水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法培训讲学

水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法HJ505-2009

1. 适用范围

1.1 本方法适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。

1.2 本方法的检出限为0.5mg/L，方法的测定下限为2 mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测

定上限为6mg/L，稀释与接种法的测定上限为6000mg/L。

2. 术语和定义

五日生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是分解有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。条件为（20±1）℃培养5天，分别测定样品培养前后的溶解氧，两者之差即为BOD5值，以氧的毫克/升表示。

3. 方法原理

将水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h或（2+5）d±4 [先在0~4℃的暗处培养2d，接着在（20±1）℃的暗处培养5d，即培养（2+5）d]，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量。

若样品中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；

对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化出力等的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质是，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。

4. 试剂和材料

分析时，只采用公认的分析纯试剂和蒸馏水或同等纯度的水（在全玻璃装置中蒸馏的水或去离子水），水中含铜不应高于0.01mg/L，并不应有氯、氯胺、苛性碱、有机物和酸类。

4.1 接种液

取POLYSEED 胶囊1 粒溶于装有250ml稀释水的烧杯中。将烧杯置于磁力搅拌器上搅

拌曝气1h。曝气结束，放置0.5h后倾出全部清液，将该清液置于磁力搅拌器上搅拌，此接种液最多能放置二天。其它获得接种液的途径见如下。

4.1.1 未受工业废水污染的生活污水：化学需氧量不大于300mg/L，总有机碳不大于100 mg/L；

4.1.2 含有城镇污水的河水或湖水；

4.1.3 污水处理厂的出水；

4.1.4 分析含有难降解物质的工业废水时，在其排污口下游适当处取水样作为废水的驯化接种液。也可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入少量生活污水，使适应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量的絮状物时，表明微生物已繁殖，可用作接种液。一般驯化过程需3~8天。

4.2 盐溶液

4.2.1 磷酸盐缓冲溶液

将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、16.6g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）、17.7g七水合磷

酸氢二钠（Na2HPO4）和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于约500ml水中，稀释至1000ml 并混合均匀。此缓冲溶液的pH 应为7.2。

4.2.2 七水合硫酸镁

将22.5g的七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至1000ml 并混合均匀。

4.2.3 氯化钙

将27.5g的无水氯化钙（CaCl2）溶于水，稀释至1000ml 并混合均匀。

4.2.4 六水合氯化铁

将0.25g六水合氯化铁（FeCl3·6H2O）溶解于水中，稀释至1000ml 并混合均匀。

以上四种盐溶液在0~4℃可稳定保存6 个月。如有沉淀应弃去。

4.3 稀释水

取上述四种盐溶液（4.2.1、4.2.2、4.2.3和4.2.4）各1 ml，加入约1L水中，然后曝气2 小时以上，混合均匀，将此溶液置于20℃下恒温，确保溶解氧浓度不低于8mg/L。稀释水的BOD5值不得超过0.5mg/L。

4.4 接种稀释水：根据接种液的来源不同，每升稀释水（4.3）中加入适量接种液（4.1）：城市污水和污水处理厂出水加1~10ml，河水或湖水加10~100ml，将接种液稀释水存放在（20±1）℃的环境中，当天配置当天使用。接种的稀释水pH值为7.2，BOD5应小于1.5mg/L。4.5 盐酸溶液，c(HCL)=0.5mg/L：将40ml 浓盐酸溶于水中，稀释至1000ml。

4.6 氢氧化钠溶液，c(NaOH)=0.5mol/L：将20克氢氧化钠溶于水中，稀释至1000ml。

4.7 亚硫酸钠溶液(0.025mol/L)：将1.575g亚硫酸钠溶于水中，稀释至1000ml。此溶液需现用现配。

4.8 葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12O6）和谷氨酸

（HOOCH-CH2-CH2-CHNH2-COOH，优级纯）在130℃干燥1h，各称取150mg溶于水中，在1000ml容量瓶中稀释至标线。此溶液的BOD5为（210±20）mg/L，现用现配。该溶液也可少量冷冻保存，融化后立即使用。

4.9 丙烯基硫脲硝化抑制剂（1.0g/L）

溶解0.2g丙烯基硫脲于200ml水中，4℃保存，可稳定保存14 天。

4.10 乙酸溶液，1+1

4.11 碘化钾溶液（100g/L），将10g碘化钾溶于水中，稀释至100ml。

4.12 淀粉溶液（5g/L）：将0.5g淀粉溶于水中，稀释至100ml。

5. 仪器和设备

5.1 培养瓶

细口瓶的容量在200ml 之间，带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口，最好是直肩的。

5.2 培养箱：控制20±1 ℃。

5. 3 溶解氧测定仪：YSI-58。

6. 干扰

6.1 水样的pH 若超出6.5－

7.5 范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节pH 近于7，但不要超过水样体积的0.5％。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的酸或碱进行中和。6.2 水样中含有重金属等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或提高稀释倍数以减少毒物的浓度。

6.3 含有少量游离氯的水样，一般放置1－2h，游离氯即可消失。对在短时间内不能消失的余氯，可加入适量亚硫酸钠溶液去除样品中存在的余氯和结合氯，加入的亚硫酸钠溶液的量由下述方法确定。

取已中和的水样100ml，加入乙酸溶液10ml、碘化钾溶液1ml，混匀，暗处静置5分钟。用亚硫酸钠溶液滴定析出的碘至淡黄色，加入1ml 淀粉溶液呈蓝色。再继续滴定至蓝色刚刚褪去，即为终点，记录所用亚硫酸钠溶液体积，由亚硫酸钠溶液消耗的体积，计算出水样中应加亚硫酸钠溶液的体积。

6.4 一般污水处理厂的水样，应经过硝化池，含有大量硝化菌，可在每升稀释样品中加入2ml 浓度为1.0g/L的烯丙基硫脲（ATU）（C4H8N2S）溶液以去除。

6.5 从水温较低的水域或富营养的湖泊忠采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，在不使满瓶的情况下，充分振摇，并时时开塞放气，以赶出过饱和的溶解氧。从水温较高的水域或废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20℃左右，