组织切片制作步骤
组织病理切片的制作流程(精品)
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 组织病理切片的制作流程(精品)组织病理切片的制作流程 1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1) 材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2) 组织块的大小：所取组织块较理想的体积为 2. 0cm2. 0cm0. 3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取 0. 1～0. 2cm 即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取 0. 3 ～0. 5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3) 勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
1 / 17夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4) 规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5) 选好组织块的切面: 根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6) 保持材料的清洁: 组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7) 保持组织的原有形态: 新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
组织病理切片制作流程(完整版)
组织病理切片制作流程(完整版)组织病理切片是一种常规病理学检查方法，用来对病理组织进行形态学观察和病理诊断。
制作一张优质的组织病理切片需要严格按照一定的流程进行。
组织标本采集组织标本的采集是组织病理学检查的第一步。
组织标本的质量直接影响到切片的质量。
因此，采集前需要确保标本来源正确，并与患者信息相符。
对于手术标本，需要注意保护血管、神经、肌肉等结构，避免对组织结构造成不必要的损害。
对于活检标本，需要选择有代表性的组织，避免损伤重要结构和血管。
组织处理组织标本采集后，需要进行组织处理。
对于手术标本，可以直接收取。
对于活检标本，需要迅速固定，避免组织发生变性和坏死。
常用的固定剂包括10%中性缓冲福尔马林、乙醇、甲醛等，选择固定剂需要根据样本的性质和检测需要来确定。
样本包裹固定后的组织标本需要进行包裹以便于切片操作。
包裹材料通常选择的是聚苯乙烯、增韧剂聚苯乙烯等塑料材料，包裹材料必须能够完全包裹组织标本，并保证固定。
切片制备组织标本包裹后，需要进行切片制备。
切片机是用于切割病理标本的设备，其切割面的厚度一般在4-6μm之间。
在切片制备中，需要根据标本要求来选择显微镜下的切面。
切片后，标本必须尽快贴在玻片上进行染色。
组织染色组织染色是组织病理学检测的重要环节。
目前常用的染色包括常规的苏木素-伊红染色和免疫组化染色等。
苏木素-伊红染色是一种常规染色方法，可以显示出组织的基本结构和染色体。
免疫组化染色可以显示出特定的蛋白质和胚间充质细胞等。
组织标签和包装染色后的组织切片需要进行标签和包装。
标签需要包含姓名、性别、年龄和检测日期等基本信息。
组织切片还需要包装防止刮损和振动。
结果解释组织病理切片制备完成后，需要进行结果解释。
结果解释需要根据不同的病理学检测目的进行，一般是通过显微镜进行观察和诊断。
有时候，还需要通过综合分析临床病史和症状等信息来确定诊断结论。
总结组织病理切片制备流程需要严格按照一定的步骤来进行，包括组织标本采集、组织处理、样本包裹、切片制备、组织染色、组织标签和包装以及结果解释。
组织切片制作
一、取 材 取材应注意事项： 取材应注意事项：
1 切取组织应根据需要观察的部位进行选择。 切取组织应根据需要观察的部位进行选择。 所取组织应包括脏器或组织的重要结构或全层， 所取组织应包括脏器或组织的重要结构或全层，同时考虑 好切面方向。 好切面方向。 病理组织除切取病变部位外， 病理组织除切取病变部位外，还要切取病变和正常组织交 界区域，以利观察分析。 界区域，以利观察分析。 2 切取的组织必须新鲜。 切取的组织必须新鲜。 取材后立即投入固定液中，否则组织会收缩变形， 取材后立即投入固定液中，否则组织会收缩变形，发生自 溶现象。 溶现象。
1
固定液的用量 应充足，一般为组织块体积的 倍左右 倍左右。 应充足，一般为组织块体积的10倍左右。
2
固定时间 应根据组织的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、 应根据组织的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、 种类 渗透力的强弱而定 而定。 渗透力的强弱而定。
一般组织， 左右， 如：一般组织，以10％福尔马林固定 ％福尔马林固定24h左右，波音 左右 波音(Bouin)氏固定液 氏固定液 12至24h，卡诺氏 固定液1h内 至 ，卡诺氏(Carnoy)固定液 内。 固定液
酒精固定液： 酒精固定液： 无水乙醇（纯酒精） 无水乙醇（纯酒精）85ml（或95ml） （ ） 15ml（或5ml） 蒸馏水 （ ） 优点：有固定兼脱水作用，固定后可直接放入 ％－ ％－95 优点：有固定兼脱水作用，固定后可直接放入85％－ 酒精中脱水。对糖原、 ％酒精中脱水。对糖原、纤维蛋白和弹性纤维等固定效 果好。 果好。 缺点：但固定速度较慢，易使组织变脆。一般先用 ％ 缺点：但固定速度较慢，易使组织变脆。一般先用85％ 酒精固定数小时再放入95％酒精继续固定。 酒精固定数小时再放入 ％酒精继续固定。 除此之外，还有重铬酸钾、苦味酸、升汞、醋酸、 除此之外，还有重铬酸钾、苦味酸、升汞、醋酸、丙酮 重铬酸钾 等单纯固定液。 等单纯固定液。
组织切片流程
组织切片流程常规石蜡包埋社团切片（常规切片）制备的操作流程及要求㈠社团块依序进行：①水洗，②脱水，③透明，④浸蜡，⑤包埋和⑥切片。
㈡社团切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物，必须专人管理，2m以内不患上有有焰的火，局部环境应有良好的透风和救火设施。
㈢常规切片的手工操作（步骤次序和各步骤的持续时间）1．水洗：用水流冲洗已经固定的社团块30min。
2．脱水（常温下）（1）乙醇－甲醛（AF）液固定60~120min（2）80%乙醇60~120min（3）95%乙醇Ⅰ60~120min（4）95%乙醇Ⅱ60~120min（5）无水乙醇Ⅰ60~120min（6）无水乙醇Ⅱ60~120min（7）无水乙醇Ⅲ60min［注意事项］①未经充分固定的社团不患上进入脱水程序。
②用于脱水的试剂容积应为社团块总体积的5～10倍以上。
③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。
④脱水试剂应及时过滤、更换（500ml乙醇可用于500个社团块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换）。
⑤较大社团块的脱水时间长于较小者，应将两者分隔进行脱水。
⑥社团置于无水乙醇内的时间不宜过长（以免硬化）。
⑦丙酮脱水性能强，会使社团块过缩、硬脆，不宜用以替换无水乙醇。
3．透明（1）二甲苯Ⅰ20min（2）二甲苯Ⅱ20min（3）二甲苯Ⅲ20min［注意事项］①二甲苯的容积应为社团块总体积的5～10倍以上。
②社团块在二甲苯中透明的时间不宜过长（以防社团硬、脆），并依不同品类社团及其大小而异；社团出现棕黄或暗红色透明即可。
③二甲苯应及时过滤、更换。
④社团经二甲苯程度适当处理后不显透明时，常提示该社团的固定或脱水不充分，应查找原因并妥帖处理。
4．浸蜡（1）石蜡Ⅰ（45~50℃）60min（2）石蜡Ⅱ（56~58℃）60min（3）石蜡Ⅲ（56~58℃）60min［注意事项］①熔化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内或水浴中（70℃）进行，不患上用有焰的火加温。
组织切片制作方法
组织切片制作方法
组织切片是制备病理学标本的主要方法之一，以下是其制作步骤：
1. 收集组织样本，并在一定时间内将其放入固定液中进行固定。
2. 将组织样本从水中逐渐转移到酒精中进行脱水。
3. 将样本置于包埋剂中，使其逐渐转移到蜡块中。
4. 用切片机将蜡块切割成极薄的切片，并用染色剂染色，以便在显微镜下进行观察和分析。
5. 将切片封入载玻片中。
此外，为了确保切片的质量，需要注意以下几点：
1. 载玻片应干净无油，如有云雾斑点，则不能使用。
2. 切片制作过程中，应将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上，使蜡块的切面与刀口成平行方向。
刀的倾斜度通常为15℃，转动轮转推进器，调节切片厚度为6μm，切成厚度均匀的切片。
3. 切片贴附后，放在空气中稍晾干，然后进行烤片。
烤片的温度以蜡溶解为准，也可以放置60℃烘箱内烘烤过夜。
血块组织、皮肤组织须及时烤片，但脑组织、脂肪组织待完全晾干后才能进行，这样可防止产生气泡而影响染色。
以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。
组织切片制备技术
组织切片制备技术在生命科学领域中，组织切片制备技术是一项基本且重要的技术，它被用于组织学、解剖学、病理学和神经科学等诸多领域。
组织切片制备技术可以产生高质量的组织切片样本，以便进行研究和分析。
本文将探讨组织切片制备技术的具体步骤和注意事项。
1. 组织处理在进行组织切片制备之前，需要对样本进行处理。
处理的目的是保护组织结构和细胞形态，以便在组织切片过程中得到高质量的切片。
处理的方法包括固定、脱水和浸渍。
2. 组织固定组织固定是组织切片制备技术中的一个重要步骤，目的是停止组织活动并保护组织结构。
固定的方法包括乙醛、甲醇和布氏液等。
3. 组织切片组织切片是组织切片制备技术的核心步骤之一。
合适的切片厚度应该根据需要来决定。
切片的方法包括手工切片和机器切片。
机器切片可通过旋转式、滑动式或挤压式制备。
4. 切片染色切片染色是组织切片制备技术中的关键步骤，可使细胞和组织结构变得更明显。
切片染色的方法主要有荧光染色和显微镜染色。
5. 成像和分析成像和分析是组织切片制备技术的最后一步。
通过显微镜成像和分析，可以观察到细胞和组织结构的形态和分布。
这种方法还可以被用于研究细胞和组织中的基因，蛋白质和其他特定目标。
注意事项：- 操作中要注意安全，佩戴手套和眼镜等防护设备；- 操作环境要保持清洁，防止异物进入；- 操作材料要储存妥善，避免过期或者污染；- 操作流程要规范，避免操作过程中发生错误。
结论：组织切片制备技术是在生命科学领域中非常基本的技术。
制备高质量的组织切片样本是开展组织学、解剖学、病理学和神经科学等领域的基础工作。
研究人员在进行组织切片制备时，必须依据标准的步骤和注意事项，以确保所获得的数据是可靠且具备参考价值的。
组织切片制作过程
组织切片制作过程一、组织切片技术1、取样：样品长度0.5—1cm，切面光滑（最好一刀切）2、样本处理：取样后立即放入Bowin氏固定液中固定（24—48h一般24h）3、组织冲洗：将组织用纱布或包埋盒包住，装入容器中，兑水冲洗过夜，一般为一夜。
4、组织脱水：70%酒精—80%酒精—85%酒精—90%酒精—95%酒精（各50min）无水酒精I—无水酒精II (各40min)5、组织透明：纯酒精（2）：二甲苯（3）（体积比为2:3混合液）（10min）纯酒精（1）：二甲苯（3）（体积比为1:3混合液）（5min）纯二甲苯(2min)6.透明石蜡和包埋：（两个蜡杯，一个1h,一个1—2h）,烘箱温度65—70℃（蜡的熔点为55—60℃）①接着步骤5马上取出样品后放入第一个蜡杯1h后转移到另一个蜡杯中，在第二个蜡杯中放置时间也为1h。
②包埋：a.制作中昌状包埋盒凹b.j将蜡倒入包埋盒中，然后用加热的镊子夹住样品让人包埋盒中（防止气泡）。
③修块：a.将蜡块修整为长方形或正方形，方便切片b.切片、展片、贴片①切片厚度为5—7μm，刀片要新，勿磨损，先用15—20μm厚度将蜡块修平，然后再将厚度调整到5—7μm②展片：温度调为43—44℃，与刀片相接触的面朝下，等到片子完全摊平（无白点）方可捞出。
（注：载玻片必须用盐酸浸泡清洗干净，无灰尘）③烤片：温度为45℃，烘烤时间为10—20分钟④再将玻片放入烘箱中（37—45℃）数小时，片完全贴住即可。
二、HE染色过程（苏木精—伊红染色）1.脱蜡：①二甲苯I 8min ②二甲苯II 5-8min2.洗去二甲苯：③无水酒精I 3min④无水酒精II 3min3.复水：⑤95%酒精5min—90%酒精5min—80%酒精5min—70%酒精5min—60%酒精5min—50%酒精5min—自来水5min—蒸馏水5min4.核染：⑥苏木紫 8min（染成蓝色）5.洗去苏木紫：⑦自来水 8—10min（拿出片子直接在自来水中冲洗）6.盐酸酒精分色（颜色由蓝变红即可）：⑧醇酸30s—1min(洗去其他细胞器染色，核染较深)注：醇酸配制：浓盐酸0.5—1ml，70%—95%酒精100ml7.蓝化：⑨10min—数小时（由红变蓝，一般半小时即可）将染缸放入盛满自来水的脸盆中，打开水龙头，小流速。
安徽高等院校植物细胞及组织切片标本制作步骤
安徽高等院校植物细胞及组织切片标本制作步骤制作植物细胞和组织切片是植物学和生物学研究中常用的实验方法之一、下面是一般的植物细胞和组织切片制作步骤。
1.实验材料准备-植物标本：选择具有代表性的植物标本，新鲜度较高的嫩叶、茎和根部适合制作细胞和组织切片。
-植物细胞和组织固定剂：常用的固定剂有乙醇、乙酸、福尔马林等。
选择适当浓度的固定剂根据样本的特性来确定。
-切片工具：显微刀片、玻璃切片、切片夹和切片盒等。
-切片染色剂：苏木素、伊红等。
2.样本处理-选择适当大小的植物标本，将其放置在固定剂中固定一段时间，常规处理时间为1-24小时，具体时间根据固定剂浓度和标本的特性来确定。
较硬的组织可选择用150-200mL的固定液浸泡2-12小时，较脆弱的组织可缩短固定时间。
-固定后，将样本从固定剂中取出，用纸巾轻轻擦干外表水分。
3.组织松解-对于较厚的植物组织，需要进行松解以使细胞方便切片观察。
通常，可用腐解溶液进行松解。
常用的腐解溶液有酶解液、盐酸和氯化铁等。
将样本浸泡在腐解溶液中，温度和处理时间根据样本的特性而定，通常需要温和的温度（如37°C）并持续一段时间（如30分钟-4小时），直到细胞组织松解。
4.切片制备-用镊子将处理好的样本取出，用切片钳将样本固定在切片夹上。
夹住样本的位置要仔细选择，以尽量保留较好的细胞和组织结构。
-使用显微刀片沿着横切面或纵切面将样本切割成较薄的切片。
刀片的角度和力度要适中，避免切片过厚或者过薄。
厚度通常为10-20微米。
-将切好的样本放在预先准备好的玻璃切片上。
用切片钳将切片夹住，并用切片盒盖上，防止灰尘和水分进入。
5.切片染色-拿起玻璃切片，将其放在染色剂（如苏木素溶液）中浸泡。
染色时间根据样本和染色剂而定，通常需要15-30分钟。
-取出染色剂，用去离子水或蒸馏水冲洗切片，直到水洗液透明。
-将切片用纸巾轻轻吸干水分，然后放在显微镜玻片上。
6.保存和观察-将切片放在带盖玻片上，用透明胶带黏贴边缘以防止切片移动。
组织切片制作步骤
组织切片制作步骤1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为50px×50px×7.5px，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～5px即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～12.5px，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
故取组织块的大小一般为50px×50px×7.5px。
法医病理学组织切片制作
3．苏木素的配方①自然氧化（Ehrlieh）苏木素： 苏木精 2g 铵明矾 3g 无水酒精 100ml 甘油 100ml 蒸馏水 100ml 将上述药品配在一起后装入玻璃瓶中，瓶口罩上数层纱布以防灰尘落入染液，暴露于阳光中或空气中自然氧化（成熟过程），约6周—8周以上，染液配制越久其染色能力越强，可以一次大量配制以备用。
常用脱水剂：溶于水和透明剂的试剂，如酒精、丙酮、正丁醇等。（1）酒精步骤：70％ 80％ 90％ 95％ 100％Ⅰ 100％Ⅱ，一般数小时到12小时，更换一次酒精。 配低浓度酒精时，可用市售95％酒精配制。70％酒精：95％酒精70ml加蒸馏水25ml至95ml；80％酒精：95％酒精80ml加蒸馏水至95ml，依次类推。（2）丙酮 脱水作用与酒精相似，虽其脱水作用比酒精强，但可引起组织块的收缩较，价钱较贵，故不宜用于一般组织脱水，它即有脱水作用又有透明作用，用丙酮固定的材料要小，脱水1～8小时即可。
（三）蜡的种类：1．蜂蜡：是动物体内提取的蜡，颜色微黄故也称为黄蜡，溶点在54℃左右。特点是润滑带有粘性，冬天用量比夏天多。2．石蜡：是由矿物质中提取，质地较疏松，色白。根据蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡。 软蜡：50℃以下的石蜡。硬蜡：溶点在50℃以上的石蜡。两种蜡可以混合在一起使用。石蜡熔点有52℃～54℃，56℃～58℃，58℃～60℃，60℃～62℃。
七、切片工具：切片刀、磨刀机、切片机、水浴锅，干燥箱等；载薄片、手术刀、毛笔、弯镊子、托盘、大平皿（展片使用）、烤片盒、蛋白甘油等。（一）切片机种类：轮转式切片机、滑行式切片机（滑动式）、冰冻切片机、超薄切片机等（电镜用）。（二）构造：由四个基本部分组成：刀台、标本台、旋转轮、控制切片厚度的微动装置（标有 l～25或1～50的数字，每一数字代表一个微米）。根据需要调节厚度，一般采用5μm～7μm。蛋白甘油：用鸡蛋清（不要鸡蛋黄）用玻璃棒充分搅拌后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加数颗麝香草酚。
HE组织切片制备标准操作程序
HE组织切片制备标准操作程序一、Purpose 目的保证病理切片质量，以达到准确的病理诊断。
二、Scope范围石蜡包埋组织切片三、Reagents and instrument试剂，仪器苏木素、伊红、切片机、水浴箱。
四、Process工作流程（一）切片1、将切片刀安装在持刀座上；2、将蜡块固定于支持器上；3.、细心移动刀座或蜡块支持器，使蜡块与刀刃接近，旋紧刀座，观察蜡块面是否与刀座相平，如不平须调节支持器，使蜡块面与刀面平行；4、修块（粗切）：用右手匀速旋转切片机轮，修切蜡块表面至包埋其中的组织块全部切到。
修块粗切片的厚度为15-20微米（注意：对于医嘱再次深切片特别是在原切片中发现了有意义病变而进行的深切片应尽量少修块，以尽量好地获得有关病变的连续性）；5、调节切片厚度调节器（一般为2-4 微米），进行切片。
切出的蜡片应连续成带状，完整无缺，厚度适宜（3-5 微米）、均匀，无刀痕、颤痕、皱褶、开裂、缺损、松解等；6、以专用镊子轻轻夹取完整、无刀痕、厚薄均匀、干净的蜡片，放入漂片机的温水中（40-50℃左右），使切片全面展开；每切完一个蜡块后必须认真清理水面，不得遗留其它病例的组织碎片以免污染。
7、将蜡片附贴于处理过的载玻片上，蜡片应放在载玻片右2/3处的中央，留出载玻片左1/3的位置用于贴附标签；蜡片与载玻片之间无气泡；为防止蜡片滑落，蜡片的一角（远离组织的）可粘在载玻片边缘上；若一片载玻片上捞两片以上的蜡片，必须把蜡片均匀贴附在载玻片上，保持制片的美观。
8、必须立即在置放了蜡片的载玻片一端（待贴标签处），用铅笔准确清楚地标记其相应的病理号（包括次级号），外借白片，需在每张白片上注明对应的病理号。
9、将置放了蜡片的载玻片呈45度斜置片刻；待载玻上的水分流下后，将其插入专用的染色架中，最后置于恒温箱中烘烤（72℃左右，15分钟），然后即可进行染色。
10、切片注意事项（1）切片前蜡块要冷冻，这样容易切片（甲状腺、淋巴结及胃镜等特殊组织，必须控制冰冻时间）。
组织病理切片的制作流程
组织病理切片的制作流程第一篇：组织病理切片的制作流程组织病理切片的制作流程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
组织病理切片的制作过程
组织病理切片的制作过程
1．取材：
器械准备：锋利的手术刀；液氮罐一个或者冰盒；镊子；生理盐水
(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后30min至1h，防止细胞自溶以保证原有的形态学结构，选取胰腺癌导管型腺癌病人高、中、低分化各至少5例（前期未经过放疗、化疗等肿瘤内科专科治疗）。
(2)组织块的大小：所取癌组织/癌旁组织较理想的体积为
(0.3-0.5)cm×(0.3-0.5)m×0.3cm，厚度不大于0.5cm
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 在不影响病理诊断情况下取材，癌旁组织（癌组织旁1-2cm）
(5)保持组织块的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用生理盐水冲洗干净后再放入液氮或者冰盒中。
(6)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
（7）备注好患者的姓名，性别，年龄，籍贯，住院号，ID号，病理类型及分化程度
1。
组织切片的制作步骤
组织切片制作过程：1.固定：10%甲醛溶液内固定24～28h组织块大小为15×15×5mm2.水洗：流水冲洗24h需用到胶皮管、烧杯、纱布组织块放于烧杯中，用纱布将烧杯口封死，在纱布中间部位留出供胶皮管插入的豁口，胶皮管一头接到水源，另一头插入烧杯中。
有水注入后，尽量让组织块不要沉底。
3.脱水：不同浓度的酒精50%——70%——80%——95%——95%——无水酒精——无水酒精30m-1h 2-4h 2-4h 2h 2h 1h 1h其中70%酒精可以长时间保存，并且在脱水过程中随时可返回70%酒精中。
但是返回后，仍需按顺序进行，即80%开始。
4.透明：无水酒精：二甲苯（1：1）——二甲苯30m 30m透明过程中，在二甲苯中时，需注意观察组织块是否已透明，无需按固定时间来计算。
5.浸蜡与包埋：将石蜡融化后置于52℃～60℃烘箱中二甲苯：石蜡（1：1）——石蜡（1）——石蜡（2）——石蜡（3）30min 30min 30min 30min6.切片：按需要厚度一般将切片机设为5-7um厚，厚度视组织块而定。
7.展片：用水浴锅，将温度设为40℃，用毛笔将切好的蜡片从切片机上卷下，放入水浴锅中。
8.粘片：需准备蛋白甘油，蛋白甘油由鸡蛋蛋清和甘油调配而成，比例为1：1。
先将一滴蛋白甘油涂抹在干净的载玻片上，然后用载玻片从水中将展好的蜡片捞起，平放入烘箱内进行烘干，烘干温度为50℃，时间为12～24h。
9.染色：二甲苯（1）——二甲苯（2）——无水酒精（1）——无水酒精（2）——5-10min 5-10min 5min 3-5min95%酒精（1）——95%酒精（2）——80%酒精——70%酒精——50%酒精——2-3min 2-3min 2min 2min 2min蒸馏水——苏木精——自来水洗——蒸馏水——1%盐酸酒精——自来水蓝化2min 5-15min 2min 2min3-5s 15-30min——蒸馏水——50%酒精——70%酒精——80%酒精——伊红——95%酒精(1)2min 2min 2min 2min 1-2min 2-5min——95%酒精（2）——无水酒精（1）——无水酒精（2）——二甲苯（1）2-5min 5min 5min 5min——二甲苯（2）5-10min10.封片：树胶封片，置于35℃～38℃之间烘干。
组织病理切片的制作过程
组织病理切片的制作过程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
组织病理切片制作流程(完整版)
组织病理切片的制作流程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体(外科手术切除标本、活检标本、尸检标本)或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1) 材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
⑵组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm X 2.0cm X 0.3cm,以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1〜0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3〜0.5cm,这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3) 勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4) 规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5) 选好组织块的切面: 根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6) 保持材料的清洁: 组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7) 保持组织的原有形态: 新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1) 小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4〜20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
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如何做出一张合格的组织切片？
一般要先取材→固定→透明→包埋→切片，最后进行染色组化等操作。
本文着重叙述取材以后如何进行包埋和切片。
包埋可分为OCT包埋（冰冻切片）与石蜡包埋。
.冰冻切片对于组织的抗原性保留比较好，但是形态保留比较差，一般用来做原位杂交ISH，免疫荧光IF。
冰冻切片较厚一般厚度8~15μm。
冰冻包埋步骤较为简洁，固定之后，直接用镊子将样品放置到样品托上，挤压OCT完全包裹组织，放入冷冻机待OCT凝固即可。
凝固后就可以直接切片。
如果不能及时切片，用锡箔纸包装好，放入-80℃存放。
.石蜡切片，一般用来做HE染色或者免疫组织化学IHC。
厚度更薄，一般为4um，工艺较为复杂并且制作样本的好坏取决于不同组织的种类和组成，更加依赖制作者的经验，需要在实验过程中不断优化才能得到最佳的实验条件。
下面是石蜡包埋和切片的具体步骤：
一、实验材料
动物组织，4%多聚甲醛（PFA），PBS，ddH2O，二甲苯，梯度乙醇，石蜡，石蜡包埋机。
二、实验步骤
1、取材：针对各组织部位规范化取新鲜组织，并用刀片单向切割成约3-4mm大小组织块，不要超过5mm。
2、固定：将切好的组织块放入4%多聚甲醛（PFA）中固定，以组织块与4%多聚甲醛体积比1：7为宜。
PFA最好现用现配，一般在4度固定24~48h即可，固定时间因组织而异。
冰冻切片可以直接用丙酮固定。
其他固定液比如缓冲福尔马林PBS配的福尔马林含有K+和Na+，PH=7.4。
固定的原理是采用蛋白质凝固剂，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构、位置和除水以外的物质的过程。
固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物、酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构和生活时相仿。
关于固定液的选择可以参考这篇文章[1]。
3、洗去PFA：固定完毕后，流水冲洗3次，每次5分钟。
4、脱水透明：此步骤应根据不同组织设置合适时间，基本流程如下
脱水：30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇（关键步骤：可当日2H也可过夜）→95%乙醇1→95%乙醇2→无水乙醇
根据不同组织大小和类型调整脱水时间，对于小鼠肝组织95%乙醇控制在30min-1H，100%乙醇5min-30min。
透明：50%乙醇+50%二甲苯→二甲苯1→二甲苯2→二甲苯3
利用透明剂即可以和脱水剂相混合又能和石蜡相混合的特性，可以将脱水剂替换出来，并引入石蜡到组织中。
二甲苯易挥发并且有毒，该步骤在通风橱中进行。
透明过程中及时观察组织形态调整透明时间，在光照下观察组织是否透明成功，透明适度即可，一般透明时间约为5min-30min。
透明后放入小塑料盒子里做好标记。
5、浸蜡：将石蜡融化，温度保持在55℃左右。
一共需要过三遍蜡。
因第一次组织含二甲苯过多，第一次浸蜡时间尽可能短约15分钟，后两次可适当延长至30min-1h。
该步骤的蜡纯度质量要求不高，但是要注意该步骤石蜡的熔点为54-56℃。
6、包埋：将组织块放入盛有蜡液的模具中，所需组织切面与底部平行，因蜡液在冷环境中易凝固，此步尽量要快。
包埋用的石蜡因为要用于切片，对其质量和纯度和硬度的要求比较高，一般采用徕卡高熔点58-60℃的片状石蜡。
包埋的进口石蜡
包埋在包埋机上进行，包埋机有60℃的工作台和-10℃的工作台，顶部是融化后的徕卡高级石蜡，从出蜡头按压出蜡。
徕卡的包埋机工作台
取一个金属槽子，加入一些石蜡，然后用镊子将组织固定好，移动到-10℃的台子上，石蜡很快凝固，组织就固定在里面了，最后盖上做好标记的盖子。
放在冷冻台上，约半小时后可以把铁槽取下来。
蜡液凝固虽然很快，但是刚凝固的蜡不好切，最好在四度冰箱放置过夜后再进行切片。
蜡块可在4度储存很久。
7、切片：不同组织厚度参考：肝肺心：4-6um，常规：4um，淋巴结，肾：2um。
刀片锋利，使用时千万小心，日本产feather R35刀片是病理学老师推荐的最好用的刀片，但是单价十分昂贵720一盒，一盒50片。
注意事项：软组织冰冻一下再切，硬组织加热后再切。
石蜡切片要点和对策，戳这里[2]：
8、展片：切好的片段用毛笔小心转移到38-40℃的展片台内的清水上，待几分钟后切片完全没有褶皱，选择组织形状完整并且没有刀痕的片子进行捞片，一个片子可以捞上两片。
使用黏附载玻片，吸附能力更强。
9、烤片：放入60度烘箱内烤片，烤片过夜，取出后常温保存备用。
三、注意事项
1、组织一定要新鲜，冻过的组织最好不要用来包埋，因为组织结构可能改变。
如果进行短途运输，干冰比液氮更合适。
2、组织块可根据组织特性调整大小。
3、切组织块时刀片一定要锋利，及时更换并且单方向切，防止损坏组织。
4、固定时间依材料大小、固定剂种类而异，可从1小时到几时小时，有时中间需要更新固定剂。
某些固定剂对组织的硬化作用较强，作用时间应严加控制，不能过长。