血清学鉴定实验 PPT
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➢ 当抗原过多或抗体过多，则抗原抗体的结合不能 形成大的复合物，因而抑制可见反应的出现，这 一现象称为带现象。
➢ 抗体过多出现的抑制现象称前带现象，而抗原过 多出现的抑制现象称后带现象。
➢ 为了克服带现象，在进行血清学试验时，需将抗 原或抗体作适当稀释。
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
❖ O抗原:是一种沙门氏菌细胞壁表面的 耐热多糖抗原 ，100 ℃，2.5 h不被破 坏，它的特异性依赖于细胞壁脂多糖 侧链多糖的组成。
❖ H抗原:是一种蛋白质性鞭毛抗原，共 有63种，60 ℃加热30～60 min及酒精 作用均可破坏其抗原性，但能抵抗甲 醛。
❖ Vi抗原: 是一种N-乙酰-D-半乳糖胺糖 醛酸聚合物，60 ℃加热1 h即破坏其凝
抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）是指抗原与 相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内 （invivo），也可发生于体外(invitro)。体内反应可介导吞 噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用；体外反应则根据抗原的物 理性状、抗体的类型及参与反应的介质（例如电解质、补体、 固相载体等）不同，可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的 反应及中和反应等各种不同的反应类型。因抗体主要存在于血 清中，在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验，所以体外抗 原抗体反应亦称为血清反应（erologicreaction）。
＋
－
颗粒状凝集物
均匀混浊
沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表
注意事项wk.baidu.com
1.生理盐水端应不出现凝集颗粒。 2.沙门菌Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应抗体
发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意，需事 先加热破坏Vi抗原，O抗原才得以与相应的O诊 断血清发生凝集。
抗原抗体反应特点
•反应的二阶段性 结合阶段-----反应发生快，几秒钟至几分钟 。 反应阶段-----较慢，需几分钟、几十分钟或更长时间 。
抗原抗体反应类凝型集--反---应凝集反应
颗粒性抗原（如细菌、红血球等）或吸附在乳 胶、白陶土、离子交换树脂和红细胞的抗原与 其特异性抗体结合后，在有电介质存在时，凝 聚成肉眼可见的凝集小块。
凝集原——凝集素
玻片法 直接凝集反应
试管法
血清学鉴定
实验目的
掌握细菌的血清学鉴定法 。
实验原理
根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点， 用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。
实验材料
1.菌种 待检细菌 2.试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3.其他 载玻片
沙门氏菌诊断血清（11种）
O抗原、H抗原和Vi抗原
抗原抗体反应条件
• 抗原 • 抗体
3. 环境因素： （1）电介质：0.85%NaCI；
（2）温度：37或56 （3）pH值：7.0
（4）振荡：适当的机械振 （5）反应时间
抗原抗体反应的特点
• 特异性和交叉性
若两种抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交 叉反应。亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高 。
相H抗原的，要用位相变异的方法再检查其另一个相。单相菌不必作位 相变异检查。 6. 综合O和H因子血清以及Vi因子血清的检查结果，按照考夫曼-怀特沙门 氏菌属抗原表解判定沙门氏菌的菌型。
实验方法
50ul血清+待检菌
50ulNS+待检菌
注意：
先用A－F和 Vi血清检测，根据 结果再进行其他鉴定。
结果判断
微生物抗原成分-----细菌抗原成分
•菌体抗原:革兰氏阴性菌的菌体抗原称O抗原--脂多糖蛋白质的复合物
•鞭毛抗原称为H抗原
•表面抗原:不同细菌的表抗原名称不同.大肠杆 菌的表面抗原称为封套抗原或K抗原,肺炎双球菌 的叫荚膜抗原,伤寒沙门氏菌的表面抗原称为Vi 抗原
细菌抗原
细菌的各种抗原
抗原抗体反应
沙门氏菌的血清鉴定的方法
❖ 用O、H 和Vi因子血清与待检的菌株作玻片凝 聚试验。
1.先用O因子血清确定菌株所属的 O群及O抗原 的各种成分。
2.再用H因子血清检查其第1相和第2相的H抗原 以确定血清型。
3.必要时还要用Vi血清检查(目前有3种)。
沙门氏菌的血清型鉴定步骤
1. 先用A~F多价O血清检查，确定菌株是否在A~F六个O群的范围内。 2. 再用代表六个O群的O因子血清检查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、
例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表. 鼠伤寒沙门氏菌: O抗（1，4，[5]，12）， 第Ⅰ相H抗原（i） 第Ⅱ相H抗原(1,2)。
它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（ 1，4，[5]，12：i：1，2）
❖ [ ]内的O抗原可能存在或不存在。 ❖ [ ]内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。
集性和免疫原性。
沙门氏菌的主要抗原组成
O抗原：至少58种, 含相同抗原组分归为一组， 引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组。
H抗原：分为Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示， Ⅱ相以1、2、3等表示。
Vi抗原：抗原性弱，不稳定，可阻止O抗原与其 相应抗体的凝集反应。
沙门氏菌菌型的表示方法
❖ 血清型以数字和字母表示.
《临床微生物学检验》实验
血清学实验
v 血清学诊断：是指用已知细菌的特异性抗 原检测患者血清中相应抗体的方法，以诊 断感染性疾病。（用已知抗原检测血清中 的特异性抗体）
❖ 血清学鉴定：即采用含有已知特异性抗体 的免疫血清（诊断血清）与分离培养出的 未知纯种细菌或标本中的抗原进行血清学 反应，以确定病原菌的种或型。 （用已知 抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原）
O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。 3. 确定O群之后，分别用HA(a、b、c、d、i、z10、z29）HB、HC、HD四种
多价H血清检查。 4. 用3.所确定的多价H血清所包括的所有H因子血清逐一检查定为第1相或
第2相H抗原。 5. 检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原，或检出第2相H抗原而未检出第1
• 反应的可逆性
抗原与抗体的结合为分子表面的结合，结合的适 宜温度为0～40℃、pH在4.0～9.0范围内。如温 度超过60℃或pH降到3.0以下，或加入解离剂台 硫氰化钾、尿素等，则抗原抗体复合物又可重新 解离，解离后的抗原或抗体性质不改变。
抗原抗体反应特点
• 最适比和带现象
➢ 只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的 结合反应。
➢ 抗体过多出现的抑制现象称前带现象，而抗原过 多出现的抑制现象称后带现象。
➢ 为了克服带现象，在进行血清学试验时，需将抗 原或抗体作适当稀释。
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
❖ O抗原:是一种沙门氏菌细胞壁表面的 耐热多糖抗原 ，100 ℃，2.5 h不被破 坏，它的特异性依赖于细胞壁脂多糖 侧链多糖的组成。
❖ H抗原:是一种蛋白质性鞭毛抗原，共 有63种，60 ℃加热30～60 min及酒精 作用均可破坏其抗原性，但能抵抗甲 醛。
❖ Vi抗原: 是一种N-乙酰-D-半乳糖胺糖 醛酸聚合物，60 ℃加热1 h即破坏其凝
抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）是指抗原与 相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内 （invivo），也可发生于体外(invitro)。体内反应可介导吞 噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用；体外反应则根据抗原的物 理性状、抗体的类型及参与反应的介质（例如电解质、补体、 固相载体等）不同，可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的 反应及中和反应等各种不同的反应类型。因抗体主要存在于血 清中，在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验，所以体外抗 原抗体反应亦称为血清反应（erologicreaction）。
＋
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颗粒状凝集物
均匀混浊
沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表
注意事项wk.baidu.com
1.生理盐水端应不出现凝集颗粒。 2.沙门菌Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应抗体
发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意，需事 先加热破坏Vi抗原，O抗原才得以与相应的O诊 断血清发生凝集。
抗原抗体反应特点
•反应的二阶段性 结合阶段-----反应发生快，几秒钟至几分钟 。 反应阶段-----较慢，需几分钟、几十分钟或更长时间 。
抗原抗体反应类凝型集--反---应凝集反应
颗粒性抗原（如细菌、红血球等）或吸附在乳 胶、白陶土、离子交换树脂和红细胞的抗原与 其特异性抗体结合后，在有电介质存在时，凝 聚成肉眼可见的凝集小块。
凝集原——凝集素
玻片法 直接凝集反应
试管法
血清学鉴定
实验目的
掌握细菌的血清学鉴定法 。
实验原理
根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点， 用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。
实验材料
1.菌种 待检细菌 2.试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3.其他 载玻片
沙门氏菌诊断血清（11种）
O抗原、H抗原和Vi抗原
抗原抗体反应条件
• 抗原 • 抗体
3. 环境因素： （1）电介质：0.85%NaCI；
（2）温度：37或56 （3）pH值：7.0
（4）振荡：适当的机械振 （5）反应时间
抗原抗体反应的特点
• 特异性和交叉性
若两种抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交 叉反应。亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高 。
相H抗原的，要用位相变异的方法再检查其另一个相。单相菌不必作位 相变异检查。 6. 综合O和H因子血清以及Vi因子血清的检查结果，按照考夫曼-怀特沙门 氏菌属抗原表解判定沙门氏菌的菌型。
实验方法
50ul血清+待检菌
50ulNS+待检菌
注意：
先用A－F和 Vi血清检测，根据 结果再进行其他鉴定。
结果判断
微生物抗原成分-----细菌抗原成分
•菌体抗原:革兰氏阴性菌的菌体抗原称O抗原--脂多糖蛋白质的复合物
•鞭毛抗原称为H抗原
•表面抗原:不同细菌的表抗原名称不同.大肠杆 菌的表面抗原称为封套抗原或K抗原,肺炎双球菌 的叫荚膜抗原,伤寒沙门氏菌的表面抗原称为Vi 抗原
细菌抗原
细菌的各种抗原
抗原抗体反应
沙门氏菌的血清鉴定的方法
❖ 用O、H 和Vi因子血清与待检的菌株作玻片凝 聚试验。
1.先用O因子血清确定菌株所属的 O群及O抗原 的各种成分。
2.再用H因子血清检查其第1相和第2相的H抗原 以确定血清型。
3.必要时还要用Vi血清检查(目前有3种)。
沙门氏菌的血清型鉴定步骤
1. 先用A~F多价O血清检查，确定菌株是否在A~F六个O群的范围内。 2. 再用代表六个O群的O因子血清检查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、
例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表. 鼠伤寒沙门氏菌: O抗（1，4，[5]，12）， 第Ⅰ相H抗原（i） 第Ⅱ相H抗原(1,2)。
它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（ 1，4，[5]，12：i：1，2）
❖ [ ]内的O抗原可能存在或不存在。 ❖ [ ]内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。
集性和免疫原性。
沙门氏菌的主要抗原组成
O抗原：至少58种, 含相同抗原组分归为一组， 引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组。
H抗原：分为Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示， Ⅱ相以1、2、3等表示。
Vi抗原：抗原性弱，不稳定，可阻止O抗原与其 相应抗体的凝集反应。
沙门氏菌菌型的表示方法
❖ 血清型以数字和字母表示.
《临床微生物学检验》实验
血清学实验
v 血清学诊断：是指用已知细菌的特异性抗 原检测患者血清中相应抗体的方法，以诊 断感染性疾病。（用已知抗原检测血清中 的特异性抗体）
❖ 血清学鉴定：即采用含有已知特异性抗体 的免疫血清（诊断血清）与分离培养出的 未知纯种细菌或标本中的抗原进行血清学 反应，以确定病原菌的种或型。 （用已知 抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原）
O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。 3. 确定O群之后，分别用HA(a、b、c、d、i、z10、z29）HB、HC、HD四种
多价H血清检查。 4. 用3.所确定的多价H血清所包括的所有H因子血清逐一检查定为第1相或
第2相H抗原。 5. 检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原，或检出第2相H抗原而未检出第1
• 反应的可逆性
抗原与抗体的结合为分子表面的结合，结合的适 宜温度为0～40℃、pH在4.0～9.0范围内。如温 度超过60℃或pH降到3.0以下，或加入解离剂台 硫氰化钾、尿素等，则抗原抗体复合物又可重新 解离，解离后的抗原或抗体性质不改变。
抗原抗体反应特点
• 最适比和带现象
➢ 只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的 结合反应。