五种血型不规则抗体检测方法的比较
ABO血型鉴定不规则抗体筛选
为什么这次试验没有安排玻片法 的反定型？
因为存在于病人或献血者血清中的抗 Ａ及抗Ｂ，个体差异很大，如果效价较 弱，在玻片上不足以凝集大量抗原阳性 的红细胞，造成假阴牲的结果所以采用 玻片法作反定型的结果常不可靠。而用 试管离心法作反定型，则促进抗原抗体 反应，形成肉眼可见的凝块，使结果更 为可靠
谢谢
ＡＢＯ正反定型结果不一致的常 见原因有哪些？
（１）人为因素：①试剂不标准、失效或污染； ③操作中加错样本或试剂、离心速度不足或过 度、细胞与血清比例不当、结果判断错误等。 （２）客观因素：①因某些疾病导致抗原减弱 如：白血病，MDS（骨髓增生异常综合征）患 者血型抗原减弱导致误定血型。②受检者抗体 效价低（如婴幼儿、老年人、大量输液的患者， 血浆蛋白低下等）③某些药物干扰如输注右旋 糖酐后会干扰血型检定。
四 实验步骤.swf
1. 玻片法
（1） 取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端 用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2） 用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清 上，注意勿使滴管与血清相接触。 （3） 竹签两头分别混合，搅匀。用两根 分别用来混合A型和B型标准
二 实验原理
血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在 ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种 抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型 鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清 （含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗 体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者 红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系 统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、 B、AB、O四型。 见下表
A标准血清 B标准血清 2滴 受试者的红细胞悬液 1滴 1滴 混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。 。 取出观察结果。完全凝集的管底部有红细胞的凝块， 管底细胞边缘呈花边状，轻弹试管凝块不散；完全不 凝的试管，血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐，用手 轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升，随即成为 均匀的悬液;轻微凝集的，必须将液体转到载玻片上镜 检后判定凝集程度。
五种血型不规则抗体检测方法的比较
五种血型不规则抗体检测方法的比较目的：对各种不规则抗体检测方法的敏感性进行比较，避免因不规则抗体漏检而导致红细胞输注无效。
方法：采用五种不同的血清学方法对已知低效价抗体进行不规则抗体筛选及效价的测定，对不同方法抗体检出特异性和敏感性进行判定。
结果：盐水法只能检出IgM类不规则抗体；聚凝胺法检测结果不宜判定；木瓜酶法的敏感性较低，改良聚凝胺法和抗人球蛋白法敏感性最好；五种方法不规则抗体检出特异性无差异。
结论：改良聚凝胺法与抗球蛋白法联合检测可以提高抗体检出敏感性，避免输血患者因低效价不规则抗体漏检而导致无效输注。
标签：不规则抗体；木瓜蛋白酶；聚凝胺；微柱凝胶；抗球蛋白试验红细胞制品的应用，大大提高了临床疗效，救治了很多生命垂危的患者。
然而随着临床输血的不断深入，人们发现某些情况下存在血液输注无效现象，有研究表明红细胞血型不规则抗体是输血输注无效及溶血性输血不良反应的主要原因[1]。
目前应用于临床的方法主要是盐水法、聚凝胺法、抗人球蛋白法等，由于各种方法的实验原理、操作方法及影响因素不同，致使因不规则抗体漏检而引起的输血不良反应时有发生[2]。
为此，我们同时采用5种不同的方法并加以优化对已知抗体样本进行检测，现将结果报告如下。
1 材料和方法1.1 仪器和试剂多抗试剂（抗IgG和C3d）、筛选细胞、谱细胞由上海市血液生物医药公司生产提供；聚凝胺试剂由珠海贝索生物制品公司生产；木瓜酶液自制；日本久保田离心机（KA-2200）；37℃水浴箱。
1.2 样本来源2012—2015年我院遇到的不规则抗体阳性标本，鉴定其抗体特异性和效价，选取效价较高的抗-D、-E、-Ec、-C、-Ce、-M各一例，对这几种抗体分别进行相应倍数的稀释，调整后每个抗体分别制成含有1∶1、1∶2、1∶4相应效价的样本。
总计18例样本。
1.3 方法1.3.1 盐水法、经聚凝胺法以及抗人球蛋白法严格参照《输血免疫血液学实验技术》[3]标准操作。
不规则抗体筛查及其阳性患者的应对策略
添加了特异性的抗体，如抗A抗B 抗D等
ABO和Rh血型鉴定
添加了抗人球蛋白。 多特异性：抗IgG + C3D 单特异性：抗IgG或C3D
直接抗人球蛋白 交叉配血实验 不规则抗体筛查 抗体鉴定 抗体效价 新生儿溶血病检测
抗人球蛋白检测卡
不同厂家产品存在差异，在操作时一定要原厂试剂 配套使用，严格按照说明书进行操作，否则，可能 出现假阴性或者假阳性。
《临床输血技术规范》明确规定：“凡遇以下情况 必须做抗体筛选试验： 交叉配血不合的；有输血史、妊娠史或短期内需接受多次输血者。”
检测不规则抗体有利于早期发现对于输血有意义的抗体，让我们有充足的 时间选择配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成延误治疗。
不规则抗体检测
不规则抗体的定义
通常把ABO血型以外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如抗D、抗 N、抗M、jk-抗体等。
凝胶微柱技术原理
微柱凝胶技术是通过对凝胶种类的选择和凝胶浓度的调节来控制分子 筛孔径大小，使分子筛只允许游离红细胞通过，从而达到分辨凝集红 细胞和非凝集红细胞的目的。微柱凝胶技术是目前最易大规模推广、 最适于常规试验的血型血清学试验技术。
种类 中性胶 特异性胶
抗人球蛋白胶
凝胶中添加的抗体
适用范围
不含抗体，相当于试管的作用 反定型
红细胞沉降所需离心力<100g 而血清蛋白沉降离心力>3000g
反应腔
加 入 了 抗 球 蛋 白 的 凝 胶
不规则抗体阳性如何配血？
输注血液的选择：选择红细胞表面不含有对应抗原的血输 注
实验室具体操作: 如果有条件可以鉴定出具体是哪一种不 规则抗体，然后选择不含有对应抗原的血发给病人。如果 没有条件可进行盲配，使用能够检测出IgG类抗体的方法 交叉配血相合即可输注。
输血科普常识系列三——不规则抗体检测知多少
输血科普常识系列三——不规则抗体检测知多少不规则抗体又叫意外抗体，输血前检测患者血液中的不规则抗体可以确定他们血液中是否有某种除ABO和Rh血型系统以外的特定抗体，并在输注血液时确保选用与其相匹配的血液。
这项检测通常称为不规则抗体检测。
今天我们就来了解一下输血前会做的这一项检验——不规则抗体检测。
什么是不规则抗体检测？在人们前往医院治疗疾病的过程当中，输血是一种常见的为患者补充血液的治疗方法，可以有效的避免患者因失血过多而发生危险。
而在输血的过程当中，很多人都知道人们的血型分为A型、B型、AB型和O型四种，不同血型的人是不能随便输血的，只有为患者输入血型相同的血液才能帮助患者摆脱危险。
但你知道吗？在当前世界上通用的ABO血型系统之外，人体还有40多种不同的血型系统，而且人们体内存在的不规则抗体也是有一定区别的。
所谓的不规则抗体，通常指的是与当前常用的ABO血型和Rh血型体系法则不相吻合的抗体，其中绝大多数都是免疫性抗体，如果医生为需要输血的患者输入了含有不规则抗体的血液或是与其体内不规则抗体不相合的血液，那么即使输入的血液与患者的ABO和Rh 血型相同也有很大的可能发生溶血，进而导致患者面临严重的危险。
因此，在临床上对患者进行输血之前，医护人员通常会对患者的血液进行不规则抗体检测，之后选择不含有针对该抗体相应的抗原的血液输入患者的体内。
借助这个检测，医护人员就能够有效的避免患者因为输入含有相应抗原的血液而导致溶血性输血反应，进而有效的保障患者的安全。
献血的时候，最好不要选择直系亲属之间进行献血，因为在这种情况下，可能会影响血液供体和受体之间的相容性。
这主要是因为直系亲属之间可能会有相似的基因和血型，有可能会引起移植物抗宿主病，这增加了输血后引起免疫反应的风险。
因此，医疗机构通常建议献血者选择非直系亲属进行献血。
另外，如果献血者有某些疾病或正在服用某些药物，也可能会导致献出的血液不适合供给他人使用。
ABO＼RhD血型3种鉴定方法的比较
ABO＼RhD血型3种鉴定方法的比较目的:探讨进行ABO、RhD正反定型手工微柱法在血型鉴定中的应用。
方法:对门诊送检血样同时采用手工微柱凝胶法及手工盐水试管和玻片法进行ABO、RhD正反对比定型鉴定。
结果:一次性正确率,手工微柱凝胶法正定型为100%、反定型为99.92%;试管法分别达到99.92%、99.83%;玻片法正定型率正确率为98.91%。
结论:手工微柱凝胶法操作简单、快速,易于观察。
其灵敏度高于试管法与玻片法。
血型标本便于保存,利于事后复查,值得在二甲以上医院推广。
标签：微柱凝胶法;试管法;玻片法在做ABO血型鉴定时,临床广泛应用的玻片法虽操作简单、方便快捷,但在临床实际工作中却时有发生血型鉴定错误现象,而且往往是在患者需要输血治疗申请配血时被发现错定血型,导致临床科室对检验科产生不良印象,认为检验质量差,检验结果不准确、不可靠。
对检验科工作会产生很大的负面影响。
试管法是传统经典的ABO、RhD血型鉴定方法,其结果准确可靠,但与微柱凝胶法相比,敏感性较差,操作难以规范化、自动化、检测结果不易保存,而微柱凝胶法用于ABO、RhD血型鉴定易于自动化、标准化、结果准确可靠,特异性强等优点被许多大医院所采用。
笔者在湘雅三院输血科进修学习期间,对于门诊每天送检血型鉴定标本同时采用手工微柱凝胶法鉴定ABO、RhD血型结果与试管和玻片法进行ABO、RhD血型鉴定结果进行比较。
1材料与方法1.1材料湖南省湘雅三院输血科2009年1月~2009年6月门诊血型鉴定1 193例,抽取静脉血1 ml用EDTA-K2抗凝,年龄1 d～90岁。
1.2试剂ABO、RhD血型定型微柱凝胶试剂卡(单克隆抗体)(长春博迅生物技术有限责任公司提供)反定型用的A型标准试剂细胞、B型标准试剂细胞由本实验室自制2%~5%试剂红细胞,按第一版《临床输血手册》[1]操作。
1.3设备TD-3A型血型血清学专用离心机(长春博研科学仪器有限责任公司生产)1.4 方法对门诊送检血样同时采用手工微柱凝胶法及手工盐水试管法进行ABO、RhD正反定型鉴定。
【2017年整理】不规则抗体筛查与血型抗体效价
不规则抗体筛查●申请单项目：不规则抗体筛查●标本要求：EDTA抗凝管抽取2ml，标本不得有溶血、脂血及凝块，否则视为不合格标本给予退回。
●检测时间：每次收取标本，当天发出报告。
●费用：50元/次●临床意义：不规则抗体是指抗-A、抗-B或抗AB以外的其他抗体。
目前不规则抗体的筛查方法是采用O型试剂红细胞检测被检者的血清中的不规则抗体。
由于有临床意义的不规则抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入的不配合的红细胞或缩短其寿命，产生溶血性输血反应，轻则影响治疗效果，重则危及病人生命；此外，对孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器的发育，并使其智力发育受到伤害，严重者则会危及新生儿的生命安全。
因此，抗筛选择是很必要而且必须的。
●其筛选的意义主要在三个方面:1.献血者的血清或血浆进行抗体筛查，可以防止有不规则抗体的血液输注给病人，避免由于献血者血液中的不规则抗体引起病人红细胞的破坏二引起的溶血性输血反应，同时可以减少血液浪费，可将有不规则抗体的血液制备成抗体血清，用于稀有血型的检测。
2.对需要输血治疗的患者，进行不规则抗体筛查，可以有助于血液的选择，从而有充分的时间来选择不含有针对某抗体的影响抗原的血液，从而防止因为输注含有某种抗体相应抗原的血液而引起溶血性输血反应，保证输血安全。
3.孕妇进行不规则抗体筛查，可以尽早发现不规则抗体，可以在孕期进行新生儿溶血病的预防和防治，减少不规则抗体对胎儿或新生儿带来的伤害，减少新生儿溶血病的程度，提高胎儿或新生儿的身体素质。
反复输血或多次妊娠可以使患者受到免疫刺激而产生不规则抗体。
因此，输血前对有输血史，人生史的患者进行不规则抗体筛查非常必要，有利于早起发现和确认具体有临床意义的抗体并可以在配血前鉴定此抗体，已获得充足的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的供者，确保输血安全。
临床意义：1.孕妇及产妇必查此项目。
2.有输血史者（血制品），输血前必查此项目。
3.建议入院检测血型时一同检测，每次输血前检测。
输血前不规则抗体筛查结果分析
输血前不规则抗体筛查结果分析发表时间：2012-03-16T14:03:46.210Z 来源：《中外健康文摘》2011年第48期供稿作者：李瑞红梁斌侯春仙王洪涛[导读] 不规则抗体是指ABO血型系统外的其他血型抗体也称为不完全抗体，多为IgG类抗体。
孙志毅李瑞红梁斌侯春仙王洪涛（山西省晋中市第一人民医院输血科山西晋中 030600）【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）48-0408-01【摘要】目的通过对患者输血前不规则抗体的筛查，探讨输血前不规则抗体筛查的重要性，确保临床输血安全有效的进行。
方法用达亚美微柱凝胶技术，利用Diamed-ID低离子/抗人球蛋白卡和抗体筛查细胞及聚凝胺法对3279名患者进行输血前不规则抗体的筛查。
结果3279名患者输血前标本不规则抗体筛查阳性11例，其中阳性率为：0.34%。
微柱凝胶法检出率为100%。
聚凝胶法检出率为85%，两种方法的敏感度差异具有统计学意义（P＜0.05）其中血液科、肿瘤科、妇产科不规则抗体阳性检出率占总阳性率80%。
结论用微柱凝胶技术检出率敏感度高，更有利于保证临床输血安全。
其抗体产生的主要因素，多为反复多次输血和妊娠，故对有输血史和妊娠史的患者惊醒输血前不规则抗体筛查，具有更重要意义。
不规则抗体是指ABO血型系统外的其他血型抗体也称为不完全抗体，多为IgG类抗体。
是引起溶血反应的主要原因[1]。
输血前不规则抗体筛查有助于血液的选择，防止因输血含有某抗体相应抗原的血液而引起的溶血性输血反应。
为确保临床输血的安全、有效，我院引进瑞士达亚美微柱凝胶技术，按卫生部《临床输血技术规范》规定，从2010年10月起，对我院3279名患者进行输血前不规则抗体筛查利用微柱凝胶技术和聚凝胺法进行筛查，并同时采用谱细胞进行鉴定，现将分析结果报告如下： 1 资料与方法1.1 资料2010年10月1日—2011年10月1日期间在本院手术备血和治疗用血的患者3279例。
不规则抗体解读
病史
患 者 女 27岁 福建人 主 诉：孕38+1周发现贫血9月余伴腹痛9小时 查 体：重度贫血貌，全身皮肤轻度黄染，脾
脏肋下三指 既往史：脾脏肿大2年余。半月前输红悬液2u 婚育史：已婚，G3P0 家族史：其母33岁因血液病去世具体不详，
姐姐有“巨脾”史，已切脾脏，育二 子
Kell血型系统
Kpb、Kpa、Jsa、Jsb等22种抗原 此血型系统抗体皆为IgG，，可引起新生
儿溶血病和溶血性输血反应
Duffy血型系统
6个抗原（Fya、Fyb、F3、F4、F5、F6） 抗Fya比较常见，抗Fyb 比较少见， Fya、Fyb、抗原示红细胞膜上间日疟裂殖子的
受体，若缺乏这两种抗原的个体可抵抗间日疟 的感染 IgG抗体，抗Fya可引起新生儿溶血病和急性或 迟发型溶血性输血反应，抗Fyb 引起的免疫反 应较弱，较少引起新生儿溶血病，可引起迟发 型溶血性输血反应
入院时主要检查结果
同济医院检查:
血常规：WBC 6.6*109/L，N% 71.4%，RBC 2.3*109/L，HB 50g/L，PLT 106*109/L
肝功能： 肾功能正常，尿常规正常，24小时尿蛋白总量
0.99g，甲状腺功能正常。
WitB12 114pmol/L 叶酸
铁蛋白 211ng/ml
患者自身血清与红细胞也有凝集，与不 规则抗体可鉴别
鉴定谱细胞进一步做抗体特异 性鉴定
鉴定谱细胞一般8-16人份已知血型表现 型的O型红细胞配套组成，包括Rh-、 Kidd、MNSs、Duff、Diego、Kell、Lewis 及P 等血型抗原。
观察反应格局，解释谱细胞的反应结果
Rh血型系统
观察结果：红细胞均沉于管底为阴性，悬浮于凝胶表 面或中间为阳性结果。根据红细胞血型抗体筛选细胞 反应格局表测定抗体特异性。
不规则抗体筛查的意义
不规则血型抗体筛查的意义不规则抗体是指抗-A、抗-B以外的其他血型抗体。
目前不规则抗体的筛查方法是采用瑞士达亚美的标准系列红细胞检测被检者的血清中的不规则抗体。
人的血型抗体有IgG和IgM两类。
现在所知ABO血型系统的抗-A，抗-B是IgM型，其它血型系统的抗体都是IgG型。
IgM型抗体在盐水介质中能与含相应抗原的红细胞发生肉眼可见的凝结（传统ABO血型鉴定）；而IgG型抗体在盐水介质中只能使相应抗原的红细胞致敏，不能使红细胞凝结。
IgG型抗体与相应的红细胞反应必须借助酶学试验或抗人球蛋白试验才能发生肉眼可见的凝结。
也就是说传统的盐水血型鉴定和交叉配血试验只对ABO 血型系统有效，而对其它多种血型系统无效。
由于其它血型系统的不规则抗体会导致输血反应：轻者引起寒战、发热，影响治疗效果；重者破坏输入的不配合的红细胞或缩短其寿命，产生溶血性输血反应，危机病人生命；此外，对孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器的发育，并使其智力发育受到伤害，严重者则会危及新生儿的生命安全。
因此，抗筛选是很必要而且必须的。
其筛选的意义主要在于三个方面：一、献血者的血清或血浆进行抗体筛查，可以防止含有不规则抗体的血液输注给病人，避免由于献血者血液中的不规则抗体引起病人红细胞的破坏而引起的溶血性输血反应，同时可以减少血液浪费，可将有不规则抗体的血液制备成抗体血清，用于稀有血型的检测。
二、对需要输血治疗的患者，进行不规则抗体筛查，可以有肋于血液选择，从而有充分的时间来选择不含有针对某抗体的响应抗原的血液，从而防止因为输注含有某抗体相应抗原的血液而引起溶血性输血反应，保证输血安全。
三、孕妇进行不规则抗体筛查，可以尽早发现不规则抗体，可以在孕期进行新生儿溶血病的预防和治疗，减少不规则抗体对胎儿或新生儿带来的伤害，减轻新生儿溶血病的性病程度，提高胎儿或新生儿的身体素质。
美国、日本、澳大利亚等国家和我国的香港地区均已将不规则抗体筛查列入常规检测，而我国卫生行政部门目前尚未要求对献血者和受血者进行抗体筛查，在临床也只有少数医院对患者进行抗体筛查。
红细胞不规则抗体筛查常用方法选择分析
红细胞不规则抗体筛查常用方法选择分析摘要】目的探讨筛选红细胞血型不规则抗体筛查的最佳方法及意义。
方法凝聚胺法(Polybrene)、蛋白水解酶法.抗人球蛋白法、微柱凝胶免疫法进行不规则抗体筛选及灵敏度，特异性鉴定。
结果除蛋白水解酶法以外其他三种方法均能全部检测出IgG型抗体,阳性符合率为100%。
但灵敏度有所差异。
结论各种血型血清学试验都有其自身的特点,适用于不同范围及不同情况。
【关键词】抗体效价不规则筛查输血安全酶法凝聚胺法抗人球蛋白法微柱凝胶免疫检测法不规则抗体引起输血不良反应、新生儿溶血病、疑难配型等的主要原因之一。
对有输血史、妊娠史或短期内需要接受多次输血者作抗体筛选试验发现有临床意义的不规则抗体,从而避免输血的不良反应,保证临床用血的安全,特别是对有输血史和妊娠史的择期手术患者有更为重要的临床意义。
本文采用微柱凝胶法、凝聚胺法和 LIM抗人球法，蛋白水解酶法，进行不规则抗体检测。
一、材料仪器1.聚凝胺试剂盒由珠海贝索生物技术有限公司(台资)提供,2.酶技术相关试剂抗人球蛋白，菠萝酶粉剂均由上海血液生物医药有限责任公司提供,3.抗体筛查细胞由长春博迅生物医药有限责任公司提供，由 3 个细胞组成，包括 Rh，Kidd，MNSs，Duffy，Diego，Kell，Lewis，P等8个血型系统的19个抗原互补; 凝胶卡专用离心机、孵育器由长春博迅公司提供。
4.不规则抗体抗-D、E、C、c、e、S、s、K、Fya、Fyb、Jka、Jkb、M、N、P1来自加拿大Dominion公司。
二、试验方法1.抗体效价测定使用商品的筛选细胞分别采用微柱凝胶法、凝聚胺法、蛋白水解酶法，抗人球蛋白法对倍比稀释后的各种抗血清进行检测，比较四种实验方法对不同血型系统抗体的敏感性测其效价,以最高稀释度且凝集≥1+者为效价终点。
同时用该试剂红细胞与正常献血者血清反应,作为阴性对照试验，见表1。
2.四种方法所用血清量和实验时间的比较见表2。
不规则抗体筛查
不规则抗体检查之迟辟智美创作不规则抗体检查也称红细胞抗体检查.不规则抗体是指抗Ａ、抗Ｂ以外的血型抗体.ＡＢＯ系中的亚型,变异型抗Ａ1或某种抗Ｂ等抗体,也称为不规则抗体.其多为ＩｇＧ抗体.主要是经输血或妊娠等免疫安慰发生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必需通过特殊介质才华使致敏红细胞呈现凝集反应.临床上通常所称的“同型血”实际上是指ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同.如果交叉配血不仔细,或者只用盐水介质配血,则有可能检查不出ＡＢＯ血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可招致溶血性输血反应的发生.红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1、ABO血型鉴定发现受检者血清中有意外抗体时；2、供血者血清抗体筛检；3、输血前受者血清抗体检查；4、输血后溶血反应疑为由同种抗体引起时；5、孕妇血清的抗体检查；6、新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检查；7、直接抗球卵白试验阳性红细胞上抗体的检查.1. 原理利用筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）上存在的多种红细胞抗原与被检血清在凝聚胺介质中反应，如果呈现凝集暗示血清中存在不规则抗体.2. 试剂2.1 5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）2.2 凝聚胺试剂2.3 直接抗人球试剂外周血或静脉血3. 把持步伐3.1 取试管三支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ并往各管加病人血清（血浆）2滴，加5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各1滴.3.2 各加LIM0.7ml，混合均匀后，再各加Polybrene 溶液2滴，并混合均匀.3.3 用BASO专用离心机1000G离心力，离心10秒，然后把上清液倒失落，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体.3.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必需重作.3.5 最后加入Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果.如果凝集散开，暗示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定.4. 筛选Ⅰ号细胞，筛选Ⅱ号细胞，筛选Ⅲ号细胞.对应的细胞反应格局表一张.红细胞血型抗体筛选细胞反应格局表4. 临床意义虽然不规则抗体筛选阳性率仅为0.37%,可是该项阳性的患者一旦输入具有相应抗原的红细胞,抗原、抗体发生免疫性结合,在补体的介入下,使输入的红细胞发生溶解,即发生溶血性输血反应.患者呈现发热、贫血、黄疸和血红卵白尿,严重时甚至危及其生命.因此,在输血中要经常警惕这种输血反应发生的可能性.当不规则抗体筛选阳性时,必需进一步作抗体鉴定,确定其特异性后,再输入无相应抗原的红细胞,才华到达平安输血之目的.新生儿溶血病(ＨＤＮ)也是由于母亲体内存在着与其胎儿红细胞不配合的ＩｇＧ性质的不规则抗体,引起的同种主动免疫性疾病.凡是以ＩｇＧ性质呈现的不规则抗体,理论上都可以引起ＨＤＮ,因为ＩｇＧ性质抗体能通过胎盘进入胎儿血循环,破坏胎儿红细胞,引发胎儿水肿、黄疸、贫血和肝脾肿年夜,甚至并发核黄疸.因此对有输血史或妊娠史的孕妇也应作不规则抗体筛选,若检测出不规则抗体,应作出相应的预防和治疗.Ｒｈ血型中Ｄ抗原的抗原性强于Ｅ抗原的抗原性,因此发生抗Ｄ抗体的几率年夜于抗-Ｅ抗体.抗Ａ1抗体为Ａ亚型中不规则抗体,它的存在提示我们在注意ＡＢＯ血型以外的不规则抗体的同时,也应高度重视ＡＢＯ亚型中的不规则抗体,因为它也是引起溶血性输血反应的一个因素.抗Ｍ抗体为冷凝集素,很少在37℃有活性,一般在体内不能引起溶血反应,但患者处于高温麻醉状态下手术时应注意,因为此类抗体可激活补体.当机体的体温在冷抗体最适反应温度范围内(4～20℃)时,可发生溶血反应.37℃4℃,偶可在37℃查出.抗Ｐ1抗体很少在体内造成溶血,几乎总是ＩｇＭ型抗体,所以不能通过胎盘,不会造成ＨＤＮ.冷凝集素在配血时可忽略.自身抗体在自身溶血性贫血时呈现较多,一直以来是输血的一年夜难题,我们仍遵循一般输血原则.综上所述,不规则抗体是引起溶血性输血反应和新生儿溶血病的主要因素之一, 对输血发生溶血性反应所引起肾衰、死亡病例的诊断有临床意义.因此为了保证输血平安,提高输血疗效,减少或根绝溶血性输血反应的发生,不规则抗体检查必需作为输血前检查的重要项目之一.。
不规则抗体筛选方法的比较
不规则抗体筛选方法的比较李炜华【摘要】目的探讨筛选血型抗体的最佳方法及意义.方法 11例阳性标本分别用盐水法、凝聚胺法(Polybrene)、抗人球蛋白法、微柱凝胶免疫法进行抗体筛选及特异性鉴定.结果除盐水法外,其它三种方法均能检测出IgG型抗体,阳性符合率为100%.但灵敏度有所差异.结论各种血型血清学试验都有其自身的特点,适用于不同范围及不同情况.随着技术不断的发展,微柱凝胶是抗人球蛋白法很好的替代方法.【期刊名称】《右江民族医学院学报》【年(卷),期】2011(033)004【总页数】2页(P497-498)【关键词】血型;输血;盐水法;凝聚胺法;抗人球蛋白法;微柱凝胶免疫检测法;不规则抗体【作者】李炜华【作者单位】江苏省宿迁市中心血站,江苏,宿迁,223800【正文语种】中文【中图分类】R446.622;R457.13不规则抗体是指除ABO血型系统以外的所有抗体。
对受血者的血浆做常规的抗体筛选试验以发现有临床意义的不规则抗体,从而避免输血的不良反应,保证临床用血的安全,特别是对有输血史和妊娠史的择期手术患者有更为重要的临床意义。
抗体检测还可以协助临床诊断自身溶血性贫血、新生儿溶血病及溶血性输血反应。
由于筛选方法较多,灵敏度、准确性和重复性均有所不同,故各实验室采用的方法不同。
笔者对2009年12月1日～2010年11月30日期间各医院送至本站的需输血患者的血浆进行抗体筛选,并对阳性的标本分别用盐水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、微柱凝胶免疫检测法进行了检测,并对结果、灵敏度、所用时间及所用血浆量进行了比较与分析,现报告如下:1 材料与方法1.1 材料筛选红细胞由上海输血技术有限公司提供;凝聚胺由BASO公司提供;抗人球蛋白试剂由上海血液生物医药有限责任公司提供;微柱凝胶免疫检测卡由长春博迅生物制品有限公司提供;免疫微柱孵育器及血型血清学多用离心机均由长春博研科研仪器有限公司提供。
1.2 标本 2009年 12月 1日～2010年11月30日各医院送至本站的需输血患者的血浆,共计3 020份。
三种自动化微板法检测红细胞抗体检测效果比较
三种自动化微板法检测红细胞抗体检测效果比较刘强;余薇;李国良【摘要】目的比较微量板酶法、抗人球蛋白微量板法和微量板聚凝胺法三种自动化检测红细胞抗体的检测结果,并进行分析.方法将通过试管法确认的不同效价的红细胞不规则抗体,分别使用微量板酶法、抗人球蛋白微量板法和微量板聚凝胺法进行自动化检测.结果三种自动化微板法均能检测到低效价的IgG型红细胞抗体,其中微量板酶法检出率为80%,抗人球蛋白微量办法和聚凝胺微量板法检出率相同均为97.5%.结论微量板聚凝胺法快速、灵敏且经济高效,在工作模式上能完全与血站的其他检测项目兼容,值得在血站推广.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2017(035)003【总页数】3页(P322-323,329)【关键词】红细胞不规则抗体;IgG型抗体;IgM型抗体;自动化检测;微量板【作者】刘强;余薇;李国良【作者单位】江西省血液中心,江西南昌 330052;江西省血液中心,江西南昌330052;江西省血液中心,江西南昌 330052【正文语种】中文【中图分类】R446.62;R457.1+1;R193.3红细胞不规则抗体（RBC-Iab）是指抗-A、抗-B之外的抗体，包括IgG和IgM两类抗体。
是引起新生儿溶血病、输血不良反应以及血型鉴定困难、疑难配血等的主要原因之一，因而对不规则抗体的筛查与鉴定是保证临床输血安全的重要手段和关键环节[1，2]。
目前，国家规定的献血者血液强制性检测项目中没有包括RBC-Iab 筛查，有文献报道无偿献血者RBC-Iab阳性率在0.48%[3]。
随着血站自动化筛查系统的提高，已有许多报道红细胞不规则抗体微量板法的相关研究，因此笔者对微量板法中的蛋白水解酶法、抗人球蛋白试验（AGT）和聚凝胺三步法（TSPT）相比较，确定最适合血站自动化筛查的方法。
1.1 试验材料2016年1月至2016年6月本中心采集的无偿献血者血液标本25761例，其中检出不规则抗体阳性标本5例，以及日常工作中用试管法筛查并已用谱细胞确定了抗体特异性的已知不规则抗体阳性标本8例。
五种不规则抗体检测方法的比较研究
规 则抗体 的敏 感性 、 特异性。选取解放 军总医院门诊及住 院输血 患者 ５０ ０例 ， ０ 分别采用盐水法 、 木瓜酶法 、 聚胺法 、 凝 试管 间
接 抗 人 球 蛋 白法 、 自动 微 柱 凝 胶 抗 人 球 蛋 白法 对 其 输 血 前标 本 进 行 抗 体 筛 选 ， 阳性 结 果 进 行 抗 体 鉴 定 。 盐 水 法 未 能 检 出 全 对 阳性 结 果 ； 瓜 酶 法 检 出其 中 的 １ 木 ５例 ， 异 率 ８ ．％ ； 管 间接 抗 人 球 蛋 白法 检 出 了其 中 的 １ 特 ６７ 试 ９例 ， 异 率 为 ８ ．％ ； 聚 胺 特 ９５ 凝
木 瓜酶 （ 春 博 德 生 物 技 术 公 司 提 供 ） Ｐ ｌ— 长 ；ｏ ｙ ｂｅ ｅ试 剂（ ｒｎ 台湾 Ｂ Ｓ Ａ Ｏ公 司 ） 抗 人 球 蛋 白血清 （ ； 上 海市 血 液 中心 提 供 ） 微柱凝 胶 间接抗 球 蛋 白卡 （ ｉ ； Ｄ— ａａＧ ｌ ｏｍｂ ， ＩＧ， ３ ） ＭＧ ｎ ｅ ｏ ｓ 抗一 Ｃ ｇ Ｃ ｄ ； Ｔ试 验 系 统 （ 班 西
法检 出阳性结果 １ ， ８例 特异 率 １０ ； 自动微柱凝胶 间接抗人球 蛋 白法检 出阳性标本 ２ ０％ 全 ２例 ， 特异 率 ９ ． ％。说 明盐水法不 ０９
适 合 不规 则抗 体 检 测 ； 瓜 酶 法 检 出率 低 ， 有 一 定 局 限 性 ； 管 间接 抗 人 球 蛋 白法 需 要 反 复 洗 涤 红 细 胞 ， 时较 多， 便 于 木 具 试 费 不 开 展 大规 模 筛查 ； 聚 胺 法 简 便 、 凝 快速 ， 手 工操 作 ， 易标 准 化 ； 自动 微 柱 凝 胶 抗 人 球 蛋 白法 灵敏 度 高 、 复 性 好 、 于 标 但 不 全 重 易
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行,这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。
2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。
3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应,以发现在37℃中有反应活性的抗体。
这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等.当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。
4.标本要求受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清,48小时内使用5。
试剂5。
1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。
每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选,见表1005—1。
5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、Lu b、Xr/min a等。
每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005—2。
5。
3。
抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。
5.4。
致敏红细胞（质控细胞）。
5。
5。
0.9％生理盐水。
5.6。
Coombs微柱凝胶卡。
6.器材试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。
7。
操作程序7。
1。
盐水介质法7.1。
1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。
7。
1。
2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2％~5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。
7。
1.3。
以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005—1中。
如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。
红细胞血型不规则抗体不同检测方法检测效果比较
World Latest Medicine Information (Electronic Version) 2021 Vo1.21 No.23投稿邮箱：sjzxyx88@246（下转第251页）作者简介：唐炳娣（1987-），女，民族：汉，籍贯：广东惠州，研究方向：主要从事医学检验研究，职称：主管技师，科室：输血科，单位名称：惠州市第三人民医院，第二作者：叶志达。
·医学检验·红细胞血型不规则抗体不同检测方法检测效果比较唐炳娣，叶志达（惠州市第三人民医院，广东 惠州 516000）摘要：目的 探讨比较红细胞血型不规则抗体不同检测方法检测效果。
方法 以2019年1月至2020年6月收治的12816例患者为对象，采集血液标本，分别采用微柱凝胶法与凝聚胺法检测红细胞血型不规则抗体，分析比较两种检测方法的不规则抗体差异情况。
结果 数据分析显示，微柱凝胶法检出156例不规则抗体阳性，自身抗体15例，高球蛋白影响8例，同种特异抗体133例。
凝聚胺法检出151例不规则抗体阳性。
比较微柱凝胶法与凝聚胺法的阳性率（1.21% vs 1.17%），差异不大，无统计学意义（P >0.05）。
结论 红细胞血型不规则抗体检测中，微柱凝胶法与凝聚胺法的灵敏度高，在不规则抗体筛查以及交叉配血中具有较高的应用价值，保证输血安全。
关键词：红细胞；血型不规则抗体；微柱凝胶法；凝聚胺法中图分类号：R331.1+41 文献标识码：B DOI ：10.3969/j.issn.1671-3141.2021.23.099本文引用格式：唐炳娣,叶志达.红细胞血型不规则抗体不同检测方法检测效果比较[J].世界最新医学信息文摘,2021,21(23):246,251.0 引言随着输血事业迅速发展，输血安全日益引起了人们的关注与重视，近十来年，卫生部《临床输血技术规范》逐步推广并实施，各级医院也相继开展凝聚胺法配血、RHD 定型并且对有妊娠史、输血史或者短期内需反复输血者进行抗体筛查等工作，旨在减少输血事故，保证输血安全性与有效性[1]。
五种不规则抗体检测方法的比较研究
五种不规则抗体检测方法的比较研究毕蔚茹;冯倩;于洋;林子林;潘纪春;陈民才;骆群;李锡金【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2006(6)19【摘要】比较盐水法、木瓜酶法、凝聚胺法、试管间接抗人球蛋白法、全自动微柱凝胶间接抗人球蛋白法检测受血者血清中不规则抗体的敏感性、特异性.选取解放军总医院门诊及住院输血患者5 000例,分别采用盐水法、木瓜酶法、凝聚胺法、试管间接抗人球蛋白法、全自动微柱凝胶抗人球蛋白法对其输血前标本进行抗体筛选,对阳性结果进行抗体鉴定.盐水法未能检出阳性结果;木瓜酶法检出其中的15例,特异率86.7%;试管间接抗人球蛋白法检出了其中的19例,特异率为89.5%;凝聚胺法检出阳性结果18例,特异率100%;全自动微柱凝胶间接抗人球蛋白法检出阳性标本22例,特异率90.9%.说明盐水法不适合不规则抗体检测;木瓜酶法检出率低,具有一定局限性;试管间接抗人球蛋白法需要反复洗涤红细胞,费时较多,不便于开展大规模筛查;凝聚胺法简便、快速,但手工操作,不易标准化;全自动微柱凝胶抗人球蛋白法灵敏度高、重复性好、易于标准化,适于临床输血前大批量抗体筛选.【总页数】3页(P3176-3178)【作者】毕蔚茹;冯倩;于洋;林子林;潘纪春;陈民才;骆群;李锡金【作者单位】解放军总医院输血科,全军临床输血中心,北京,100853;解放军总医院输血科,全军临床输血中心,北京,100853;解放军总医院输血科,全军临床输血中心,北京,100853;解放军总医院输血科,全军临床输血中心,北京,100853;解放军总医院输血科,全军临床输血中心,北京,100853;解放军总医院输血科,全军临床输血中心,北京,100853;解放军总医院输血科,全军临床输血中心,北京,100853;解放军总医院输血科,全军临床输血中心,北京,100853【正文语种】中文【中图分类】R4【相关文献】1.儿童肺炎支原体抗体检测方法的比较研究及分析 [J], 张凤花;李金星2.血型不规则抗体检测方法及临床应用 [J], 张志哲3.五种血型不规则抗体检测方法的比较 [J], 杨讯;徐学新;李海云;杨旭4.布鲁氏菌4种高通量抗体检测方法的比较研究 [J], 蒋卉;冯宇;李筱英;范学政;彭小薇;丁家波5.国产微柱凝胶抗人球蛋白不规则抗体筛检卡在红细胞不规则抗体筛检中的应用[J], 郭博;刘杨;管政因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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五种血型不规则抗体检测方法的比较
目的：对各种不规则抗体检测方法的敏感性进行比较，避免因不规则抗体漏检而导致红细胞输注无效。
方法：采用五种不同的血清学方法对已知低效价抗体进行不规则抗体筛选及效价的测定，对不同方法抗体检出特异性和敏感性进行判定。
结果：盐水法只能检出IgM类不规则抗体；聚凝胺法检测结果不宜判定；木瓜酶法的敏感性较低，改良聚凝胺法和抗人球蛋白法敏感性最好；五种方法不规则抗体检出特异性无差异。
结论：改良聚凝胺法与抗球蛋白法联合检测可以提高抗体检出敏感性，避免输血患者因低效价不规则抗体漏检而导致无效输注。
标签：不规则抗体；木瓜蛋白酶；聚凝胺；微柱凝胶；抗球蛋白试验
红细胞制品的应用，大大提高了临床疗效，救治了很多生命垂危的患者。
然而随着临床输血的不断深入，人们发现某些情况下存在血液输注无效现象，有研究表明红细胞血型不规则抗体是输血输注无效及溶血性输血不良反应的主要原因[1]。
目前应用于临床的方法主要是盐水法、聚凝胺法、抗人球蛋白法等，由于各种方法的实验原理、操作方法及影响因素不同，致使因不规则抗体漏检而引起的输血不良反应时有发生[2]。
为此，我们同时采用5种不同的方法并加以优化对已知抗体样本进行检测，现将结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 仪器和试剂
多抗试剂（抗IgG和C3d）、筛选细胞、谱细胞由上海市血液生物医药公司生产提供；聚凝胺试剂由珠海贝索生物制品公司生产；木瓜酶液自制；日本久保田离心机（KA-2200）；37℃水浴箱。
1.2 样本来源
2012—2015年我院遇到的不规则抗体阳性标本，鉴定其抗体特异性和效价，选取效价较高的抗-D、-E、-Ec、-C、-Ce、-M各一例，对这几种抗体分别进行相应倍数的稀释，调整后每个抗体分别制成含有1∶1、1∶2、1∶4相应效价的样本。
总计18例样本。
1.3 方法
1.3.1 盐水法、经聚凝胺法以及抗人球蛋白法严格参照《输血免疫血液学实验技术》[3]标准操作。
1.3.2 酶处理法
称取1.0g木瓜酶，用pH5.5的PBS定容至100ml，用力震荡15min，使大
部分溶解，离心收集上清液，分装密封，放-20℃以下冰箱备用。
盐水法加样，观察结果，然后加入1%木瓜蛋白酶溶液2滴，混匀置37℃水浴30min，离心和观察结果。
1.3.3 改良聚凝胺法[4]
1.3.3.1 阳性对照试剂我们平常用的聚凝胺阳性对照试剂效价为1∶32，效价较高，如果患者血样中存在效价较低的不规则抗体，判定结果时，阳性对照管凝集较强，而试验管较弱，很容易把低效价的抗体漏检。
现将阳性对照试剂进行32倍稀释（稀释后效价为1∶1），其聚凝胺试验结果凝集强度刚好为1+。
在改良聚凝胺试验时，用经过稀释的阳性对照试剂作为对照，试验管结果≥阳性对照管的凝集强度的判定为阳性。
1.3.3.2 操作步骤按盐水法加样后加入10滴Lim溶液，室温孵育1min，再加入2滴Polybrene试剂，立即以1000g离心1min，弃去试管中液体，摇动试管，肉眼判断红细胞凝集情况。
如果有凝集出现则继续操作，加入1滴重悬液，轻摇试管，肉眼观察结果。
1.3.4 结果判定
红细胞凝集程度参照《全国临床检验操作规程》（第3版）[5]，以4+、3+、2+、1+、±表示，无凝集反应为阴性。
2 结果
盐水法只能检出IgM类的抗体，木瓜酶法和聚凝胺法在检测IgG抗体时敏感性较低，甚至存在对弱抗体的漏检；改良聚凝胺法和抗人球法敏感性最好，结果见表1。
3 讨论
血型不规则抗体是ABO血型抗体以外的所有抗体，多为IgG型，最常见的是Rh系统抗体，其次为MNS系统等，主要经妊娠、输血等免疫刺激产生。
虽然在国内正常人群中不规则抗体阳性检出率仅为0.3%～2%[6]，但却是引起红细胞输注无效、溶血性输血反应的主要原因之一。
随着输血技术的发展，抗体筛查新方法不断涌现，应用于临床的方法主要是盐水法、聚凝胺法、酶法、抗人球蛋白法等，由于各种方法的试验原理、操作方法及影响因素不同，因不规则抗体漏检导致的红细胞输注无效时有发生。
本研究主要采用5种不同的方法对含有相应效价的已知抗体进行平行试验，对比不同方法在检测弱抗体时的敏感度和特异性，为选择合理的方法提供理论依据。
本次结果显示，盐水法只能检测出IgM类的不规则抗体，聚凝胺法容易漏检弱抗体，木瓜酶法和聚凝胺法敏感性略低，改良聚凝胺法和抗人球蛋白法检测结果凝集强度接近，敏感性最好。
目前，检出IgG不规则抗体的方法有木瓜酶法、聚凝胺法、抗人球法等技术，它们各有优缺点。
酶法通过改变红细胞的结构使隐蔽的抗原得以暴露，对Rh和Kidd等系统抗体敏感，但它同时可以破坏红细胞膜上的MNS等系统抗原构型，破坏其抗原性，酶试剂易失活，使之应用受限；聚凝胺法对大多数血型系统抗体都比较敏感，尤其对Rh系统抗体特别敏感，且操作简便，目前已作为临床常规的筛选试验，但聚凝胺法的应用也有一定的局限性，如必须严格按照规定时间判定结果，对有些低效价抗体易漏检，敏感性较低；改良聚凝胺法延续了聚凝胺技术快速，简便，灵敏的特点，同时在加入低效价的阳性对照试剂做对照时，既避免了必须在1min内判读结果，同时避免了大部分弱抗体的漏检，值得我们推广应用；抗人球蛋白法是世界公认的检测IgG类血型抗体最可靠的方法，但操作繁琐，适合择期输血患者的不规则抗体筛选和配血。
在临床工作中，我们需要根据各种方法自身的特点，选择一种快速、敏感的方法进行不规则抗体的检测，以确保输血安全。
对于有输血史、妊娠史或多次输血的患者，我们建议在首先用盐水法检测IgM类抗体后，可选用改良聚凝胺法联合抗人球法进行IgG类不规则抗体的检测。
参考文献
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