实验三 植物不定芽诱导和快繁技术
油松成熟胚的不定芽诱导及植株再生试验
油松成熟胚的不定芽诱导及植株再生试验摘要以油松成熟种胚为材料，研究不同培养基、不同激素水平及光照条件对油松不定芽谤导的影响。
结果表明：在光照培养条件下，诱导油松不定芽的最佳培养基为DCR+2.0mg／L 6-BA+0.1mg／LNAA，诱导率达到36％。
幼苗在1／2DCR+0.1mg／LNAA+0.1mg／LIBA+0.1mg／L KT培养基上能生根并形成完整植株，诱导率达到25％。
关键词油松；成熟胚；不定芽；诱导；植株再生文献标识码 A文章编号1007－5739(2009)16－0145－01油松为我国特有树种，是我国华北、西北及东北南部的主要造林树种之一，同时也是世界上重要的木材及松脂生产资源。
目前林业上主要依靠实生苗和优树嫁接的繁殖方法，繁殖系数低，苗木高低不一，林相参差不齐，远远不能满足生产的要求。
而通过组织培养的方法不仅能为植树造林提供大量苗木，还能为遗传转化改良树种打下扎实的基础。
目前关于油松组培成苗的报道非常少，主要存在增殖技术不成熟、生根难等问题。
为此，现以油松成熟种子为材料，进行不定芽诱导与生根诱导条件的探索和优化，试图建立成熟的油松组织培养技术，为其苗木的无性繁殖提供依据。
1材料与方法1.1试验材料成熟油松种子，北京林业大学种子保存室提供。
1.2试验方法1.2.1种子预处理。
将成熟种子置于4℃冰箱冷藏放置30d。
1.2.2消毒和接种。
在超净工作台上，将预处理过的成熟油松种子，用70％酒精浸泡30s，无菌水冲洗，然后置于2％NaClO溶液中3min，无菌水冲洗3～5min。
将完整的种胚从种子中剥出，接种到培养基中。
1.2.3激素浓度与组成的筛选。
将完整的胚接种于7种不同激素浓度和配比的DCR培养基中(表1)，并添加肌醇0.1g／L、蔗糖30.0g／L、琼脂6.0g／L，调pH值至5.8，4周后观察不定芽诱导情况。
1.2.4基本培养基的筛选。
按参考文献H中的方法配制MS、SH、DCR 3种培养基，统计3种培养基中外植体的出芽率、生根诱导率及生长状况。
《蓝莓快繁及诱导加倍技术的研究》
《蓝莓快繁及诱导加倍技术的研究》一、引言蓝莓作为一种营养丰富、口感独特的水果，深受消费者喜爱。
然而，由于蓝莓的繁殖周期长、种植成本高，导致其市场价格较高，影响了蓝莓的普及程度。
因此，开展蓝莓快繁及诱导加倍技术的研究具有重要的实际意义。
本文旨在研究蓝莓快繁和诱导加倍技术的关键技术，为蓝莓的高效种植和大规模推广提供理论依据。
二、蓝莓快繁技术研究1. 材料与方法本研究采用组织培养法进行蓝莓快繁。
选取生长健壮、无病虫害的蓝莓母株作为外植体，通过消毒处理后，将其切割成适当大小的茎段或叶片，接种于含有适宜培养基的组培瓶中。
2. 培养条件培养室温度控制在（25±2）℃，光照强度为2000 lx，光照时间为16小时/天。
每隔一段时间进行移栽换瓶处理，同时进行常规的营养元素添加。
3. 结果与讨论（1）经过不断试验优化，我们发现以MS培养基为基础的培养基配方能够有效地促进蓝莓的外植体生长和繁殖。
同时，适宜的生长环境对蓝莓的快繁也有重要影响。
（2）通过观察和记录蓝莓植株的生长情况，我们发现快繁技术可以显著缩短蓝莓的繁殖周期，提高繁殖效率。
此外，通过多次继代培养，可以实现蓝莓植株的遗传稳定性。
三、蓝莓诱导加倍技术研究1. 材料与方法本研究采用植物生长调节剂进行蓝莓诱导加倍。
选取生长旺盛的蓝莓组培苗作为实验材料，通过施加适宜浓度的植物生长调节剂进行诱导处理。
2. 诱导条件诱导处理后，将组培苗放置在适宜的生长环境下进行培养。
定期观察并记录组培苗的生长情况及染色体加倍情况。
3. 结果与讨论（1）通过实验发现，适宜浓度的植物生长调节剂能够有效地诱导蓝莓组培苗的染色体加倍。
在适宜的温度、光照等条件下，能够促进加倍细胞的分裂和生长。
（2）在诱导过程中，我们观察到加倍后的蓝莓植株具有更强的生长势和抗病性。
此外，经过多次实验和筛选，我们可以确定最佳的植物生长调节剂浓度和处理时间。
四、结论与展望本文研究了蓝莓快繁及诱导加倍技术的关键技术，通过组织培养法和植物生长调节剂的应用，实现了蓝莓的高效繁殖和染色体加倍。
植物快速繁殖技术实验指导
《植物快速繁殖技术》实验指导国平编生态与资源工程系2014年 1月 8日目录前言 III学生实验守则IV实验一观赏植物种子无菌萌发与试管开花技术1实验二金线莲的快速繁殖技术3实验三铁皮石斛的快速繁殖技术5实验四一种植物的组织培养与快速繁殖8前言植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官 ( 如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体 , 在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。
近 40 年以来，植物组培技术已渗透到植物生理学、病理学、遗传学、药学、育种以及生物化学等各个研究领域，为快速繁育优良品种，培育无毒苗木，进行突变筛选培育，药用植物工厂化生产，种质保存和基因库建立等方面开辟了新途径，成为生物学科中的重要研究技术和手段之一。
现如今，植物组织培养技术具有保持花卉优良性状、培育脱毒苗木、保存种质资源等优势，根据这些优势，植物栽培技术也被广泛应用于花卉的种苗繁殖与生产之中。
学生实验守则一、自觉遵守纪律和各项规章制度，保持室安静，注意环境卫生，不吸烟、不随地吐痰、不乱扔纸屑杂物，爱护公务。
二、实验过程中应严肃认真，严格遵守操作规程。
贵重、精密仪器的使用须在专人指导下进行。
三、爱护实验仪器设备，厉行节约。
仪器若有损坏，应如实报告，填写登记表。
凡损坏、丢失的仪器设备，均应查清原因，按仪器设备损坏、丢失赔偿制度处理。
四、实验物品不得随意翻动，严禁携出室外。
若需借用应办理借物手续。
五、注意实验室安全，易燃易爆品的操作应远离火源。
六、实验结束，由实验指导教师和管理人员检查清点仪器设备，学生应办好交接手续，做好清洁卫生，及时关好水电阀门，保持实验室和仪器的清洁整齐。
实验一观赏植物种子无菌萌发与试管开花技术一、实验目的掌握利用种子作为外植体进行快速繁殖的方法；掌握试管花卉的培养技术；了解植物开花的影响因素。
油松成熟胚的不定芽诱导及植株再生
辽
宁 林
业 科
技
２ ０ ０ｌ Ｎ ｏ５
第５ 期
Ｊ ｕ ａ ｏ ａ ｎ ｎ ｒ ｓｒ Ｓｃｅ ｃ ｏ ｒ ｌ ｆ Ｌｉ ｏ ｉ ｇ Ｆｏ ｅ ｔｙ ｎ ｉ ｎ ｅ＆ Ｔｅ ｈ ｏｌ ｇ ｃｎ ｏｙ
油松成熟胚的不定芽诱导及植株再生
温
摘
伟， 林
梅， 魏 爽 ， 崔建 国
油 松 种 子 为 市 场 购 买 的 商 品 种 子 ， 芽 率 为 发 ９％， 存 在 ４ ７ 储 ℃冰 箱 中备用 。试 验 前 １ 月 ， 种 个 将
子 与湿 沙 （ 含水 量 为 沙 子最 大持 水 量 的 ６ ％） １ ０ 按 ： ３
不定芽 的最佳 基本培养基为 Ｄ Ｒ， Ｒ中ＮＯ－ＮＨ Ｃ ＤＣ ３ ／ 为 ４磷 元 素含 量为 ＭＳ 养基 的 １ 倍 ， ， 培 ． ５ 这一 浓度 也 是 董 丽芬 等［ ３ １ 氮、 、 研究 磷 钾元 素 对 油松不 定 芽诱 导
１０ ６ ） １８ ６
（ 阳农 业 大 学 林 学 院 ， 宁 沈 阳 沈 辽
要 ： 油松 成 熟合 子胚 为 外植 体 ， 过 器 官直 接 发 生途 径 获得 再 生植 株 。诱 导 油松 不 定 芽的 以 通
最佳 基 本培 养基 为 ＤＣ 最佳激 素组 合 为 Ｔ ．ｍｇＬ ＮＡＡ０２ｍｇＬ， Ｒ， ＤＺ０１ ／＋ ． ／ 不定 芽 生长 的最佳 激 素组 合 为 Ｔ ．５ｍｇＬ ＮＡ １ ／ 生根 最 佳 培 养 基 为 ｌ Ｒ＋ＩＡ ２ｍｅＬ ６Ｂ ０ ５ｍｇＬ。 ＤＺ００ ／＋ Ａ ．ｍｇＬ； ０ ／ ＤＣ ２ Ｂ ， ＋ －Ａ ． ／ ／ ０ 生根 苗移 栽到 草炭 土： ２ｌ体 积 比 ） 沙＝ ：（ 的基 质 中， 活率 为 ８ ％。 成 ０
河津樱不定芽诱导及植株再生技术研究
河津樱不定芽诱导及植株再生技术研究陈剑勇，余燕华，周俊新，俞群（福建林业职业技术学院，福建南平353000）摘要：为探讨河津樱外植体的最佳消毒处理方法，通过多因子正交试验探讨不定芽诱导、芽苗增殖及生根培养最佳培养基组合。
结果表明，河津樱外植体先用70%的酒精预处理15s ，再用0.1%HgCl 2溶液消毒9min 效果最佳，存活率可达74.67%；不定芽诱导最佳培养基组合为B 5+6-BA 0.9mg/L+IBA 0.1mg/L ，诱导率达94.00%；芽苗增殖最佳培养基组合为：B 5+KT 0.6mg/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.1mg/L ，增殖系数达3.05，芽苗平均高度2.53cm ；最佳生根培养基组合为：1/2MS+NAA 0.4mg/L+IBA 0.1mg/L+活性炭1.0g/L ，生根率达91.56%。
建立起的河津樱组培快繁技术体系，可以满足河津樱优质种苗的规模化生产需要。
关键词：河津樱；不定芽；增殖；生根3次，接种10d 后统计各处理的污染率和存活率。
1.2.2不定芽诱导培养试验。
采用三因素三水平的正交L9（34）试验设计，基本培养基（MS 、B5、WPM ）、植物生长调节剂6-BA （0.3、0.6、0.9mg/L ）和IBA （0.1、0.3、0.5mg/L ），共计9个处理组合，每个处理组合接种50瓶，每瓶接种1个茎段，重复3次。
30d 后统计不定芽诱导率，筛选最佳的不定芽诱导培养基组合。
1.2.3芽苗增殖培养试验。
基本培养基选用不定芽诱导试验筛选出的最佳基本培养基，植物生长调节剂选用KT （0.2、0.4、0.6mg/L ）、6-BA （0.4、0.8、1.2mg/L ）和I-BA （0.1、0.3、0.6mg/L ）的三因素三水平L9（34）正交试验设计，共计9个组合，每个组合接种50棵芽苗，重复3次。
将诱导培养获得的高达1.5cm 以上的芽苗切取后接种到不同处理组合的芽苗增殖培养基中，30d 后统计芽苗增殖情况，从中选取最优芽苗增殖培养基组合。
多肉植物玉露的组培快繁技术研究
多肉植物玉露的组培快繁技术研究作者：王莉来源：《乡村科技》 2017年第24期（禹城市十里望镇政府，山东禹城251200）［摘要］为了提高多肉植物玉露的繁殖效率，满足多肉植物玉露产业快速发展的需求，以多肉植物草玉露叶片为试验材料进行组织培养与快速繁殖的研究。
结果表明：玉露不定芽诱导培养的最佳培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，不定芽分化率最高（达到95%）；不定芽增殖培养的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，不定芽增殖分化率最高（达到380%）；生根诱导效果最佳的培养基是1/2MS+IBA 2 mg/L，生根率最高，达到95%以上。
［关键词］玉露；组织培养；快速繁殖［中图分类号］ S682.33 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1674-7909（2017）24-56-2植物组织培养也称离体培养，是指将植物体各部分组织，如叶肉组织、胚乳、薄壁组织等进行培养，从而获得再生植株；也指在培养过程中从各组织上得到愈伤组织，愈伤组织经过再分化形成再生的完整植株。
1 材料与方法1.1 试验材料草玉露作为原材料，以草玉露幼嫩的叶片为外植体进行诱导分化不定芽试验，以2 cm左右的组培苗进行生根试验。
1.2 试验方法1.2.1 外植体的取得和灭菌处理。
用剪刀剪取草玉露幼嫩的叶片作为外植体，放入烧杯中，再将其放在水龙头下流水冲洗30 min，然后在洗衣粉水中浸泡7～10 min，最后用自来水冲洗干净。
在无菌室内的超净工作台上，外植体先用75%酒精进行表面消毒2～5 s，再用无菌水冲洗一两次，然后放入2%次氯酸钠溶液中消毒5～10 min，再用无菌水漂洗两三次，用无菌滤纸吸干表面水分。
将灭菌后的叶片切成0.5 cm切段，分别接种于预先灭菌的培养基上。
为了减少出现杂菌，要在火焰旁进行接种。
1.2.2 培养基及培养条件。
以MS培养基作为基本培养基，外加蔗糖30 g/L、琼脂6 g/L，再根据试验要求加入不同量的植物激素制成试验所需的培养基，调节pH值到5.8。
2021大马士革玫瑰的快速繁殖技术探讨范文1
2021大马士革玫瑰的快速繁殖技术探讨范文 大马士革玫瑰（Rosa damascene Mill.var.kazanlika）为蔷薇科蔷薇属灌木，花香纯正，是萃取玫瑰精油和加工玫瑰纯露的优良品种。
玫瑰精油含有多种化学成分（如香茅醇、香叶醇等芳香物质、有机酸等有益美容的物质）[1],被认为是玫瑰精油的极品。
大马士革玫瑰目前主要以分根、扦插、压条及组培繁殖[2].用压条、嫁接等方法繁殖，受季节、母株材料等多种因素限制，成活率极低，很难进行规模化生产；采用离体培养繁殖，在较短时间内可获得大量、整齐一致的种苗。
黄颖等[3]以大马士革玫瑰茎尖为外植体进行组培快繁技术研究，筛选出最佳的初代培养基、继代培养基和生根培养基。
吴新海等[4]研究了不同激素配比对大马士革玫瑰茎段继代增殖和生根培养的影响 , 继代增殖培养以 MS +6 -BA1.0mg/L +NAA0.1mg/L+GA30.1mg/L+蔗糖 3%+琼脂 0.6%为宜；生根培养以 1/2MS+IBA0.5mg/L+蔗糖 3%+琼脂 0.6%为宜。
赵蓓蓓等[5] 对大马士革玫瑰组培快繁体系进行了初步研究，指出继代增殖培养以1/2MS+6 -BA1.0mg/L +NAA0.04mg/L +IBA0.1mg/L较好，增殖系数为 2.4,最佳增殖培养基和生根培养基仍需继续探索。
本研究在前人研究成果基础上，初代培养以 MS 培养基为基本培养基，增殖和生根培养以 WPM 培养基为基本培养基，以大马士革玫瑰带腋芽的茎段为外植体，探讨不同浓度组合的植物生长调节剂对不定芽诱导、增殖和生根的影响，以期为大马士革玫瑰的快速繁殖及商业化生产奠定基础。
1 材料与方法 1.1 试验材料 大马士革玫瑰采自石家庄圣地玫瑰公司，以生长健壮、无病虫害的当年生半木质化的嫩枝为试验材料。
1.2培养条件 初代培养以 MS 培养基为基本培养基；继代增殖和生根培养以 WPM 培养基为基本培养基，添加不同浓度组合的植物生长调节剂，培养基中均加入0.60%的琼脂、蔗糖 30.0g/L,pH5.6~5.8.培养温度22~28℃，空气相对湿度 40%~60%,光照强度为 1500~2000Lux,光照时间为 14h/d. 1.3试验方法 1.3.1 外植体处理 （1）消毒时间对外植体影响试验。
杉木茎段不定芽诱导及植株再生条件筛选
杉木茎段不定芽诱导及植株再生条件筛选莫雅芳;戴勤;谭玲;苏治南;卢亮;杨梅【摘要】[目的]探索广西杉木快繁技术,为杉木组织培养和种苗供应提供参考依据.[方法]以杉木优良树种基部枝条为试验材料,进行茎段外植体消毒、不定芽诱导及植株再生研究.[结果]以75％酒精处理30 s+0.1％升汞消毒6min的效果较理想,污染率为30％；初代培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 0.6 mg/L,第8d即有芽萌动,诱导率可达47％；继代培养基1/2MS +IBA 0.3 mg/L+6-BA 0.4 mg/L 中加入蔗糖30 g/L,25 d腋芽增殖倍数可达3.4倍；1/4MS+IBA0.15mg/L+NAA 0.075 mg/L对杉木生根诱导效果较好,生根率为52％.[结论],杉木外植体用75％酒精和0.1％升汞消毒6min效果较理想,适当减少培养基中矿质元素有利于杉木外殖体芽的诱导和试管苗的增殖生长,NAA可促进试管苗生根.%[Objective]Conditions of the adventitious bud induction and plant regeneration for Cunninghamia lanceolata were screened and rapid propagation techniques for Chinese fir in Guangxi was explored to provide references for supply and tissue culture of Chinese firseedlings.[Method]Using base branches of superior Chinese fir species as testing materials,stem explant disinfection,adventitious bud induction and plant regeneration were the focal points in the current research.[Result] (1)The best disinfection method was treating stem explants with 75％ethanol for 30 s and 0.1％ mercuric chloride for 6 min,which showed 30％contamination rate; (2)In the initial medium (1/2MS + NAA 0.2 mg/L + 6-BA 0.6 mg/L),the buds germinated on the 8th day with the induction rate of 47％; (3)In the optimum subculture medium (1/2MS + IBA 0.3 mg/L + 6-BA 0.6 mg/L + white sugar 30 g/L),axillary buds were multiplied by 3.4 times on the 25th day; (4)The induction effect was the best with the rooting rate of 52％ in the rooting medium (1/4MS + IBA 0.15 mg/L + NAA 0.075 mg/L).[Conclusion]It was beneficial to the adventitious bud induction for Chinese fir with the initial medium (1/2MS + NAA 0.2 mg/L + 6-BA 0.6 mg/L) and the optimum subculture medium (1/2MS + IBA 0.3 mg/L + 6-BA 0.6 mg/L + white sugar 30 g/L).NAA was conducive to rooting in vitro,and rooting induction effect was the best in the rooting medium of 1/4MS + IBA 0.15 mg/L + NAA 0.075 mg/L.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2013(044)005【总页数】5页(P810-814)【关键词】杉木;组织培养;不定芽;植株再生;条件筛选【作者】莫雅芳;戴勤;谭玲;苏治南;卢亮;杨梅【作者单位】广西国有高峰林场林业研究中心南宁530001;广西大学林学院南宁530004;广西大学林学院南宁530004;广西大学林学院南宁530004;广西大学林学院南宁530004;广西大学林学院南宁530004【正文语种】中文【中图分类】S791.270 引言【研究意义】杉木（Cunninghamia lanceolata）是我国南方特有的速生商品材树种。
油松成熟胚的不定芽诱导及植株再生
油松成熟胚的不定芽诱导及植株再生温伟;林梅;魏爽;崔建国【摘要】以油松成熟合子胚为外植体,通过器官直接发生途径获得再生植株.诱导油松不定芽的最佳基本培养基为DCR,最佳激素组合为TDZ 0.1 mg/L+NAA 0.2 mg/L,不定芽生长的最佳激素组合为TDZ 0.05 mg/L+NAA 1.0 m/L;生根最佳培养基为1/2 DCR+IBA 2 mg/L+6-BA 0.05 mg/L.生根苗移栽到草炭土:沙=2:1(体积比)的基质中,成活率为80%.【期刊名称】《辽宁林业科技》【年(卷),期】2010(000)005【总页数】2页(P17-18)【关键词】油松;成熟胚;不定芽;植株再生【作者】温伟;林梅;魏爽;崔建国【作者单位】沈阳农业大学,林学院,辽宁,沈阳,110866;沈阳农业大学,林学院,辽宁,沈阳,110866;沈阳农业大学,林学院,辽宁,沈阳,110866;沈阳农业大学,林学院,辽宁,沈阳,110866【正文语种】中文【中图分类】S791.254.05油松（Pinus tabulaeformis）又称中国松，是中国特有树种。
材质坚韧，富含油脂，耐腐蚀，是重要的用材树种；所含松脂是提炼松香、松节油的重要原料；具有抗瘠薄、抗风、耐寒的特性，在西北、东北等广大生境较差地区造林中占有特殊的地位。
油松主要靠种子繁殖，但是其种子园投资大、结实晚，已建立的种子园普遍存在种子产量不稳定、出种率低等问题，不能满足生产上对良种的需求[1]。
组织培养是解决良种繁育的主要途径之一。
1996年郑均宝等首次以油松成熟合子胚为外植体，通过器官直接发生途径获得植株再生[2]。
2004年董丽芬等通过器官发生途径获得丛生芽[3]。
2007年，周巧云用合子胚的不同切段诱导出愈伤组织[4]。
TDZ为N-苯基-N-1，2，3-噻二唑 (N-phenyl-N-1，2，3-thiadiazol-5-ylurea)，是一种人工合成的细胞分裂素，近年来在组织培养中应用广泛。
花生幼叶不定芽诱导与快速繁殖
花生幼叶不定芽诱导与快速繁殖刘璨;苏良辰;庄依娜;覃铭;李玲【摘要】以花生品种'粤油7号'6～8 d龄幼叶为外植体进行植株再生研究.结果表明,外植体在MS + 0.6 mg/L NAA + 8 mg/L 6-BA + 1 mg/L AgNO3 + 3 mg/L Gln培养基上,诱导不定芽效果好,经两次继代培养出芽率达81.03%,每个外植体平均出芽数达5.79个.经伸长培养基MS + 2 mg/L 6-BA + 4 mg/L GA3培养,不定芽伸长长度达1.0～2.0 cm.试管苗在培养基1/2 MS + 0.5 mg/L NAA + 3 mg/L IBA上生根率达86.15%,不定根粗而长,有侧根,移栽成活率达90%,结实率100%.【期刊名称】《亚热带植物科学》【年(卷),期】2010(039)002【总页数】5页(P21-24,37)【关键词】花生;叶片;不定芽;植株再生【作者】刘璨;苏良辰;庄依娜;覃铭;李玲【作者单位】华南师范大学,生命科学学院,广东,广州,510631;华南师范大学,生命科学学院,广东,广州,510631;华南师范大学,生命科学学院,广东,广州,510631;华南师范大学,生命科学学院,广东,广州,510631;华南师范大学,生命科学学院,广东,广州,510631【正文语种】中文【中图分类】Q943.1花生(Arachis hy pogaea)是重要的油料作物，多种病虫害和季节性干旱严重地影响其产量和品质。
尽管常规花生育种技术在抗性品种的选育中发挥了重要作用，但由于花生栽培种中缺乏相关的抗性基因，因此花生野生种的利用及抗性基因的转化受到国内外广泛重视。
转基因生物技术在花生上的应用发展比较缓慢，原因之一是花生组织培养的再生体系技术不够成熟，制约了转基因技术在花生遗传转化上的应用。
近年来，国内外许多学者通过花生体胚和器官发生途径成功地获得再生植株，但多数试验结果仍存在体细胞胚畸形、重复性低、易产生畸形苗、再生周期较长等缺陷[1-5]。
‘早食李’茎段不定芽的诱导试验
导 萌发的 腋芽先 行切 除再接 种在 含 １ ／ － Ｂ ～２ ｍｇ Ｌ ６ Ａ浓
养基 中加 入ＧＡ， 、ＣＨ也未能得 到有效的 解决 。可能与瓶 内 分布 的不定芽数量 过多 ，营 养供应 不足有关 。因此 ，降低 ６Ｂ － Ａ浓度 ，减 少不定芽的产 生 增值倍数 ，又提 升 了不定 芽的质量 ，为 后续 的生根培养提供壮苗 。
［］ 辽 宁 大 学 学 报 （ Ｊ． 自然 科 学 版 ） ２０ ，０（） ３ ４ ３ ７ ， ０ ３ ３ ４ ：８ — ８ ．
果树的组织培养 ，因为Ｆ４ 。 ｊ 音养基的成分 与ＭＳ 培养基 的成 分
比较其 氨态氮含 量较低 。而高浓度 的硝态氮和 氨态氮 可降 低 ‘ 李 ’的增殖率 和成 活率。此试 验能成功诱 导 出不 定 郁 芽 ，是基本培养基 、外源植物生长调节剂、暗／ 光交替处理
农 学 院 ） １９ ， ２ ：６ ， ９ １ （） ５ ．
度 的培养基 中，先 进行 ｌ ０～５ 的 黑暗处理 ，然后再移 到 ０ｄ
光下 培养。光下 经过 ４ 培养后 ，在切 除腋芽 处基部附 近 ０ｄ 可见 白色不定芽 长出 ，长 势较好 ，数量在２ 个左右 。而 ～３ 全部 在光下培养 的茎段 则没有产生 不定芽 。可见 ，一定 时 间的暗处理是诱导 ‘ 早食李 ’不定芽发生的主要因素。 由于长 时 间于暗 中培养 ，缺 少光 照 ，不 定芽 呈 白色 、 徒长 状 ，顶部呈水 渍状而 逐渐腐烂 死亡 ，因此 ，诱导 出的 不定芽应及时 转移 到光 下培 养，改善光 照条件 。 诱导 出不定 芽的茎 段经过一 段时 间光 下培养后 ，在腋 芽基部附近形成 不定芽分 化 中心 ，分化 出大量 不定 芽。不 定芽成丛簇 状 ，数量较 多 ，但 叶狭小浓密 、面积小 ；茎节 间短 ，伸长生长缓 慢 ，长势较差 。
胡萝卜肉质根细胞的悬浮培养和不定芽的诱导(实验报告)
根愈伤组织转接到胡萝卜细胞悬浮培养基中，于 25 ℃、全黑暗、摇床上震荡培养 以分离得到单细胞[5]。 （3）胡萝卜肉质根愈伤组织再分化培养 将实验 3-1 建立的生长状态良好、色泽新鲜、结构紧密的胡萝卜肉质根愈伤组 织转接到胡萝卜不定芽分化培养基上，置于温度 25 ℃ 、光照时间 14 h/d、光照强 度 1000～2000Lx 条件下诱导胡萝卜愈伤组织再分化成苗（或丛芽）[6]。 （4）培养结果 文字描述配合图片记录培养结果 Ⅳ、镜检 用无菌尼龙滤网将培养物滤去。除去滤网上的愈伤组织碎块和大的细胞团。留 下胡萝卜细胞液，用滴管吸取一滴在培养皿上，用台盼蓝染色，然后置于倒置显微 镜下观察。也可以做成临时装片进行观察。
3)、材料：
胡萝卜肉质根愈伤组织
4．实验方法步骤及注意事项 实验步骤：
Ⅰ、胡萝卜愈伤组织的增殖培养 （1） 、准备工作 ①接种室的清洁和消毒；②超净工作台的开机和消毒；③解剖刀、镊子、已灭 菌培养皿和滤纸、待用培养基等的准备；④实验材料的准备（选择无污染、愈伤组 织生长状态良好、色泽新鲜的材料摆放于净工作台上） 。 （2） 、愈伤组织增殖培养 将实验 1 建立的生长状态良好、色泽新鲜未褐化的胡萝卜肉质根愈伤组织转接 到愈伤组织增殖培养基上，放置在 25 ℃全黑暗条件下进行愈伤组织的增值培养[4]， 以获得足够数量、质地良好的愈伤组织，作为胡萝卜细胞悬浮培养的实验材料。 （3） 、培养结果 文字描述配合图片记录培养结果 Ⅱ、胡萝卜细胞悬浮培养培养基和不定芽分化培养基的配制 （1） 、胡萝卜细胞悬浮培养培养基和不定芽分化培养基的配方及体积 ①胡萝卜不定芽分化培养基 配方： MS＋0.1mg/L NAA ＋ 1mg/L 6-BA ＋ 0.7 ％琼脂＋3％蔗糖，pH5.8 配制体积：每小组配制 0.5L，用 50ml 三角瓶分装成 20 瓶，每人 2 瓶。 ②胡萝卜细胞悬浮培养培养基 配方： MS＋1mg/L 2,4-D ＋ 0.5mg/L 6-BA＋200mg/L 水解酪蛋白＋3％蔗糖，pH5.8 配制体积：每小组配制 0.5L，用 100ml 三角瓶分装成 20 瓶，每人 2 瓶。 （2） 、胡萝卜愈伤组织增殖培养基的配制 ①药品及用具的准备；②培养基配制；③调节培养基的酸碱性至 pH5.8；④培 养基的分装；⑤培养基的灭菌。 Ⅲ、胡萝卜细胞悬浮培养和不定芽分化 （1） 、准备工作 ①接种室的清洁和消毒；②超净工作台的开机和消毒；③解剖刀、镊子、已灭 菌培养皿和滤纸、待用培养基等的准备；④实验材料的准备（选择无污染、愈伤组 织生长状态良好、色泽新鲜的材料摆放于净工作台上） （2） 、胡萝卜细胞的悬浮培养 将实验 3-1 建立的生长状态良好、色泽新鲜、结构松散、无污染的胡萝卜肉质
香果树叶片直接诱导不定芽技术研究
果 树群落 、遗传 多样性及 繁育等方 面的研 究 已有一 些研 究 报道 。虽然香果树分 布较广 ，但均零星 生长 ，未见大面 积分 布 ，资 源极少 。由于香果 树母树 在光 照不足的 密林 中 难 以开花结 实 ，且具 有典 型的 间歇性 结实特 性 ，间隔期长 达 ２～４年 。 因此 ，香果树 更新所 需 的种子 来源有 限 ，幼
用 洗衣粉 清洗 一流水 冲洗 ３ ０ ｍｉ ｎ以 上 一 ７ ５ ％酒 精浸
泡３ ０ Ｓ一 ０ ． １ ％ Ｈｇ Ｃ １ ， ５～ １ ０ ｍｉ ｎ 一 无 菌 水 冲 洗 ５～ ６
转入生根 培养基 １ ／ ２ ＭＳ ＋蔗 糖 ２ ０ ｇ ／ Ｌ ＋ ＡＣ １ ． ０ ｇ ／ Ｌ＋ 琼脂 ６ ． ０ ｇ ＋ ＮＡ Ａ ０ ． ２ ｍｇ ／ Ｌ中进行生根培养 ，接种 １ ０ ｄ
１ ． ０ ｍ ｇ ／ Ｌ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． １ ｍ ｇ ／ Ｌ的 Ｍ ｓ 培 养基 上可 以直接 诱导 出不 定 芽，诱 导率 达 ７ ６ ％；在含 有 ６ 一 Ｂ Ａ １ ． ０ ｍ ｇ ／ Ｌ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． １ ｍ ｇ ／ Ｌ的 Ｍ Ｓ 培养基上 ，不 定芽的增殖 系数 可达 ５～ ８ ；以含 有 Ａ Ｃ １ ． ０ ｇ ／ Ｌ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． ２ ｍ ｇ ／ Ｌ的 １ ／ ２ Ｍ ｓ 培 养基为 生根培 养基 ，香果树试 管苗生根率达 １ ０ ０ ％，炼苗成活率达 ８ ６ ． ２ ％。
术研 究，提高其 繁殖 系数 ，对于 香果树 资源保存 和扩大 栽
培及利用具有极其重要的意义 。 前人 已对 香果树再生技术进行研 究 ，并取得一些成果 。
【CN109566416A】一种诱导不定芽进行姜科植物种苗快速繁殖的方法【专利】
权利要求书1页 说明书5页 附图1页
CN 109566416 A
CN 109566416 A
权 利 要 求 书
1/1 页
1 .一种诱导不定芽进行姜科植物种苗快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1、选取健壮的姜科组培苗，在超净工作台条件下去除外围根； 步骤2、去除主茎，保留根及膨大茎；叶片保留基部叶鞘部位； 步骤3、将膨大茎和叶鞘部位横切，接种于诱导培养基上，光照培养； 步骤4、将不定芽转接于增殖培养基上，光照培养。 2 .根据权利要求1所述的一种诱导不定芽进行姜科植物种苗快速繁殖的方法，其特征 在于，所述的步骤1具体为：选取5-6周苗龄的健壮生姜组培苗，保留1 .0-2 .0cm的主根，去除 其余外围根。 3 .根据权利要求1所述的一种诱导不定芽进行姜科植物种苗快速繁殖的方法，其特征 在于，所述的步骤2具体为：保留主根及以上1 .0-1 .5cm的膨大茎，去除其余茎和叶，叶片切 下后保留基部叶鞘部位1 .0-1 .5cm。 4 .根据权利要求1所述的一种诱导不定芽进行姜科植物种苗快速繁殖的方法，其特征 在于，所述的步骤3具体为：将膨大茎进行横切，每个薄层的厚度为2 .0-3 .0mm、叶鞘每段切 成5 .0-7 .0mm，接种于诱导培养基上，放置于25±2℃的光照培养室中培养10-15天。 5 .根据权利要求4所述的一种诱导不定芽进行姜科植物种苗快速繁殖的方法，其特征 在于，所述的诱导培养基为MS+TDZ1 .0-4 .0mg/L+NAA 0-2 .0mg/L。 6 .根据权利要求1所述的一种诱导不定芽进行姜科植物种苗快速繁殖的方法，其特征 在于，所述的步骤4具体为：将诱导出的不定芽转接于增殖培养基上，放置于25±2C °的光照 培养室中培养4-5周。 7 .根据权利要求6所述的一种诱导不定芽进行姜科植物种苗快速繁殖的方法，其特征 在于，所述的增殖培养基为6-BA2 .0-3 .0mg/L+NAA0 .2-0 .5mg/L。
实验三植物不定芽诱导与快繁技术
难生根的植物可以采取： ⑴降低无机盐浓度，1/2 MS培养基 ⑵采用IBA、NAA0.1-0.5mg/L 。 ⑶添加吸附剂。 ⑷减少琼脂。
实验三植物不定芽诱导与快繁技术
实验三植物不定芽诱导与快繁技术
5、试管苗的移植 小根5cm左右可以炼苗移栽。即将形成的小
植株转移到土壤的过程。这个过程是微繁殖最关 键的一步。
实验三植物不定芽诱导与快繁技术
第一节 根的培养
一、根培养的实践意义 1、是进行根系生理代谢研究的最优良试验体 系。 2、是研究器官分化、形态建成的良好体系。 3、建立快速生长的根无性系，对药物生产有 重要意义。 4、对根细胞培养物进行诱变处理，可筛选突 变体，用于育种实践。
实验三植物不定芽诱导与快繁技术
西红柿浓度(mg/L)
Ca(NO3)2.4H2O
200
143.9
Na2SO4
200
100
KCl
65
40
KNO3
82
NaH2PO4.2H2O
18.6
10.6
MgSO4.7H2O
740
368.5
MnSO4.4H2O
4.5
FeC6H5O7.3H2O
4.
ZnSO4.7H2O
2.7
3.35 2.25 1.34
第四章 器官培养
宜职院08.9
实验三植物不定芽诱导与快繁技术
目的与要求
了解离体根培养的实践意义，掌握离体根的培 养方法，熟悉离体根培养的培养基配方。了解植物 茎尖培养的意义，掌握茎尖培养的方法，以及茎尖 微繁技术。掌握叶培养概念，离体叶组织培养方法， 了解影响叶片组织脱分化和再分化因素。
具有植物离体根培养的认知和进行根培养的基 础能力，具有熟练进行植物茎尖培养和茎段培养的 能力，具有叶培养认知和进行叶培养的基础能力。
黄花风铃木的组培快繁技术
黄花风铃木的组培快繁技术陈丽文，时群，杨利平，李芳菲（钦州市林业科学研究所，广西钦州535099）以黄花风铃木的种子为外植体，诱导获得无菌苗，然后用无菌苗的带腋芽茎段诱导不定芽，再将不定芽诱导生根，获得完整植株。
总结了黄花风铃木的初始诱导培养、继代增殖培养、生根培养以及生根苗移栽和管护的方法，掌握了黄花风铃木的组培快繁技术。
黄花风铃木；组织培养；快繁技术将已消毒处理好的种子接种至初始培养基上，初始培养基为MS+6-BA 0.4mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉4.2g/L ，pH 值5.8。
接种后暗培养5d ，再移至自然光照条件下培养20d ，培养温度为25±2℃。
暗培养5d 后种子开始萌动，在自然光照条件下继续培养5d 即可长出小苗，20d 无菌小苗可长至约4cm 高。
2不定芽的分化及增殖培养2.1不定芽的分化将初始培养获得的无菌苗剪切成长约2cm 的带腋芽节段，接种到芽分化培养基上，芽分化培养基为MS （改良）+6-BA 1.5mg/L+IAA 0.3mg/L+L-半胱氨酸25mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉4.2g/L ，pH 值5.8。
接种时将带腋芽节段斜插在培养基上，接种后放在培养室内弱光条件下培养，光照较弱可促进不定芽的分化。
培养温度25±2℃，光照强度1000~1500Lx ，每天光照12~14h ，培养20d 左右在腋芽处可分化出小芽。
此时，将培养材料移到光照强度稍强的地方继续培养，光照强度2000~3000Lx ，在培养温度和光照时间不变的条件下，适当提高光照强度可促进已分化的小芽长高。
2.2不定芽的增殖待分化出的小芽长到2cm 以上时，再将小芽切下，剪成带腋芽的小段，转接至芽增殖培养基上进行芽的增殖培养，每隔30d 左右转接1次。
芽增殖培养基和培养条件与芽分化培养相同，但随着增殖代数的增加，需要根据培养材料的生长情况适当调整培养基配方或培养条件，以保证继代苗正常生长，增殖系数达3.0以上。
红掌组织培养中不定芽诱导和增殖的研究
红掌组织培养中不定芽诱导和增殖的研究赵斌，李英丽，方正*（河北农业大学河北省生物无机化学重点实验室，河北保定071001)摘要：对不同浓度MS培养基、不同浓度细胞分裂素6-BA、不同浓度生长素NAA和IBA对红掌组织培养中不定芽诱导和增殖的影响进行研究。
得出不定芽诱导和增殖的最佳培养浓度。
结果表明，MS培养基对红掌不定芽诱导效果最好，诱导率为85.96%，增殖系数4.12；1.0 mg/L 6-BA为红掌不定芽诱导和增殖的最佳浓度，诱导率为96.3%，增殖系数6.67；0.3mg/LIBA为红掌不定芽诱导的最佳生长素浓度，诱导率为96.31%。
最适宜的配比为MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.3mg/L。
关键词：红掌；组织培养；诱导；增殖中图分类号：S682.14 文献标识码：Study on the adventitious buds induction and proliferation in TissueCulture of Anthurium andraeanumZHAO Bin1, LI Ying-1i1 , FANG Zheng1*(Key Lab of Bio-inorganic Chemistry .Agricultural University of Hebei. Baoding 071001 .China) Abstract：The factors which is different concentrations of MS medium, cytokinin6-BA, growth hormone NAA and IBA that influence the adventitious buds induction and proliferation in Tissue Culture of Anthurium andraeanum were studied. The optimal culture concentration of proliferation of adventitious buds was be found. The results showed that MS medium was the best for Anthurium adventitious buds and the induction rate was 85.96%, the proliferation coefficient 4.12.1.0 mg / L 6-BA for the Anthurium adventitious buds was the optimal concentrations and the induction rate was 96.3%, proliferation coefficient 6.67. 0.3mg/LIBA for the Anthurium adventitious buds was the optimal concentrations and the induction rate was 96.31%. The most appropriate ratio of MS +6- BA 1.0mg / L + IBA 0.3mg / L.Key Word：Anthurium andraeanum; tissue culture; callus induction; proliferation;红掌(Antlturium andraeanum )又名安祖花、花烛、灯台花、蜡烛花等，为天南星科（Araceae）花烛属[1]多年生附生常绿草本花卉。
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4、说明叶组织培养的一般方法
5、简述叶片培养中叶片消毒的一般程序
探讨
试比较根、茎、叶作外植体进行离 体培养的特点
（二）叶片组织的脱分化与再分化培养
1、叶组织培养的一般方法
⑴叶组织分离与消毒
大多数植物的叶原基、幼嫩叶片，双子叶 植物的子叶，单子叶植物心叶的叶尖组织， 都可用于叶组织的脱分化与再分化培养。
方法一：
幼嫩叶片培养时：选取植株顶端未充分展
开的幼嫩叶片——流水冲洗——蘸有少量75%酒精
的纱布擦拭叶片两面——放入0.1%升汞溶液中消 毒5-8min——无菌水冲洗3-4次——消毒后叶片转 入到铺有滤纸的无菌培养皿内——解剖刀切成 0.5cm×0.5cm左右的小块或薄片（如叶柄和子
四、影响离体根生长的因素 1、基因型 不同植物的根对培养的反应不同，番 茄、烟草、马铃薯、小麦可快速生长并继代培养无 限生长。萝卜、豌豆需长时间且有限。木本植物很 难生长。 2、营养条件 硝酸盐是最好氮源，蔗糖是最好碳 源，铁、锰、硼、硫、维生素不能缺少。 3、激素 生长素对不同植物反应不同 4、pH 5、光照和温度 25-27℃
⑶培养 25-28℃，光照12-14h，光照度1500-2000Lx， 不定芽分化和生长期间3000-10000Lx。 2、影响叶肉组织培养的因素 ⑴基因型 不同植物种类、同一物种的不同品种间在 叶组织培养特性上有一定的差异。 ⑵细胞分裂素与生长素的组合 两种细胞分裂素都能促进芽的分化，6-BA 的作用好于KT，但6-BA对不定芽的进一步发育 （茎叶的形成）有抑制作用。
胡 萝 卜 根 培 养
2、一般方法
100ml三角瓶，内装40-50ml培养液，如长时
间培养，可采用大型器皿500-1000ml培养液的发
酵瓶进行培养。根据需要可在瓶中添加新鲜培养
液继续培养或分割转移后继代培养。为避免培养
过程中培养基成分变化对生长的影响，可采用流
动培养方法。
2、根瘤菌结瘤实验的特殊方法
第一节
根的培养
一、根培养的实践意义 1、是进行根系生理代谢研究的最优良试验体 系。 2、是研究器官分化、形态建成的良好体系。 3、建立快速生长的根无性系，对药物生产有 重要意义。
4、对根细胞培养物进行诱变处理，可筛选突
变体，用于育种实践。
二、离体根的培养方法 1、培养步骤： 离体根培养的第一步是要获得无性繁殖系。 方法如下： 种子表面消毒——无菌条件下萌发——根伸 长后切取1.0cm长的根尖——接种于培养基——侧 根生长——切取侧根的根尖扩大培养——获离体根 无性系
Raggio1965年等设计了离体根的结瘤实验装
置。 此装置由两个部分组成，下部是试管，管中 装有含无机盐的营养液，并接种根瘤菌，上部是 玻璃盖，盖中有一单向开口的管状凹槽，槽中盛
放含有有机化合物的琼脂固体培养基。故有机营
养从根基部吸收，无机营养从根尖吸收。
Bunting和 Horrocks1964年修改 了Raggio等的装置， 变为在粗沙中提供无 机盐。利用这一技术 研究菜豆、大豆等离 体根根瘤菌的固氮情 况，结果表明这些根 瘤菌含有血红蛋白， 并能固定大气中的氮。
第二节
一、概念和意义
茎尖培养
1、茎尖培养概念
茎尖分生组织培养：指对不超过0.1mm的茎 尖或几十微米的茎尖进行的培养。特点：可获无 病毒苗，操作困难，成苗时间长。 普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎
尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易成活、
成苗时间短、繁殖速度快。
2、茎尖培养意义
茎尖培养在园艺植物离体培养中最常见，可快
⑺损伤
损伤后刺激诱导愈伤组织生长和器官发生。
3、离体叶组织的茎和芽发生途径
⑴直接产生不定芽
⑵由愈伤组织产生不定芽
⑶胚状体形成
⑷其他途径
叶片的分化程度较高，一般需要通过诱导 愈伤组织并经再分化才能产生植株，变异率较 高。再分化能力弱的植物种类而言，叶片离体 再生的难度相当大。
思考
1、简述植物离体根培养方法 2、植物茎尖培养有什么类型？ 3、茎尖微繁技术要点
叶）——上表皮朝上接在固体培养基上培养。
方法二： 70%酒精漂洗约10秒，饱和漂白粉液中浸315分钟，无菌水冲洗数次，放在无菌的干滤纸 上吸干水分以供接种用。对一些粗糙或带绒毛
的叶片要延长灭菌时间。注意要选择成熟的叶
片。 同一叶片的栅栏组织比海绵组织较成熟。培 养叶肉时因海绵组织在分裂前就死亡，如果栅 栏组织不发达就难培养。
茎段
茎尖取 材有限，可 采用带节或 不带牙的茎 段进行培养。
第三节
叶的培养
一、离体叶培养概念及意义 1、离体叶培养概念 指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶 等叶组织的无菌培养。多经脱分化形成愈伤组 织，再由后者分化出茎和根。
2、离体叶培养意义 ⑴研究叶形态建成、光合作用、叶绿素形成等理 论问题的良好方法。 ⑵通过叶片组织的脱分化和再分化培养，以证实 叶细胞的全能性。 ⑶通过离体叶组织、细胞的培养，探索离体叶组 织、细胞培养的条件和影响因素。 ⑷利用离体叶组织的再生特性，建立植物体细胞 快速无性繁殖系，提高某些不易繁殖植物的繁殖系 数。 ⑸叶细胞培养物是良好的遗传诱变系统，经过自 然变异或者人工诱变处理可筛选出突变体应用于育 种实践。
第四章
ห้องสมุดไป่ตู้
器官培养
宜职院08.9
目的与要求 了解离体根培养的实践意义，掌握离体根的培 养方法，熟悉离体根培养的培养基配方。了解植物 茎尖培养的意义，掌握茎尖培养的方法，以及茎尖 微繁技术。掌握叶培养概念，离体叶组织培养方法， 了解影响叶片组织脱分化和再分化因素。 具有植物离体根培养的认知和进行根培养的基 础能力，具有熟练进行植物茎尖培养和茎段培养的 能力，具有叶培养认知和进行叶培养的基础能力。
Raggio 装置
三、离体根培养所用的培养基
离体根培养多用无机离子浓度低的
White培养基或其他培养基，MS、B5等也可采
用，但必须将其浓度稀释到2/3或1/2。
苜蓿离体根的培养液和西红柿离体根的
培养液如下：
成份
Ca(NO3)2.4H2O Na2SO4 KCl KNO3 NaH2PO4.2H2O MgSO4.7H2O MnSO4.4H2O FeC6H5O7.3H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI CuSO4.5H2O MoO3 甘氨酸 烟酸 维生素B1 维生素B6 蔗糖 Ph
二、叶培养方法 （一）叶原基培养：叶原基培养是研究形态建成 的重要手段。 1、采用休眠期顶芽，剥去一部分鳞片。 2、在次氯酸5%溶液中浸泡20min，进行表面消毒。 3、切取柱状叶原基进行培养。 培养基采用Knop’s无机盐（部分修改）或 Kundson（1951）配方，添加Nitsch配方中的微 量元素（再加CoCL225mg/L）和2%蔗糖、8%琼脂， Ph5.5。部分实验中添加维生素、NAA、水解酪蛋 白等，温度24℃，人工光照24h。
⑶细胞分裂素与生长素的组合
细胞分裂素与生长素配合使用，诱导芽分 化效果好于单独使用细胞分裂素。 ⑷供试植株的发育时间和叶龄 个体发育早期的幼嫩叶片较成熟幼嫩叶片分
化能力高，发育完全的叶片组织器官分化能力较
幼龄叶片组织再分化能力低得多。 ⑸叶脉 叶脉、叶柄分化能力较强。
⑹极性
叶背面朝上放置就不生长。
苜蓿浓度(mg/L)
200 200 65 82 18.6 740 4.5 4. 2.7 1.5 0.8 0.004 0.02 3 0.5 0.1 0.1 20000 5.5
西红柿浓度(mg/L)
143.9 100 40 10.6 368.5 3.35 2.25 1.34 0.75 0.38 0.002 0.01 4 0.75 0.1 0.1 15000 5.2
三、普通茎尖培养与繁殖技术 茎尖培养可进行植物的无性快繁，并且技术 较为成熟，也叫微繁技术。 （一）茎尖微繁技术的一般方法 1、无菌培养体系的建立 外植体制备：正在生长的芽或腋芽、茎段、 鳞茎切块、块茎、球茎。茎尖组织大小为带2-4 个叶原基或更多。 操作程序：类似一般无菌操作基本技术培 养基：MS、B5、White等，糖2-3%，生长调节剂。 培养条件：1000-3000Lx、16h、25℃。
叶 片 愈 伤 组 织 诱 导 形 成
⑵培养基 常用MS、B5、White、N6等培养基，3%糖， 培养基中添加椰子汁等有机添加物，有利于 叶片组织培养中的形态发生。 大多数双子叶植物的叶组织培养，细胞分 裂素特别是KT、6-BA有利于芽的形成，生长 素特别是NAA有利于根的发生，2,4-D有利于 遇伤组织的形成。一般BA 1-3mg/l，NAA 0.25-1mg/l。
速繁殖无性系、培养无病毒苗、品种改良。
二、茎尖培养一般方法 （一）材料的制备
健壮枝梢-去除叶片-分成1-2cm-自来水冲洗消
毒-75%的酒精30秒-0.1%升汞或20倍次氯酸钠消毒 8-10min-无菌水-修剪剥离茎尖，通常切割下顶端 0.1-0.1叶原基的茎尖-（无菌水）-接种。 （二）培养基
多为MS培养基及其改良配方，还有White配方、
难生根的植物可以采取： ⑴降低无机盐浓度，1/2 MS培养基 ⑵采用IBA、NAA0.1-0.5mg/L 。 ⑶添加吸附剂。 ⑷减少琼脂。
5、试管苗的移植
小根5cm左右可以炼苗移栽。即将形成的小
植株转移到土壤的过程。这个过程是微繁殖最关 键的一步。 ⑴保持小苗水分供需平衡 ⑵选择适当的介质：珍珠岩、蛭石、粗砂、炉
灰渣、锯木屑等。
⑶防止杂菌滋生：保持环境干净，农药灭菌。 ⑷注意光温管理：避免阳光直射、温度适宜。
（二）影响茎尖微繁因素 1、基因型 2、外植体大小 3、供试植株生理状态 4、芽在植株上部位 5、供试植株年龄 6、培养基 7、褐变 8、玻璃化 9、极性 10、后生变化 11、中间繁殖体的形态发生能力 12、遗传稳定性