免疫学检验-抗原抗体反应的类型ppt课件
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• 标记免疫的抗原抗体反应。每种反应类型都包括 若干实验技术。
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第三章 免疫原和抗血清的制备
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抗原和抗体是免疫学检测的两个重要因素；也 是整个免疫反应的基本条件。
第一节 免疫原的制备
免疫原是诱导机体产生抗体和致敏淋巴细胞， 并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反 应的物质。
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（二）超速离心分离法 超速离心分离法最常用于分离亚细胞成分及大
分子蛋白质，它是进一步纯化的第一次过筛。 （三）选择性沉淀法
选择性沉淀法是采用各种沉淀剂或利用某些条 件促使抗原成分沉淀的方法。 １.核酸去除法 ２.盐析沉淀法
（1）抗原的粗筛 （2）提取丙种球蛋白 （3）抗原的浓缩
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细菌的鞭毛抗原需用有动力的菌株，菌液用0.3 ％－0.5％甲醛处理，而菌体抗原则需要100℃加温2 －2.5h去掉鞭毛抗原后应用。毒素抗原则需要在杀 菌后再加 0.5％－l％氯化钙溶液。寄生虫和真菌抗 原除用破碎法加工粗提外，大多要加以适当纯化。 有些细胞膜亦可制成颗粒性抗原。颗粒抗原悬液呈 浑浊状或乳浊状，多采用静脉内免疫法，较少加佐 剂作皮内注射。
第四节 抗原抗体反应的类型
• 可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应 （precipitation）；
• 颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应 （agglutination）；
• 抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应 （cytolysis）；
• 细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反 应（neutralization）；
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（四）凝胶过滤 凝胶过滤又名分子筛层析，凝胶是具有三维空
间多孔网状结构的物质，经过处理平衡后，装入层 析柱内成为分子筛的支撑物。 （五）离子交换层析
离子交换层析是利用一些带电离子基团的凝胶 或纤维素，吸附交换带有相反电荷的蛋白质抗原。
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３.有机溶剂沉淀法 ４.水溶性非离子型聚合物沉淀法 常用聚合物为聚乙 二醇（Polyethyleneglycol，PEG）及硫酸葡聚糖。 水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制仍不十分清楚，大 致机制有如下解释： ①聚合物与蛋白质形成共沉淀物； ②聚合物与蛋白质之间发生水的重分配； ③聚合物与蛋白质形成复合物。
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一、颗粒性抗原的制备 颗粒性抗原包括人和各种动物细胞抗原以及各
种细菌抗原和寄生虫体抗原。血细胞抗原制备比较 简单，常用的细胞抗原为绵羊红细胞，采用该细胞 制备溶血素，直接取新鲜绵羊红细胞，以无菌生理 盐水洗涤3次（每次离心2000r／min 10min），最 后配成106／ml浓度的细胞悬液，即可应用。细菌抗 原多用液体或固体纯培养物，经集菌后处理。
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二、可溶性抗原的制备和纯化
（一）组织和细胞粗抗原的制备 １.组织细胞抗原的制备 所用组织必须是新
鲜的或低温保存的。器官或组织材料取得后应立即 去除表面的包膜或结缔组织以及一些大血管。脏器 应用生理盐水灌注，去除血管内残留的血液及有形 成分，再用含0.5ｇ／LNaN3生理盐水洗去血迹及污 染物。将洗净的组织剪成小块，然后进行粉碎。粉 碎的方法有两类：①高速组织捣碎机法②研磨法
（5）表面活性剂处理法： 在适当的温度、pH及低离子强度的条件下，表
面活性剂能与脂蛋白形成微泡，使膜溶解或渗透性 改变。常用的表面活性剂有十二烷基硫酸钠（SDS 阴离子型）、二乙胺十六烷基溴（阳离子型）、聚 山梨酯（非阳离子型）、苯扎溴胺等。该方法常用 于破碎细菌，且作用比较温和。在提取核酸时常用 此方法破碎细胞。
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2．组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备 制备抗原的细胞包括正常细胞、传代细胞或病
理细胞（如肿瘤细胞）。细胞抗原一般分为三个组 分：膜蛋白抗原、细胞质抗原（主要为细胞器）和 细胞核与核膜抗原。三种抗原的制备均需将细胞破 碎，其方法有以下几种。
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（1）反复冻融法：将细胞或整块组织置－20℃冰 箱内冻结，然后置室温融化，如此反复2次，大部分 组织细胞及细胞内的颗粒可冻融破碎。 （2）超声破碎法：常用于处理微生物和组织细胞。 （3）自溶法：利用组织和微生物的自身酶系统，在 一定的pH和温度下，使其细胞裂解。自溶的温度， 对动物组织细胞常选0－4℃，而对待微生物常选室 温（22－25℃）。自溶时常需加入少量防腐剂，如 甲苯或氯仿等，因NaN3抑制酶的活力，则不宜使用。
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（4）酶处理法： 溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶等，在一定的条件
下能消化细菌和组织细胞。如溶菌酶在碱性条件下， PH8.0可对革兰阳性菌细胞壁的溶菌作用，该法适 用于多种微生物。酶破坏细胞具有作用条件温和、 内含物成分不易受到破坏、细胞壁损坏的程度可以 控制等特点。
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第三章 免疫原和抗血清的制备
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抗原和抗体是免疫学检测的两个重要因素；也 是整个免疫反应的基本条件。
第一节 免疫原的制备
免疫原是诱导机体产生抗体和致敏淋巴细胞， 并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反 应的物质。
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（二）超速离心分离法 超速离心分离法最常用于分离亚细胞成分及大
分子蛋白质，它是进一步纯化的第一次过筛。 （三）选择性沉淀法
选择性沉淀法是采用各种沉淀剂或利用某些条 件促使抗原成分沉淀的方法。 １.核酸去除法 ２.盐析沉淀法
（1）抗原的粗筛 （2）提取丙种球蛋白 （3）抗原的浓缩
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细菌的鞭毛抗原需用有动力的菌株，菌液用0.3 ％－0.5％甲醛处理，而菌体抗原则需要100℃加温2 －2.5h去掉鞭毛抗原后应用。毒素抗原则需要在杀 菌后再加 0.5％－l％氯化钙溶液。寄生虫和真菌抗 原除用破碎法加工粗提外，大多要加以适当纯化。 有些细胞膜亦可制成颗粒性抗原。颗粒抗原悬液呈 浑浊状或乳浊状，多采用静脉内免疫法，较少加佐 剂作皮内注射。
第四节 抗原抗体反应的类型
• 可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应 （precipitation）；
• 颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应 （agglutination）；
• 抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应 （cytolysis）；
• 细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反 应（neutralization）；
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（四）凝胶过滤 凝胶过滤又名分子筛层析，凝胶是具有三维空
间多孔网状结构的物质，经过处理平衡后，装入层 析柱内成为分子筛的支撑物。 （五）离子交换层析
离子交换层析是利用一些带电离子基团的凝胶 或纤维素，吸附交换带有相反电荷的蛋白质抗原。
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３.有机溶剂沉淀法 ４.水溶性非离子型聚合物沉淀法 常用聚合物为聚乙 二醇（Polyethyleneglycol，PEG）及硫酸葡聚糖。 水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制仍不十分清楚，大 致机制有如下解释： ①聚合物与蛋白质形成共沉淀物； ②聚合物与蛋白质之间发生水的重分配； ③聚合物与蛋白质形成复合物。
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一、颗粒性抗原的制备 颗粒性抗原包括人和各种动物细胞抗原以及各
种细菌抗原和寄生虫体抗原。血细胞抗原制备比较 简单，常用的细胞抗原为绵羊红细胞，采用该细胞 制备溶血素，直接取新鲜绵羊红细胞，以无菌生理 盐水洗涤3次（每次离心2000r／min 10min），最 后配成106／ml浓度的细胞悬液，即可应用。细菌抗 原多用液体或固体纯培养物，经集菌后处理。
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二、可溶性抗原的制备和纯化
（一）组织和细胞粗抗原的制备 １.组织细胞抗原的制备 所用组织必须是新
鲜的或低温保存的。器官或组织材料取得后应立即 去除表面的包膜或结缔组织以及一些大血管。脏器 应用生理盐水灌注，去除血管内残留的血液及有形 成分，再用含0.5ｇ／LNaN3生理盐水洗去血迹及污 染物。将洗净的组织剪成小块，然后进行粉碎。粉 碎的方法有两类：①高速组织捣碎机法②研磨法
（5）表面活性剂处理法： 在适当的温度、pH及低离子强度的条件下，表
面活性剂能与脂蛋白形成微泡，使膜溶解或渗透性 改变。常用的表面活性剂有十二烷基硫酸钠（SDS 阴离子型）、二乙胺十六烷基溴（阳离子型）、聚 山梨酯（非阳离子型）、苯扎溴胺等。该方法常用 于破碎细菌，且作用比较温和。在提取核酸时常用 此方法破碎细胞。
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2．组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备 制备抗原的细胞包括正常细胞、传代细胞或病
理细胞（如肿瘤细胞）。细胞抗原一般分为三个组 分：膜蛋白抗原、细胞质抗原（主要为细胞器）和 细胞核与核膜抗原。三种抗原的制备均需将细胞破 碎，其方法有以下几种。
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（1）反复冻融法：将细胞或整块组织置－20℃冰 箱内冻结，然后置室温融化，如此反复2次，大部分 组织细胞及细胞内的颗粒可冻融破碎。 （2）超声破碎法：常用于处理微生物和组织细胞。 （3）自溶法：利用组织和微生物的自身酶系统，在 一定的pH和温度下，使其细胞裂解。自溶的温度， 对动物组织细胞常选0－4℃，而对待微生物常选室 温（22－25℃）。自溶时常需加入少量防腐剂，如 甲苯或氯仿等，因NaN3抑制酶的活力，则不宜使用。
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（4）酶处理法： 溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶等，在一定的条件
下能消化细菌和组织细胞。如溶菌酶在碱性条件下， PH8.0可对革兰阳性菌细胞壁的溶菌作用，该法适 用于多种微生物。酶破坏细胞具有作用条件温和、 内含物成分不易受到破坏、细胞壁损坏的程度可以 控制等特点。
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