封闭抗体PPT

主动免疫治疗效果预测和评价指标
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免疫疗法主要使被治疗者产生同种免疫反应，因而检测治疗过程中的 免疫反应效果，应根据是否产生封闭抗体来判断。检测方法通常有以 下几种： 封闭抗体ELISA法测定：封闭抗体阳性则认为效果良好，可以妊娠。 封闭抗体仍然阴性，需要进行第二个疗程治疗。 皮肤迟发型变态反应：皮内接种淋巴细胞的部位产生发红与硬结时， 可认为已发生迟发型变态反应；如不能产生迟发型变态反应，提示接 种的淋巴细胞数量少或活性低下。迟发型变态反应有缩小倾向者，下 次妊娠预后良好。 T细胞及NK细胞活性测定。
北京爱普益医学检验中心
封闭抗体的检测及意义
郭磊
复发性流产的定义及分类


自然流产：是指妊娠过程失败、胚胎死亡和胚胎及附属物排出，排 出物或胚胎及附属物不足1000g，孕周不足28周。 复发性流产（RSA）：俗称习惯性流产，是指连续发生2次或2次 以上自然流产。 原发性复发流产：从未有活婴出生的复发性流产。 继发性复发流产：曾有正常分娩的复发性流产。 复发性流产的分类：根据病因和发病机制，复发性流产可分为非免 疫型和免疫型。
CDC方法
原理：HLA抗体与 淋巴细胞表面的相 应抗原结合后激活 补体，导致细胞膜 损伤，通透性增强， 染料进入细胞，细 胞死亡。在倒置相 差显微镜下观察， 着色的细胞为死亡 细胞，视野下有较 多细胞死亡为阳性 。
阴性
此方法目前已基本淘汰。
阳性
特点： 操作繁琐，检测活细胞，要求标本新鲜； 假阳性，假阴性率高。
免疫性因素造成的流产是复发性流产最重要的原因，过去所谓的不明 原因流产80%与免疫因素有关。免疫型流产中又以封闭抗体（APLA） 缺乏造成的同种免疫型复发性流产发生率最高。

如何确诊复发性流产的病因
复发性流产的诊断实际上为排除性诊断，因
此，至少要对复发性流产的两大病因进行系 统筛查。
非免疫因素检查：
什么是封闭抗体

在正常孕妇的血清中，存在一种抗配偶淋巴细胞的特异性IgG抗体 (Antipaternal lymphocyte antibody, APLA)，它可抑制淋巴细胞反应 （MLR），封闭母体淋巴细胞对培养的滋养层的细胞毒作用，防止辅 助T细胞识别胎儿抗原的抑制物，并可阻止母亲免疫系统对胚胎的攻 击。封闭同种抗原刺激的淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子 （MIF），故称其为封闭抗体（blocking antibodies,BA）。
哪些人需要做免疫因素检查
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2次或2次以上自然流产； 2次或2次以上试管婴儿（VF-ET）失败； 控制性超排卵周期，卵泡发育不良，＜6个卵泡； 枯萎卵； 内膜生长不良、菲薄、三线征不典型； 原因不明性不孕； 免疫紊乱史，如ANA阳性、风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等； 不明原因胎儿生长受限（FGR）妊娠、羊水过少妊娠史。
封闭抗体缺乏为什么会发生复发性流产



现代生殖免疫学认为，妊娠是一个极其复杂的生理过程。胚胎所携带的 基因有一半来自母体，另一半来自父体。来自父体的抗原对于母体来说 是外来抗原，母亲体内的免疫系统就会自动去清除它。但是，绝大多数 妇女却能继续正常妊娠至足月，其原因就是因为妊娠以后有免疫耐受机 制的存在，其中封闭抗体的产生起了重要的作用。 研究认为，孕妇血中的APLA可以表现以下作用： ①APLA中和同种异体 抗原，而不使胎儿受到排斥； ②抗体直接作用于具有免疫能力的细胞如： CTL细胞、NK细胞等； ③直接结合到靶细胞的抗原上，从而降低它们 对受体细胞参与的免疫反应的敏感性。 如果母体缺乏封闭抗体，则导致同种免疫识别保护功能低下，将来自父 体的一半当作异物排斥，就会导致流产。流产次数越多的患者，其体内 封闭抗体缺乏的可能性越大。封闭抗体的产生不足，使得免疫系统容易 对胚胎产生免疫攻击，母体对胎儿产生强烈的排斥现象，妊娠早期可出 现复发性流产，妊娠晚期则可出现妊娠高血压疾病、胎儿宫内生长受限， 甚至出现胎死宫内，最终导致流产。
主动免疫治疗的疗效


主动免疫疗法在全球应用已多年，疗效肯定，但各家报道的疗效差异显 著：71％～100％。 由于同种免疫型RSA的诊断是建立在排除其他病因基础上的，因此，对 于治疗失败的患者应重新进行详细的病因筛查，尤其要排除胚胎染色体 核型异常。
反复自然流产患者免疫治疗前后封闭抗体的变化及其意义 （中国卫生检验杂志2007年10月第17卷第10期） 中山大学附属第二医院
诱导封闭抗体产生； 促使Th1/Th2细胞因子平衡向Th2偏移，包括外周血和蜕膜局部； 调节T淋巴细胞亚群比例，包括CD4/CD8比例、αβT/γδT等； 下调NK细胞活性； 纠正共刺激分子CD80、CD86表达异常。
哪些人需要做淋巴细胞主动免疫治疗
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流产次数达2次或2次以上，封闭抗体检测为阴性； 夫妇双方染色体正常； 妻子无生殖道解剖异常及其他妇科检查正常； 内分泌检查正常，免疫球蛋白和甲状腺功能正常； 无弓形虫、巨细胞病毒等感染； 自身抗体检测阴性； 夫妻双方肝、肾功能正常； 夫妻双方同意接受主动免疫疗法，签署知情同意书。
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自身免疫型：患者体内出现各种自身抗体，如抗心磷脂抗体（ACA）、 抗核抗体（ANA）、抗甲状腺抗体（ATA）等。 同种免疫型：由于夫妇之间主要组织相容复合物（MHC），在人类又 称白细胞抗原（HLA）的相容性过大所致，患者与正常生育妇女的免 疫状态不同，表现在体液免疫的异常及血清中缺乏封闭抗体等方面。
免疫因素检查：
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自身免疫型复发性流产： ①抗心磷脂抗体（ACA）：ACA以IgG类最具临床意义，ACA IgM、 IgG检查2次，每次间隔6周。 ②抗核抗体（ANA）、狼疮抗凝因子（LAC）、β2糖蛋白－Ⅰ （β2GP-Ⅰ）、D-二聚体、凝血4项、补体3、补体4。 同种免疫型复发性流产： ①封闭抗体（APLA）：阴性结果表示女方血清中缺乏此APLA ，易发 生复发性流产。 ②细胞免疫型检查：CD19（B淋巴细胞表面标志）、CD16＋、CD56 ＋（NK细胞表面标志）、CD3、CD4、CD8（T淋巴细胞分群）。 免疫型不孕：抗精子抗体、抗子宫内膜抗体、抗卵巢抗体、抗HCG抗 体、抗甲状腺抗体、PCT、体外交叉精子宫颈粘液接触试验 （SCMCT）。 母儿血型不合溶血病：夫妻检查ABO血型、Rh血型。
FCM方法
检测CD 分子如 CD 3 、 CD 4 、 CD 8等
CD3阳性 特点： 仪器昂贵； 检测多个CD, 准确性高 。
CD8阳性
ELISA方法
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Байду номын сангаас2.
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双方染色体检查：所有的RSA患者夫妇双方都要进行外周血染色体 核型检查，排除染色体数量和结构的异常。 生殖道解剖结构检查：B超、输卵管造影、宫腔镜、腹腔镜、磁共振； 生殖内分泌检查：性激素6项、子宫内膜活检、甲状腺功能、空腹血 糖、葡萄糖耐量试验（OGTT）、胰岛素拮抗（IR）测定； 生殖道感染检查：衣原体；支原体；淋菌及β-溶血性链球菌培养； 梅毒血清实验（RPR）；艾滋病抗体（HIV）； 优生5项（TORCH）：巨细胞病毒(CMV-IgM或IgG)、弓形虫(TOXIgM或IgG)、风疹病毒(RV-IgM或IgG)、单纯疱疹病毒I型(HSV-I-IgM 或IgG)、单纯疱疹病毒II型(HSV-II-IgM或IgG)。
免疫治疗后封闭抗体阳性者与阴性者的妊娠结局比较 治疗后抗体 例数 妊娠成功 再次流产 妊娠成功率
阳性
阴性 合计
893
205 1098
780
85 865
27
34 61
87. 35%
41. 46% 78.78%
封闭抗体检测方法
一、 CDC方法：微量淋巴细胞毒 二、 FCM方法：流式细胞仪
三、 ELISA方法：酶联免疫法
免疫治疗前要做哪些检查
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双方检查血常规、ABO及Rh血型； 甲肝IgM、丙肝IgM、乙肝二对半； 梅毒血清实验（RPR）、艾滋病抗体（HIV）；

供血者检查无异常方可做免疫治疗，检查结果3个月有效。
免疫治疗的时机及方法




一般主张从妊娠前开始免疫，抽取供血者外周血30ml，肝素抗凝，在无 菌条件下淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，调至浓度为2～4×10 7 /ml，细 胞悬液量约3 ml，将分离出的淋巴细胞注射到女方的左右上臂皮内，共 注射6～8个点。 注射时间不受月经期影响。每隔2～3周一次，4次为1个疗程，治疗过程 中避孕。多采用2疗程法，孕前孕后各免疫一疗程。 第一疗程完成后2周复查封闭抗体，如果复查结果封闭抗体转阳或弱阳， 鼓励患者在3个月内妊娠，妊娠后仍需维持治疗，怀孕5～6周继续再进 行一个疗程主动免疫治疗，每2周1次，共4次，妊娠16周后一般不需要 加强免疫。 转阳性3个月后未妊娠，可每2～3个月巩固治疗一次，或重新治疗1个疗 程。 如果复查结果封闭抗体仍为阴性，重复免疫治疗一个疗程，直至封闭抗 体转阳；如果三个疗程仍未能转阳，则需要另觅治疗方法。 部分患者可能在未完成一个疗程的时候已经怀上，那仍然需要至少完成 一个疗程的治疗。
封闭抗体如何进行检测

同种免疫型反复性自然流产患者主动免疫治疗前后需要进行封闭抗体检 测，方法为抽取患者外周血2ml，分离血清（7日内检测2-8℃储存，超 过15日后检测需要-20℃储存），用ELISA法进行测定，如果APLA阴性， 则需要进行淋巴细胞主动免疫治疗。
如何选择供血者



供血者首选患者丈夫。由于使用丈夫的淋巴细胞简便、副作用少，故目 前临床上倾向于使用丈夫的淋巴细胞作为免疫原。 如果患者丈夫因患乙肝、丙肝等血液传染疾病不能供血，可采用无关第 三个体的淋巴细胞进行治疗，效果无差异。最好选择与患者没有血缘关 系的健康人，供血者与患者有血缘关系效果稍差。 抽血者须空腹抽血；必须即抽即用，不可库存。
主动免疫治疗的安全性


主动免疫治疗在全球应用已有20余年，其主要的副作用为感染性疾病 （如肝炎、HIV等），输血反应、过敏反应、移植抗宿主反应等。 关于其对母体免疫功能的影响，到目前为止尚未见有易感染和恶性肿瘤 的报道。 关于对子代的影响，林其德、张建平、李大金等经过十多年的观察，未 见主动免疫对母体及子代产生明显副作用。主动免疫的后代在出生体重、 体格生长发育和智力，包括个人-社会、语言、精细动作-适应性、大运 动4个能区方面与同龄儿童比较差异无显著性意义。 综合国内外文献，多数学者认为主动免疫疗法是较为安全的。
封闭抗体缺乏如何治疗

封闭抗体阴性表示女方体内缺乏封闭抗体，容易发生复发性流产，需要 使用丈夫或第三方血液中的淋巴细胞给患者皮内注射，使之体内产生封 闭抗体，以保护胚胎不被母体当做异物排斥。这种治疗称为淋巴细胞主 动免疫治疗，简称主动免疫治疗(LIT)。
主动免疫疗法的作用机制
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习惯性流产患者免疫治疗前后封闭抗体的变化及其意义 （广西医学2009年1月第31卷第1期） 广西妇幼保健院
免疫治疗前后封闭抗体的变化
治疗前 阳性 阴性 阳性率 28 1098 2. 49% 一个疗程后 519 579 47. 27% 二个疗程后 231 348 68. 32% 三个疗程后 143 205 81. 33%
非免疫类复发性流产
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染色体异常型：指夫妻双方或一方或胚胎染色体异常所致流产。 生殖道解剖异常型：指先天性发育异常或后天性子宫疾病所致解剖异 常所致流产。 内分泌异常型：指由于内分泌功能失调所致流产。 生殖道感染型：指弓形虫、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等感染所致的 流产。
免疫类复发性流产
免疫治疗前后封闭抗体的变化 治疗前 阳性 阴性 阳性率 47 941 4. 76% 一个疗程后 715 226 75. 98% 二个疗程后 188 38 95. 96% 三个疗程后
免疫治疗后封闭抗体阳性者与阴性者的妊娠结局比较 治疗后抗体 阳性 阴性 合计 例数 893 17 910 妊娠成功 848 8 856 再次流产 45 9 54 妊娠成功率 94. 96% 47. 06% 94.07%