氯化锂转化
盐湖氯化锂的生产工艺与影响因素
盐湖氯化锂的生产工艺与影响因素摘要:本文对盐湖氯化锂的生产工艺内容进行了总结,并以察尔汗盐湖为例,从盐湖卤水中的锂含量、盐湖卤水镁锂比、盐湖提锂生产工艺采用三个方面论述了盐湖氯化锂的主要影响因素,最后阐述了氯化锂的总体发展趋势,以期为相关研究人员提供参考。
关键词:盐湖;氯化锂;生产工艺;影响因素0引言由于其优异的物理和化学性能,锂的应用范围很广,被誉为“促进世界发展的能量金属”。
锂的主要用途是军用,随着新能源、冶金、航天、玻璃等工业的迅速发展,锂的需求量不断增加,因此,锂的生产技术也越来越受到重视。
地壳中的锂含量只有0.0065%,只有少量的锂元素分布在盐湖的卤水中[1]。
在自然界中,锂是以化合物的形式存在的。
氯化锂的应用范围很广,在电解法生产金属锂时,会产生大量的氯化锂。
目前国内最常用的一种生产金属锂的方法是1893年刚茨提出的,即氯化锂的溶盐法,这种方法具有简便、高效的特点,在生物、医药等方面有着广阔的应用前景。
1.氯化锂概述氯化锂是一种分子量为42.39的无机物。
它是一种有潮解力的白色结晶,其广泛应用于空调行业,如助焊剂、干燥剂、化学试剂,同时也可用于制作烟火、干电池、金属锂等。
氯化锂是生产金属锂的主要原材料,是电解制造金属的助熔剂(例如,制造铝和钛),还可以作为铝的焊接剂、空调除湿剂、特殊水泥原料、火焰等。
无水氯化锂是一种用于电解法制备金属锂、铝的焊剂、钎剂,以及在非制冷空调中的吸湿(除湿)材料。
600℃下电解氯化锂的混合熔盐,可以制备金属锂。
工业用的金属锂就是用这种方法来制造的[2]。
将氯化锂与 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)混合在一起,可以制成不同浓度的溶液,用作高分子溶媒。
2.氯化锂生产工艺2.1矿石直接转化法将锂辉石经930~1000℃锻烧,将其转化为易发生化学反应的β-锂辉石,并与 KCl反应,得到摩尔成分比例为60%的KC1与40%的LiC1的混合物。
经降温后,用醇类作溶剂对氯化锂进行萃取,再蒸发、提取,得到纯度为99.47%的氯化锂产品。
酵母感受态的制备(化学法)
1、毕氏酵母氯化锂转化法(1)试剂1M LiCl(用去离子蒸馏水配制,滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释)50% PEG3350(Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制,滤膜过滤除菌,用较紧的盖子的瓶子分装)2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA)-20℃保存注:醋酸锂对毕氏酵母无效,仅氯化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用;(2)感受态毕氏酵母的制备接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中,30℃摇菌过夜(约24~28h)培养到OD值为0.8~1.0(约108 Cells/ml);收获细胞,用25ml无菌水洗涤一次,室温下1500g离心10min;重悬细胞于1ml 100mM LiCl溶液中,将悬液转入1.5ml离心管;离心机最大速度离心15秒沉淀菌体,重悬菌体于400ul 100mM LiCl溶液中;按50ul/管分装,立即进行转化;注:不要将感受态酵母菌冰浴;(3)毕氏酵母的转化煮沸1ml鲑鱼精DNA 5min,迅速冰浴以制备单链担体DNA;将感受态酵母菌离心,以Tips去除残余的LiCl溶液;对于每一个转化,按以下顺序加入:50% PEG3350 240ul1M LiCl 36ul2mg/ml 单链Salmon sperm DNA 25ul5~10ug/50ul H2O 质粒DNA 50ul剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀(约1min);30℃水浴孵育30min;42℃水浴热休克20~25min;6000~8000rpm离心收集酵母菌体;重悬酵母于1ml YPD培养基,30℃摇床孵育;1~4h后,取25~100ul菌液铺选择性培养基平板,于30℃培养2~3天鉴定;2、毕氏酵母PEG1000转化法(1)试剂缓冲液A:1.0M Sorbitol,10mM Bicine,pH8.35(sigma),3%(v/v)ethylene gl ycol缓冲液B:40%(w/v)PEG1000(sigma),0.2M Bicine,pH8.35缓冲液C:0.15M NaCl,10mM Bicine,pH8.35未污染的新鲜、试剂级DMSO,-70℃保存注:缓冲液A、B、C均用滤膜过滤,-20℃保存;将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处(即使在冰上解冻的待转化细胞,其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降;如进行多样品的转化,建议按6样品/组进行);(2)待转化毕氏酵母的制备接种环接种Pachia pastoris于YPD平板,30℃培养2d;挑取单克隆酵母菌株于10mlYPD培养基中,30℃振荡培养过夜;取步骤2中小量菌液接种到100mlYPD培养基中振荡培养,待其OD值从0.1升到0. 5~0.8;室温下3000g离心收集酵母菌体,50ml缓冲液A洗涤一次;重悬菌体于4ml缓冲液A中,按0.2ml/管分装于1.5ml的离心管中,每管加入11ulD MSO,混合后迅速于液氮中冷冻,-70℃保存(3)毕氏酵母的转化将约50ug线性化质粒DNA溶于20ul TE或水中,直接加于冻结的酵母细胞中;加入担体DNA(40ug变性超声线性化鲑鱼精DNA)以获得最大转化率;37℃水浴孵育5min,中间混合样品1~2次;取出离心管,加入1.5ml缓冲液B,彻底混匀;30℃水浴孵育1h;室温下2000g离心10min,去除上清液,菌体沉淀重悬于1.5ml缓冲液C中;离心样品,去除上清液,轻微操作将样品重悬于0.2ml缓冲液C中;将所有转化液铺于选择性平板,于30℃孵育3~4天后,鉴定;3、毕氏酵母电转化法(1)E.coli TOP10F’感受态细胞的制备取10ul TOP10F’菌液,接种于200ml LB液体培养基中活化培养,37℃,200 rpm,16~18小时。
国内盐湖卤水提取碳酸锂生产工艺及现状
国内盐湖卤水提取碳酸锂生产工艺及现状盐类和碳酸锂都是我国经济发展中必不可缺地物资,同时对我国地国防建设也具有非常重要现实意义.近年来,锂电子电子已经成为化学电源行业发展地热潮,由于它具有不含铅汞,自放电速率低,环保等优势,因此目前在电源行业得到了较为广泛地应用.我国作为一个锂资源丰富地国家,在盐湖,温泉水等资源中都含有大量锂资源,同时由于工业排放大量废水,导致有害离子地产生,所以加强对锂资源地研究是非常有必要地.据工作人员调查,将锂电子地电池广泛地应用在相应领域中,不仅可以降低资源成本,还可以更好地满足电源市场地需求,因此必须提高对卤水提取碳酸锂相关工作地研究,从而有效地解决我国而临地资源紧缺地问题.卤水提取中碳酸锂技术工艺分析根据锂资源种类地不同可以将锂资源提取技术分为这两类:盐湖卤水提取和矿石提取.锂资源提取技术历史悠久,在工作人员地努力以及有关部门地大力支持下,目前碳酸锂地提取技术已经相对成熟,其操作工艺主要包括酸法,酸法还包括了醋酸钠法,氯化钠法,硫酸法等,但是从目前实际情况看来,在固体采矿过程中提取碳酸锂比较复杂,必须经过粉碎,磨矿,焙烧等工作流程才可以顺利地获取可溶态碳酸锂化合物,同时在此项工作地进行中还需要消耗大量酸碱以及能量,并带来设备严重腐蚀问题.现阶段我国工业级市场,碳酸锂地价格为元左右,如果将锂灰石作为碳酸锂地提取材料,才可以将其资源成本控制在元,节约成本为元,由于不能更好地满足行业需求,所以需要加强对盐湖卤水获取碳酸锂资源地大力研究,使其成为卤水取锂工作地主流技术.沉淀法这种方法是最早在工业得到应用地方法,其中主要包含了铝酸沉淀法,碳酸沉淀法,其中地碳酸沉淀法主要应用在工业生产过程中,这种方法地应用原理为:借助太阳能将蒸汽池中含有锂资源地卤水以自然蒸发地方式来进行浓缩,并进行拖硼酸化,并在锂含量得到标准,其浓度逐渐升高时,及时使用石灰将其中地镁除掉,最后将其以碳酸锂形式产生,并进行相应地干燥处理,成功得到碳酸锂产品.比如我国某研究学者也积极采用这种方法来进行碳酸锂地提取,从而发现这种方法具有一定地实效性,同时还具有反应速度快,准确度高等优势,因此将这种方法灵活地应用在碳酸锂产品地提取过程中可以取得更好地成效,它值得大力地推广和应用.同时这一学者还指出,沉淀法比较适合应用在低镁锂比卤水提取工作中,比如死海,察尔汗盐湖,将这种方法应用在酸碱沉淀钙杂质地提取过程中可以发挥出很好地应用效果.但是目前纯碱市场地价格波动大,因此操作起来会消耗大量地资源,不具有经济性地特点,由此可见,操作技术较为成熟,准确性高等特点是沉淀法地主要特征.锻烧提取法这种方法地主要操作原理是,将提硼后卤水进行自然蒸发,然后去除地水分,从而顺利地得到氧化镁.在七百摄氏度地环境中将锻烧,以此来得到氧化镁,同时采用加水侵泡地方式,并用石灰和纯碱将其中含有地钙,镁去掉,采取溶液蒸发方式,使其浓缩为总含量地,在其内加入定量地纯碱,使其进行沉淀,从而获取碳酸锂,在这种情况下,锂资源含量为.由于经过了锻烧和氧化,因此可以得到纯度为地氧化镁.比如我国某理工大学地杨教授,不断加强对卤水提取碳酸锂工作地地深入分析和研究,并积极使用某盐湖水进行提硼,然后得到母液,并采用锻烧提取法进行试验,通过采用这种方法将镁分离以及锂侵收率控制保证在以上,从而有效地解决了分离镁锂地问题,同时将其这种方法灵活地应用在工业生产中.碳化法这里提到地碳化法主要是利用二氧化碳与碳酸锂地化学反应,从而将盐湖卤水中地锂以及其他元素进行有效地分离,但是这项工作对操作技术地要求很高,目前只有盐湖适合采用这种方法.我国地锂资源储量居世界第一,经研究发现,中国青海察尔汗盐湖中锂资源储量达到了多万吨,占全国锂资源储量.工作人员通过对盐湖中地锂资源进行大力地研究,发现了适合特殊环境电源地侵取法,成功开发了分离、水侵、碳化、提取碳酸锂地新型操作技术,有效地保证了精矿碳酸锂地纯度为,与此同时,锂资源地回收率为,进行净化、提纯等工艺,可获取优质地碳酸锂产品,这利方法地优势是:操作简单、产品地质量好、成本低.溶剂提取法这种方法目前在我国盐湖提取里地相关工作中得到了较为广泛地应用,其应用原理为:通过利用锂在溶剂中产生产生不同地溶解度,以此来获取碳酸锂.在锂提取地过程中选择合适地方法是最为关键地,某学者在相关研究中指出,在酸性环境地条件下,通过使用和酮类地化合物并采用溶剂提取地方式,可以使其分离系数达到在某次研究报道中,使用进行锂提取,这种方法对金属离子选择地要求很高.在世纪初期,盛怀禹等人利用锂提取体系,这个体系还包括了酚类化合物,苯基偶氮,二氯苯,同时将二氯苯作为稀释剂,在混合地盐水中进行锂提取.严金英等人提出在将苏丹一作为锂提取地体系,在青海湖高镁锂地卤水中使用磷酸二丁酯,具体操作如下:先在卤水中添加定量地燃料使其蒸发,待食盐,钾等成分被彻底分离后,进行除硼操作,然后在其溶液内加入二氯化铁,以此形成混合物,继而使用酸进行洗涤,并使用盐酸进行提取,最后经过除杂,焙烧等环节,得到无水地氯化锂,并经过证实,得到:锂提取率得到,锂回收率达到,同时还具有可循环利用地优势,如上所述,从盐湖卤水中进行氯化锂地提取并通过二次转化,成功得到碳酸锂.结语综上所述,卤水提锂可以有效地提高锂资源地利用率,因此相关工作人员不断加大对这种锂提取技术地分析和研究,经过有关实验,对不同地提锂技术进行研究,从而发现,由于碳化法成本低,产品地质量好,所以成为我国工业卤水提锂地主要操作技术并成为工业提锂地发展趋势,但是工作人员需要注意,在实验过程中应该根据实际情况,选择合适地工艺方法,以此推动盐湖提锂工作地稳定发展.。
电转化注意事项
电转化注意事项作者: global.wun(站内联系TA)发布: 2009-10-20一、制备感受态的菌液收集时间:1、准确测定OD值:OD在1.2~1.5之间。
1)为了准确测定OD值,建议将菌液稀释不同浓度测定(1、2、4、8、16倍稀释,看其O D值是否呈线性关系)。
每个倍数做3-5个重复,应该可以大致推断OD值是否准确!菌液看上去浑浊,但OD值不高,很可能OD稀释倍数不够!2)OD值是否测准也可以这样估算:OD600为40左右时,菌体湿重(6000rpm离心5min)约0.95g/10ml。
高密度发酵时菌体湿重将相应下降。
2、75ml的菌,经18h左右的培养,最后sorbital洗涤完毕后,50ml离心管里所剩菌体特别浓,需要1ml sorbitol才可溶解为糊状。
正常培养的OD在1.2~1.5之间的500ml菌液,收集的感受态也用1ml稀释的,没那么粘稠。
可以看看降低培养温度(27摄氏度)或缩短培养时间(12h)。
3、甚至不用转接,直接挑单克隆在50-100mlYPD中摇过夜,效果也很好二、制备感受态的菌液量如果只转一个样品,50ml就够了,一般50ml的培养液如果OD值正常的话够做10管感受态的,其他的按比例缩小。
用大试管摇5ml菌液,然后取1ml毫升在1.5mlEP管中制感受态,每一步的离心时间30秒就行。
整个流程时间短,制备好的感受态用来做转化的效率很高。
山梨醇离心,洗涤的过程之后的重悬的时候注意浓度,不要过于粘稠和稀释。
三、感受态的保存感受态细胞做好后由于电转化杯还没有处理好等原因,在冰上放几个小时再做可能有一定的影响,尽量马上制备马上转化。
如果感受态细胞要保存,不需要加甘油,一般80ul EP管分装,-70 或-80 摄氏度保存。
另附:酵母GS115点种分离纯化接种GS115于5ml YPD液体培养基,30℃,200rpm振荡过夜,涂布YPD平板,30℃培养48 小时,用YNB基本培养基和含His的补充培养基作点种分离纯化,挑选在补充培养基生上生长而在基本培养基上不生长的单菌落划YPD平板,4℃保存。
美国推进核武器氘化锂-6热核部件生产
美国推进核武器氘化锂9@热核部件生产%%美国!"+3年!月发布的新版%核态势评估&报告提出(应确保目前重建美国锂化合物生产能力的计划能够充分满足军事需求)*为落实该报告要求'能源部在!"!+财年预算申请报告中加大对(锂现代化)专项计划的经费投入'并增加新的锂加工设施建设费用'大力保障氘化锂D热核部件供应。
/!保障氘化锂9@部件供应锂D与氘合成的氘化锂D是氢弹必不可少的核心装料*在氢弹爆炸中'高能中子与装料中的锂D发生反应生成氚,然后氚与氘发生聚变反应'释放出巨大能量*氚也是增强裂变弹的重要装料,锂D是生产氚的关键原料之一*美国在核反应堆中,利用中子轰击偏铝酸锂合金靶件生成氚*因此,只要核武器存在,锂D便是不可缺少的*美国1963年停止生产军用锂D,共生产了4424吨*至今仍保有大量锂-6,其中大部分处于库存储备状态,少量存在于从核武器上拆卸下来的退役氘化锂-6部件#以下简称(退役部件)$中*库存锂-6材料主要为氯化锂-6,少量!接上页#办公室宣布2"2"年3月将在贝利项目中为三家反应堆技术开发商提供总计39/*万美元,帮助开展移动式微堆原型堆的工程设计工作*两年之后,国防部将选择一种设计,启动原型堆建设*获得资助的三家开发商分别是西屋公司, BWX技术公司和X能源公司。
西屋宣布,将利用国防部资金推进固体堆芯热管冷却堆(埃文西”(eVinci)的商业化*BWX技术和X能源均没有公开宣布国防部资助下的微堆设计*为锂金属,只有转化成氘化锂-6后才可用于制造部件.退役部件含有许多杂质,必须先经过纯化,去除杂质后才可再利用*为制造新的氘化锂-6部件,美国2"13年之前采用库存材料和回收退役部件,2"13年改为仅回收利用退役部件,2"19年又恢复利用库存材料*美国先后采取并正在研发多种工艺,对库存材料/退役部件进行加工*第一种是针对退役部件的锂化学纯化和转化工艺,分为*个步骤-一是将退役锂部件在盐酸中溶解.二是经过蒸发结晶,电解还原等处理获得锂金属.三是通过氘化反应将锂金属转化成氘化锂.四是粉碎研磨.五是加工成型,制成核武器部件*第二种是针对库存的锂转化工艺,分为4个步骤-一是对氯化锂进行电解还原处理,生成锂金属.二是经过氘化反应,将锂金属转化成氘化锂.三是粉碎研磨.四是加工成型,制成核武器部件*由于空气处理系统中使用的干燥剂产生腐蚀性液体和气体,上述两种工艺2"13年停用*第三种是针对退役部件的直接材料制造工艺,即退役部件经打磨擦拭,去除表面杂质,然2!结语为了加速推进先进反应堆技术的商业化,在未来的全球市场竞争中占据领先地位,美国能源部启动了先进反应堆示范计划,准备在未来*至/年内建成2座示范堆,并大力推进创新型先进反应堆的研发*目前美国企业正在研发的先进反应堆设计有超过2"种,首座先进反应堆电厂有望在2"2/年建成投运*!中核战略规划研究总院%伍浩松%戴%定#29停止锂化学纯化和转化,采用直接材料制造工艺使用新的纯化工艺图+%锂部件制造流程图和时间轴后粉碎研磨'再加工成型'制成核武器部件*该工艺于!"+!年启用'回收利用率低'打磨擦拭过程中产生的高达*"6的锂化合物粉末无法再利用*虽然该工艺能够满足当前的生产要求'但美国认为无法满足未来预期需求'为此开始重新启用锂转化工艺'计划!"!"财年全面恢复*第四种是美国正在研发的新型锂纯化工艺'目标是提高安全性和纯化效率*-!开展锂工艺技术改造!"+2财年'美国设立(锂保障)专项计划'拨款!2+1万美元'!"!"财年拨款!33"万美元'!"!+财年改名为(锂现代化)计划'申请,21"万美元'同比增长,$436*经费增长的主要原因是需要加工更多的锂材料'以支持B61D2核弹研发计划以及电解池的全面投运*(锂现代化)计划为了保障武器所需的锂材料和部件供应'实施工艺改造和技术开发'主要活动包括-#+$回收和保障氘化锂材料*如前所述'美国目前利用两种工艺生产氘化锂材料'主要利用直接材料制造工艺*该工艺对退役部件的质量要求较高'约有+*6的退役部件不适用*为保障该工艺所需的退役部件数量'美国将对更多部件进行认证*#2$重建将氯化锂转化为氘化锂的转化能,"力*美国现有大量氯化锂和锂金属库存*为了将其转化为可用于武器部件的氘化锂'该计划拨款支持电解池和氢化反应器的运行和维护'在!"!"财年全面恢复锂转化工作*#,$拨款支持辅助设施建设'保障生产能力*(锂现代化)计划支持对现有设施的维修,升级改造和关键设备更新,维持9204-2号楼的锂相关工作'直到新的锂加工设施建成*#4$研发和部署锂纯化和生产技术,支持新的锂加工设施*美国正在研发更加安全有效的锂纯化和生产工艺,包括四种新的锂纯化工艺,氘气捕获和回收工艺,锂粉末回收工艺,新的自动锂电解池等,以满足近期以及新的锂加工设施对新工艺的需求*2020财年,美国能源部按计划交付了锂材料,并更新和验证了锂供需模型.完成了9204-2号楼的安全和维修工作.重新启动锂材料转化工艺设备,例如电解池和氢化反应器.完成锂纯化和生产技术的技术准备评估报告.完成锂均质化技术准备评估报告,达到技术成熟度*级#技术成熟度达到/级,具备工业应用条件$.完成锂热分解和蒸馏技术准备评估报告,达到技术成熟度*级*202+财年,美国能源部计划继续维持锂材料供应,维护锂供需模型.完善并使用新的锂加工工艺,以替代目前的技术.继续研发锂转化和纯化技术,重建这两种能力.维护和调整目前的运行设备,降低单点故障的风险*1!新的锂加工设施美国目前使用丫-12场址9204-2号楼加工锂部件*该设施始建于+94,年,最初用于铀部件生产,+9*4年转用于锂加工,上世纪30年代末至90年代初对大部分设备进行替换或升级*随着时间推移,建筑结构和工艺设备不断老化,特别是用于回收锂-$的工艺产生大量腐蚀性液体和气体,导致房屋建筑腐蚀严重*此外,该设施过于庞大,大幅超过使用寿命,运营成本高昂,存在许多运营问题,无法满足当前的任务要求*为实现未来氘化锂-$的长期可靠供应,替代现有9204-2号楼老旧设施,20+*年美国批准新建锂加工设施的任务需求*新设施拟建在Y-12场址东侧正在拆除的生物综合设施,建筑面积约+42万平方米,包括锂加工区,运输和接收区,存储区以及技术和管理支持区*在新设施开工之前,需要拆除旧的建筑物,修复受污染的环境*届时,新设施将按照现在的标准进行锂纯化和加工工作,拥有更加灵活的响应能力*20+9年美国完成该设施的概念设计,原计划2022财年开工建造,202/财年完成建设,20,0财年开始运行*由于对该设施的需求有变,目前计划2024财年开工建造,20,+财年完成建设,投运时间未知*此外,建设费用也进一步增加,从20+9财年估计的/42亿美元,增加到2020财年估计的9.55亿〜16.4*亿美元,主要原因是该设施建筑面积从9290平方米增加到1.2万平方米,以及工艺设备要求细化和项目风险的进一步明确*2!结语自2013年开始,美国采取一系列措施,设立(锂现代化)专项计划,研发新的锂加工工艺,加快新的锂加工设施建设,大力推进核武器氘化锂-6热核部件生产*这是特朗普政府推进核力量建设的一项重要举措*为确保我国核力量的长期有效性,也应确保锂材料的长期可靠供应.加快发展先进的工艺技术,积极更新改造加工设施.保持先进,足够的锂生产加工能力* !中核战略规划研究总院%高寒雨%郭慧芳仇若萌%赵%畅#,1。
转化法制备六氟磷酸锂
转化法制备六氟磷酸锂李宣丽;彭琴;付豪;王辛龙;杨林;张志业【摘要】采用平衡法测定了-20~20℃下,六氟磷酸钾、氯化锂和氯化钾在乙腈中的溶解度,并以溶解度数据为基础,提出了转化法制备六氟磷酸锂的新工艺.以乙腈为溶剂,六氟磷酸钾和氯化锂为原料,经转化反应、浓缩结晶纯化分离后得到样品.借助于红外光谱法、X射线衍射分析,并与市售六氟磷酸锂产品比对,确认制备产品为六氟磷酸锂,其纯度为99.93%,w(氯离子)=2×10-6、碳酸二甲酯(DMC)不溶物质量分数为0.06%,优于商用六氟磷酸锂(纯度为99.90%),达到HG/T 4066-2008《六氟磷酸锂和六氟磷酸锂电解液》要求,此方法有望替代AHF溶解法,作为制备六氟磷酸锂的工艺路线.【期刊名称】《无机盐工业》【年(卷),期】2014(046)002【总页数】3页(P41-43)【关键词】溶解度;六氟磷酸锂;转化反应【作者】李宣丽;彭琴;付豪;王辛龙;杨林;张志业【作者单位】四川大学化学工程学院,四川成都610065;四川大学化学工程学院,四川成都610065;四川大学化学工程学院,四川成都610065;四川大学化学工程学院,四川成都610065;四川大学化学工程学院,四川成都610065;四川大学化学工程学院,四川成都610065【正文语种】中文【中图分类】TQ131.11目前,六氟磷酸锂(LiPF6)是商业锂离子电池中使用最广泛的锂盐之一,它的合成难度较高,直到1996年才由日本森田化学工业公司实现工业化。
随着便携式电子产品、电动汽车和电动自行车等行业对锂电池的需求量急剧增大,预计2015年全球六氟磷酸锂需求量将达到 10000 t/a[1]。
目前,全球六氟磷酸锂市场占有率前三名均为日本企业(关东电化学工业、Stella Chemifa、森田化学工业),自从2010年多氟多、九九久等公司实现自主制备六氟磷酸锂以来,中国各企业逐渐打破了电解质依赖进口的局面,并且在与日本公司竞争的过程中,中国企业自身的优势日趋突显。
氯化锂转化
毕氏酵母氯化锂转化法试剂1M LiCl <用去离子蒸馏水配制,0.22um滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释>50% PEG3350 <Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制,0.45um滤膜过滤除菌,用较紧的盖子的瓶子分装>(氯化锂转化法只能PEG3350,不能用PEG8000)2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA)-20℃保存注:醋酸锂对毕氏酵母无效,对酿酒酵母有效,仅氯化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用。
感受态毕氏酵母的制备1. 接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中,30℃摇菌过夜(约24~28h)培养到OD值为0.8~1.0(约108 Cells/ml);培养基里有流沙样的菌体在流动2. 收获细胞,用25ml无菌水洗涤一次,室温下1500g离心10min;3. 重悬细胞于1ml 100mM LiCl溶液中,将悬液转入1.5ml离心管;4. 离心机最大速度离心15秒沉淀菌体,重悬菌体于400ul 100mM LiCl溶液中;5. 按50ul/管分装,立即进行转化;注:不要将感受态酵母菌冰浴;毕氏酵母的转化1. 煮沸1ml鲑鱼精DNA 5min,迅速冰浴以制备单链担体DNA;鲑鱼精DNA主要是防止目的基因的降解,协助目的基因的转化2. 将感受态酵母菌离心,以Tips去除残余的LiCl溶液;3. 对于每一个转化,按以下顺序加入:50% PEG3350 240ul1M LiCl 36ul2mg/ml 单链Salmon sperm DNA 25ul5~10ug/50ul H2O 质粒DNA 50ul4. 剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀(约1min);5. 30℃水浴孵育30min;6. 42℃水浴热休克20~25min;7. 6000~8000rpm离心收集酵母菌体;8. 重悬酵母于1ml YPD培养基,30℃摇床孵育;9. 1~4h后,取25~100ul菌液铺选择性培养基平板,于30℃培养2~3天鉴定;毕氏酵母PEG1000转化法试剂缓冲液A:1.0M Sorbitol,10mM Bicine,pH8.35(sigma),3%(v/v)ethylene glycol 缓冲液B:40%(w/v)PEG1000(sigma),0.2M Bicine,pH8.35缓冲液C:0.15M NaCl,10mM Bicine,pH8.35未污染的新鲜、试剂级DMSO,-70℃保存注:1. 缓冲液A、B、C均用滤膜过滤,-20℃保存;2. 将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处(即使在冰上解冻的待转化细胞,其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降;如进行多样品的转化,建议按6样品/组进行);待转化毕氏酵母的制备1. 接种环接种Pachia pastoris于YPD平板,30℃培养2d;2. 挑取单克隆酵母菌株于10mlYPD培养基中,30℃振荡培养过夜;3. 取步骤2中小量菌液接种到100mlYPD培养基中振荡培养,待其OD值从0.1升到0.5~0.8;4. 室温下3000g离心收集酵母菌体,50ml缓冲液A洗涤一次;5. 重悬菌体于4ml缓冲液A中,按0.2ml/管分装于1.5ml的离心管中,每管加入11ulDMSO,混合后迅速于液氮中冷冻,6. -70℃保存毕氏酵母的转化1. 将约50ug线性化质粒DNA溶于20ul TE或水中,直接加于冻结的酵母细胞中;加入担体DNA(40ug变性超声线性化鲑鱼精DNA)以获得最大转化率;2. 37℃水浴孵育5min,中间混合样品1~2次;3. 取出离心管,加入1.5ml缓冲液B,彻底混匀;4. 30℃水浴孵育1h;5. 室温下2000g离心10min,去除上清液,菌体沉淀重悬于1.5ml缓冲液C中;6. 离心样品,去除上清液,轻微操作将样品重悬于0.2ml缓冲液C中;7. 将所有转化液铺于选择性平板,于30℃孵育3~4天后,鉴定;毕赤酵母转化方法最常用的是电转化法和原生质体法,其中电转化法最为方便,转化效率最高,最容易产生多拷贝整合。
浅谈绿色试剂氯化锂在制药工艺中的应用
浅谈绿色试剂氯化锂在制药工艺中的应用*碱金属中的锂、钠、钾作为地球高丰度元素,广泛以氯化锂、氯化钠、氯化钾的形式存在于盐湖、海洋中,对生物体无毒,且环境友好。
水溶性的氯化锂价格低廉,可以转化为难溶的碳酸锂,易于分离转换与循环利用。
锂与钠、钾虽然同属于第一主族元素,但由于其结构的特殊性,凸显出特别的化学性质。
3号元素锂离子的半径为0.76?(钠离子半径为1.02?,钾离子半径为1.33?),与钠离子、钾离子相比,单电子层锂离子的半径过小,因此锂的化合物表现出不同于钠、钾化合物的共价性,以及锂离子对富电子非金属原子的亲和性。
尤其是锂离子表现出的亲氧性受到了重点关注。
这些特异的化学性质,使这个碱金属在有机药物合成与制药工艺研究中具有特殊的作用。
原子经济、试剂经济与反应步骤经济是绿色化学与清洁制药工程的三个基本理念。
笔者在长期的制药工艺研究过程中发现,氯化锂就是一个碳零排放、廉价、可回收循环使用的绿色试剂,它的合理使用,可以大大促进药物合成反应,简化反应步骤,最终实现药物合成的最佳成本效益。
因此,及时将绿色试剂氯化锂在现代药物合成上的最新成果引入制药工艺学的教学中,可以让学生感受到锂元素的美好,及早接受绿色化学的熏陶,了解绿色化学在制药工艺中的具体运用,体会到制药工艺之美与科学之美。
以下是我们在制药工艺学本科与研究生教学中所引入的氯化锂促进药物合成的案例。
这些案例来自于我们自己的科研实践和同学们的研究文献,生动展现了绿色制药工艺对药物制造过程的重大影响和显著的社会与经济效益。
一、氯化锂代替有机锂试剂六甲基二硅胺基锂在合成利莫那班中的应用5-(4-氯苯基)-1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酸乙酯是新型减肥药物利莫那班(图1A2)合成的关键中间体。
在最初原研公司(法国赛诺菲-安万特公司)的报道中,合成路线使用昂贵的、空气湿度敏感、且产生大量废物的有机锂试剂,六甲基二硅胺基锂(LiHMDS)作为缩合试剂,来介导对氯苯丙酮与草酸二乙酯的Claisen缩合。
毕氏酵母(Pichia_pastoris)感受态细胞制备及转化 (1)
毕氏酵母(Pichia pastoris)感受态细胞制备及转化1、毕氏酵母氯化锂转化法(1)试剂1M LiCl(用去离子蒸馏水配制,滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释)50% PEG3350(Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制,滤膜过滤除菌,用较紧的盖子的瓶子分装)2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA)-20℃保存注:醋酸锂对毕氏酵母无效,仅氯化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用;(2)感受态毕氏酵母的制备接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中,30℃摇菌过夜(约24~28h)培养到OD 值为0.8~1.0(约108 Cells/ml);收获细胞,用25ml无菌水洗涤一次,室温下1500g离心10min;重悬细胞于1ml 100mM LiCl溶液中,将悬液转入1.5ml离心管;离心机最大速度离心15秒沉淀菌体,重悬菌体于400ul 100mM LiCl溶液中;按50ul/管分装,立即进行转化;注:不要将感受态酵母菌冰浴;(3)毕氏酵母的转化煮沸1ml鲑鱼精DNA 5min,迅速冰浴以制备单链担体DNA;将感受态酵母菌离心,以Tips去除残余的LiCl溶液;对于每一个转化,按以下顺序加入:50% PEG3350 240ul1M LiCl 36ul2mg/ml 单链Salmon sperm DNA 25ul5~10ug/50ul H2O 质粒DNA 50ul剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀(约1min);30℃水浴孵育30min;42℃水浴热休克20~25min;6000~8000rpm离心收集酵母菌体;重悬酵母于1ml YPD培养基,30℃摇床孵育;1~4h后,取25~100ul菌液铺选择性培养基平板,于30℃培养2~3天鉴定;2、毕氏酵母PEG1000转化法(1)试剂缓冲液A:1.0M Sorbitol,10mM Bicine,pH8.35(sigma),3%(v/v)ethylene glycol 缓冲液B:40%(w/v)PEG1000(sigma),0.2M Bicine,pH8.35缓冲液C:0.15M NaCl,10mM Bicine,pH8.35未污染的新鲜、试剂级DMSO,-70℃保存注:缓冲液A、B、C均用滤膜过滤,-20℃保存;将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处(即使在冰上解冻的待转化细胞,其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降;如进行多样品的转化,建议按6样品/组进行);(2)待转化毕氏酵母的制备接种环接种Pachia pastoris于YPD平板,30℃培养2d;挑取单克隆酵母菌株于10mlYPD培养基中,30℃振荡培养过夜;取步骤2中小量菌液接种到100mlYPD培养基中振荡培养,待其OD值从0.1升到0.5~0.8;室温下3000g离心收集酵母菌体,50ml缓冲液A洗涤一次;重悬菌体于4ml缓冲液A中,按0.2ml/管分装于1.5ml的离心管中,每管加入11ulDMSO,混合后迅速于液氮中冷冻,-70℃保存(3)毕氏酵母的转化将约50ug线性化质粒DNA溶于20ul TE或水中,直接加于冻结的酵母细胞中;加入担体DNA(40ug变性超声线性化鲑鱼精DNA)以获得最大转化率;37℃水浴孵育5min,中间混合样品1~2次;取出离心管,加入1.5ml缓冲液B,彻底混匀;30℃水浴孵育1h;室温下2000g离心10min,去除上清液,菌体沉淀重悬于1.5ml缓冲液C中;离心样品,去除上清液,轻微操作将样品重悬于0.2ml缓冲液C中;将所有转化液铺于选择性平板,于30℃孵育3~4天后,鉴定;3、毕氏酵母电转化法(1)E.coli TOP10F’感受态细胞的制备取10ul TOP10F’菌液,接种于200ml LB液体培养基中活化培养,37℃,200 rpm,16~18小时。
利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的方法
利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的方法在当前氢能源兴起的趋势下,氢氧化锂作为氢能源电池的重要原料,也受到了广泛的关注。
而利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂,成为了当前研究的热点之一。
本文将对这一方法进行深度和广度兼具的评估,以便于读者更深入地了解这一技术。
一、利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的方法氢氧化锂是氢能源电池的关键原料之一,其制备方法多种多样。
近年来,利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的方法备受研究者的关注。
这一方法相比于传统的制备方法具有更高的效率和更低的成本,在提高氢氧化锂的制备工艺中起到了非常重要的作用。
通过将氯化锂等离子体溶液进行电解,可以将氯化锂转化为氢氧化锂,而且该方法还可以大大减少对环境的污染,非常符合现代绿色制备的发展趋势。
二、利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的优势与其他制备方法相比,利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的方法具有明显的优势。
这一方法的制备工艺简单,操作便捷,不需要大量的辅助设备和化学试剂,因此成本较低。
通过该方法制备的氢氧化锂纯度高,质量优良,能够满足电池级氢氧化锂的要求。
另外,从环境保护的角度来看,该方法最大程度地避免了对环境的污染,是一种绿色环保的制备方法。
利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的方法在实际应用中具有广阔的发展前景。
三、对利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的个人观点和理解个人认为,利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的方法具有很大的潜力。
在当前能源环境问题日益严峻的情况下,氢能源作为一种清洁能源备受关注。
而氢氧化锂作为氢能源电池的重要原料,其制备方法的研究具有重要的意义。
而利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的方法,不仅能够提高制备效率,降低成本,还能够减少对环境的影响,是一种非常有前景的研究方向。
我对这一方法的未来发展充满期待。
四、总结与回顾通过本文的介绍,我们对利用氯化锂直接电解制备电池级氢氧化锂的方法有了更深入的了解。
氯化锂和氧化锂的换算关系(一)
氯化锂和氧化锂的换算关系(一)氯化锂和氧化锂的换算关系1. 换算关系概述•氯化锂(LiCl)和氧化锂(Li2O)是常见的锂化合物,在锂电池和其他应用领域中有重要的作用。
•换算关系是指根据一定的化学计算方法,将氯化锂的质量或量转化为对应的氧化锂的质量或量,或者反之。
2. 原子量的影响•换算关系的基础是不同化合物中锂的原子量不同。
•氯化锂(LiCl)中的锂原子量为 g/mol,氧化锂(Li2O)中的锂原子量为 g/mol * 2 = g/mol。
•由此可见,氯化锂中每个锂原子的质量为 g/mol,而氧化锂中每个锂原子的质量为 g/mol。
3. 求解换算关系的方法•换算关系可以通过以下两种方法求解:–质量比例法:根据化学方程式中的反应物比例计算不同化合物之间的质量换算关系。
例如,对于化学方程式LiCl + O → Li2O + Cl2,氯化锂和氧化锂的质量比例为1:1,因此可以直接换算。
–摩尔比例法:根据化学方程式中的反应物与生成物的摩尔比例计算不同化合物之间的量换算关系。
例如,对于化学方程式2LiCl + O2 → Li2O + Cl2,氯化锂和氧化锂的摩尔比例为2:1,因此需要通过摩尔计算转化换算。
•换算关系的具体计算方法可以根据实际情况灵活运用,例如根据具体的化学方程式和所需求解的量单位不同。
4. 应用举例•氯化锂和氧化锂的换算关系在锂电池领域中常常被使用。
•例如,在锂电池制造过程中,需要根据氯化锂的质量或量来确定所需的氧化锂的质量或量,以保证正常的电池性能和功率输出。
•运用换算关系,可以计算出所需的氧化锂量,并据此进行材料配比和工艺控制,以确保锂电池的可靠性和稳定性。
5. 总结•氯化锂和氧化锂之间存在着换算关系,可通过质量比例法或摩尔比例法进行计算。
•换算关系的应用在锂电池制造和其他领域具有重要意义,有助于准确控制化学反应和材料配比,保障产品质量和性能稳定。
•在实际应用中,根据具体的化学方程式和所需求解的量单位,可以选择合适的换算方法。
氯化锂和氧化锂的换算关系
氯化锂和氧化锂的换算关系1. 引言氯化锂和氧化锂是两种常见的锂盐,它们在工业生产和科学研究中有广泛的应用。
在一些情况下,我们需要将氯化锂和氧化锂之间进行换算,以便于实际应用。
本文将详细介绍氯化锂和氧化锂的换算关系。
2. 氯化锂和氧化锂的基本概念2.1 氯化锂(LiCl)氯化锂是一种无机盐,由一价阳离子锂离子(Li+)和一价阴离子氯离子(Cl-)组成。
它是无色晶体或白色颗粒状固体,在水中能够溶解。
2.2 氧化锂(Li2O)氧化锂是一种碱性金属氧化物,由两个一价阳离子锂离子(Li+)和一个二价阴离子氧离子(O2-)组成。
它是白色固体,在高温下可以与水反应生成碱性溶液。
3. 换算关系3.1 原子量的换算根据化学计量学原理,氯化锂中的锂离子和氧化锂中的锂离子的原子量是相同的。
锂的原子量为6.941 g/mol。
3.2 摩尔质量的换算根据摩尔质量的定义,摩尔质量等于物质的质量除以物质的摩尔数。
对于氯化锂和氧化锂来说,摩尔质量可以通过原子量换算得到。
•氯化锂(LiCl)的摩尔质量 = 锂原子量 + 氯原子量 = 6.941 g/mol +35.453 g/mol = 42.394 g/mol•氧化锂(Li2O)的摩尔质量 = 锂原子量× 2 + 氧原子量 = 6.941 g/mol × 2 + 16.00 g/mol = 29.882 g/mol3.3 质量换算根据摩尔质量和物质的质量之间的关系,可以进行氯化锂和氧化锂之间的质量换算。
•已知氯化锂(LiCl)的质量,想要换算成氧化锂(Li2O)时,可以使用以下公式:质量(g)= 摩尔数× 摩尔质量所以,氧化锂的质量 = 氯化锂的质量× (摩尔质量(Li2O) / 摩尔质量(LiCl))•已知氧化锂(Li2O)的质量,想要换算成氯化锂(LiCl)时,可以使用以下公式:质量(g)= 摩尔数× 摩尔质量所以,氯化锂的质量 = 氧化锂的质量× (摩尔质量(LiCl) / 摩尔质量(Li2O))4. 应用举例4.1 例子1:将10 g 氯化锂换算成氧化锂的质量根据上述公式,可以进行计算:氧化锂的质量= 10 g × (摩尔质量(Li2O) / 摩尔质量(LiCl)) = 10 g × (29.882 g/mol / 42.394 g/mol) ≈ 7.04 g所以,将10 g 氯化锂换算成氧化锂的质量约为7.04 g。
氯化锂热工参数-概述说明以及解释
氯化锂热工参数-概述说明以及解释1.引言1.1 概述在热力学系统中,氯化锂是一种常用的吸收剂,被广泛应用于各种制冷、空调系统中。
氯化锂的热工参数是描述其在热力学过程中的性能表现的重要指标。
研究氯化锂的热工参数可以帮助我们更好地理解其在吸收式制冷系统中的作用机理,从而优化系统设计和运行。
本文将重点探讨氯化锂的热工参数,分析其重要性以及影响因素,旨在为相关领域的研究提供参考和借鉴。
1.2 文章结构文章结构部分用于介绍本文的组织结构和内容安排。
在这部分内容中,可以简要描述本文的整体架构和各部分的主题内容,以帮助读者更好地理解文章的逻辑框架。
以下是文章结构部分的内容示例:文章结构本文分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分,将介绍氯化锂热工参数的背景和意义,以及本文所要讨论的主题。
在正文部分,将详细探讨氯化锂的热工参数、其重要性分析以及影响因素,以便读者深入了解该主题。
最后,在结论部分将总结热工参数的重要性,并探讨未来研究方向,最终得出结论。
通过这样的简要介绍,读者可以明确了解文章的逻辑结构,有助于他们更好地理解和阅读全文内容。
1.3 目的:本文的主要目的是对氯化锂的热工参数进行深入分析和探讨。
通过研究氯化锂的热工参数,可以更好地了解其在工业生产和应用中的特性和性能。
同时,通过对氯化锂热工参数的研究,可以为提高氯化锂的生产效率、优化工艺和节能减排提供重要依据。
通过探讨氯化锂热工参数的重要性和影响因素,可以为未来的研究提供参考,促进氯化锂在各个领域的应用和发展。
因此,本文旨在系统地介绍氯化锂的热工参数,分析其重要性,并为未来的研究提供方向和展望。
2.正文2.1 氯化锂的热工参数氯化锂是一种重要的吸收剂,在吸收式制冷和热泵系统中被广泛应用。
其热工参数包括氯化锂的熔点、沸点、比热容、热导率等。
这些参数决定了氯化锂在吸热和放热过程中的性能表现。
首先,氯化锂的熔点是指在一定压力下从固态到液态的转变温度。
熔点的准确掌握对于吸收式制冷系统的稳定运行至关重要。
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xx酵母氯化锂转化法
试剂
1M LiCl <用去离子蒸馏水配制,
0.22um滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释>
50% PEG3350 <Sigma P3640用去离子蒸馏水配制,
0.45um滤膜过滤除菌,用较紧的盖子的瓶子分装>(氯化锂转化法只能PEG3350,不能用PEG8000)2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl, pH
8.0,
1.0mM EDTA)-20℃保存注:
醋酸锂对毕氏酵母无效,对酿酒酵母有效,仅氯化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用。
感受态xx酵母的制备
1.接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中,30℃摇菌过夜(约24~28h)培养到OD值为
0.8~
1.0(约108 Cells/ml);培养基里有流沙样的菌体在流动
2.收获细胞,用25ml无菌水洗涤一次,室温下1500g离心10min;
3.重悬细胞于1ml 100mM LiCl溶液中,将悬液转入
1.5ml离心管;
4.离心机最大速度离心15秒沉淀菌体,重悬菌体于400ul 100mM LiCl溶液中;
5.按50ul/管分装,立即进行转化;
注:
不要将感受态酵母菌冰浴;
xx酵母的转化
1.煮沸1ml鲑鱼精DNA 5min,迅速冰浴以制备单链担体DNA;鲑鱼精DNA 主要是防止目的基因的降解,协助目的基因的转化
2.将感受态酵母菌离心,以Tips去除残余的LiCl溶液;
3.对于每一个转化,按以下顺序加入:
50% PEGul
1M LiCl36ul
2mg/ml单链Salmon sperm DNA25ul
5~10ug/50ul H2O质粒DNA50ul
4.剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀(约1min);
5. 30℃水浴孵育30min;
6. 42℃水浴热休克20~25min;
7. 6000~8000rpm离心收集酵母菌体;
8.重悬酵母于1ml YPD培养基,30℃摇床孵育;
9. 1~4h后,取25~100ul菌液铺选择性培养基平板,于30℃培养2~3天鉴定;毕氏酵母PEG1000转化法
试剂
缓冲液A:
1.0M Sorbitol,10mM Bicine,pH
8.35(sigma),3%(v/v)ethylene glycol缓冲液B:40%(w/v)PEG1000(sigma),
0.2M Bicine,pH
8.35
缓冲液C:
0.15M NaCl,10mM Bicine,pH
8.35
未污染的新鲜、试剂级DMSO,-70℃保存
注:
1.缓冲液
A、B、C均用滤膜过滤,-20℃保存;
2.将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处(即使在冰上解冻的待转化细胞,其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降;如进行多样品的转化,建议按6样品/组进行);
待转化xx酵母的制备
1.接种环接种Pachia pastoris于YPD平板,30℃培养2d;
2.挑取单克隆酵母菌株于10mlYPD培养基中,30℃振荡培养过夜;
3.取步骤2中小量菌液接种到100mlYPD培养基中振荡培养,待其OD值从
0.1升到
0.5~
0.8;
4.室温下3000g离心收集酵母菌体,50ml缓冲液A洗涤一次;
5.重悬菌体于4ml缓冲液Axx,按
0.2ml/管分装于
1.5ml的离心管中,每管加入11ulDMSO,混合后迅速于液氮中冷冻,
6. -70℃保存
xx酵母的转化
1.将约50ug线性化质粒DNA溶于20ul TE或水中,直接加于冻结的酵母细胞中;加入担体DNA(40ug变性超声线性化鲑鱼精DNA)以获得最大转化率;
2. 37℃水浴孵育5min,中间混合样品1~2次;
3.取出离心管,加入
1.5ml缓冲液B,彻底混匀;
4. 30℃水浴孵育1h;
5.室温下2000g离心10min,去除上清液,菌体沉淀重悬于
1.5ml缓冲液Cxx;
6.离心样品,去除上清液,轻微操作将样品重悬于
0.2ml缓冲液Cxx;
7.将所有转化液铺于选择性平板,于30℃孵育3~4天后,鉴定;
毕赤酵母转化方法最常用的是电转化法和原生质体法,其中电转化法最为方便,转化效率最高,最容易产生多拷贝整合。
由于原生质体法必须首先制备去除细胞壁的原生质体细胞以利于DNA进入,然后细胞再生细胞壁,产生转化体,而ZeocinR抑制细胞壁的形成,导致不能产生转化体。
因此利用ZeocinR作为选择标记的载体如p PICZ系列,不能使用原生质体法进行转化。