ATP荧光法微生物(细菌总数)快速检测系统

ATP荧光法微生物（细菌总数）快速检测系统

使用说明书

第一部分ATP荧光法微生物（细菌总数）快速检测系统简介

1、系统原理 (3)

2、组成部件及相关功能 (4)

3、应用领域、特点、效益 (4)

4、检测注意事项及操作步骤 (4)

5、ATP快检系统使用注意事项及故障排除 (9)

6、对应关系曲线 (10)

7、有关食品安全和卫生检测的问答 (11)

8、具体样品检测的操作方法及方案 (14)

第二部分ATP荧光法微生物（细菌总数）快速检测系统使用说明

1、技术参数及性能 (23)

2、仪器操作说明 (24)

2．1开机、初始化 (24)

2．2参数设置 (24)

2．2．1选择RLU方式 (25)

2．2．2选择其它样品名方式 (25)

2．2．3设置文件类型............................... . (26)

2．2．4设置日期时间......................... (27)

2．2．5设置检测时间 (27)

2．2．6 U盘格式化 (27)

2．3测试 (27)

2．4查询 (28)

2．4．1查询测试结果 (28)

2．4．1．1删除测试结果 (29)

2．4．1．2删除文件 (29)

2．4．2查询文件信息 (30)

2．4．3查询仪器信息 (30)

2．4．4查询电池电量 (30)

2．4．5快速查询 (30)

2．5通讯 (32)

3、上位机软件 (33)

3．1软件安装 (33)

3．2驱动程序的安装 (36)

3．3软件启动 (38)

3．4软件运行 (39)

3．5样品及回归方程设定 (40)

3．6 “文件名”说明 (41)

3．7文件、记录操作和数据库 (42)

4、电池充电 (43)

5、保修 (43)

第一部分ATP荧光法微生物（细菌总数）快速检测系统简介

1、系统原理

萤火虫会发光是由于它能合成将化学物质的化学能转变为光能的生物催化剂—萤火虫荧光素酶（简称虫光素酶，luciferase）、虫荧光素（D-luciferin）以及所有细胞生物都产生的生物能量物质—三磷酸腺苷（ATP）。在有氧的条件下，虫光素酶催化虫荧光素和ATP之间发生氧化反应，形成氧化荧光素并发出荧光，其生化反应式如下：

ATP＋D-Luciferin＋O2 Mg++AMP＋Oxyluciferin＋PP i＋CO2＋Light

Luciferase

上式表明，只要具备适当条件，不仅萤火虫，即使在试管中也能发出荧光。当反应系统中，虫光素酶和虫荧光素处于过量的情况下，荧光的强弱取决于ATP的数量。以检测含细菌的样品为例，细菌细胞越多，ATP量越高，发出的荧光也就越强。由于虫光素酶对ATP的反应非常灵敏，荧光强弱可通过荧光仪10~15秒内计量。所以，在排除样品中非细菌ATP干扰的情况下，通过荧光值就能确定样品中细菌ATP 的含量，从而确定细胞数量，因此，此系统为半定量快速检测系统。

维持胞内ATP浓度的相对恒定，是ATP在细胞代谢中发挥中心作用的关键。每个细胞的ATP量与胞内容积成正比，但ATP量与菌落形成单位（colony-forming units=cfu）之间却常常偏离这种关系，主要原因是样品中细菌细胞与细胞碎片彼此聚集成团，这种效应曾在大肠杆菌培养物这种单一菌群模式系统中有过描述，一个菌落有可能由单个或几个细胞扩增形成；另一种原因是检测者没有对样品作适当的预处理，比如没有去除胞外游离ATP。根据相关文献记载，不同种类细菌中的ATP 含量不同，由于细菌ATP含量都处于10-18mol数量级，细微差别忽略不计，均值约为2.5×10-18mol。对于同种细菌，影响细胞内ATP含量的因素也很多，生长阶段、培养基种类、有氧无氧以及代谢抑制物的存在，都会影响细胞数和荧光值的对应关系。实测表明处于同一生长状态和批次样品中的ATP是相对恒定的，即在同一环境中微生物种类及生长情况固定，其ATP含量也相对恒定。

2、组成部件及相关功能

2.1 试剂组，按检测操作顺序分为：

（1）体细胞裂解试剂（TRA），能专一而有效地裂解样品中的非细菌细胞（主要为体细胞）并释出ATP，然后通过过滤比色杯底部的滤膜将其排除。

（2）细菌细胞裂解试剂（XRA），能专一而有效地裂解样品中细菌细胞并释出ATP。

（3）荧光反应试剂组（LLR），能与细菌ATP相互作用并有效地发出荧光。

（4）物表清洁度检测试剂组（SCR），能与物体表面ATP相互作用并有效地发出荧光。

2.2 微量荧光检测仪（也称微量光度计），准确计量检样的荧光值。

2.3 可供100次测定的样品预处理耗材。

（1）过滤比色杯的杯架一个，用于固定过滤比色杯。

（2）加压器一个，用于加压、排出体细胞ATP和试剂组。

（3）带滤膜荧光反应比色杯100个，为荧光反应容器。

（4）专用无菌吸水纸，置于过滤比色杯架，吸收加压后流出的液体。

（5）带密封圈专用无菌浓缩器，用于浓缩样品。

（6）自备微生物学无菌操作所需常规用具、器皿，样品采集无菌、无ATP的容器、塑料袋、手套、镊子等。

3、应用领域、特点、效益

4、检测注意事项及操作步骤

4.1 试剂的准备和注意事项：

4.1.1 本公司提供的“ATP荧光法细菌总数快检系统”所含试剂组与微量荧光检测仪需匹配使用，不可用其它试剂替代。

4.1.2 LLR试剂（含萤火虫荧光素酶和D-荧光素）应在冰箱冷冻室-20℃中贮存，有效期6个月。LLR试剂组易变质，室温下不高于25℃时不得超过24小时，在0-4℃有效期为5天。

4.1.3试剂（LLR）在用于检测前按规定低温存放，检测前20分钟取出平衡到室温方可应用。如果超过有效期，应弃用，重新购置。体细胞裂解试剂（TRA）及细菌细胞裂解试剂（XRA）可处于室温下保存，2-8℃下保存效果最佳。

4.1.4，萤火虫荧光素酶对ATP极其敏感，生物材料容易引起ATP交叉污染，所以检测应尽量满足微生物学常规无菌操作，才能取得准确、真实的检测数据。4.2样品采集和预处理简介

非生理条件下，细菌细胞的ATP浓度将急速下降，但也同样拥有快速补偿机制以维持胞内ATP浓度相对稳定，保障生命活动正常进行。因此，在采集细菌样品或进行预处理时要注意下列事项。

4.2.1.为避免离心浓缩一类非生理状况的步骤出现，可使用注射器将样品转移到一次性滤膜上。如需洗涤细胞，应用无菌、无ATP的PBS缓冲液淋洗，以免影响胞内ATP浓度。

4.2.2.卫生监测时，常用涂抹法或用棉拭子擦拭采集样品，但此法对于有生物膜结构的细菌并非最佳方式，其一，细胞收集率不高；其二，棉花纤维干扰光检测。可改进为用滴瓶将ATP提取液滴加到待检表面，用海绵签收集ATP后进行光检。

4.2.3.细胞的ATP含量与细胞大小成正比，体细胞和酵母细胞的ATP含量大约分别是细菌细胞的1000倍和100倍，但ATP量和菌落形成单位（cfu）之间常常偏离这种关系，理论上每个活细胞都形成一个菌落，而实际上细胞彼此聚集常常出现二个或几个活细胞形成一个菌落的情况。