血清学鉴定实验 PPT
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血清学诊断技术PPT课件
集,此孔稀释倍数为1个工作单位
12
中国农大动物医学院
鸡新城疫红细胞凝集试验（HA试验） (过程图)
孔号
1
稀释倍数
5
生理盐水（毫升） 4*
病毒液（毫升）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
10
20
40 80 160 320 640 1280
对照
25
25
25 25 25 25
25
25
25
25
25
25 25 25 25
3
中国农大动物医学院
三 器材 1.血凝板、 2.微量移液器 3.标准抗原 4.1%红细胞悬浮液 5.被检血清 6.稀释液
4
中国农大动物医学院
四 操作程序 （一）0.5％――１％红细胞的准备
1.阿氏液(抗凝剂)的配制
葡萄糖
1.866ｇ
柠檬酸钠 0.8ｇ
柠檬酸
0.055ｇ
氯化钠 0.418g
蒸馏水 100ml
15
中国农大动物医学院
2 操作步骤 (1) 每孔加25ul的稀释液: (2) 第1孔加25ul待检血清，反复吸吹10次; 吸取25ul于第 (3) 2孔，以此类推倍比稀释至第11孔; 最后从第11孔取2 (4) 5ul弃去,第12孔为抗原对照; (3) 每孔加4单位抗原;室温下( 18-22℃)作用30分 (4) 取1％红细胞25ul加于各孔中 (5) 将血凝板振荡1分钟 (6) 室温作用30-45分钟（禽流感 37℃）观察结果 (7) 结果判定 将血凝板呈45°竖起观察
5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白 细胞薄膜，将沉淀的细胞加稀释液（生理盐水）洗 涤，再用离心机3000转/分钟离心5-10分钟，充 去上清液，再加稀释液洗涤，
血清学试验
•
用已知免疫血清与细菌的可溶性抗原
接触，在有适量电解质存在时，于两液交
界面形成肉眼可见的白色沉淀环，来指示 抗原的存在。
抗原、抗体必须澄清
Ag
抗体比重大，可形成清晰的界面
Ab
• （三）荚膜肿胀试验
•
1.原理
•
用荚膜免疫血清（含抗体）与检材中细菌的荚膜抗原特异性
结合形成复合物，使荚膜呈肿胀现象。
•
2.方法
• （四）制动试验 • 原理 将特异性抗血清与相应运动活泼的细菌
悬液混合，则抗鞭毛抗体与鞭毛抗原结合，使 鞭毛强直、相互粘着而失去动力，细菌运动停 止，从而证明相应细菌的存在。 • 方法 将待检标本或增菌培养液1滴置于玻片 上，用显微镜观察细菌运动情况。再于待检标 本上加1滴适当稀释的抗血清，混匀，作悬滴 镜检。 • 结果 若滴加抗血清3～5分钟内，细菌运动停 止，菌体凝集成块为制动试验阳性；反之，滴 加抗血清后，细菌运动无改变为制动试验阴性。
•
（1）处理标本
•
标本用蒸馏水洗涤，接种于小鼠皮下，次日抽取皮下渗出液
（2）取洁净玻片一张，两侧各加待测 菌1～2接种环，于一侧加抗血清，另一 侧加正常兔血清，混匀；再于两侧各加 1％美蓝水溶液，加盖玻片，湿盒内室 温5～10分钟。
标本
（3）结果 阳性：试验侧为蓝色菌体周围可见界限清晰、厚薄不等的无 色环状物。对照侧无此现象。 阴性：试验侧与对照侧均不产生无色环状物为阴性。
• 原理
• （二）固相酶联免疫试验（ELISA）
• 1.基本原理 • ⑴使抗原和抗体结合到某种固相载体表面，并保持其
免疫活性。 • ⑵使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或抗体，这
种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活 性。 • ⑶在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原） 和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗 原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的 抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载 体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加 如酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产 物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜 色反应的深浅进行定性或定量分析。
血清学鉴定实验-图文
➢ 当抗原过多或抗体过多，则抗原抗体的结合不能 形成大的复合物，因而抑制可见反应的出现，这 一现象称为带现象。
➢ 抗体过多出现的抑制现象称前带现象，而抗原过 多出现的抑制现象称后带现象。
➢ 为了克服带现象，在进行血清学试验时，需将抗 原或抗体作适当稀释。
抗原抗体反应特点
反应的二阶段性 结合阶段-----反应发生快，几秒钟至几分钟 。 反应阶段-----较慢，需几分钟、几十分钟或更长时间 。
O1 O2 O4 O5 O7 O8 O9 O10 O11 O14 O15 O19 O20 O27 O34 O46 O3,19 Ha Hb Hc Hd Hf Hg Hh Hi Hk Hm Hn Hp Hr
Hs Ht Hu Hv Hw Hx Hy Hz Hz6 Hz10
Hz13 Hz15 Hz28 Hz29 H2 H5 Hlv HA HB HC HD Vi
待检菌株。 4.培养后，其已知相细菌的动力受到抑制，解离出另一相的细菌，并向周
围蔓延生长，形成一个大的菌落。 5.检查其菌落的边缘部分，即可确定该菌株的另一相H抗原。 6.该方法通常1~3天内可以有结果。
位相变异试验的方法
❖ U形管法 ❖ 小玻管法 ❖ 小套管法 ❖ 软琼脂斜面法
59种沙门氏菌的血清列表
2.再用H因子血清检查其第1相和第2相的H抗原 以确定血清型。
3.必要时还要用Vi血清检查(目前有3种)。
沙门氏菌的血清型鉴定步骤
1. 先用A~F多价O血清检查，确定菌株是否在A~F六个O群的范围内。 2. 再用代表六个O群的O因子血清检查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、
O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。 3. 确定O群之后，分别用HA(a、b、c、d、i、z10、z29）HB、HC、HD四种
➢ 抗体过多出现的抑制现象称前带现象，而抗原过 多出现的抑制现象称后带现象。
➢ 为了克服带现象，在进行血清学试验时，需将抗 原或抗体作适当稀释。
抗原抗体反应特点
反应的二阶段性 结合阶段-----反应发生快，几秒钟至几分钟 。 反应阶段-----较慢，需几分钟、几十分钟或更长时间 。
O1 O2 O4 O5 O7 O8 O9 O10 O11 O14 O15 O19 O20 O27 O34 O46 O3,19 Ha Hb Hc Hd Hf Hg Hh Hi Hk Hm Hn Hp Hr
Hs Ht Hu Hv Hw Hx Hy Hz Hz6 Hz10
Hz13 Hz15 Hz28 Hz29 H2 H5 Hlv HA HB HC HD Vi
待检菌株。 4.培养后，其已知相细菌的动力受到抑制，解离出另一相的细菌，并向周
围蔓延生长，形成一个大的菌落。 5.检查其菌落的边缘部分，即可确定该菌株的另一相H抗原。 6.该方法通常1~3天内可以有结果。
位相变异试验的方法
❖ U形管法 ❖ 小玻管法 ❖ 小套管法 ❖ 软琼脂斜面法
59种沙门氏菌的血清列表
2.再用H因子血清检查其第1相和第2相的H抗原 以确定血清型。
3.必要时还要用Vi血清检查(目前有3种)。
沙门氏菌的血清型鉴定步骤
1. 先用A~F多价O血清检查，确定菌株是否在A~F六个O群的范围内。 2. 再用代表六个O群的O因子血清检查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、
O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。 3. 确定O群之后，分别用HA(a、b、c、d、i、z10、z29）HB、HC、HD四种
血清学实验教学PPT课件
免疫学（分子免疫学）
血清学反应的实质
抗原抗体结合反应
•在体内表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和
毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤。 •在体外，由于参与反应的抗原物理性状以及 反应条件的不同，可出现凝集、沉淀、细胞 溶解和补体结合等反应。
血清学实验的基本原理
分子表面结合（非共价键结合） 亲水胶体转化为疏水胶体
建立细胞免疫学说 建立体液免疫学说
血清学实验
免疫学（抗感染免疫）
1945年 1948年 1953年 1956年
R.Owen 同卵双生的两只小牛的不同血型可以相互耐受 C.Snell 发现组织相容性抗原 R.Billingham 成功进行了人工耐受试验 Witebsky 建立自身免疫动物模型
免疫学
1980′s~ 发现众多细胞因子， 受体、基因及其生物活性研究
水化膜
电荷
血清学反应的特点
特异性 可逆性 比例性 反应的阶段性
特异性结合阶段
可见反应阶段
影响血清学反应的因素
抗原抗体本身的性质 电解质 酸碱度 温度
血清学反应的优缺点
不需要特殊仪器设备，操作简便。 灵敏度低，绝大多数为定性测定。
血清学试验的应用
传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病、 变态反应性疾病的确诊 疫苗免疫效果监测 人群免疫水平监测 生物活性物质的超微定量、物种及微生物 鉴定和分型 基因分离，克隆筛选，表达产物的定性、 定量分析和纯化等，已经成为现代分子生 物学研究的重要手段
血清学实验教学
血清学实验的建立及概念
1883年 俄国动物学家 1890年 德国医师、日本学者 1894年 比利时血清学家 1896年 H. Durham 1897年 R. Kraus 1900年 K. Landsteiner 1900年 J. Bordet 1900′s 英国医师
血清学反应的实质
抗原抗体结合反应
•在体内表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和
毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤。 •在体外，由于参与反应的抗原物理性状以及 反应条件的不同，可出现凝集、沉淀、细胞 溶解和补体结合等反应。
血清学实验的基本原理
分子表面结合（非共价键结合） 亲水胶体转化为疏水胶体
建立细胞免疫学说 建立体液免疫学说
血清学实验
免疫学（抗感染免疫）
1945年 1948年 1953年 1956年
R.Owen 同卵双生的两只小牛的不同血型可以相互耐受 C.Snell 发现组织相容性抗原 R.Billingham 成功进行了人工耐受试验 Witebsky 建立自身免疫动物模型
免疫学
1980′s~ 发现众多细胞因子， 受体、基因及其生物活性研究
水化膜
电荷
血清学反应的特点
特异性 可逆性 比例性 反应的阶段性
特异性结合阶段
可见反应阶段
影响血清学反应的因素
抗原抗体本身的性质 电解质 酸碱度 温度
血清学反应的优缺点
不需要特殊仪器设备，操作简便。 灵敏度低，绝大多数为定性测定。
血清学试验的应用
传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病、 变态反应性疾病的确诊 疫苗免疫效果监测 人群免疫水平监测 生物活性物质的超微定量、物种及微生物 鉴定和分型 基因分离，克隆筛选，表达产物的定性、 定量分析和纯化等，已经成为现代分子生 物学研究的重要手段
血清学实验教学
血清学实验的建立及概念
1883年 俄国动物学家 1890年 德国医师、日本学者 1894年 比利时血清学家 1896年 H. Durham 1897年 R. Kraus 1900年 K. Landsteiner 1900年 J. Bordet 1900′s 英国医师
血清学试验
2、胶乳凝集试验
3、协同凝集反应
抗体致敏载体，载体为金黄色葡萄球 菌A蛋白（SPA） SPA具有与IgG的Fc段结合的特性。
第三节 沉淀反应 （precipitation reaction)
可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、菌体 裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出 液等）与相应的抗体结合，在适量电介质存在 下，形成肉眼可见的细微的白色沉淀。
第一节 血清学试验概述
二、特点
特异性与交叉性 敏感性 反应的可逆性 反应的二阶段性 最适比与带现象 用已知测未知
第一节 血清学试验概述
三、影响血清学试验的因素 电解质 温度 酸碱度 震荡 杂质和异物
第一节 血清学试验概述
四、应用及发展趋向
血清学试验在医学和兽医学领域已广泛应用，可 直接或间接从传染病、寄生虫病检出相应的抗原 或抗体。 血清学试验还广泛应用于生物活性物质的超微定 量、物种及微生物鉴定和分型等方面。 血清学试验也用于基因分离，克隆筛选，表达产 物的定性、定量分析和纯化等，已经成为现代分 子生物学研究的重要手段。
酶联免疫吸附试验（简称ELISA ）
将抗原或抗体吸附于固相载体的表面，酶标 记物与相应的抗体或抗原反应后，形成酶标 记抗原抗体复合物，在遇到相应底物时，结 合物上的酶催化底物产生水解、氧化或还原 等反应，从而生成可溶性或不溶性的有色物 质，可用肉眼或酶标测定仪判定结果。颜色 的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，因此， 可根据颜色的深浅来定量抗体或抗原。
第三节 沉淀反应 （precipitation reaction)
可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀
第三节 沉淀反应 沉淀反应 （precipitation reaction)
实验五禽流感血清学诊断
血凝抑制（HI）试验
1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的 病毒液。 2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，自第1 孔至第11孔各加50 uL生理盐水。 3. 第1孔加被检鸡血清50 uL，吹吸混合均匀，吸50 uL至第2孔，依 此倍比稀释至第10孔，吸弃50 uL，稀释度分别为：1:2、1:4、 1:8 …… ；第12孔加禽流感阳性血清50 uL，作为血清对照。
判定标准：HI效价小于或等于3lg2判定HI试验阴性；HI效价等于4lg2为可 疑，需重复试验；HI效价大于或等于5lg2为阳性
禽流感灭活疫苗免疫效果判断：HI抗体效价≥ 4log2(1:16) 为免疫合格。 禽流感弱毒疫苗免疫效果判断：鸡群免疫抗体转阳率≥50%判定合格。
正常合格为从高浓度到低浓度（从前到后）红细胞沉积依次减少，如1-4孔出 现不完全沉积，即凝集现象，即无抗体或抗体水平较低，不合格；反之，5-10 孔出现沉淀，则抗体水平较高，合格。
血凝（HA）试验
1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50 μL生理盐水。 2. 于左侧第1孔加50 μL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均 匀后，吸50 μL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50 μL； 第12孔为红细胞对照。 3. 自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50 μL，在振荡器 上振荡，室温下静臵后观察结果。
﹣
振荡1分钟，室温10分钟
以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的滴度，即血清效价
血凝抑制（HI）试验
6. 结果判定：待病毒对照孔（第11孔）出现红细胞100%凝集（#），而 血清对照孔（第12孔）为完全不凝集（-）时，即可进行结果观察。
输血前血型血清学检验PPT参考幻灯片
26
处理方法
获得性“B”现象
• 将抗B试剂酸化到pH6.0，就可区别“真B”和获 得性“B”。
• 酸化的抗B试剂仅与“真B”反应。
2+ 表示部分RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
1+ 表示RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
± 表示RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶底。
- 表示RBC全部沉积于胶底。
PH 表示部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有残留红细胞。
H 表示完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中无红细胞。
红细胞)； b.撕开检测卡的封膜，于A、B、D、Control微柱管
反应腔中加入1%待检RBC悬液各50ul； c.将检测卡置离心机，1800r/min 2min，
2500r/min 1min离心；
6
ABO、RhD血型抗原检测卡
4+ 表示RBC绝大部分凝聚于凝胶表层。
3+ 表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层。
10
ABO正反定型不符结果分 析
• 假阳性结果 a.试剂、红细胞或盐水受到细菌污染； b.加样时交叉污染； c.加错样本; d.离心时间、速度过大; e.实验容器不洁; f.记录或结果判读错误。
11
ABO正反定型矛盾
抗体问题
正定型
反定型
抗A 抗B 抗AB
Ac Bc
-- -
--
12
抗体减弱或不产生原因
• 由肠梗阻、结肠或直肠癌和其他低位肠道有关的 疾病引起。
• 肠壁渗透性增加，细菌多糖吸附到红细胞上产生 B特异性。
• 也见于普通变形杆菌引起的败血症。
处理方法
获得性“B”现象
• 将抗B试剂酸化到pH6.0，就可区别“真B”和获 得性“B”。
• 酸化的抗B试剂仅与“真B”反应。
2+ 表示部分RBC沉积于胶底，部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
1+ 表示RBC多数沉积于胶底，可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中。
± 表示RBC绝大多数沉积于胶底，极少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶底。
- 表示RBC全部沉积于胶底。
PH 表示部分溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中有残留红细胞。
H 表示完全溶血，凝胶管中液体呈清澈透明红色，凝胶中无红细胞。
红细胞)； b.撕开检测卡的封膜，于A、B、D、Control微柱管
反应腔中加入1%待检RBC悬液各50ul； c.将检测卡置离心机，1800r/min 2min，
2500r/min 1min离心；
6
ABO、RhD血型抗原检测卡
4+ 表示RBC绝大部分凝聚于凝胶表层。
3+ 表示RBC多数凝聚于凝胶表层，少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层。
10
ABO正反定型不符结果分 析
• 假阳性结果 a.试剂、红细胞或盐水受到细菌污染； b.加样时交叉污染； c.加错样本; d.离心时间、速度过大; e.实验容器不洁; f.记录或结果判读错误。
11
ABO正反定型矛盾
抗体问题
正定型
反定型
抗A 抗B 抗AB
Ac Bc
-- -
--
12
抗体减弱或不产生原因
• 由肠梗阻、结肠或直肠癌和其他低位肠道有关的 疾病引起。
• 肠壁渗透性增加，细菌多糖吸附到红细胞上产生 B特异性。
• 也见于普通变形杆菌引起的败血症。
4病毒血清学实验方法
二、方法与步骤
（一）试验材料
病毒
必须是具有感染力的病毒，先进行病毒 滴度的测定。
细胞培养，将病毒10倍稀释接种敏感细 胞，观察CPE，确定滴定终点以CCID50 或LD50表示。
标准病毒试验浓度：100 CCID50/单位 体积或100 LD50/单位体积。
（一）试验材料
抗体
包含病毒抗体阳性和阴性血清。 用细胞培养法测病毒抗体的滴度：将倍比稀释
＝（71－50）/（71－29）＝0.5
大于50%的CPE阳性率血清稀释度的对数+距离比例×稀释 系数的对数=lg10-3+0.5 ×lg0.1=-3.5,其反对数是10-3.5。
阳性血清组的病毒CCID50为10-3.5/0.1ml。
因抗血清组的CCID50为10-3.5，阴性血清组的病毒 CCID50为10-5.5,所以10-3.5-10-5.5=2,表明分离的病毒 是与中和抗体相对应的病毒。
lgCCID50=大于50%的CPE阳性率血清稀释度的对 数+距离比例×稀释系数的对数=lg10-5+0.5 ×lg0.1=-5.5,其反对数是10-5.5.
阴性血清组的病毒CCID50为10-5.5/0.1ml。
用Reed-Muench计算 表： 阳性组血清病毒CCID50的计算
病毒稀释 CPE孔数
第六章 病毒血清学实验方法
第一节、中和试验
（neutralization test)
概念：体外将病毒与特异抗体混合并 发生反应，再将混合物接种至敏感的 宿主体内，然后测定残存病毒感染力 的方法。
– 中和抗体：凡与病毒抗原结合使病毒失去 感染力的抗体。
–优点
敏感性和特异性高； 中和抗体在体内存在时间长。
红细胞血型血清学技术的发展和应用PPT
免疫性溶血性疾病诊断
通过红细胞血型血清学技术，对免疫性溶血性疾病进行诊断，为 临床治疗提供依据。
自身免疫性疾病研究
利用红细胞血型血清学技术，研究自身免疫性疾病的发病机制和免 疫反应特点。
移植排斥反应监测
在器官移植后，通过红细胞血型血清学技术监测排斥反应，及时发 现并处理排斥反应。
红细胞血型血清学技术在法医学中的应用
亲子鉴定
01
利用红细胞血型血清学技术进行亲子鉴定，为法医学中的身份
认定提供科学依据。
犯罪嫌疑人身份鉴定
02
通过红细胞血型血清学技术，对犯罪嫌疑人进行身份鉴定，协
助警方破案。
交通事故中身份鉴定
03
在交通事故中，利用红细胞血型血清学技术对遇难者进行身份
鉴定，为后续处理提供依据。
红细胞血型血清学技术在生物学和医学研究中的应用
免疫治疗
利用红细胞血型血清学技术鉴定 免疫相关抗原，为免疫治疗提供 新的靶点和策略。
个体化医疗
通过红细胞血型血清学技术了解 个体差异，为个体化医疗提供依 据，实现精准医疗。
红细胞血型血清学技术的标准化和国际化发展
标准化发展
制定红细胞血型血清学技术的国际标 准，促进不同国家和地区之间的技术 交流和应用。
红细胞血型血清学技术的质量控制和标准化
试剂质量控制
确保试剂的质量和稳定性，定期进行试剂质量检查。
操作标准化
制定标准的操作流程和规范，确保实验结果的准确性 和可靠性。
结果解读和报告
根据实验结果，准确解读并出具报告，为临床输血和 血液相关工作提供依据。
03
红细胞血型血清学技术 的应用
红细胞血型血清学技术在输血医学中的应用
采用高分辨率和高灵敏度的检测方法，如质谱分析、荧光共振能量转移
通过红细胞血型血清学技术，对免疫性溶血性疾病进行诊断，为 临床治疗提供依据。
自身免疫性疾病研究
利用红细胞血型血清学技术，研究自身免疫性疾病的发病机制和免 疫反应特点。
移植排斥反应监测
在器官移植后，通过红细胞血型血清学技术监测排斥反应，及时发 现并处理排斥反应。
红细胞血型血清学技术在法医学中的应用
亲子鉴定
01
利用红细胞血型血清学技术进行亲子鉴定，为法医学中的身份
认定提供科学依据。
犯罪嫌疑人身份鉴定
02
通过红细胞血型血清学技术，对犯罪嫌疑人进行身份鉴定，协
助警方破案。
交通事故中身份鉴定
03
在交通事故中，利用红细胞血型血清学技术对遇难者进行身份
鉴定，为后续处理提供依据。
红细胞血型血清学技术在生物学和医学研究中的应用
免疫治疗
利用红细胞血型血清学技术鉴定 免疫相关抗原，为免疫治疗提供 新的靶点和策略。
个体化医疗
通过红细胞血型血清学技术了解 个体差异，为个体化医疗提供依 据，实现精准医疗。
红细胞血型血清学技术的标准化和国际化发展
标准化发展
制定红细胞血型血清学技术的国际标 准，促进不同国家和地区之间的技术 交流和应用。
红细胞血型血清学技术的质量控制和标准化
试剂质量控制
确保试剂的质量和稳定性，定期进行试剂质量检查。
操作标准化
制定标准的操作流程和规范，确保实验结果的准确性 和可靠性。
结果解读和报告
根据实验结果，准确解读并出具报告，为临床输血和 血液相关工作提供依据。
03
红细胞血型血清学技术 的应用
红细胞血型血清学技术在输血医学中的应用
采用高分辨率和高灵敏度的检测方法，如质谱分析、荧光共振能量转移
12 经典血清学试验
十二章经典血清学实验一、名词解释凝结性实验：按照是否产生凝结现象，用已知抗体或抗本来判定相应（未知）抗原或抗体的免疫反应。
凝集反应：细菌，红细胞等颗粒性抗原，或吸附在颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体发生特异性反应，在适当电解质存在下，经过一段时光形成肉眼可见的凝集现象。
反应中的抗原称为凝集原，反应中的抗体称为凝集素。
直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接发生特异性结合并浮上肉眼可见的凝集现象称为直接凝集反应。
间接凝集反应：将可溶性抗原（或抗体）吸附在一种与免疫无关的惰性载体颗粒表面，使其成为致敏载体，然后与相应抗体（或抗原）结合，在电解质存在的条件下发生凝集的现象。
葡萄球菌A蛋白（SPA）：是金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与IgG分子的Fc片段结合，当SPA-Ab与相应抗原结合时，就可产生协同凝集反应。
HA：有些病毒具有能凝集某种哺乳动物和禽类红细胞的特性，依此特性建立的检测主意称为病毒血凝实验。
HI：按照病毒的特异性抗体可以抑制血凝现象建立的检测主意称为血凝抑制实验。
沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的白色沉淀。
参加沉淀反应的可溶性抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。
琼脂免疫蔓延：抗原，抗体在琼脂凝胶中蔓延，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应。
反应的沉淀物因颗粒较大，故在凝胶中不再蔓延，而形成沉淀带。
电泳：带电质点在电场中向着带异向电荷的电场移动。
免疫电泳：由琼脂双蔓延与琼脂电泳技术结合的实验。
凝集价/滴度/抗体效价：浮上50%以上凝集的血清最大稀释度为该血清的凝集价。
沉淀价：环状沉淀实验时，以浮上白色沉淀环的最高抗原稀释倍数作为沉淀素的效价，即沉淀价。
中和指数：在尽头法中和实验中，使病毒感染力减少至50%的血清中和效价称为中和指数。
中和效价：中和实验中，被检血清中抗体中和病毒的能力。
病毒的毒价：引起半数感染动物死亡的病毒最小量。
第1页/共5页二、简答题1.凝集反应和沉淀反应的基本类型有哪些？有何用途？2.凝集反应和沉淀反应的区别？（凝集反应和沉淀反应各有什么特点？）3.琼脂凝胶免疫蔓延实验有哪些不同的主意？举例说明它们的用途？抗原，抗体在琼脂凝胶中蔓延，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应。
白细胞抗原系统检测ppt课件
预致敏淋巴细胞试验（又称为阳性分型法)
• PL细胞作为已知的分型细胞 • 待检淋巴细胞作为刺激细胞 • 待检淋巴细胞分别与一系列的预致敏淋巴细胞进行单向MLC • 待检细胞与预致敏淋巴细胞预先识别的抗原相同，预致敏淋巴细胞会迅速增殖 • 预致敏淋巴细胞分型试验是用阳性反应作为判定标准
第三节 HLA分子生物学检测
Luminex检测技术
• 结合荧光流式细胞仪和免疫标记技术 • 可区分HLA-I和HLA-II抗体 • 可鉴定抗体的属性和强度
HLA抗体检测
Luminex检测技术
• 以包被抗原的微球磁珠作为靶细胞 • 每种磁珠上包被一种抗原 • 多种磁珠可以在同一体系内反应
待测血清与磁珠孵育
• 存在HLA抗体时，形成抗原-抗体复合物 • 加入荧光标记的抗人IgG抗体 • 形成抗原-抗体-荧光标记抗体复合物
Luminex仪测定微球磁珠上的荧光值 判定HLA抗体的强度和特异性
• 微球磁珠荧光值大小 • 每种磁珠的反应特性
第二节 HLA细胞学检测
重点提示
掌握下列方法的基本原理及其应用
• 混合细胞培养方法（mixed lymphocyte culture，MLC） • 纯合分型细胞（homozygote typing cell,HTC） • 预致敏淋巴细胞试验（primed lymphocyte test,PLT）
白细胞抗原检测
目录
第一节 HLA血清学检测
• HLA抗原检测 • HLA抗体检测
第二节 HLA细胞学检测 第三节 HLA分子生物学检测
• HLA的分子生物学检测方法 • HLA常见基因分型方法比较 • HLA分型模棱两可结果的原因及其对策
第四节 粒细胞抗原抗体检测
第一节 HLA血清学检测
• PL细胞作为已知的分型细胞 • 待检淋巴细胞作为刺激细胞 • 待检淋巴细胞分别与一系列的预致敏淋巴细胞进行单向MLC • 待检细胞与预致敏淋巴细胞预先识别的抗原相同，预致敏淋巴细胞会迅速增殖 • 预致敏淋巴细胞分型试验是用阳性反应作为判定标准
第三节 HLA分子生物学检测
Luminex检测技术
• 结合荧光流式细胞仪和免疫标记技术 • 可区分HLA-I和HLA-II抗体 • 可鉴定抗体的属性和强度
HLA抗体检测
Luminex检测技术
• 以包被抗原的微球磁珠作为靶细胞 • 每种磁珠上包被一种抗原 • 多种磁珠可以在同一体系内反应
待测血清与磁珠孵育
• 存在HLA抗体时，形成抗原-抗体复合物 • 加入荧光标记的抗人IgG抗体 • 形成抗原-抗体-荧光标记抗体复合物
Luminex仪测定微球磁珠上的荧光值 判定HLA抗体的强度和特异性
• 微球磁珠荧光值大小 • 每种磁珠的反应特性
第二节 HLA细胞学检测
重点提示
掌握下列方法的基本原理及其应用
• 混合细胞培养方法（mixed lymphocyte culture，MLC） • 纯合分型细胞（homozygote typing cell,HTC） • 预致敏淋巴细胞试验（primed lymphocyte test,PLT）
白细胞抗原检测
目录
第一节 HLA血清学检测
• HLA抗原检测 • HLA抗体检测
第二节 HLA细胞学检测 第三节 HLA分子生物学检测
• HLA的分子生物学检测方法 • HLA常见基因分型方法比较 • HLA分型模棱两可结果的原因及其对策
第四节 粒细胞抗原抗体检测
第一节 HLA血清学检测
沙门氏菌检验PPTGB4789.4-2016 -JW
37
BS琼脂：某些非典型菌株产生绿色菌落， 其周围培养基稍微或不呈暗色。如果BS平 板培养24±2小时后，没有出现典型菌落， 则不挑取任何菌落，让平板继续培养24±2 小时。如果经48±2小时培养后，仍没有典 型或可疑的菌落出现，则挑取2个或更多个 非典型的菌落。
38
赖氨酸脱羧酶试验
赖氨酸脱羧酶试验培养基：蛋白胨、酵母浸 膏、葡萄糖、溴麝香草酚蓝（紫）。 原理：细菌使氨基酸脱羧，产生胺类，使培 养基变碱，颜色不改变。 沙门菌的反应：阳性。 意义：柠檬酸杆菌、志贺菌 均为阴 性；埃 希氏菌不定。
亚硫酸铋琼脂（BS）：含有煌绿、亚硫酸铋能抑制大 肠杆菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的生长，但对伤寒、 副伤寒等沙门菌的生长无影响。伤寒杆菌及其他沙门 菌能利用葡萄糖将亚硫酸铋还原成硫酸铋，形成黑色 菌落周围绕有黑色和棕色的环，对光观察可见有金属 光泽。该培养基制备过程不宜过分加热，以免降低其 选择性，应在临用时配制，超过48h不宜使用。陆桥 的说明书要求提前一天配置？
11
四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)：含有胆盐， 抑制革兰氏阳性球菌和部分大肠埃希氏菌 的生长，而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍生长
亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：可对伤寒 及其他沙门氏菌作选择性增菌，亚硒酸与 蛋白胨中的含硫氨基酸结合，形成亚硒酸 和硫的复合物，影响细菌硫代谢，从而抑 制大肠埃希氏菌、肠球菌和变形杆菌的增 殖。
注：此培养基在制作过程中过分加热可使培养基的选择性降 低，与TTB或SC合用可获得更高的检出率。
35
沙门菌的分离培养基
XLD琼脂：培养基中含有去氧胆酸钠作指示剂， 在该浓度下的去氧胆酸钠也同时作为大肠埃 希氏菌的抑制剂 ，而不影响沙门菌属和志贺 菌属的生长。
XLD培养基分离沙门菌和志贺菌的敏感性超过 了传统的培养基，如：EMB、SS、BS。因这些 培养基尚有抑制志贺菌属生长的潜在因素， 故本培养基是分离鉴定沙门菌及志贺菌属的 可靠培养基。在国外广泛使用。
BS琼脂：某些非典型菌株产生绿色菌落， 其周围培养基稍微或不呈暗色。如果BS平 板培养24±2小时后，没有出现典型菌落， 则不挑取任何菌落，让平板继续培养24±2 小时。如果经48±2小时培养后，仍没有典 型或可疑的菌落出现，则挑取2个或更多个 非典型的菌落。
38
赖氨酸脱羧酶试验
赖氨酸脱羧酶试验培养基：蛋白胨、酵母浸 膏、葡萄糖、溴麝香草酚蓝（紫）。 原理：细菌使氨基酸脱羧，产生胺类，使培 养基变碱，颜色不改变。 沙门菌的反应：阳性。 意义：柠檬酸杆菌、志贺菌 均为阴 性；埃 希氏菌不定。
亚硫酸铋琼脂（BS）：含有煌绿、亚硫酸铋能抑制大 肠杆菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的生长，但对伤寒、 副伤寒等沙门菌的生长无影响。伤寒杆菌及其他沙门 菌能利用葡萄糖将亚硫酸铋还原成硫酸铋，形成黑色 菌落周围绕有黑色和棕色的环，对光观察可见有金属 光泽。该培养基制备过程不宜过分加热，以免降低其 选择性，应在临用时配制，超过48h不宜使用。陆桥 的说明书要求提前一天配置？
11
四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)：含有胆盐， 抑制革兰氏阳性球菌和部分大肠埃希氏菌 的生长，而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍生长
亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：可对伤寒 及其他沙门氏菌作选择性增菌，亚硒酸与 蛋白胨中的含硫氨基酸结合，形成亚硒酸 和硫的复合物，影响细菌硫代谢，从而抑 制大肠埃希氏菌、肠球菌和变形杆菌的增 殖。
注：此培养基在制作过程中过分加热可使培养基的选择性降 低，与TTB或SC合用可获得更高的检出率。
35
沙门菌的分离培养基
XLD琼脂：培养基中含有去氧胆酸钠作指示剂， 在该浓度下的去氧胆酸钠也同时作为大肠埃 希氏菌的抑制剂 ，而不影响沙门菌属和志贺 菌属的生长。
XLD培养基分离沙门菌和志贺菌的敏感性超过 了传统的培养基，如：EMB、SS、BS。因这些 培养基尚有抑制志贺菌属生长的潜在因素， 故本培养基是分离鉴定沙门菌及志贺菌属的 可靠培养基。在国外广泛使用。
2024版沙门氏菌检验实验解析PPT
增加“无菌量筒：容量50mL、无菌均质杯、无菌均质袋、无菌广口瓶：容量500mL、无菌试管15mm×150mm、18mm×180mm、无菌接种环：10μL（直径约3mm）、1μL以及接种针”
对检验用器具规格明确，方便实验室选用
增加“生物安全柜”
对于实验室开展活菌操作、样本检测实验室生物安全等级需“BSL-2”，因此，增加此设备是生物安全必须。
明确接种菌液浓度为“0.5麦氏浊度”，接种量“2滴~3滴”，避免接种量过大导致假阳性；还有增加"接种混匀后滴加一层无菌液体石蜡进行密封"由于氰化钾不稳定容易分解失效，因此，加石蜡密封避免造成假阳性反应。
“符合表3中A1者，为沙门氏菌典型的生化反应”后面补充“进行血清学鉴定后报告结果”
明确的指出符合沙门氏菌典型的生化反应需要进行血清学鉴定后报告结果
调整可疑菌落初筛流程
流程图更清晰易懂
TTB选择性增菌改为：低背景菌36 ℃±1 ℃，高背景菌42 ℃±1 ℃原因：验证试验发现，对于生鲜样品，TTB 42℃比 TTB 36℃的选择性好，所以继续沿用；对于深加工样品，TTB 36℃比 TTB 42℃生长好，所以低背景菌采用36℃±1℃培养。如有需要，可将预增菌的培养物在2 ℃~8 ℃冰箱保存不超过72h，再进行选择性增菌。
2016版“必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴定”修改为2024版中“必要时,按表5进行沙门氏菌种和亚种的生化鉴定”
“生化群”用“种和亚种”替代，更易懂;
在表5沙门氏菌种和亚种的生化鉴定中增加“肠炎沙门氏菌、邦戈尔沙门菌种名”以及肠炎沙门氏菌种内对应的6个亚种和生化群分型”;生化反应项增加“明胶酶、L(+)-酒石酸盐、半乳糖醛等8项”
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❖ O抗原:是一种沙门氏菌细胞壁表面的 耐热多糖抗原 ，100 ℃，2.5 h不被破 坏，它的特异性依赖于细胞壁脂多糖 侧链多糖的组成。
❖ H抗原:是一种蛋白质性鞭毛抗原，共 有63种，60 ℃加热30～60 min及酒精 作用均可破坏其抗原性，但能抵抗甲 醛。
❖ Vi抗原: 是一种N-乙酰-D-半乳糖胺糖 醛酸聚合物，60 ℃加热1 h即破坏其凝
抗原抗体反应条件
• 抗原 • 抗体
3. 环境因素： （1）电介质：0.85%NaCI；
（2）温度：37或56 （3）pH值：7.0
（4）振荡：适当的机械振 （5）反应时间
抗原抗体反应的特点
• 特异性和交叉性
若两种抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交 叉反应。亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高 。
例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表. 鼠伤寒沙门氏菌: O抗（1，4，[5]，12）， 第Ⅰ相H抗原（i） 第Ⅱ相H抗原(1,2)。
它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（ 1，4，[5]，12：i：1，2）
❖ [ ]内的O抗原可能存在或不存在。 ❖ [ ]内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。
微生物抗原成分-----细菌抗原成分
•菌体抗原:革兰氏阴性菌的菌体抗原称O抗原--脂多糖蛋白质的复合物
•鞭毛抗原称为H抗原
•表面抗原:不同细菌的表抗原名称不同.大肠杆 菌的表面抗原称为封套抗原或K抗原,肺炎双球菌 的叫荚膜抗原,伤寒沙门氏菌的表面抗原称为Vi 抗原
细菌抗原
细菌的各种抗原
抗原抗体反应
沙门氏菌的血清鉴定的方法
❖ 用O、H 和Vi因子血清与待检的菌株作玻片凝 聚试验。
1.先用O因子血清确定菌株所属的 O群及O抗原 的各种成分。
2.再用H因子血清检查其第1相和第2相的H抗原 以确定血清型。
3.必要时还要用Vi血清检查(目前有3种)。
沙门氏菌的血清型鉴定步骤
1. 先用A~F多价O血清检查，确定菌株是否在A~F六个O群的范围内。 2. 再用代表六个O群的O因子血清检查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、
凝集原——凝集素
玻片法 直接凝集反应
试管法
血清学鉴定
实验目的
掌握细菌的血清学鉴定法 。
实验原理
根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点， 用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。
实验材料
1.菌种 待检细菌 2.试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3.其他 载玻片
沙门氏菌诊断血清（11种）
O抗原、H抗原和Vi抗原
➢ 当抗原过多或抗体过多，则抗原抗体的结合不能 形成大的复合物，因而抑制可见反应的出现，这 一现象称为带现象。
➢ 抗体过多出现的抑制现象称前带现象，而抗原过 多出现的抑制现象称后带现象。
➢ 为了克服带现象，在进行血清学试验时，需将抗 原或抗体作适当稀释。
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
相H抗原的，要用位相变异的方法再检查其另一个相。单相菌不必作位 相变异检查。 6. 综合O和H因子血清以及Vi因子血清的检查结果，按照考夫曼-怀特沙门 氏菌属抗原表解判定沙门氏菌的菌型。
实验方法
50ul血清+待检菌
50ulNS+待检菌
注意：
先用A－F和 Vi血清》实验
血清学实验
v 血清学诊断：是指用已知细菌的特异性抗 原检测患者血清中相应抗体的方法，以诊 断感染性疾病。（用已知抗原检测血清中 的特异性抗体）
❖ 血清学鉴定：即采用含有已知特异性抗体 的免疫血清（诊断血清）与分离培养出的 未知纯种细菌或标本中的抗原进行血清学 反应，以确定病原菌的种或型。 （用已知 抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原）
集性和免疫原性。
沙门氏菌的主要抗原组成
O抗原：至少58种, 含相同抗原组分归为一组， 引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组。
H抗原：分为Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示， Ⅱ相以1、2、3等表示。
Vi抗原：抗原性弱，不稳定，可阻止O抗原与其 相应抗体的凝集反应。
沙门氏菌菌型的表示方法
❖ 血清型以数字和字母表示.
• 反应的可逆性
抗原与抗体的结合为分子表面的结合，结合的适 宜温度为0～40℃、pH在4.0～9.0范围内。如温 度超过60℃或pH降到3.0以下，或加入解离剂台 硫氰化钾、尿素等，则抗原抗体复合物又可重新 解离，解离后的抗原或抗体性质不改变。
抗原抗体反应特点
• 最适比和带现象
➢ 只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的 结合反应。
抗原抗体反应特点
•反应的二阶段性 结合阶段-----反应发生快，几秒钟至几分钟 。 反应阶段-----较慢，需几分钟、几十分钟或更长时间 。
抗原抗体反应类凝型集--反---应凝集反应
颗粒性抗原（如细菌、红血球等）或吸附在乳 胶、白陶土、离子交换树脂和红细胞的抗原与 其特异性抗体结合后，在有电介质存在时，凝 聚成肉眼可见的凝集小块。
抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）是指抗原与 相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内 （invivo），也可发生于体外(invitro)。体内反应可介导吞 噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用；体外反应则根据抗原的物 理性状、抗体的类型及参与反应的介质（例如电解质、补体、 固相载体等）不同，可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的 反应及中和反应等各种不同的反应类型。因抗体主要存在于血 清中，在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验，所以体外抗 原抗体反应亦称为血清反应（erologicreaction）。
O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。 3. 确定O群之后，分别用HA(a、b、c、d、i、z10、z29）HB、HC、HD四种
多价H血清检查。 4. 用3.所确定的多价H血清所包括的所有H因子血清逐一检查定为第1相或
第2相H抗原。 5. 检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原，或检出第2相H抗原而未检出第1
＋
－
颗粒状凝集物
均匀混浊
沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表
注意事项
1.生理盐水端应不出现凝集颗粒。 2.沙门菌Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应抗体
发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意，需事 先加热破坏Vi抗原，O抗原才得以与相应的O诊 断血清发生凝集。
❖ H抗原:是一种蛋白质性鞭毛抗原，共 有63种，60 ℃加热30～60 min及酒精 作用均可破坏其抗原性，但能抵抗甲 醛。
❖ Vi抗原: 是一种N-乙酰-D-半乳糖胺糖 醛酸聚合物，60 ℃加热1 h即破坏其凝
抗原抗体反应条件
• 抗原 • 抗体
3. 环境因素： （1）电介质：0.85%NaCI；
（2）温度：37或56 （3）pH值：7.0
（4）振荡：适当的机械振 （5）反应时间
抗原抗体反应的特点
• 特异性和交叉性
若两种抗原之间含有部分共同抗原时，则发生交 叉反应。亲缘关系越近，交叉反应的程度也越高 。
例如:查考夫曼-怀特沙门氏菌属抗原表. 鼠伤寒沙门氏菌: O抗（1，4，[5]，12）， 第Ⅰ相H抗原（i） 第Ⅱ相H抗原(1,2)。
它的血清型应表示为:鼠伤寒沙门氏菌（ 1，4，[5]，12：i：1，2）
❖ [ ]内的O抗原可能存在或不存在。 ❖ [ ]内的H抗原可能是罕见的，正常情况下一般不存在。
微生物抗原成分-----细菌抗原成分
•菌体抗原:革兰氏阴性菌的菌体抗原称O抗原--脂多糖蛋白质的复合物
•鞭毛抗原称为H抗原
•表面抗原:不同细菌的表抗原名称不同.大肠杆 菌的表面抗原称为封套抗原或K抗原,肺炎双球菌 的叫荚膜抗原,伤寒沙门氏菌的表面抗原称为Vi 抗原
细菌抗原
细菌的各种抗原
抗原抗体反应
沙门氏菌的血清鉴定的方法
❖ 用O、H 和Vi因子血清与待检的菌株作玻片凝 聚试验。
1.先用O因子血清确定菌株所属的 O群及O抗原 的各种成分。
2.再用H因子血清检查其第1相和第2相的H抗原 以确定血清型。
3.必要时还要用Vi血清检查(目前有3种)。
沙门氏菌的血清型鉴定步骤
1. 先用A~F多价O血清检查，确定菌株是否在A~F六个O群的范围内。 2. 再用代表六个O群的O因子血清检查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、
凝集原——凝集素
玻片法 直接凝集反应
试管法
血清学鉴定
实验目的
掌握细菌的血清学鉴定法 。
实验原理
根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点， 用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。
实验材料
1.菌种 待检细菌 2.试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3.其他 载玻片
沙门氏菌诊断血清（11种）
O抗原、H抗原和Vi抗原
➢ 当抗原过多或抗体过多，则抗原抗体的结合不能 形成大的复合物，因而抑制可见反应的出现，这 一现象称为带现象。
➢ 抗体过多出现的抑制现象称前带现象，而抗原过 多出现的抑制现象称后带现象。
➢ 为了克服带现象，在进行血清学试验时，需将抗 原或抗体作适当稀释。
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
相H抗原的，要用位相变异的方法再检查其另一个相。单相菌不必作位 相变异检查。 6. 综合O和H因子血清以及Vi因子血清的检查结果，按照考夫曼-怀特沙门 氏菌属抗原表解判定沙门氏菌的菌型。
实验方法
50ul血清+待检菌
50ulNS+待检菌
注意：
先用A－F和 Vi血清》实验
血清学实验
v 血清学诊断：是指用已知细菌的特异性抗 原检测患者血清中相应抗体的方法，以诊 断感染性疾病。（用已知抗原检测血清中 的特异性抗体）
❖ 血清学鉴定：即采用含有已知特异性抗体 的免疫血清（诊断血清）与分离培养出的 未知纯种细菌或标本中的抗原进行血清学 反应，以确定病原菌的种或型。 （用已知 抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原）
集性和免疫原性。
沙门氏菌的主要抗原组成
O抗原：至少58种, 含相同抗原组分归为一组， 引起人类疾病的沙门菌大多数在A~F组。
H抗原：分为Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示， Ⅱ相以1、2、3等表示。
Vi抗原：抗原性弱，不稳定，可阻止O抗原与其 相应抗体的凝集反应。
沙门氏菌菌型的表示方法
❖ 血清型以数字和字母表示.
• 反应的可逆性
抗原与抗体的结合为分子表面的结合，结合的适 宜温度为0～40℃、pH在4.0～9.0范围内。如温 度超过60℃或pH降到3.0以下，或加入解离剂台 硫氰化钾、尿素等，则抗原抗体复合物又可重新 解离，解离后的抗原或抗体性质不改变。
抗原抗体反应特点
• 最适比和带现象
➢ 只有抗原与抗体呈适当比例时，才可出现可见的 结合反应。
抗原抗体反应特点
•反应的二阶段性 结合阶段-----反应发生快，几秒钟至几分钟 。 反应阶段-----较慢，需几分钟、几十分钟或更长时间 。
抗原抗体反应类凝型集--反---应凝集反应
颗粒性抗原（如细菌、红血球等）或吸附在乳 胶、白陶土、离子交换树脂和红细胞的抗原与 其特异性抗体结合后，在有电介质存在时，凝 聚成肉眼可见的凝集小块。
抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）是指抗原与 相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内 （invivo），也可发生于体外(invitro)。体内反应可介导吞 噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用；体外反应则根据抗原的物 理性状、抗体的类型及参与反应的介质（例如电解质、补体、 固相载体等）不同，可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的 反应及中和反应等各种不同的反应类型。因抗体主要存在于血 清中，在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验，所以体外抗 原抗体反应亦称为血清反应（erologicreaction）。
O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。 3. 确定O群之后，分别用HA(a、b、c、d、i、z10、z29）HB、HC、HD四种
多价H血清检查。 4. 用3.所确定的多价H血清所包括的所有H因子血清逐一检查定为第1相或
第2相H抗原。 5. 检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原，或检出第2相H抗原而未检出第1
＋
－
颗粒状凝集物
均匀混浊
沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表
注意事项
1.生理盐水端应不出现凝集颗粒。 2.沙门菌Vi抗原存在时可阻止O抗原与相应抗体
发生凝集，故在做玻片凝集时应加注意，需事 先加热破坏Vi抗原，O抗原才得以与相应的O诊 断血清发生凝集。