小鼠睾丸不同的生精阶段

神经生长因子在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达

化，外吸收法测定ＲＡ浓度及纯度，脂糖凝胶紫Ｎ琼
电泳检测其完整性。１４２引物的设计：．．参照Ｇｎａｋ中所登录的小鼠ｅｂｎ
（Ｎ０３０）、大鼠（Ｘ００７３）人Ｍ１６９Ｍ０１５１０、
进行了分析，以探讨ＮＦ与睾丸组织发育和精子发Ｇ
大利ＢｏＲｄ司；ＭＬ２型显微镜：国Ｌｉ。ｉ－ａ公ＤＢ德ｅｃａ
１４方法．
１４１总ＲＡ的提取及检测：用Ｔｉｌ剂盒．．Ｎ利ｒｏ试ｚ
提取各周小鼠睾丸组织中的总ＲＡ，规方法纯Ｎ常
生的关系。
（Ｍ０２０）牛（Ｍ５００）ＮＦ基因序列，Ｎ０５６、Ｘ８９７的Ｇ在
ＮＢ上进行同源性比较，用Ｐｉｅ．ＣＩ利ｒｒ０软件在小ｍ５
１材料与方法
１１实验动物．实验动物为山西医科大学实验动物中心提供的成年昆明种小鼠（动字第０００医７１２号）共３，２只（雌雄比例３：１。笼养一周后，照雌３只／１）按雄
Ｋｔ５ｐＤＡｍｒｅｉ０ｂＮａｋｒ由大连宝生物公司提供；、
ＲｂｉａｔＮＦ即用型ＳＢａｂｔｎｉＧ、．ＡＣ试剂盒、ＡＤＢ显色试
剂盒（Ｒ０２由武汉博士德生物工程有限公司提Ａ１２）

性成熟前小鼠生精细胞的发育过程

第20卷第3期中国兽医学报V o l.20,N o.3 2000年5月Ch inese　Jou rnal　of　V eterinary　Science M ay2000性成熟前小鼠生精细胞的发育过程张学明,文兴豪,赖良学,李德雪3,李子义,杨盛华,杜惜明,曾发贵　　(解放军军需大学动物科技系,吉林长春130062)摘要:用光镜、电镜观察了生后1～18d昆明白小鼠的生精上皮。

结果显示,生后1～3d,曲细精管内只有生殖母细胞和支持细胞2类形态结构截然不同的细胞,前者位于管中部;生后4～5d,少数生殖母细胞已附着在基膜上;生后6～7d,原始A型精原细胞大量出现并附着在基膜上;生后8d,A型精原干细胞大量出现,B型精原细胞开始出现;生后10d,B型精原细胞大量出现;生后12～13d,前初级精母细胞出现,少数曲细精管的管腔开始出现;生后14～15d,多数曲细精管管腔基本形成,前初级精母细胞大量出现。

本试验的结果表明,7～8d小鼠的睾丸最适于分离精原干细胞。

关键词:精原干细胞;形态结构;小鼠中图分类号:S852116 文献标识码:A 文章编号:100524545(2000)0320293205 精原干细胞的异体及异种移植是当前干细胞领域的一个新的研究热点。

但目前用于移植的细胞都是混合细胞,效率很低[1]。

若能将精原干细胞分离纯化,即可克服上述不足。

分离纯化精原干细胞必须选取合适日龄的睾丸,才能获取较多的细胞。

目前有关性成熟前小鼠生精上皮细胞生长发育所经历的形态结构的变化,尚缺乏系统的研究报道。

本试验系统观察了小鼠性成熟前各级生精细胞发育分化进程,以为选择合适日龄的小鼠睾丸分离纯化小鼠精原干细胞提供依据。

1　材料与方法111　动物的选择及饲养　昆明白小鼠,由本校实验动物中心提供,按常规方法饲养管理。

选择自然发情母鼠与公鼠合笼,次日8:00检查阴道栓,见栓日中午记为交配后(PC)0.5d,PC19d后确切记录幼鼠出生时间。

不同时期小鼠睾丸睾酮合成能力差异机制的研究

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology2007,15(2):207~211*基金项目：国家自然科学基金项目(No.30270955)；西农博士启动基金(2004博01)资助。

**通讯作者。

Author for correspondence.教授，主要从事生殖生理和生殖内分泌研究。

Email： <j.zhang@>.收稿日期： 20060724接受时期： 20060831·研究论文·不同时期小鼠睾丸合成睾酮能力的差异 *王鲜忠，孙燕，吴建云，罗英，贾孙涨，胡淮杰，张家骅 **（西南大学动物科技学院，重庆市牧草与草食家畜重点实验室，重庆 400716）摘要：不同发育阶段，睾丸合成睾酮的能力差异很大。

为了阐明引起睾酮合成差异的分子机制，实验以不同年龄的 SPF昆白小鼠 ,采用 RTPCR与Western blot分析了不同年龄阶段类固醇合成酶的变化。

结果显示：（1）在不同年龄阶段，（胆固醇支链裂解酶） mRNA、（3β 羟胆固醇脱氢酶） mRNA、（类固醇合成快速调节蛋白） mRNA和蛋白的水平无明显变化；（2）（C 1720裂解酶） mRNA的表达水平在 30、 60和 120d均处于较高的水平，但是在 270d则处于较低的水平；（3） 30~270d，细胞外信号调节激酶(ERK)活性无明显变化。

表明， mRNA表达差异可能导致不同时期睾酮合成能力差异的重要原因，但ERK活性可能与衰老引起睾酮合成能力下降无直接关系。

关键词：睾丸；类固醇合成;小鼠；年龄中图分类号： S188 文献标识码： A 文章编号： 10061304(2007)02020705Changes of the Ability of Testosterone Synthesis in Mouse Testis of Different PeriodsWANG Xianzhong,SUN Yan,WU Jianyun,LUO Ying,JIA Sunzhang,HU Huaijie,ZHANGJiahua**To study the mechanism of changes of the ability of testosterone synthesis in different periods,Kunbai mouse in different periods were used as experimental animals.The ability of testosterone synthesis was analyzed by RTPCR and Western blot.The results were as followed:(1)In all periods,the expression of cholesterol side chain decomposition enzyme( ),3betahydroxysteroid de hydrogenase( )， steroidogenic acute regulatory protein(StAR)mRNA and protein had no significant change.(2)The levels of cy tochrome P45017alphahydroxylase( )mRNA were high in10,60and120d.However,that of mRNA decreased sig nificantly in270d.(3)From30d to270d,the activity of extracellular signal regulated kinases(ERK)had no significant change.These re sults inferred that the difference of the level of mRNA was an important factor of the difference of the level of testosterone,butthe activity of ERK had no direct relation with the decrease of mRNA and the level of testosteronetestis;steroidogenesis;mice;age睾酮具有维持生精作用、刺激生殖器官发育、维持正常性欲和促进蛋白质合成的生理作用（王启荣和杨则宜， 2004）。

小鼠睾丸生精小管内残余体颗粒形成及转归的观察

粒。这些颗粒早可见于生精周期 Ⅳ ～Ｖ期，在精子细胞朝向管腔一侧的胞质之内出现细粒状的细小蓝色颗粒。伴随
着生精时相的向后推移，精子细胞的胞质逐渐减少，颗粒逐渐变大，颗粒数量相应减少，至精子排放时，即生精周期的
ＸｉａｏＣｈａｎｇｙｉ，ＷａｎｇＹａｑｉｎｇ，ＬｉＪｉａｈｕａｅｔａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｉｓｔｏｌｏｇｙ＆Ｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＣｈｉｎａＴｈｒｅｅＧｏｒｇｅｓＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｃｈａｎｇ４４３００２，Ｃｈｉｎａ
小鼠睾丸生精小管内残余体颗粒形成及转归的观察
肖长义，王雅琴，黎家华，汤桂成，魏霞
三峡大学医学院组织胚胎学教研室，宜昌４４３００２
摘要：目的
的。方法
通过对小鼠睾丸生精小管内残余体物质的形成与转归的观察，了解机体器官是如何处置结构废弃物
ＦｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄＯｕｔｃｏｍｅｏｆＲｅｓｉｄｕａｌＢｏｄｉｅｓｉｎＳｅｍｉｎｉｆｅｒｏｕｓＴｕｂｕｌｅｓｏｆｔｈｅＭｏｕｓｅＴｅｓｔｉｓ

小鼠受孕知识

小鼠受孕知识.小鼠性成熟早，35 日龄雄性附睾精液中有运动的精子，雌鼠在35 日龄即可发情排卵、受孕．雌鼠在正常情况下，每隔4～5 d为一个性周期，发情后2～3 h即可排卵．雌鼠产后还可出现一次动情期，即分娩后24 h内排卵，此时交配可受孕，俗称“血配”，出现边哺育边妊娠的现象．2.实验动物的选择选用性成熟未交配过的健康小鼠进行．实验发现，体形和体重较大动物交配比较容易受孕．3.掌握小鼠性周期时间镜检阴道涂片，低倍镜下观察细胞的类型，然后换上高倍镜，细胞可能是有核上皮细胞、角化(老的、无核的)上皮细胞．观察阴道涂片的组织细胞学变化，可确定动情期的不同阶段．4.把握交配季节小鼠生殖有关的实验，一般应在春秋季进行，因小鼠怕热畏寒，这二季节温度比较适宜，动物的受孕率较高．若在夏冬季实验，动物房室温应控制在22±2~C，空气湿度为50％左右.5.动物交配，妊娠识别选择适龄雌雄小鼠，鉴定动情期，是确保小鼠受孕的关键．交配前查看雌鼠外阴和阴道口，外阴充血肿胀，阴道口张开且呈干燥状态，确认为动情期雌鼠.小鼠阴栓一般在交配后12～24 h自动脱落．由于小鼠交配后能产生阴栓，所以常把阴栓的有无作为判断是否交配的重要标志．6.受孕辅助方法及其影响为提高受孕率，可对动物进行动情周期诱导和同步化．常用两种方法：一种是物理方法，即“预接触”，经“预接触”处理后的雌鼠，60％～70％可查见阴栓．另一种是化学方法，即对小鼠进行“超数排卵”(supemvu lation)，腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)，48 h后结合HCG腹腔注射处理的雌鼠，当晚与雄鼠1：1合笼，一般均可受孕，80％可见阴栓．自然同步发情的生殖是理想的，副作用少，效果好，而超排卵质量较差，胚胎生活力较差，体外培养增殖缓慢．7.合理管理，精心饲养动物饲养应在开放系统动物房进行．由于光照能刺激小鼠性激素的分泌，对雌鼠性周期有一定的影响，因而采用12 h：12 h明暗光照，温度18～25℃，空气相对湿度40％～60％，噪音≤60分贝．8.昆明小鼠系远交系，l945年由印度Haffikine研究所引入云南昆明。

小鼠的生殖生理学特点

小鼠的生殖生理学特点(一)性成熟和体成熟动物生长发育到一定程度，即达到性成熟期。

性成熟的表现是生殖器官发育完全，出现第二性征。

这时雄性动物有产生精子、雌性动物有产生卵子的能力，并出现性的要求。

小鼠性成熟时期的标志是：雌性小鼠阴道口张开，出现求偶周期，有交配的欲望，愿意接近公鼠；公鼠睾丸下降，精子生成。

雌鼠一般在20日龄以前阴道口由皮肤闭合，之后阴道口皮肤逐渐变薄，阴道开口，其开口与卵巢机能活动相一致，所以阴道开口是雌鼠性成熟的主要标志。

雄鼠在25日龄左右，睾丸自腹腔落入阴囊，35日龄后睾丸形成精子，40日龄后的精子可受精，同时体重增加较快。

小鼠性成熟日龄因品系及饲养管理条件的不同而有所差异，一般雌性小鼠为35～50日龄，雄性小鼠为45～60日龄。

小鼠的体成熟一般在60～90日龄，此时小鼠体重增长较缓慢，是小鼠的适宜配种年龄。

(二)性周期小鼠为多周期发情动物。

雌性小鼠除妊娠期，通常进行周期性排卵。

性周期为4～5天，一般在发情后2～3小时即可排卵，其性活动一般可分为发情前期、发情期、发情后期和休情期。

产后12～14小时内有一次产后性周期。

自此以后，由于给仔鼠哺乳，性周期暂时停止。

离公鼠独居生产的母鼠，在仔鼠断乳2～6天后可出现下一个性周期。

(三)排卵和交配雌性小鼠排卵期为3～4天，但在排卵期仅有数小时允许公鼠交配。

小鼠属于自发排卵的动物，排卵一般发生在发情期末的半夜至凌晨4:30左右，交配一般发生在排卵前的22:00至次日凌晨1:00，即交配早于排卵2小时左右。

交配后精子到达输卵管受精部位的时间为20～60分钟，等待新鲜的卵子。

小鼠的排卵数因品系、个体及饲养管理等环境因素的不同而有所差异，我们在实验中常选用的昆白系小鼠排卵较多，但个体差异较大。

小鼠自然繁殖交配或超排发情交配后，如要知道是否已经交配以及体内的卵母细胞是否受精，一般是在交配的次日晨8:00时以前检查雌鼠的阴门，如见有阴门栓(小块稠桨糊样物质)，则认为已经交配，并表明卵母细胞可能受精。

小鼠生后不同发育阶段附睾组织中Crb3的表达

ｔｃｎｌ２１，ｔｌＩ６２７９ｐｇｓｄｉ１．１５２１／ｅｈｏ，０１ＡｒｉｅＤ８８１，ａｅ，ｏ：０１６／０１ｃ
８２１．６８７
［０ＲｏＨ，ＦｎＳ，ＬｉＪ，ｔａ．Ｔｈｕｓ一ｌ１ｏ — １３ｈＭａｕＣｅ１ｅＣｒｍｂ３Ｐａｓｃｒｎ
一
用＿ ” 。在对斑马鱼Ｏｌ及相关Ｃｂ基因和ＭＤ】］ｉｅＴｒ —
Ｃ细胞培养Ｌ。Ｋｌ研究下发现敲除Ｃｂｒ３将导致多核表型、纺锤体、纤毛及中心体异常，明Ｃｂ说ｒ３对细
胞游离面的纤毛形成也起着重要作用。目前，关哺乳动物附睾的形态学研究已有资有
种Ｃｂ基因，在人和小鼠中已确定存在Ｃｂ、ｒ而ｒｌ
Ｃｂｒ２和Ｃｂｒ３３个基因Ｌ。Ｃｂ７］ｒｌ主要在人和小鼠的视网膜及大脑的部分区域表达；ｒ２在肾和视网膜Ｃｂ
分别选取４周龄、８周龄、２周龄、６周龄小鼠用于试１１验。每周龄４只，３周至５周小鼠的体重在１～５ｇ２，周至１周小鼠体重在２～３。０ｇ８６５ｇ５ｇ
（北农林科技大学动物医学院，西杨凌７２０）西陕１１０
摘要：用ＨＥ染色法和免疫荧光组织化学技术分别对小鼠生后不同发育阶段附睾组织结构及Ｃｂ应ｒ３

雄性小鼠生殖相关解剖图谱

雄鼠的生殖器官包括睾丸、附睾、输精管、储精囊、凝固腺、前列腺、尿道球腺、包皮腺及阴茎。

睾丸：睾丸又称精巢，是产生精子的地方。

睾丸共有两个，幼年时睾丸藏存腹腔内，性成熟以后则下降到阴囊内，其表面为纤维性结缔组织，内部有无数的曲细精管，雄性间质组织产生精子，存在与睾丸的曲细精管内。

附睾：附睾又称精巢上体，由许多弯曲旋廻的细管组成，是接受并暂时贮存精子的地方。

附睾分头、体、尾三部分。

附睾头部与睾丸上部的精细管连接，体部在睾丸的一侧下行，尾部与输精管相连。

精子在通过附睾期间成熟。

成熟的有受精能力的精子通过与附睾相接的输精管，交配时射入雌鼠阴道。

输精管：输精管是精子通过的管道，它是由附睾尾部引出的毛细管在储精囊下面、膀胱的背侧汇合进入尿道。

成年小鼠的输精管存在无数的有受精能力的精子。

储精囊(精液腺)：储精囊呈半月状，形成多数锯齿分叶，内部储存营养精子的白色浓稠分泌物。

凝固腺：为精液腺内侧附着的半月弧形的半透明的器官，起着凝固精液腺所分泌的分泌液的作用，交配后，形成阴栓。

前列腺：前列腺分背叶和腹叶，背叶位于尿道的背侧，腹叶位于膀胱基部附近处尿道腹侧，它与尿道球腺及精液腺等分泌的液体稀释精液，而使精子更为活跃。

尿道球腺：为球状分泌腺，位于骨盆腔内尿道球的背上方。

包皮腺：小鼠的包皮腺较大，是存于阴茎近腹壁上皮间的瓜籽形的脂质分泌腺，开口于包皮内侧。

阴茎：公鼠交配器官，由阴茎体、龟头组成，不交配时保持于包皮内Hypothalamus 下丘脑 Optic chiasma 视交叉 pituitary stalk 垂体Optic chiasm 视神经交叉Adenohypophysis 腺（性）垂体（前叶） intermediate lobe （脑下）垂体中叶 neurohypophysis 垂体神经部。

两种小鼠生精细胞染色体制备方法的探讨与评价

— 104 —CHINESE JOURNAL OF ANATOMY V ol.44 No.2 2021 解剖学杂志 2021年第44卷第2期两种小鼠生精细胞染色体制备方法的探讨与评价*卢文亮孟卫京薛春梅杨静宁伟霞毛国丽郭兴萍△（山西省生殖科学研究所，太原 030006）摘要目的：比较改良的体内注射秋水仙素制备法和空气干燥直接制备法制作小鼠生精细胞减数分裂中期染色体标本的优劣。

方法：选用8~12周龄雄性Balb/c 小鼠，分别采用改良的体内注射秋水仙素制备法和空气干燥直接制备法进行减数分裂中期染色体制备，并用Giemsa 染色。

光镜下观察小鼠生精细胞减数分裂不同阶段分裂相细胞染色体形态并计数，计算各分裂相细胞的检出率。

结果：体内注射秋水仙素制备法和空气干燥直接制备法对生精细胞减数分裂中期染色体核型的检出率分别为10.37%和6.46%。

秋水仙素处理小鼠的最适浓度是4 mg/kg ，体内注射秋水仙素制备法制得的核型分裂相比空气干燥直接制备法多，直接制备法得到的染色体核型边缘清晰，更便于计数。

结论：体内注射秋水仙素制备法的优势在于核型分裂相多，而空气干燥直接制备法的优势在于染色体核型边缘清晰，更便于计数，可根据不同实验需求进行选择。

关键词生精细胞；减数分裂；标本制备；小鼠Discussion and evaluation on chromosome preparation methodsof spermato genic cells in two groups of mice *Lu Wenliang ， Meng Weijing ， Xue Chunmei ， Yang Jing ， Ning Weixia ， Mao Guoli ， Guo Xingping △（Shanxi Institute of Reproductive Science ， Taiyuan 030006， China ）Abstract Objective ： To compare the advantages and disadvantages of the modified colchicine injection and the direct air drying methods for preparing meiotic metaphase chromosome of mouse spermatogenic cells. Methods ： Male Balb/c mice aged 8 to 12 weeks were used to prepare meiotic metaphase chromosomes by the modified colchicine injection and air drying ， respectively ， and stained with Giemsa. Under light microscope ， the chromosome morphology was observed and the mitotic phase cells were counted at different stages of meiosis in spermatogenic cells ， and the rate of cells in each phase was calculated. Results ： The detection rate of chromosome karyotypes in meiotic metaphase of spermatogenic cells by two methods was 10.37% and 6.46% respectively. The optimum concentration of colchicine for the mice was 4 mg/kg ， and the karyotype obtained by injection of colchicine in vivo was more than that by direct preparation. The chromosome karyotype obtained by direct preparation had clear edges and was easier to count. Conclusion ： Colchicine injection in vivo can obtain more karyotypes ， while air drying direct preparation can obtain clear chromosome karyotype edge ， which is easier to count ， and can be selected according to the different experimental requirements.Key words germ cell ； meiosis ； specimen preparation ；mousedoi ： 10.3969/j.issn.1001-1633.2021.02.003·论著·*山西省卫生健康委科研项目（2019004）第1作者E-mail ：*****************△通信作者，E-mail ：***************收稿日期：2020-07-16；修回日期：2020-11-15生精细胞减数分裂期染色体分析是遗传学、组织学胚胎学、细胞生物学和生殖生物学研究的重要手段[1-2]。

出生后小鼠睾丸不同发育期TIMP-4的表达

ｆａｍｉｌｙ．Ｉｅｐｅｅｔｓｕｙ，ｓｍｉｑａｔｔｉｅｒＰｎｔｒｓｎｔｄｈｅ－ｕｎｉｖ－ＣＲ，Ｗｅｔｍｏｔ，ａｄｉｄｉｅｔｉａｔｓｅｂｌｔｎｇｎｎｒｃｍｍｕｎｆｕｒｓｅｃｔｉｎｒｓｄｔｉｏｏｃｎｅｓａｍｇｗｅｅｕｅｏｌｅ
ｂｏｔｇｒｓｌｓｉｄｉａｅａ１Ｐｗａｌｘｒｓｄｉｄｌｔｓｅｎｓｎｔｅｐｓｅｕｉｇｏｈｒｄｖｌｐｎａｅｏ．ｌｔｉｕｔｎｃｔｄｔｔ１Ｍ４ｓｏｎｙｅｐｓｎａｕｔｅｔｓａｄｗａｏｘｒｓｄｄｒｎｔｅｅｅｏｍｅｔｌｐｒｄｓｎｅｈｅｅｅｉｈｕｔｆｉＴｅｒｓｌｓｏｅｍｍｕｏｕｒｓｎｅｓｉｉｇｆｒｈｒｓｏｄｔａＭＰ４ｐｏｅｎｗａｎｅｉｅｙｌＣｉｅｎＬｙｉｅｌ．，．ｓａａｎｆｏｅｅｃｔｎｎｕｔｅｈｗｅｈｔＴＩ－ｒｔｉｓｉｔｎｓｖｌＯａｚｄｉｅｄｇｃｌｓＩｅｅｄｔｌａｌ１
达于成年小鼠的睾丸中。为了证实ＴＭ－ＩＰ４基因在出生后小鼠睾丸中的表达是否具有发育依赖性，本实验利用Ｒ－Ｃ、Ｗｅｅｂｔｎ和间接免疫荧光染色三种方法，分别检测了ＴＭＰ４ｍＮＴＰＲｓｍｌｔｇｔｏｉＩ．ＲＡ和蛋白在出生后小鼠睾丸不同发育期中的时空表达方式。Ｒ－ＣＴＰＲ和Ｗｅｔｌｔｇ果分别显示，ＴＭ－ｍＮｓｒｂｔｎ结ｅｏｉｎＩＰ４ＲＡ和蛋白均只在成年小鼠睾丸中表达，而在出生后的其它各阶段都不表达；间接免疫荧光染色进一步证实１Ｍ－白只定位在成年小鼠睾丸的１Ｐ４蛋Ｌｙｉ细胞中。结果提示，ＴＭ－出生后小鼠睾丸中的表达具有显著的发育依赖性【物学报５（）３ｅｄｇＩＰ４在动３１：１０— １４０７。３，２０］

小鼠睾丸发育全过程中cyclin B1和Bax基因的表达

2)进行免疫组织化学检测（每组随机取5张切片）
石蜡切片脱蜡至水，H2O2水溶液室温孵育以消除内源性过氧化物酶活性。
山羊血清封闭后，滴加适当比例稀释的一抗37℃孵育。PBS液冲洗后滴加适当比例稀释的相应生物素标记二抗37℃孵育。PBS冲洗后滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素37℃孵育，PBS冲洗后显色剂显色（DAB或AEC）。光镜下观察显色至适当深浅后终止显色。
2011年3月-2011年9月cyclinB1和Bax蛋白免疫组化分析，明确它们在小鼠睾丸发育过程中蛋白质水平的表达过程和组织定位。
2011年9月-2011年12月研究结果的整理、分析和总结工作；撰写论文、发表文章。
选取两个值得研究的基因，在小鼠睾丸发育过程中从蛋白质水平全程探讨生精细胞的增殖与凋亡情况，综合实验结果讨论基因表达与凋亡之间的相关性，有望明确某些前期研究中很难解释的问题，以进一步阐明这两个基因在小鼠睾丸发育过程中的生理功能。
4．年度研究计划和预期进展
2010年11月-2011年2月购置实验所需药盒、物品、试剂、消耗品等。饲养小鼠，完成不同阶段小鼠睾丸的取材工作。
有研究结果表明，精子细胞中大量存在的cyclin B1 蛋白是作为一种细胞分裂完成的信号 ,为启动精子细胞变态所必需,另一种可能的解释是精子细胞的核骨架和核基质中有cyclin B1蛋白的作用底物,而cyclin B1蛋白可能参与精子变态时的核骨架变化。调节核浓缩和核包装，cyclin B1基因的这种转录后贮存以及在精子细胞变态时瞬时表达的特点，无疑对生精过程的正常进行具有重要意义。
Bax基因的概述：Bcl-2 和Bax是与凋亡密切相关的基因，二者具有同源性，Bcl-2是最为熟悉的抑凋亡基因，而Bax则是促凋亡基因，Bcl-2抑制凋亡必须通过与Bax形成异源二聚体来实现，二者的比例决定精子细胞凋亡趋势，如果Bcl-2表达水平下降将使细胞无法平衡促凋亡基因Bax的作用，从而使细胞走向凋亡[5]。Bax基因蛋白表达增强；与此同时机体为平衡Bax基因的作用，抑凋亡基因也被启动，然而，当病理刺激持续的情况下，Bcl-2和Bax相互竞争，通过某种信号使Bcl-2基因蛋白占据了优势，其结果使凋亡趋势被抑制。[6]

影响小鼠发育过程中的几个重要因素

影响小鼠发育过程中的几个重要因素王晓会124120035（云南师范大学生命科学学院，云南昆明650500）摘要：在一个生物体发育过程中，影响其正常发育的因素有很多，本文通过阅读并分析近年国内公开发表的与小鼠发育相关的文章，根据有关文献, 综合分析、归纳总结了小鼠睾丸发育全过程，小鼠睾丸TERT与小鼠发育的关系，小鼠硫酸乙酰肝素对小鼠发育的影响，神经前体细胞( neural progenitor cell，NPC)与小鼠发育的联系，miRNA 在小鼠发育过程中的作用，以及高尔基体与小鼠发育的联系和核糖核酸和与NADP对小鼠发育的影响等。

关键词：小鼠发育；小鼠硫酸乙酰肝素；小鼠睾丸TERT；神经前体细胞；miRNA；高尔基体；核糖核酸和与NADPImportant factors in the process of development in miceWangXiaohui 124120035(The Life of Science ,YunNan Normal University,KunMing650500,china)Abstract:There are many factors that can influence the development of a living organism. In this article, through reading and analysis domestic published articles that related to development in mice recent years, to conclude some factors that can influence the development of mice.Including Mice testis development process; Testis TERT relationship in the development of mice;The influence in the development of heparan sulphate in mice;The function of miRNA; Influence of Golgi Apparatus during Mouse Oocyte Development invitro ; The influence of ribonucleic acid and the NADP.Key Words:Mouse Development; Heparan sulfate; Testis TERT; mi RNA; Golgi Apparatus;Ribonucleic acid and the NADP1小鼠睾丸发育全过程[1]睾丸是重要的雄性生殖腺，可产生精子和雄性激素，对雄性生殖系统的发育起着重要作用。

全转录组测序分析精子发生中RNA结合蛋白质的动态表达

基础医学与临床Basic & Clinical MedicineJune 2021Vol.41 No.62021年6月第41卷第6期文章编号：1001-6325 ( 2021) 06-0825-06研究论文全转录组测序分析精子发生中RNA 结合蛋白质的动态表达李凯，邙新雨，邹定峰，李梦真，缪时英，王琳芳，宋伟**收稿日期：2021-03-29 修回日期：2021・04-16基金项目：国家自然科学基金(31970794,32000586)* 通信作者(corresponding author ) : songwei@ (中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室，北京100005)摘要：目的系统解析RNA 结合蛋白质(RBPs)在小鼠精子发生中的动态表达全貌、阶段特异性及协同表达模式，并预测其潜在调控作用。

方法整合6种类型生精细胞的全转录组测序数据，分析精子发生全程差异表达的RBPs ；利用时间序列分析软件(STEM)分析差异表达RBPs 动态表达模式；利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)鉴定精子发生中协同表达的RBPs ；通过ClusterProfiler 工具分别对差异表达以及协同表达的RBPs 进行GO 功能富集分析。

结果精子发生中共鉴定519个阶段特异表达的RBPs,并具有7种动态表达模式，其中减数分裂时期的RBPs 占比最高；GO 分析显示RBPs 主要参与mRNA 选择性剪接、加工或翻译过程;WGCNA 分析获得246个共表达RBPs,其中减数分裂时期共表达RBPs 占比最高。

结论RBPs 在精子发生中呈现阶段特异性，并且以协同表达模式发挥调控作用。

其在精子发生早期阶段参与RNA 加工或剪接等过程，而在后期阶段参与核糖体组装或RNA 翻译等过程。

关键词：RNA 结合蛋白质;转录组;共表达;精子发生中图分类号:Q28文献标志码:ADynamic expression of RNA-bindingproteins in spermatogenesis based on RNA-seqLI Kai, MANG Xin-yu, ZOU Ding-feng, LI Meng-zhen, MIAO Shi-ying, WANG Lin-fang, SONG Wei *(State Key Laboratory of Medical Molecular Biology , Department of Biochemistry and Molecular Biology, Institute ofBasic Medical Sciences Chinese Academy of Medical Sciences , School of Basic Medicine Peking Union Medical College ,Beijing 100005, China)Abstract : Objective To systematically characterize the dynamic expression pattern , stage specificity and co-ex pression pattern of RNA-binding protein ( RBPs) and to predict their potential regulatory role in mouse spermato genesis ・ Methods The whole transcriptome sequencing data of six spermatogenic cells types were integrated for an alyzing the differentially expressed RBPs during spermatogenesis ； STEM was used to analyze the dynamic expressionpattern of RBPs ； WGCNA was used to identify the RBPs co-expressed pattern ； The differentially expressed and co expressed RBPs were analyzed by the ClusterProfiler tool for GO function enrichment analysis. Results A total of 519 stage-specific RBPs were identified during spermatogenesis , and there were 7 dynamic expression patterns , ofwhich RBPs at the meiotic stage accounted for the highest proportion ； GO enrichment analysis showed that RBPs were826基础医学与临床Basic&Clinical Medicine2021.41(6) mainly involved in the selective splicing,processing or translation of mRNA；WGCNA analysis showed that246 RBPs were co-expressed,among which RBPs at the meiotic stage accounted for the highest proportion.Conclusions RBPs exhibit stage specificity and play a regulatory role in spermatogenesis with a coordinated expression mode.It functions mainly in the process of RNA processing or splicing in the early stage of spermatogenesis,and is have significant impact on the process of ribosome assembly or RNA translation in the later stage.Key words:RNA-binding proteins;transcriptome;co-expression；spermatogenesis精子发生是从精原细胞发育成为成熟精子的一个复杂有序的连续细胞分化过程，主要分为3个时期:精原细胞有丝分裂期、精母细胞减数分裂期和精子形成期⑴。

小鼠繁育过程经历哪些阶段？

小鼠繁育过程经历哪些阶段？小鼠繁育过程主要包括选择种鼠，合笼，受孕检测和孕鼠饲养等几个阶段。

第一步：选择最佳年龄的小鼠进行繁殖随着年龄的变化，小鼠的身体机能和繁殖能力一直在变化，如雄性小鼠的精液质量、数量和交配母鼠的受胎率，母鼠亦是如此。

了解到小鼠的各年龄段的生长状况，因此选择合适年纪的小鼠就变得非常简单了。

1. 性成熟小鼠：6~8周的成年小鼠（雌鼠5~7周，20±1.5克；雄鼠较晚，9周，25±1.5克）2. 发情雌鼠：只有在发情的时它们才会允许雄鼠进行交配。

观察到雌鼠阴道口若呈温湿红肿，褶皱明显多为发情期，此时合笼受孕率高。

雌鼠有五对乳头（胸部3对，腹部2对）；外雌性小鼠的肛门和外生殖器的距离要更短。

第二步：合笼挑选性成熟、状态好的雌雄鼠进行交配。

为了增加受孕率，合笼雄雌比例可为1:2到1:3合笼方式主要有两种：1. 连续合笼：雌鼠雄鼠连续几天内一直在同一个笼子中；2. 间断合笼：一只雌鼠和一只雄鼠相处一天，然后就换另外的一只雌鼠进来合笼；常规采用连续合笼方法，待确定母鼠怀孕后可将公鼠取出与其他母鼠进行交配，并留孕鼠单独饲养照养子代第三步：受孕检测1. 查阴拴：用镊子直接查阴道内有无阴拴（阴门口处乳白色、固态胶状物，是由雄性小鼠精囊腺和凝固腺的分泌物在阴道内凝固而形成的产物）。

缺点：容易出现漏检和假孕2. 阴道涂片查精子：合笼第二天早上检查，用一次性的吸管沾取少量生理盐水，插入雌鼠阴道抽吸几下，涂在载玻片上，加一滴生理盐水后加盖玻片镜下观察，看到大量活精子在游动则代表受精。

第四步：孕鼠饲养孕检发现怀孕小鼠后，应及时给予特殊照顾。

1. 首先要给予充足的营养，除供给足够的块料外，还要定时饲喂少量瓜子、麦芽和拌有鸡蛋的软料等食物。

2. 如果雌鼠多的话，可以把孕鼠妈妈和鼠爸分出来一起分娩，过了21天分娩期后，再分笼。

期间要密切注意孕鼠及仔鼠的生长情况。

3. 小鼠的健康状况与母鼠妈妈的哺乳能力、生产胎次有密切关系。

dd-小鼠的生精上皮周期和精子生成阶段

dd-小鼠的生精上皮周期和精子生成阶段
申立山
【期刊名称】《哈尔滨医科大学学报》
【年(卷),期】1997(31)1
【摘要】ｄｄ－小鼠的生精上皮周期及其精子生成阶段在与Ｏａｋｂｅｒｇ研究的Ｃ３Ｈ小鼠进行对照的情况下观察：①ｄｄ－小鼠生精上皮各个阶段的生殖细胞组合与Ｃ３Ｈ小鼠不同；②阶段１５和阶段１６的精细胞或者阶段Ⅳ至阶段Ⅷ很容易通过上皮中的细胞核的位置和胞浆中颗粒的出现被划分出来。

【总页数】3页(P15-17)
【关键词】生精上皮;精子生成;小白鼠
【作者】申立山
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R321.1
【相关文献】
1.小鼠睾丸不同阶段生精上皮细胞的发育形态学研究 [J], 吴枫;王行明;
2.周期素Cyclin G2在小鼠睾丸生精上皮中的表达特点 [J], 海涛;邓泽勋;何锐;张志红;徐倩;
3.周期素Cyclin G2在小鼠睾丸生精上皮中的表达特点 [J], 海涛;邓泽勋;何锐;张志红;徐倩
4.单侧睾丸动脉结扎/再通对小鼠生精上皮、血清抗精子抗体的影响 [J], 张冰;玛依拉·阿布拉克;王新星;买尔江·艾合买提
5.不同运动方式和运动时间对小鼠睾酮分泌和精子生成的影响 [J], 张姹;江青艳;魏易焓;卢静怡;王蕾蕾;常成杰;徐畅;袁业现;尹聪;束刚
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《小鼠发育概要》

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胚胎发育—原始内胚层
极滋养外胚层原始内胚层
壁滋养外胚层
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胚胎发育—原始外胚层
• 在胚胎植入时（4.5dpc），胚泡由三种不同的组织细胞组成，即滋养外胚层，原始内胚层和原始外胚层（表胚层）。表胚层细胞最少，只包括20-25个细胞，位于极滋养外胚层与原始内胚层之间。这些细胞通过缝隙连接彼此沟通。
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胚胎早期发育—卵裂
• 在卵裂过程中，第一次卵裂从动物极穿过雌雄原核所在区域，通向植物极。第二次卵裂同第一次卵裂面呈垂直方向，但也是从动物极开始延伸到植物极。第三次卵裂呈水平方向，在动植物极之间，因此它与前两个卵裂面都呈直角。
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卵裂方向
前两次分裂面始于动物极，止于植物极，前两次为经裂，实用文第档 3次为纬裂
胚泡到达子宫时，胚胎细胞分泌strypsin （一种类胰蛋白酶)，它使透明带穿孔，胚泡从孔中挤出与子宫壁接触，通过一系列反 Mouse blastocyst hatching
from the zona pellucida. (Photograph
应而着床。 from Mark et al. 1985, courtesy of E.
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答案
• 2010年2月18日法国国家科研中心发布公报说，一个由美国和法国研究人员组成的科研小组通过对小鼠胚胎的研究，发现了影响脊椎动物身体对称性的物质。脊椎动物身体的对称性早在胚胎发育初期，即体节形成时期就已经表现出来，维生素A酸在确保身体对称性上起到了关键性作用。
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Байду номын сангаас鼠的胚胎发育
PGC）起源于表胚层，PGC最早在7.0dpc原肠期胚胎中检测到，它们作为一个特殊的群体存在于后羊膜褶区域的胚外中胚层中，接下来，它们位于原条后部下方，并且被合并到尿囊基部，在头褶期形成大约75 个细胞的细胞簇。

不同发育阶段小鼠的雌性生殖器官变化

不同发育阶段的昆明小鼠的卵巢的形态学观察The morphological observation of the ovary of the Kunming mouses at the different development stages摘要本实验选用不同年龄阶段的昆明小鼠，并对它们解剖，取其生殖器官，固定、逐级脱水、做组织切片，并用HE染色，显微镜观察。

比较不同年龄阶段小鼠卵巢内卵泡、黄体的变化。

实验观察表明三个月龄的小鼠的卵巢中出现生长卵泡、成熟卵泡及少量黄体，随发育阶段的不同，初级卵泡数量减少，黄体数量不断增加，到了产后阶段，发生明显变化，黄体量很多。

本实验支持小鼠的性成熟是在两个月到三个月之间的看法。

关键词：小鼠卵巢；组织切片；固定1.前言小鼠(Mus musculus)是最重要的哺乳动物发育生物学的研究模型，由于其胚胎发育过程与人类比较接近，可以作为很多人类疾病的动物模型而备受关注。

卵巢是雌性哺乳动物的生殖器官，具有排卵和分泌类固醇激素的功能[1]，卵巢发育具有相当的复杂性与重大意义，迄今为止，其发育过程中还有许多机制和调控机理仍不甚明了。

本实验通过研究不同发育时期小鼠卵巢的基本结构，为正常小鼠的资源数据库提供资料，以便后人的继续研究。

2. 材料和方法本实验用的雌性昆明小鼠，购于山西医科大学实验动物中心，2015年4 月~5 月期间先后购买 4 只七日龄的小乳鼠，一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、八个月以及产后的小鼠各 2 只。

我们将小鼠生殖器官取材，固定、经逐级酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋、切片(6~8um)⑵。

HE组织学常规染色，显微镜下观察，并作了显微测量。

3. 观察结果卵巢是产生卵子的器官，左右各一个，位于肾脏下方，颜色呈浅粉色或红色，质较韧硬，形似豆状，长度在4mm左右，其表面凸隆，性成熟后，由于卵泡的膨大和排卵后结瘢，致使其表面凹凸不平。

卵巢的大小、形状和颜色，因月龄不同而异。

C57BL6J小鼠生长周期

小鼠的生长周期
1、胚胎期
小鼠卵在输卵管壶腹部受精后开始分裂发育，至桑椹胚(约3天)进入子宫,
形成囊胚(约第5天)开始着床，妊娠期为19〜21天。

2、生后早期及哺乳期
1 )新生小鼠赤裸无毛，皮肤肉红色,不开眼，双耳与皮肤粘连。

2 ) 4〜6日龄双耳张开耸立。

3 ) 7〜8日龄四肢发育开始爬动游走，被毛逐渐浓密，下门齿长出。

4 ) 9〜10日龄有听觉，被毛长齐。

5 ) 12〜14日龄睁眼，长出上门齿，开始采食及饮水。

3、断奶期：出生后3周龄可离乳独立生活。

4、青春早期及生长期
1) 4周龄，雌鼠阴腔张开。

2) 5周龄，雄鼠睾丸降落至阴囊，开始生成精子。

3) 出生后4-8周为生长期。

5、青春后期出生后5-8周
6、性成熟期：出生后45〜60日龄性发育成熟。

性周期：4〜5天
7、体成熟期出生后60〜90天，此即为成年期。

8、中老年期：出生后120天，逐渐进入中年期，至出生后180天，随后进入老年期。

9、健康小鼠寿命可达18〜24个月，最长可达3年。

胎胚
后早期及哺生毛眼肤粘连耳张开耸立。

韭非。