超敏反应性疾病医疗管理知识学检测(PPT 68页)
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超敏反应性疾病的免疫学检验优秀课件
方法
迟发型 48～72h内观察
速发型 15～30min内观察
结果
一、皮肤试验---点刺试验
将试验抗原与对照液分别 滴于试验部位的皮肤上
用针尖透过液滴轻挑一下 以刺破皮肤而不出血为度
1min后拭（吸）去试验抗原液
比皮内试验敏感性稍低，但假阳性较少； 皮试液浓度要比皮内试验高10～100倍。
超敏反应性疾病的免疫学检验优秀 课件
超敏反应：已经致敏的机体再次接受相同 抗原刺激后，所引起的以生理功能紊乱或组织 损伤为主的异常的适应性免疫应答。
第一节 激发试验
激发试验（provocation test） 是模拟自
然发病条件，用少量超敏原引起一次较轻的超敏 反应发作，达到确定超敏原的一种体内试验。
基础 观察症状 症状好转
饮食
或减轻
1周后
症状未减轻
1周后 吃可疑的 导致 症状
过敏食物
加重
过敏原，重复3次
疑似
排除 食物所致过敏
确定 某食物为过敏原
四、其他方法
将超敏原直接与口腔黏膜接触，当口腔 口腔激发试验 黏膜出现肿胀和充血时，可判断为阳性
反应。
将超敏原滴于一眼，阳性反应为结膜充 结膜激发试验 血、水肿、分泌增加、搔痒，甚至眼睑
二、支气管激发试验（bronchial provocative test,BPT）
口吸入 测基础肺功能
激发物稀释液：
低浓度/小剂量→双倍浓度/剂量递增
1～1分半钟
阳性伴明显气促、喘息 吸入
测定肺功能 直至
支气管 舒张剂
激发物达到最高浓度 阴性反应
阳性标准/ 明显不适/ 临床症状
二、支气管激发试验（bronchial provocative test,BPT皮肤试验的特异性高
超敏反应性疾病及其免疫检测PPT课件
超敏反应/变态反应
Hypersensitivity/Allergy
定义：机体接触到某种抗原并且致敏后，再次受到 相同抗原刺激时，出现生理功能紊乱或组织细胞损 伤的异常适应性免疫应答。 变应原(Allergen):引起超敏反应的抗原
1
超敏反应分为四型
（依发生机制和临床特点）：
• Ⅰ型超敏反应 (速发型超敏反应)
40
药物过敏性血细胞减少
Blood cell antigen
Antibody to drug
complement Adsorbed drug or Drug metabolite
Lysis
41
III 型超敏反应
特点： 1. 形成中等大小（106 Da）、可溶性（19s）复 合物（IC)， IC沉积在血管基底膜上 2. IgG,IgM 或 IgA介导 3. 补体、中性粒细胞参与 4. 造成血管及周围组织炎症
假阴性原因
14
Ⅰ型超敏反应
临床意义
• 寻找变应原 • 预防药物或疫苗过敏
应用评价
• 过敏原有限 • 食物过敏与皮肤试验相关性较差 • 选择过敏原应结合实际情况
15
Ⅰ型超敏反应
• 血清总IgE检测
常用方法：免疫比浊法 临床实验室常用 化学发光免疫法 酶联免疫吸附法---适用于中小实验室 临床意义：升高见于Ⅰ型超敏反应性疾病， 寄生虫感染， IgE型多发性骨髓瘤 应用评价：应建立当地人群IgE水平的参考区间
定义：
II型超敏反应又称细胞毒型（cytotoxic type） 或细胞溶解型（cytolytic type）超敏反应，它 是由靶细胞表面的抗原与相应IgG或IgM类抗体结 合后，在补体、巨噬细胞和NK细胞参与下，引起 的以细胞溶解或组织损伤为主的病理性免疫反应。
Hypersensitivity/Allergy
定义：机体接触到某种抗原并且致敏后，再次受到 相同抗原刺激时，出现生理功能紊乱或组织细胞损 伤的异常适应性免疫应答。 变应原(Allergen):引起超敏反应的抗原
1
超敏反应分为四型
（依发生机制和临床特点）：
• Ⅰ型超敏反应 (速发型超敏反应)
40
药物过敏性血细胞减少
Blood cell antigen
Antibody to drug
complement Adsorbed drug or Drug metabolite
Lysis
41
III 型超敏反应
特点： 1. 形成中等大小（106 Da）、可溶性（19s）复 合物（IC)， IC沉积在血管基底膜上 2. IgG,IgM 或 IgA介导 3. 补体、中性粒细胞参与 4. 造成血管及周围组织炎症
假阴性原因
14
Ⅰ型超敏反应
临床意义
• 寻找变应原 • 预防药物或疫苗过敏
应用评价
• 过敏原有限 • 食物过敏与皮肤试验相关性较差 • 选择过敏原应结合实际情况
15
Ⅰ型超敏反应
• 血清总IgE检测
常用方法：免疫比浊法 临床实验室常用 化学发光免疫法 酶联免疫吸附法---适用于中小实验室 临床意义：升高见于Ⅰ型超敏反应性疾病， 寄生虫感染， IgE型多发性骨髓瘤 应用评价：应建立当地人群IgE水平的参考区间
定义：
II型超敏反应又称细胞毒型（cytotoxic type） 或细胞溶解型（cytolytic type）超敏反应，它 是由靶细胞表面的抗原与相应IgG或IgM类抗体结 合后，在补体、巨噬细胞和NK细胞参与下，引起 的以细胞溶解或组织损伤为主的病理性免疫反应。
超敏反应性疾病及其检验PPT课件
53
速发型皮肤试验的结果判定标准
分级 －
＋ ＋＋
皮内试验 无风团或风团小于阴性对
照
风团3-5mm、红晕＜20mm
风团6-9mm伴红晕
挑剌试验
无风团或风团小于阴性对 照
无风团，阴性＜红晕 ≤20mm
无风团，红晕＞20mmm
＋＋＋ 风团10-15mm伴红晕
风团伴红晕
＋＋＋ 风团＞15mm伴红晕且有伪
＋
4、遗传性
1、抗原在细胞膜上
Ⅱ型 细胞溶解型, 细胞毒型 2、抗体为IgG、IgM
3、以细胞溶解为结局
Ⅲ型 免疫复合物型
1、抗原游离 2、抗体为IgG、IgM 3、 IC沉积，局部发生炎症反应
Ⅳ型 迟发型、细胞型
1、发生迟，消失也慢 2、抗体不参与 3、局部发生慢性炎症反应 47
五、 超敏反应的检验
足
风团伴红晕且有伪足
用磷酸组胺作标准阳性对照时，风团反应与阳性对照比较：
－ 无风团；
＋
为对照的1/3；
＋＋ 为对照的2/3； ＋＋＋ 与对照相同；
＋＋＋＋ ＞对照
54
（3）．临床意义（应用与评价） ①寻找变应原 ②预防药物或疫苗过敏
55
2.血清IgE的检测
（1）．血清总IgE的测定 （2）．特异性IgE测定
4、药物过敏性血细胞减少症：青霉素、磺胺、 安替比林、奎尼丁、非那西汀等药物抗原表 位与血细胞膜蛋白或血浆蛋白结合而获得免 疫原性
25
新生儿溶血症
26
三、 Ⅲ型超敏反应
免疫复合物型
中等大小可溶性免疫复合物沉积于全 身或局部毛细血管基底膜后，通过激活补 体和在血小板、嗜碱性、嗜中性细胞参与 下，引起的以充血水肿、局部坏死和中性 粒浸润为主的主要特征的炎症反应和组织 损伤。
(超敏反应)ppt课件
氨茶碱：
*作用 抑制磷酸二脂酶，阻止cAMP的分解。
注：cAMP可抑制肥大细胞脱颗粒。
防治原则
3.生物活性介质拮抗剂
拮抗剂)
*苯海拉明、扑尔敏、异丙嗪等抗组胺药物 ( 组胺
*水杨酸
4.改善效应器反应性的药物 肾上腺素 (*毛细血管收缩、血压升高)
(缓激肽拮抗剂) * 多根皮苷酊磷酸盐 ( 白三烯拮抗剂)
参与成分
5.生物活性介质
预先合成：组胺、激肽原酶（缓激肽）
引起即刻（或速发相）反应 新合成：白三烯、PAF、前列腺素D2
*作用：
平滑肌收缩、毛细血管扩张、 通透性增加，腺体分泌增多等
发生机制
发生机制
常见疾病
（一）过敏性休克 1.药物过敏性休克
药物：青霉素(最常见)、普鲁卡因、利多卡因、 链霉素、磺胺、有机碘等。 机制：青霉素 机体 青霉噻唑醛酸和青霉烯酸
分类： 吸入性（5-10ng/d）
食入性(10-100g/d) 化学药物与组织蛋白结合
特点： 经皮肤、消化道、呼吸道 进入，多数
人不发生反应，少数人发生变态反应。
2.LgE抗体
参与成分
3.效应细胞（肥大细胞,肥嗜碱性粒细胞）
*表面均具有IgE Fc受体（高亲和力）
4.细胞因子（IL-1，TNF，IL-6CSF等）
Ⅳ型超敏反应
迟发型
I型超敏反应
部位:局部或全身 特点: 1. 速发型（发作快，消退快） 2. 由lgE抗体介导,多种血管活性胺类物质 参与反应 3 .以生理功能紊乱为主，而不 发 生严重 组织细胞损伤 4.有明显的个体差异和遗传倾向
参与成分
1.变应原(Allergens)
概念： 能够诱导变态反应的物质
超敏反应PPT课件
• 常按致敏原出现的规律而表现有一定的季节性或 时令性
• 病理变化以水肿、分泌物增多、平滑肌痉挛、嗜 酸细胞增多为主，临床表现水肿、瘙痒、皮疹、 憋喘、绞痛、流泪等症状
Ⅱ型超敏反应临床特点 50
• 病情发展可缓慢，一般于抗原接触后一周以上发病 • 致病抗原常为药物、菌苗、疫苗、血型性抗原物质 • 临床常见为溶血、出血贫血、紫癜、黄疽、继发感
过敏性哮喘
过敏性鼻炎
过敏性结膜炎
过敏性皮炎
过敏性鼻炎（Allergic Rhinitis）23
花粉症， 美国最常见的过敏性疾病 2千4百万美国人患病（8%人口）
不同年龄发病率不同： 32% 为<17岁 43% 为18至44岁 17% 为45至64岁 8% 为 >65 岁 主要吸入植物花粉致敏，具有明显性季节性和地区性 花粉季节前脱敏疗法常能收到较好效果
定义及各型超敏反应特点
定义
10
• 超敏反应（hypersensitivity），变态反应、过敏反 应（allergy、anaphylaxis）
• 指机体通各种途径接受抗原（变应原allergen）刺激 并产生初次应答后，再次接触相同变应原刺激时，发 生的组织或器官甚至全身性的强烈反应，从而引起生 理功能紊乱或组织损伤为主的特异性免疫应答
机体对胞内感染的病原体（如胞内寄生菌、病毒、某些寄
生虫和真菌等）产生细胞免疫应答，清除病原体或阻止病
原体扩散的同时，可因产生DTH而致组织炎症损伤
(二)接触性皮炎
某些个体接触油漆、染料、化妆品、农药、药物或某些 化学物质，可发生接触性皮炎
(三) DTH参与的其他疾病
DTH在同种移植排斥反应、变态反应性脑脊髓炎、甲状腺 炎、多发性神经炎等疾病的发生、发展中也起重要作用
• 病理变化以水肿、分泌物增多、平滑肌痉挛、嗜 酸细胞增多为主，临床表现水肿、瘙痒、皮疹、 憋喘、绞痛、流泪等症状
Ⅱ型超敏反应临床特点 50
• 病情发展可缓慢，一般于抗原接触后一周以上发病 • 致病抗原常为药物、菌苗、疫苗、血型性抗原物质 • 临床常见为溶血、出血贫血、紫癜、黄疽、继发感
过敏性哮喘
过敏性鼻炎
过敏性结膜炎
过敏性皮炎
过敏性鼻炎（Allergic Rhinitis）23
花粉症， 美国最常见的过敏性疾病 2千4百万美国人患病（8%人口）
不同年龄发病率不同： 32% 为<17岁 43% 为18至44岁 17% 为45至64岁 8% 为 >65 岁 主要吸入植物花粉致敏，具有明显性季节性和地区性 花粉季节前脱敏疗法常能收到较好效果
定义及各型超敏反应特点
定义
10
• 超敏反应（hypersensitivity），变态反应、过敏反 应（allergy、anaphylaxis）
• 指机体通各种途径接受抗原（变应原allergen）刺激 并产生初次应答后，再次接触相同变应原刺激时，发 生的组织或器官甚至全身性的强烈反应，从而引起生 理功能紊乱或组织损伤为主的特异性免疫应答
机体对胞内感染的病原体（如胞内寄生菌、病毒、某些寄
生虫和真菌等）产生细胞免疫应答，清除病原体或阻止病
原体扩散的同时，可因产生DTH而致组织炎症损伤
(二)接触性皮炎
某些个体接触油漆、染料、化妆品、农药、药物或某些 化学物质，可发生接触性皮炎
(三) DTH参与的其他疾病
DTH在同种移植排斥反应、变态反应性脑脊髓炎、甲状腺 炎、多发性神经炎等疾病的发生、发展中也起重要作用
超敏反应性疾病及其免疫检测PPT课件
（二）局部性超敏反应 ★1. 呼吸道过敏反应：由花粉、尘螨、真菌、动物 毛屑等吸入性变应原引起的过敏性哮喘、过敏性鼻炎
29
2.消化道过敏反应：由食物、药物引起过敏性胃肠 炎，表现为恶心、呕吐、腹泻、腹痛等症状 ★ 3.皮肤过敏反应：由食物、 药物、花粉、漆类等 引起，主要表现为荨麻疹、湿疹、血管神经性水肿
◆接触抗原机会：如对某些花粉过敏的人，在乔迁异 地后无抗原刺激机会，故不产生该 抗原 特异的 IgE
13
◆ 细胞因子： Th2细胞分泌的IL-4可促进IgE产生； Th1细胞分泌的IFN-r可抑制IL-4分泌； 因此提高Th1细胞活性，可抑制Th2分泌IL-4， 从而降低IgE产生，阻断IgE 介导的Ⅰ型超敏反应
第二十一章
超敏反应性疾病及其免疫检测
1
思考题：
1.有关超敏反应的基本概念 2.超敏反应的分型、各类型的特点、发生机制 3.各类型超敏反应性疾病及其发生机制的相互比较 4.超敏反应免疫学检测的主要方法、原理和评价
2
基基本本概概念念
★ 1. 超敏反应（hypersensitivity ） 是指机体接触到某些抗原并且致敏后，再
10
2.抗体
引起Ⅰ型超敏反应的抗体主要是IgE
IgE特点： （1） IgE产生的部位：为变应原入侵引起过敏
反应的好发部位，如呼吸道和肠道粘膜
11
（2）IgE重要的生物学特征: 能与自身肥大细胞和嗜碱性粒细胞表
面相应的IgE Fc受体结合，使机体处于 致敏状态
12
（3）IgE合成的影响因素：
◆遗传：具有过敏体质的人对变态反应性疾病易感， 该种人血清IgE水平显著升高
◆血小板活化因子（PAF）： 促使血管扩张，通透性增强
29
2.消化道过敏反应：由食物、药物引起过敏性胃肠 炎，表现为恶心、呕吐、腹泻、腹痛等症状 ★ 3.皮肤过敏反应：由食物、 药物、花粉、漆类等 引起，主要表现为荨麻疹、湿疹、血管神经性水肿
◆接触抗原机会：如对某些花粉过敏的人，在乔迁异 地后无抗原刺激机会，故不产生该 抗原 特异的 IgE
13
◆ 细胞因子： Th2细胞分泌的IL-4可促进IgE产生； Th1细胞分泌的IFN-r可抑制IL-4分泌； 因此提高Th1细胞活性，可抑制Th2分泌IL-4， 从而降低IgE产生，阻断IgE 介导的Ⅰ型超敏反应
第二十一章
超敏反应性疾病及其免疫检测
1
思考题：
1.有关超敏反应的基本概念 2.超敏反应的分型、各类型的特点、发生机制 3.各类型超敏反应性疾病及其发生机制的相互比较 4.超敏反应免疫学检测的主要方法、原理和评价
2
基基本本概概念念
★ 1. 超敏反应（hypersensitivity ） 是指机体接触到某些抗原并且致敏后，再
10
2.抗体
引起Ⅰ型超敏反应的抗体主要是IgE
IgE特点： （1） IgE产生的部位：为变应原入侵引起过敏
反应的好发部位，如呼吸道和肠道粘膜
11
（2）IgE重要的生物学特征: 能与自身肥大细胞和嗜碱性粒细胞表
面相应的IgE Fc受体结合，使机体处于 致敏状态
12
（3）IgE合成的影响因素：
◆遗传：具有过敏体质的人对变态反应性疾病易感， 该种人血清IgE水平显著升高
◆血小板活化因子（PAF）： 促使血管扩张，通透性增强
超敏反应性疾病医疗管理知识学检测课件
超敏反应性疾病医疗管 理知识学检测课件
目录
Contents
• 超敏反应性疾病的医疗管理 • 超敏反应性疾病的并发症管理 • 超敏反应性疾病的护理与康复 • 超敏反应性疾病的科研进展与展望
01 超敏反应性疾病概述
定义与分类
定义
超敏反应性疾病是指机体受同一抗原 再次刺激后发生的一种表现为组织损 伤或生理功能紊乱的异常免疫反应。
通过治疗和康复训练，帮助患者恢复 受损的功能，提高生活质量。
患者教育与自我管理
疾病知识教育
向患者及家属传授超敏反应性疾病的基本知识，提高认知水平。
自我管理指导
指导患者进行自我管理和日常保健，包括病情监测、饮食调整、生活规律等。
05
超敏反应性疾病的科研进展与 展望
科研进展与成果
01
02
03
04
免疫机制研究
深入研究超敏反应性疾 病的发病机制，寻找更
有效的治疗靶点。
个体化治疗
根据患者的基因、环境 和生活习惯等因素，制 定个体化的治疗方案。
新型治疗手段
探索基因治疗、细胞治 疗等新型治疗手段，提
高治疗效果。
临床实ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ指南
制定和完善超敏反应性 疾病的临床实践指南，
提高诊疗水平。
临床应用前景与价值
提高诊疗效果
通过不断深入的研究和临床实 践，提高超敏反应性疾病的诊
深入探讨超敏反应性疾病的免 疫机制，为治疗提供理论基础。
新型药物研发
针对超敏反应性疾病的发病机 制，研发新型药物和治疗手段。
临床试验进展
开展多项临床试验，验证新药 和疗法的安全性和有效性。
跨学科合作
加强医学、生物学、化学等多 学科的合作，共同推进超敏反
目录
Contents
• 超敏反应性疾病的医疗管理 • 超敏反应性疾病的并发症管理 • 超敏反应性疾病的护理与康复 • 超敏反应性疾病的科研进展与展望
01 超敏反应性疾病概述
定义与分类
定义
超敏反应性疾病是指机体受同一抗原 再次刺激后发生的一种表现为组织损 伤或生理功能紊乱的异常免疫反应。
通过治疗和康复训练，帮助患者恢复 受损的功能，提高生活质量。
患者教育与自我管理
疾病知识教育
向患者及家属传授超敏反应性疾病的基本知识，提高认知水平。
自我管理指导
指导患者进行自我管理和日常保健，包括病情监测、饮食调整、生活规律等。
05
超敏反应性疾病的科研进展与 展望
科研进展与成果
01
02
03
04
免疫机制研究
深入研究超敏反应性疾 病的发病机制，寻找更
有效的治疗靶点。
个体化治疗
根据患者的基因、环境 和生活习惯等因素，制 定个体化的治疗方案。
新型治疗手段
探索基因治疗、细胞治 疗等新型治疗手段，提
高治疗效果。
临床实ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ指南
制定和完善超敏反应性 疾病的临床实践指南，
提高诊疗水平。
临床应用前景与价值
提高诊疗效果
通过不断深入的研究和临床实 践，提高超敏反应性疾病的诊
深入探讨超敏反应性疾病的免 疫机制，为治疗提供理论基础。
新型药物研发
针对超敏反应性疾病的发病机 制，研发新型药物和治疗手段。
临床试验进展
开展多项临床试验，验证新药 和疗法的安全性和有效性。
跨学科合作
加强医学、生物学、化学等多 学科的合作，共同推进超敏反
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2.标本：待测血清。 3.包被缓冲液、洗涤缓冲液、反应终止液（2 mol/L
H2SO4）等。 4.酶标板、微量加样器、酶标仪、温箱等。
操作步骤
1.包被羊抗人IgE抗体 （4℃过夜，洗涤）
2.封闭（0.5%的小牛血清或牛血清清蛋白）
3.加样（梯度稀释的IgE校准品、待测血清、阳性对照、 阴性对照、空白对照 ）
果超出此范围，应对样品进行适当的稀释，使样品中IgE的浓度 在线性范围内再行测定。
结果分析
以IgE校准品的参考含量（IU/ml）为横坐标，以对应A 值为纵坐标，绘制标准曲线。根据待测样品的A值，在标准 曲线中查出稀释后样品中IgE的浓度，再乘以稀释倍数，即 为原样品中IgE的浓度。1IU=2.4ng。
第七单元
超敏反应性疾病的免疫学检测
实验一 血清IgE的检测
一、血清总IgE的检测
实验目的
1.掌握ELISA双抗体夹心法测定血清总IgE的方法。 2.熟悉IgE在I型超敏反应中的作用和临床意义。
实验原理
待测抗原
ELISA双抗体夹验材料
1.羊抗人IgE抗体、HRP标记的羊抗人IgE抗体、IgE 校准品、TMB（四甲基联苯胺）。
注意事项
1. 不同批次的组分不可混用，且只能在效期内使用。 2. 检测标本只限于人血清、血浆。 3. 如果样本在3天内检测，可以保存在2~8℃，否则应冷
冻保存，避免反复冻溶。 4. 如果标本含有不溶物，离心去除。溶血、浑浊或含有
叠氮钠的标本不可用。 5. 加样器枪头不可混用，避免交叉污染。
结果分析
实验材料
1. 检测条 包被有特异性过敏原的NC膜 2. 碱性磷酸酶标记的抗人IgE 3. 标本稀释液 4. 碱性磷酸酶底物 5. 浓缩洗液（10X） 洗液按照1:10倍稀释 6. 标本 待测血清用标本稀释液按照1:10倍稀释。
操作步骤
稀释好的洗液将检测条要充分浸透，放在摇床上摇10分钟 倒掉洗液，加入稀释好的测试者血清，放于摇床室温反应1.5小时 倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震荡10分钟，重复三次 每槽加入碱性磷酸酶标记的抗人IgE，放于摇床上室温反应30分钟 将碱性磷酸酶标记的抗人IgE倒掉，用洗液洗三次，每次10分钟 加入碱性磷酸酶底物，放于摇床，避光反应约10分钟 去掉底物溶液，用纯水洗三次，每次5分钟 将检测条放在干燥纸上，等检测条完全干燥后判定检测结果
IgE升高相关的常见疾病有：过敏性哮喘、季节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药 物性间质性肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某些寄生虫感染等。上述疾病 时IgE升高的程度并不一致，在过敏性支气管肺曲菌病时最为显著，其值可达5000～ 20000ng/ml，除了此病和特应性皮炎以及在花粉季节之外，任何血清总IgE水平大于 5000ng/ml的患者均应考虑寄生虫感染的可能性。
通过显色区带确定血清中含有哪种sIgE，进而判断 待检者对哪种过敏原过敏。
临床意义
slgE测定是体外检测变应原的重要手段，主要用于Ⅰ 型超敏反应的诊断。该检测条包被有多种特异性过敏原，通 过检测血浆（血清）中过敏原slgE，筛查待检者对何种过敏 原过敏，为临床进行脱敏治疗奠定基础。
小结和讨论
1.人类I型超敏反应可表现为全身性超敏反应和局部性 超敏反应两种。
思考题
1. ELISA双抗体夹心法定量测定血清总IgE的原理及 应注意的问题有哪些？
2. 测定血清总IgE的临床意义？
二、血清特异性IgE的检测
实验目的
1.掌握斑点酶免疫印迹法检测sIgE的原理和方法。 2.熟悉sIgE在I型超敏反应中的作用和临床意义。
实验原理
斑点酶免疫印迹法：用NC膜作为固相支持物，检测区的不同区域 包被有特异性的过敏原，质控区包被有兔抗鼠Ig抗体。检测时将稀释的 病人血清加入反应槽内，血清中的sIgE与NC膜上的相应过敏原结合。 通过洗涤去掉未结合的游离物质，再加入酶标记的抗人IgE抗体，此抗 体会与检测区NC膜上的sIgE结合，同时会与质控区上的兔抗鼠Ig抗体 结合。如标本中无sIgE，酶标抗体不能结合在检测区相应过敏原区带上 。通过洗涤去掉未结合的标记物，然后加入底物显色。通过显色区带确 定血清中含有哪种sIgE，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。
4.37℃温育2h，洗涤
EE E E
5.加入工作浓度的HRP标记的羊抗人IgE
6.37℃温育2h，洗涤
7.加入底物，37℃温育15分钟 8.加入终止液，终止反应
9.492nm波长测各孔吸光度值（A值）
注意事项
1.包被抗体量、酶标抗体的加入量等可影响测定结果，需预先摸索最 佳条件。
2.洗涤要彻底，必要时可加大洗涤液的浓度。 3.结果判断须在10分钟内完成。 4.IgE含量与吸光度值在一定范围内呈线性关系，如果样品的测定结
思考题
1. 测定血清sIgE的方法有哪些？各有何优缺点？ 2. 测定血清sIgE的临床意义？
实验二 红细胞表面不完全抗体的检测
一、直接Coombs试验（试管法 ）
实验目的
1.掌握直接Coombs试验的原理和操作方法。 2.熟悉Coombs试验的临床意义。
实验原理
＋
患者红细胞
Coombs试剂
临床意义
血清总IgE水平一般用国际单位（IU）或ng表示，1IU＝2.4ng，相当于WHO标 准冻干血清制剂0.00928mg内所含的IgE量。正常人群IgE水平受环境、种族、遗传、 年龄、检测方法及取样标准等因素的影响，以致各家报道的正常值相差甚远。婴儿脐 带血IgE水平小于0.5IU/ml，出生后随年龄增长而逐渐升高，12岁时达成人水平。成 人血清IgE水平约在20～200IU/ml之间，一般认为大于333IU/ml（800ng/ml）时为异 常升高。
2.在5类免疫球蛋白中，IgE是血清中含量最低，半衰期 最短，分解率最高，对热最不稳定的Ig。而在I型超 敏反应患者体内，IgE含量显著增高。
3.血清总IgE的含量是由各种抗原IgE的总和决定。正常 人血清IgE含量极微，约0.1～0.9mg/L水平。临床上 一般采用敏感性较高、稳定性较好的化学发光免疫 测定法、酶联免疫测定法进行检测。
H2SO4）等。 4.酶标板、微量加样器、酶标仪、温箱等。
操作步骤
1.包被羊抗人IgE抗体 （4℃过夜，洗涤）
2.封闭（0.5%的小牛血清或牛血清清蛋白）
3.加样（梯度稀释的IgE校准品、待测血清、阳性对照、 阴性对照、空白对照 ）
果超出此范围，应对样品进行适当的稀释，使样品中IgE的浓度 在线性范围内再行测定。
结果分析
以IgE校准品的参考含量（IU/ml）为横坐标，以对应A 值为纵坐标，绘制标准曲线。根据待测样品的A值，在标准 曲线中查出稀释后样品中IgE的浓度，再乘以稀释倍数，即 为原样品中IgE的浓度。1IU=2.4ng。
第七单元
超敏反应性疾病的免疫学检测
实验一 血清IgE的检测
一、血清总IgE的检测
实验目的
1.掌握ELISA双抗体夹心法测定血清总IgE的方法。 2.熟悉IgE在I型超敏反应中的作用和临床意义。
实验原理
待测抗原
ELISA双抗体夹验材料
1.羊抗人IgE抗体、HRP标记的羊抗人IgE抗体、IgE 校准品、TMB（四甲基联苯胺）。
注意事项
1. 不同批次的组分不可混用，且只能在效期内使用。 2. 检测标本只限于人血清、血浆。 3. 如果样本在3天内检测，可以保存在2~8℃，否则应冷
冻保存，避免反复冻溶。 4. 如果标本含有不溶物，离心去除。溶血、浑浊或含有
叠氮钠的标本不可用。 5. 加样器枪头不可混用，避免交叉污染。
结果分析
实验材料
1. 检测条 包被有特异性过敏原的NC膜 2. 碱性磷酸酶标记的抗人IgE 3. 标本稀释液 4. 碱性磷酸酶底物 5. 浓缩洗液（10X） 洗液按照1:10倍稀释 6. 标本 待测血清用标本稀释液按照1:10倍稀释。
操作步骤
稀释好的洗液将检测条要充分浸透，放在摇床上摇10分钟 倒掉洗液，加入稀释好的测试者血清，放于摇床室温反应1.5小时 倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震荡10分钟，重复三次 每槽加入碱性磷酸酶标记的抗人IgE，放于摇床上室温反应30分钟 将碱性磷酸酶标记的抗人IgE倒掉，用洗液洗三次，每次10分钟 加入碱性磷酸酶底物，放于摇床，避光反应约10分钟 去掉底物溶液，用纯水洗三次，每次5分钟 将检测条放在干燥纸上，等检测条完全干燥后判定检测结果
IgE升高相关的常见疾病有：过敏性哮喘、季节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药 物性间质性肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某些寄生虫感染等。上述疾病 时IgE升高的程度并不一致，在过敏性支气管肺曲菌病时最为显著，其值可达5000～ 20000ng/ml，除了此病和特应性皮炎以及在花粉季节之外，任何血清总IgE水平大于 5000ng/ml的患者均应考虑寄生虫感染的可能性。
通过显色区带确定血清中含有哪种sIgE，进而判断 待检者对哪种过敏原过敏。
临床意义
slgE测定是体外检测变应原的重要手段，主要用于Ⅰ 型超敏反应的诊断。该检测条包被有多种特异性过敏原，通 过检测血浆（血清）中过敏原slgE，筛查待检者对何种过敏 原过敏，为临床进行脱敏治疗奠定基础。
小结和讨论
1.人类I型超敏反应可表现为全身性超敏反应和局部性 超敏反应两种。
思考题
1. ELISA双抗体夹心法定量测定血清总IgE的原理及 应注意的问题有哪些？
2. 测定血清总IgE的临床意义？
二、血清特异性IgE的检测
实验目的
1.掌握斑点酶免疫印迹法检测sIgE的原理和方法。 2.熟悉sIgE在I型超敏反应中的作用和临床意义。
实验原理
斑点酶免疫印迹法：用NC膜作为固相支持物，检测区的不同区域 包被有特异性的过敏原，质控区包被有兔抗鼠Ig抗体。检测时将稀释的 病人血清加入反应槽内，血清中的sIgE与NC膜上的相应过敏原结合。 通过洗涤去掉未结合的游离物质，再加入酶标记的抗人IgE抗体，此抗 体会与检测区NC膜上的sIgE结合，同时会与质控区上的兔抗鼠Ig抗体 结合。如标本中无sIgE，酶标抗体不能结合在检测区相应过敏原区带上 。通过洗涤去掉未结合的标记物，然后加入底物显色。通过显色区带确 定血清中含有哪种sIgE，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。
4.37℃温育2h，洗涤
EE E E
5.加入工作浓度的HRP标记的羊抗人IgE
6.37℃温育2h，洗涤
7.加入底物，37℃温育15分钟 8.加入终止液，终止反应
9.492nm波长测各孔吸光度值（A值）
注意事项
1.包被抗体量、酶标抗体的加入量等可影响测定结果，需预先摸索最 佳条件。
2.洗涤要彻底，必要时可加大洗涤液的浓度。 3.结果判断须在10分钟内完成。 4.IgE含量与吸光度值在一定范围内呈线性关系，如果样品的测定结
思考题
1. 测定血清sIgE的方法有哪些？各有何优缺点？ 2. 测定血清sIgE的临床意义？
实验二 红细胞表面不完全抗体的检测
一、直接Coombs试验（试管法 ）
实验目的
1.掌握直接Coombs试验的原理和操作方法。 2.熟悉Coombs试验的临床意义。
实验原理
＋
患者红细胞
Coombs试剂
临床意义
血清总IgE水平一般用国际单位（IU）或ng表示，1IU＝2.4ng，相当于WHO标 准冻干血清制剂0.00928mg内所含的IgE量。正常人群IgE水平受环境、种族、遗传、 年龄、检测方法及取样标准等因素的影响，以致各家报道的正常值相差甚远。婴儿脐 带血IgE水平小于0.5IU/ml，出生后随年龄增长而逐渐升高，12岁时达成人水平。成 人血清IgE水平约在20～200IU/ml之间，一般认为大于333IU/ml（800ng/ml）时为异 常升高。
2.在5类免疫球蛋白中，IgE是血清中含量最低，半衰期 最短，分解率最高，对热最不稳定的Ig。而在I型超 敏反应患者体内，IgE含量显著增高。
3.血清总IgE的含量是由各种抗原IgE的总和决定。正常 人血清IgE含量极微，约0.1～0.9mg/L水平。临床上 一般采用敏感性较高、稳定性较好的化学发光免疫 测定法、酶联免疫测定法进行检测。