实验室的标准操作规程(SOP)( 13) PPT课件

酰胺（BSTFA）+1%三甲基氯硅烷（TMCS）{美国 Supelco产品，货号 33154-u，0.1mL/ampul}。
实验室的标准操作规程（SOP）
气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素
• 2.3 标准物质 • 2.3.1 氯霉素（chloramphenicol）：纯度≥99%，Amresco分装，上海
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气相色谱法-质谱检测法检测氯霉素
• 2 实验室设备 • 2.1 仪器和设备 • 2.1.1 Agilent6890气相色谱仪：配有负化学源的5973N质谱检测器。 • 2.1.2 离心机：5810型，Eppendorf公司。 • 2.1.3 均质器：T25型，18G 刀，IKA公司 • 2.1.4 旋转蒸发器：R-200，BUCHI公司。 • 2.1.5 移液枪：200μ L、1000μ L、5000μ L，Eppendorf公司。 • 2.1.6 具塞塑料离心管：15 mL 、50 ML。 • 2.1.7 涡流混匀器：39760型，Thermolyne公司。
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• 3.2.2 衍生化 • 将浓缩液移入5 mL离心管中，用1 mL乙酸乙酯洗涤鸡心瓶，合并乙酸乙
酯。于40℃吹氮气蒸发至干。加入100 µL正己烷和100 µL硅烷化试剂， 于70℃烘箱中加热30min。吹氮气蒸发至干，加入0.50 mL正己烷与环己 烷混合液（6：4），混匀溶解，供气相色谱测定。 • 3.2.3 测定 • 3.2.3.1 气相色谱条件 • a) 色谱柱：30 m × 0.25 mm × 0.25 µm，HP-5MS；
围，进行全扫描分析，确定定量离了和确证离子及其丰度 比，见附录1。
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• 10.2 标准工作曲线 • 用注射器分别移取0.05µg/mL ，20µL 、30µL、60µL；0.1µg/mL，50µL,
1µg/mL, 25µL、标准工作液置于6个5ML 离心管中，氮气吹干，其系列 分别相当于样品中0.2、0.3、0.4、1、5 ng/g的浓度。 • 分别注射等体积的标准工作液按给定的色谱条件进行测定，用GC-NCIMS测定。记录峰面积，以峰面积为纵坐标，目标化合物浓度为横坐标， 绘制标准工作曲线，计算线性关系，得到相关系数，结果见附录2。 • 10.3 回收率实验和室内精密度实验 • 以阴性控制样品为测试样品，添加水平分别为0.2μ g/kg，0.3μ g/kg， 0.4μ g/kg，做6个平行样，共做三次，用对应工作曲线计算每个样品的 浓度，并计算回收率、标准偏差和变异系数。
• V—— 最终样液的定容体积，mL；
•
m—— 最终样液所代表试样量，g。
• 计算结果需扣除空白值。
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• 7 测定低限 • 本方法氯霉素的测定低限为 0.2 µg/kg. • 8 可接受的检验结果 • 在添加浓度0.5μ g/kg时，回收率，50%~120%。 • 9 检测报告 • 按照SPSBA00024检验报告管理程序执行。 • 10 方法验证 • 10.1 取相当于1μ g/g的氯霉素衍生化物，在200-600M/z范
行处理。 • 5.3 阳性控制样品 • 称取5.0克阴性控制样品，置于50 mL离心管中，用微量注射器加入
0.1µg/mL的氯霉素标准工作液25 µL，相当于样品浓度0.5ng/g用与样 品相同的方法进行处理。用相同浓度的标准进行定量，计算回收率，用 来判断本组操作的可靠性。
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• 6 结果计算
• 6.1 外标法定量
•
用色谱数据处理机或按下列公式计算：
•
• 式中：X—— 试样中—— 样液中硅烷化氯霉素色谱峰面积；
• AS——标准工作溶液中硅烷化氯霉素色谱峰面积；
•
c—— 标准工作溶液中氯霉素的浓度，µg/mL；
生工生物工程有限公司和Sigma公司。 • 2.4 标准溶液的配制 • 2.4.1 标准储备液的配制 • 准确称取氯霉素标样50mg置50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至
刻度，混匀，浓度为1 mg/mL，4℃保存6个月。 • 2.4.2 标准工作溶液配制： • 取1mL储备液用甲醇溶解定容到100Ml，此时浓度为1μ g/mL，取1μ g/mL
于500 g试样，混匀，均分成两份。装入清洁容器内，加封后，表明标记。 • 3.2 测定步骤 • 3.2.1 提取与净化 • 称取5 g（精确至0.01 g）试样于50 mL离心管中。加入25 mL乙酸乙酯，用均质
器均质提取2 min，4000 r/min离心3 min。将乙酸乙酯层移入50 mL鸡心瓶中， 试样再加入5 mL乙酸乙酯，涡流混匀器混匀1min，合并乙酸乙酯提取液，于 40℃旋转蒸发至近干。 • 加入1 mL甲醇溶解残渣，再加入20 mL 4% 氯化钠溶液和15 mL正己烷，用涡流 混匀器混合1 min，4000 r/min离心3 min。弃去正己烷层，水层加15 mL正己烷， 同上操作，弃去正己烷层。水层中加入15 mL乙酸乙酯，用涡流混匀器混合2 min，3000 r/min离心3min。吸取乙酸乙酯层，通过无水硫酸钠柱（5g）脱水于 另一个50 mL鸡心瓶中，用少量乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱。于40 ℃旋转蒸发 至约1 mL。
a) 传输线温度：280 C
•
b) 溶剂延迟： 5min
•
c) 离子源温度：150 C
• d) 四极杆温度：100 C
• e) 反应气：甲烷，流量：2ml/min
• f) 选择离子监测
•
目标物
监测离子
•
氯霉素
466，468，470，376
• 其中定量离子为466，定性离子为468，470，376
•
g) 离子停留时间：60毫秒
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• 2.2 试剂 • 所有试剂均为分析纯级（有机试剂需重蒸馏），水为去离子水。 • 2.2.1 乙酸乙酯。 • 2.2.2 甲醇。 • 2.2.3 正己烷。 • 2.2.4 氯化钠。 • 2.2.5 无水硫酸钠：经650℃灼烧4 h，置于干燥器内备用。 • 2.2.6 硅烷化试剂： Sylon BFT {99% N,O-双（三甲基硅烷）三氟乙
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• 5、质量控制 • 每组实验除标准、样品，需同时进行溶剂空白实验、阴性控制样品实验
和阳性控制样品实验。 • 5.1 溶剂空白 • 不加试样，用与样品相同的方法进行处理。 • 5.2 阴性控制样品 • 称取5.0克阴性控制样品，置于50 mL离心管中，用与样品相同的方法进
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• (2)质谱确证 • 在保留时间窗口内出现色谱峰后，获取其质谱图，扣除本
底后如果以下判别标准全部符合，则可判定氯霉素存在： • 所有4个监测离子全部在质谱图中出现 • 离子466为基峰和定量离子，其它3个离子与基峰丰度之比
应符合如下标准 • 质荷比 标准丰度比（%） 允许相对偏离范围（%） • 468 76 ±20 • 470 18 ±30 • 376 20 ±25
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• 水产品和畜、禽肉中氯霉素残留量检验方法
气相色谱法-质谱检测法
• 1 方法提要 • 根据方法进行验证修改后,并依据欧盟指令建立了质谱测定条件，
将某些关键步骤进行细化。 • 本方法适用于水产品和畜、禽肉组织、肠衣中氯霉素残留确证检
测。用乙酸乙酯提取，提取液用正己烷净化，硅烷化后用气相色 谱配有负化学源的5973N质谱检测器检测。
1mL定容至10mL，浓度为0.1μ g/mL；取1μ g/mL 0.5 mL定容至10mL，浓 度为0.05μ g/mL。
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• 3 实验方法 • 3.1 试样制备 • 从所取原始样品中取出部分有代表性样品，经充分混匀。用四分法缩分出不少
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• 3.2.3.3 标准溶液的衍生化 • 取适量标准溶液，用氮气吹干，加入200 µL正己烷和100 µL硅烷化试
剂，于80℃烘箱中加热30min。吹氮气蒸发至干，加入0.50 mL正己烷与 环己烷混合液（6:4），混匀溶解，供气相色谱-质谱测定。在上述色谱 条件下：氯霉素保留时间为 11.65 min。 • 3.2.3.4 样品测定 • 分别注射等体积的标准工作液、试剂空白、阴性控制样品、待检样品 （不超过10个）、阴性控制和阳性控制样品，按上述色谱条件测定，峰 面积定量。 • 4、气相色谱-质谱定性 • (1)保留时间定性：在上述条件下,目标化合物的保留时间为 11.65±0.1min
• 参考文献
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• c) PTV进样口温度：70℃(1.0 min)700℃/min 250℃(6.0 min) 700℃/min 300℃；
• d) 载气：氦气，恒压模式，柱头压 10psi； • e) 进样量：2uL
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• 3.2.3.2 质谱条件
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