
选择性平板：
高盐甘露醇平板，致病菌可
分解甘露醇产酸使指示剂
呈淡黄色。
G-菌在此平板上不生长。
常见病原微生物标本的送检 PPT课件
质量控制中心
4.医院感染与储菌所关系：人体最大的储菌所为肠道 ，其次为鼻咽部。医院环境中适合细菌生长的非生物性 储菌所（环境储源）也很多，如水槽、氧气湿化瓶、拖 布、潮湿的器材和容器等。许多种医院感染细菌能在体 外生长，其中有一些细菌还具有耐受消毒剂能力。有人 曾做过一个试验，将绿脓杆菌种入新鲜蒸馏水中，经48 小时培养发现有繁殖，经蒸馏水传代后的细菌对戊二醛 、醋酸、二氧化氯具有抵抗力。储菌所不仅是细菌生长 繁殖场所，更重要的是成为细菌基因交换基地，包括耐 药性基因及一些与产毒素和侵袭力有关的基因。因此在 储菌所居留较久的细菌，不仅会发展成多重耐药菌株， 而且也增强了毒力和侵袭性，常常成为医院感染共同来 源或持续长期存在的流行菌株
2
广元市医院感染 质量控制中心
医院感染流行病学
• 来源：人类、环境
• 传播途径：以空气、接触及媒介传播更重要
• 易感人群
–年龄
–免疫状况
–基础疾病
–其他感染
–特殊药物
–创伤
• 医院感染的预防
–去除传染源
–切断传播途径
–增强宿主抗感染能力
3
广元市医院感染 质量控制中心
常见医院感染
• 泌尿道感染 • 呼吸道感染 • 外科伤口感染 • 血流感染 • 其他：烧伤、皮肤和软组织感染，眼和结膜感
采集部位（分泌物：皮肤？口腔？生殖道？肌肉层？器
官组织？）
12
广元市医院感染 质量控制中心
临床微生物标本规范化采集 和送检中国专家共识
牵头专家： 胡必杰、倪语星、马小军、肖永红
13
广元市医院感染 质量控制中心
微生物标本采集及运送的基本原则
• 在抗菌药物使用前采集标本 • 无菌部位的标本更具有临床价值，有菌部位采集
4.医院感染与储菌所关系：人体最大的储菌所为肠道 ，其次为鼻咽部。医院环境中适合细菌生长的非生物性 储菌所（环境储源）也很多，如水槽、氧气湿化瓶、拖 布、潮湿的器材和容器等。许多种医院感染细菌能在体 外生长，其中有一些细菌还具有耐受消毒剂能力。有人 曾做过一个试验，将绿脓杆菌种入新鲜蒸馏水中，经48 小时培养发现有繁殖，经蒸馏水传代后的细菌对戊二醛 、醋酸、二氧化氯具有抵抗力。储菌所不仅是细菌生长 繁殖场所，更重要的是成为细菌基因交换基地，包括耐 药性基因及一些与产毒素和侵袭力有关的基因。因此在 储菌所居留较久的细菌，不仅会发展成多重耐药菌株， 而且也增强了毒力和侵袭性，常常成为医院感染共同来 源或持续长期存在的流行菌株
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医院感染流行病学
• 来源：人类、环境
• 传播途径：以空气、接触及媒介传播更重要
• 易感人群
–年龄
–免疫状况
–基础疾病
–其他感染
–特殊药物
–创伤
• 医院感染的预防
–去除传染源
–切断传播途径
–增强宿主抗感染能力
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常见医院感染
• 泌尿道感染 • 呼吸道感染 • 外科伤口感染 • 血流感染 • 其他：烧伤、皮肤和软组织感染，眼和结膜感
采集部位（分泌物：皮肤？口腔？生殖道？肌肉层？器
官组织？）
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临床微生物标本规范化采集 和送检中国专家共识
牵头专家： 胡必杰、倪语星、马小军、肖永红
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微生物标本采集及运送的基本原则
• 在抗菌药物使用前采集标本 • 无菌部位的标本更具有临床价值，有菌部位采集
病原微生物检测方法 27页PPT文档
直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧 光标记的抗血清,经洗涤后在荧光显微镜下观 察结果。间接法是在检测样品上滴加已知的细 菌特异性抗体,待作用后经洗涤,再加入荧光标 记的第二抗体。
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酶联免疫技术
酶联免疫技术是根据抗原- 抗体的免疫反应与 酶的高效催化作用原理有机结合,通过酶催化 底物进而发生一系列的化学反应,使溶液呈现 出颜色变化,从而显示抗原抗体特异性反应的 存在。
可以分析得出SARS与非SARS 病人血清中的 蛋白质成分变化。该技术不是利用单独的蛋白 质峰的出现和消失来判断SARS ,而是用5 个蛋 白质峰的出现和消失来判断,好比刑侦破案中 甄别5 个手指的指纹,故此称为“指纹图谱”。
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八，LAMP技术
环介导等温扩增(loop—mediated isothermal amplification，LAMP)技术是近年来发展出的一 种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传 统PCR方法相比，LAMP不需要热循环，为等温 扩增。且由于LAMP反应中产生大量的副产物一 白色焦磷酸钾沉淀，扩增产物可不经过电泳，通 过肉眼观察或浊度计即可判定结果。
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二，血清免疫学方法
免疫学技术是利用特异性抗原抗体反应,观察和研究 组织细胞、特定抗原(抗体)的定性和定量技术。为了 显示和观察这种抗原抗体反应,需要预先将某种标记 物结合到抗体上,借标记物的荧光或酶的有色反应、 放射性或高电子密度,在光镜或电镜下进行定性、定 位或定量研究。
荧光抗体技术 酶联免疫技术
用于检测：丙型肝炎病毒(HCV) 、严重急性呼吸 综合征冠状病毒(SARS—CoV) 、乙脑病毒(JEV) 、 甲型流感病毒(AIV) 、 腮腺炎病毒(MV)等。
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酶联免疫技术
酶联免疫技术是根据抗原- 抗体的免疫反应与 酶的高效催化作用原理有机结合,通过酶催化 底物进而发生一系列的化学反应,使溶液呈现 出颜色变化,从而显示抗原抗体特异性反应的 存在。
可以分析得出SARS与非SARS 病人血清中的 蛋白质成分变化。该技术不是利用单独的蛋白 质峰的出现和消失来判断SARS ,而是用5 个蛋 白质峰的出现和消失来判断,好比刑侦破案中 甄别5 个手指的指纹,故此称为“指纹图谱”。
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八，LAMP技术
环介导等温扩增(loop—mediated isothermal amplification，LAMP)技术是近年来发展出的一 种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传 统PCR方法相比，LAMP不需要热循环，为等温 扩增。且由于LAMP反应中产生大量的副产物一 白色焦磷酸钾沉淀，扩增产物可不经过电泳，通 过肉眼观察或浊度计即可判定结果。
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二，血清免疫学方法
免疫学技术是利用特异性抗原抗体反应,观察和研究 组织细胞、特定抗原(抗体)的定性和定量技术。为了 显示和观察这种抗原抗体反应,需要预先将某种标记 物结合到抗体上,借标记物的荧光或酶的有色反应、 放射性或高电子密度,在光镜或电镜下进行定性、定 位或定量研究。
荧光抗体技术 酶联免疫技术
用于检测：丙型肝炎病毒(HCV) 、严重急性呼吸 综合征冠状病毒(SARS—CoV) 、乙脑病毒(JEV) 、 甲型流感病毒(AIV) 、 腮腺炎病毒(MV)等。
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2.在活体或未经解剖的尸体内，则不能形成芽胞。芽胞呈椭 圆形，位于菌体中央，其宽度小于菌体的宽度。 3.形成荚膜是毒性特征。 4.炭疽杆菌受低浓度青霉素作用，菌体可肿大形成园珠，称 为“串珠反应”。这也是炭疽杆菌特有的反应。
（二）培养特性
1.本菌专性需氧或兼性厌氧，在普通培养基中易繁殖。 2.最适温度为37℃，最适pH为7.2～7.4 3.在琼脂平板培养24小时，粗糙菌落。菌落呈毛玻璃状，边缘
2.将标本直接涂片，沙黄荚膜染色镜检，观察形态及荚膜特 征，可以初步帮助诊断。
3.确诊应进行血平板分离培养，37℃孵育12～15小时， 钩取可疑菌落，进行青霉素串珠试验，噬菌体裂解试 验，碳酸氢钠平板二氧化碳培养。荚膜肿胀试验和小 白鼠致病力试验等与其他需氧芽胞杆菌进行鉴别确定。
四、特异防治
第一节 布鲁氏杆菌（二）
一、生物学性状
1.形态染色 本菌属初次分离培养时多呈小球杆状，毒力菌株有荚膜，经
传代培养渐呈杆状，革兰氏染色阴性。 我国流行的是羊、牛、猪布氏杆菌
2.培养特性
本菌为严格需氧菌； 牛布氏杆菌在初次分离时，需在5～10%CO2环境中才能生
长，最适温度37℃，最适的pH6.6～7.1，营养要求高，生 长时需硫胺素，烟草酸和生物素，泛酸钙等，实验室常用 肝浸液培养基或改良厚氏培养基。 此菌生缓慢，培养48小时后才出现透明的小菌落，鸡胚培 养也能生长。
触污染物品可发生下列疾病： 1．皮肤炭疽，最常见，多发生于屠宰或毛刷工人及饲养
员。 2．纵隔障炭疽， 少见。由吸入病菌芽胞所致，多发生于
皮毛工人，病死率高。病初似感冒，进而出现严重的支气 管肺炎，可在2～3天内死于中毒性休克。
3．肠炭疽， 由食入病兽肉制品所致，以全身中毒症 状为主，并有胃肠道溃疡、出血及毒血症，发病后2～ 3日内死亡。
（三）抵抗力
繁殖体抵抗力不强，易被一般消毒剂杀灭，而芽胞抵抗力 强，在干燥的室温环境中可存活数十年，在皮毛中可存活 数年。牧场一旦被污染，芽胞可存活数年至数十年。煮沸 10分钟或干热140℃3小时可将芽胞杀死。炭疽芽胞对碘特 别敏感，对青霉素、链霉素、卡那霉素等高度敏感。
二、致病性与免疫性
一）致病性 人类主要通过工农业生产而感染。机体抵抗力降低时，接
不整齐，呈卷发状，有一个或数个小尾突起，这是本菌向外伸 延繁殖所致。
4.在5～10%绵羊血液琼脂平板上，菌落周围无明显的 溶血环，但培养较久后可出现轻度溶血。菌落有粘性， 用接种针钩取可拉成丝，称为“拉丝”现象。
5.在普通肉汤培养18～24小时，管底有絮状沉淀生菌落（有荚膜），而无 毒株则为粗糙状。
第一节 炭疽杆菌（一）
炭疽杆菌（Bacillus anthraci）属于需氧芽胞杆菌属，
能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。炭疽杆菌曾被帝国主 义作为致死战剂之一。
（一）生物学性状 1.菌体粗大，排列似竹节状，无鞭毛，无动力，革兰氏染色阳性，
本菌在氧气充足，温度适宜（25～30℃）的条件下易形成芽胞。
（二）血清学检查 通常作凝集试验，判定凝集效价1：50可疑，1：100 以上为阳性。效价增高4倍以上时，更有诊断价值。
（三）酶联免疫吸附检测
（四）PCR检测 此法敏感、特异、快速，实时荧光定量PCR已用于布 氏杆菌特异性基因的检测，即在PCR反应体系中加荧 光基团，利用荧光信号积累，实时监测整个过程。通 过标准曲线可进行定量。
三、主要症状
人感染布氏杆菌表现乏力，全身软弱，食欲不振，失眠，咳 嗽，有白色痰，可听到肺部干鸣，多呈波浪热，也有稽留热、 不规则热或不发热。
盗汗或大汗，一个或多个关节发生无红肿热的疼痛，肌肉酸 痛，由于关节和肌肉疼痛难忍，即使不发烧也不能劳动，成为 能吃不能活懒汉，故该病又被称作"懒汉病"。
病灶发生在生殖器官，影响生育，严重者可引起死亡。
上述疾病若引起败血症时，可继发“炭疽性脑膜炎”。 炭疽杆菌的致病性取决于荚膜和毒素的协同作用。
（二）免疫性
注射炭疽外毒素中保护性抗原于机体，能形成抗毒素免疫， 对受染炭疽有保护作用。但单纯的荚膜抗体对机体没有保护 作用。病后可获较强的免疫力。
三、微生物学检查
1.采集皮肤炭疽的脓液、渗出物，肠炭疽的粪便以及病人的 的血液等送检，兽尸禁止解剖，可割取耳朵或舌尖一片送检。
常见病原微生物的检测
遗留问题
兔血浆制备:无菌采取兔心脏血,以1份灭菌的3.8%枸橼 酸钠液抗凝剂加4份兔血的比例充分混匀,离心,吸取上 清液即为原兔血浆,分装成1ml/支或0.5ml/支;
另用灭菌生理盐水稀释兔血浆,制成4倍稀释血浆(以下 简称为稀释兔血浆),分装同上,于-18℃以下冰冻保存,供 试验
3.抵抗力
在自然界中抵抗力较强，在病畜的脏器和分泌物中，一 般能存活4个月左右，在食品中约能生存2个月。对低温 的抵抗力也强，对热和消毒剂抵抗力弱。对链霉素、氯 霉素和四环素等均敏感。
二、致病性和免疫性
本菌侵入人体后，被吞噬细胞吞噬，由于本菌具有荚膜，能抵 抗吞噬细胞的吞噬消毁，并能在该细胞内增殖。反复出现菌血 症。由于内毒素的作用，病人出现发热、无力等中毒症状，血 流中细菌逐步消失，体温也逐渐消退。细菌在细胞内繁殖至一 定程度时，再次进入血流又出现菌血症，体温再次上升，反复 呈波浪热型。
1.预防人类炭疽首先应防止家畜炭疽的发生。家畜炭疽 感染消灭后，人类的传染源也随之消灭。
2.目前我国使用的炭疽活疫菌，作皮上划痕接种，免疫 力可维护半年至一年。青霉素是治疗炭疽的首选药物， 对肠道及吸入性炭疽治疗困难，有条件的可用抗血清。
五、检测方法
1.环状沉淀反应 2.噬菌体裂解实验 3.荚膜荧光抗体检测 4.质谱分析法
四、微生物学检验
本菌传染性大，要注意防止实验室污染。 （一）分离培养 急性期采集血液，慢性期采取骨髓，接种于双相肝浸液培养基
（一半斜面，一半液体）置37℃10%CO2环境中培养，每隔2 天检查一次，如无细菌生长则摇荡培养基，使液体浸过斜面 上，有细菌生长，可依鉴定项目确定是否为布氏杆菌。经一 月培养无细菌生长，可报告阴性。