TOLL样受体7(TLR7)增殖分化信号通路论文
Toll样受体信号通路的研究进展
Ｔｏｌｌ样受体信号通路的研究进展摘要Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是近年来发现的一类模式识别受体，通过识别病原相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)激活天然免疫。
而髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88，MyD88)是TLR信号通路中的一个关键接头分子，在传递上游信息和疾病发生发展中具有重要的作用。
本文对Toll样受体、髓样分化因子88的分子结构和基本功能，及Toll样受体的信号传导通路进行了综述。
关键词Toll样受体；髓样分化因子88；信号通路；负调控机制免疫系统识别“非我”和“自我”的过程是依赖于不同的受体来完成的,作为先天性免疫系统的重要组成部分及连接获得性免疫与先天性免疫的“桥梁”, TLRs 是生物的一种模式识别受体(pattern recognition receptor, PRR),它主要通过识别病原相关分子模式PAMPs来启动免疫反应。
而MyD88是Toll受体信号通路中的一个关键接头分子，是第一个被鉴定的含TIR结构域的接头蛋白分子，在传递上游信息和疾病发生发展中具有重要的作用。
1TLR的结构与基本功能Toll样受体一词来自对果蝇的研究,是决定果蝇背腹分化的基因所编码的一种跨膜受体蛋白,同时还参与果蝇的免疫反应,具有介导抗真菌感染信号转导的功能[1]。
后来在哺乳动物也发现有与Toll受体同源的受体分子，统称为称为Toll 样受体TLRs。
TLRs是广泛分布在免疫细胞尤其非特异免疫细胞以及某些体细胞表面的一类模式识别受体，它们可以直接识别结合某些病原体或其产物所共有的高度保守的特定分子结构，即病原相关分子模式。
迄今为止,已经发现哺乳动物至少有13种toll样受体,其中人的toll样受体鉴定出11种(TLR1-TLR11) [2]。
TLRs识别的配基各不相同，其中TLR1-TLR5的结构已被确定,但只有TLR2与TLR4的功能被部分揭示。
toll样受体信号通路
Toll 样受体(TLRs)是一个模式识别受体家族，它们在进化上高度保守，从线虫到哺乳动物都存在TLRs，目前在哺乳动物中已发现 12 个成员[1]．TLRs 主要表达于抗原递呈细胞及一些上皮细胞，为玉型跨膜蛋白，胞外区具有富含亮氨酸的重复序列，能够特异识别病原微生物进化中保守的抗原分子———病原相关分子模式 (pathogen-associatedmolecular patterns, PAMPs)[2]．为了有效地抵抗入侵的病原体，机体需要对多种 PAMPs产生适当的免疫应答，TLRs 可以通过识别 PAMPs诱发抵抗病原体的免疫反应．而且 TLRs 也参与识别有害的内源性物质．TLRs 的激活可诱导很强的免疫反应，有利于机体抵抗病原体感染或组织损伤，但是过度的免疫反应也会带来不利影响，如产生内毒素休克、自身免疫性疾病等．为了保证 TLRs 介导正确的免疫应答，机体存在精密的负调控机制，及时抑制 TLRs 信号，维持机体的免疫平衡[3]TLR 家族成员(TLR3 除外)诱导的炎症反应都经过一条经典的信号通路(图 1)，该通路起始于TLRs的一段胞内保守序列———Toll/IL-1 受体同源区(Toll/IL-1 receptor homologousregion，TIR)．TIR可激活胞内的信号介质———白介素 1 受体相关蛋白激酶(IL-1R associated kinase， IRAK) IRAK-1 和IRAK-4、肿瘤坏死因子受体相关因子 6(TNFR-associated factor 6, TRAF-6)、促分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase，MAPK)和 I资B激酶 (I资B kinase， I资K )，进而激活核因子资B(nuclear factor 资B，NF-资B)，诱导炎症因子的表达．TLRs 信号通路上的许多接头蛋白都具有 TIR结构域：髓系分化因子 88(myeloid differentiationfactor 88， MyD88)、 MyD88- 接头蛋白相似物(MyD88-adaptor like，Mal)、含有 TIR 结构能诱导干扰素茁的接头分子 (TIR domain-containingadaptor inducing interferon茁，TRIF)、TRIF 相关接头分子(TRIF-related adaptor molecule，TRAM)和SARM (sterile 琢 and armadillo motif-containingprotein)[4]．它们参与 TLRs 所介导的信号转导，其中 MyD88最重要，参与了除 TLR3 外所有 TLRs介导的信号转导．MyD88首先通过 TIR 与 TLRs 相结合，接着募集下游信号分子 IRAK-4，IRAK-4 磷酸化激活IRAK-1，随后活化 TRAF6．活化的 TRAF6具有泛素连接酶(E3)的活性，能够结合泛素结合酶(E2)，进而泛素化降解 IKK-酌．这种泛素化降解可以活化TGF-茁激酶(TGF-茁activated kinase 1， TAK1) 和TAK1结合蛋白 (TAK1 binding protein，TAB1、TAB2、TAB3)．活化的 TAK1 会催化 IKK-茁磷酸化，最终激活 NF-资B，促使炎症因子的表达．除了共同的 NF-资B 激活通路，不同的 TLRs 还存在着其特有的信号通路，一些 TLRs 具有募集 Mal、TRAM 和 TRIF 的作用．不同的接头分子在信号传导中发挥的作用不同[5]，TRIF 在脂多糖(LPS)激活的 TLR4 途径和 Poly(I∶C)激活的 TLR3 途径中都起到了重要的作用，而 TRAM 仅在 TLR4 的途径中发挥作用．TLRs 的激活是一把双刃剑，它可以通过刺激先天性免疫应答和提高获得性免疫反应来保护机体，但是它所引起的持续性炎症反应也会对机体产生损伤，自身免疫、慢性炎症和感染性疾病都与它有一定关系．例如 LPS 持续刺激 TLR4 就可以引起严重的败血病和感染性休克，此外，类风湿性关节炎、慢性阻塞性肺心病、结肠炎、哮喘、心肌病、狼疮和动脉粥样硬化的发生也与 TLRs 的激活有关．因此 TLRs 的激活必须受到严格的负调控，以保持免疫系统的稳定．对于负调控机理的研究是近几年免疫学的热点，以下将介绍 TLRs 负调控的研究进展(图 1)．。
Toll样受体7激动剂对脓毒症小鼠肝损伤时JNK信号通路的影响重点
ｏｎ
ｃ—Ｊｕｎ Ｎ— ｈｕｎｄｒｅｄ
ｋｉｎａｓｅ（ＪＮＫ）ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｄｕｒｉｎｇ
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ｅｉｇｈｔｙ ｐａｔｈｏｇｅｎ—ｆｒｅｅ ａｄｕｌｔ ｍａｌｅ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｉｃｅ，ａｇｅｄ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｒｏｕｐｓ（ｎ＝６０ ｅａｃｈ）ｕｓｉｎｇ
Ｃ５７ＢＬ／６小鼠１８０只，购自北京华阜康生物科技公 司，１０～１４周龄，体重２０～２６ ｇ。采用随机数字表法 分为３组（ｎ＝６０）：假手术组（Ｓ组）、脓毒症组（Ｓｅｐ 组）和ＴＬＲ７激动剂组（ＧＤＱ组）。采用盲肠结扎穿 孔法制备小鼠脓毒症模型，ＧＤＱ组制备模型前２４
ｈ
时腹腔注射ＴＬＲ７激动剂Ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ（批号： １１３Ｍ４７４０Ｖ，Ｓｉｇｍａ公司，美国）１．５ ｇ／ｋｇ。Ｓ组除不 结扎盲肠和穿刺盲肠外，其余操作同Ｓｅｐ组。 小鼠脓毒症模型的制备 参照文献［４］，采用 盲肠结扎穿孑Ｌ法制备小鼠脓毒症模型。禁食８ ｈ，自 由饮水。腹腔注射２％水合氯醛１５ ｍｌ／ｋｇ麻醉，常规 腹部碘伏消毒，备皮和铺无菌纱布洞巾。沿腹部中 线切开皮肤ｌ ｃｍ，用无菌镊探查到盲肠后用手术缝 线在回盲瓣下方盲肠近端ｌ／２处结扎（避免结扎肠 系膜血管），用２１ Ｇ无菌针头于被结扎盲肠尾端穿 孔，然后挤压盲肠轻柔挤出适量肠内容物，将盲肠和 挤出内容物一同还纳腹腔，逐层缝合腹壁切口。 肝ＩＬ—１０和ＩＬ一６表达水平的测定 分别于术后
ａ
ｗｅｅｋｓ，ｗｅｉｇｈｉｎｇ ２０—２６ ｇ，ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ
ｒａｎｄｏｍ
ｎｕｍｂｅｒ ｔａｂｌｅ：ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ Ｓ）；ｓｅｐｓｉｓ
Toll 样受体介导的细胞内信号通路及其免疫调节功能
Toll 样受体介导的细胞内信号通路及其免疫调节功能洪丽莉;孔倩颖;韦曦【期刊名称】《国际口腔医学杂志》【年(卷),期】2013(40)1【摘要】Toll样受体(TLR)通过富亮氨酸重复序列识别不同病原体表面共有且进化高度保守的特定分子结构，引发细胞内信号传导及炎症递质释放，启动宿主的免疫反应，而TLR 介导的牙髓细胞内信号通路对机体的免疫反应具有重要的调控作用。
本文就 TLR 在牙髓组织中的表达， TLR 信号通路， TLR 在牙髓炎症治疗中的应用前景等研究进展作一综述，以期丰富牙髓炎的发生机制，为牙髓炎的临床药物研发提供新的思路。
%Toll-like receptor(TLR) can trigger intracellular signal transductions and release antimicrobial pro-inflammatory factors, ultimately activating the host immune response by recognizing the evolutionarily conserved structures on pathogens through ligand-binding domain, which contains leucine-rich repeat motifs. The intracellular signal pathways in pulp cells mediated by TLR have important regulatory effects on body immune responses. Thus, this focus review on the expression of TLR in dental pulp tissues, the TLR signal pathways, and the possible great therapeutic implications in curing pulpitis diseases. By doing so, we aim to perfect the theory of pulpitis pathogenesis, and to provide a new angle for developing medical drugs in controlling the pulpitis problems.【总页数】5页(P76-79,85)【作者】洪丽莉;孔倩颖;韦曦【作者单位】中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科，广东省口腔医学重点实验室广州 510055;中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科，广东省口腔医学重点实验室广州 510055;中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科，广东省口腔医学重点实验室广州 510055【正文语种】中文【中图分类】Q51【相关文献】1.脓肿分枝杆菌经Toll样受体2介导的JNK/ERK信号通路诱导巨噬细胞表达肿瘤坏死因子α和白细胞介素8 [J], 桂静;王峰;李青;李金莉2.IRAK-4在白介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLRs)介导的炎症信号通路中的关键作用 [J], 李帆;芮耀诚3.病原菌对NOD样受体及Toll样受体信号通路介导的固有免疫逃逸机制研究进展[J], 何玉洁;潘建平4.TOLL样受体2、4及其介导的NF-κB信号通路参与类风湿关节炎发病的研究进展 [J], 龚辉;邓奕辉;王衡新;宋志林5.Toll样受体4单克隆抗体对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜Toll样受体4介导的核因子-κB信号通路的影响 [J], 刘懿;王磊;张志军;孙旭;黄剑平;陈坚;岳文杰;李娟;董乐;钟良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
TLR7激活上调细胞周期蛋白表达促进Hela细胞增殖
１．１ 细胞 及 主 要 试 剂 Ｈｅｌａ细 胞 购 自美 国 ＡＴＣＣ 公 司 ；胎 牛 血 清 和 ＤＭＥＭ 购 自美 国 Ｇｉｂｃｏ公 司 ；胰 酶 、ＲＩＰＡ裂 解液 、青 霉 素 链 霉 素溶 液及 周 期 试 剂 盒 购 自 中 国 上 海 碧 云 天 生 物 公 司 ；ＭＴＳ试 剂 盒 及 Ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ购 自美 国 Ｓｉｇｍａ公 司 ；Ｃｙｃｌｉｎ Ｂ１、Ｃｙｃｌｉｎ Ｅ及 Ｂ—ａｃｔｉｎ均 购 自美 国 Ａｂｃａｍ 公 司 ；二抗 购 自北京 中杉 金 桥生 物技术 有 限公 司 。 １．２ 方 法 １．２．１ 细胞 培 养 人 宫 颈 癌 细 胞 Ｈｅｌａ生 长 于 含 １０％ 胎牛 血清 和 １％青 霉 素链 霉素溶 液 的 ＤＭＥＭ 培 养液 中 ，在 ３７℃ 、５％ ＣＯ 恒 温 恒 湿 培 养 箱 内传 代 培养 。 １．２．２ 细胞 增 殖 实验 （ＭＴＳ） 胰 酶 消 化 收集 Ｈｅｌａ 细胞 ，并 调整 细胞 悬 液 浓 度 为 ３×１０ ／ｍｌ，分别 接 种 于 ９６孔 板 ，每 孔 １００ ｌ，培 养 箱 贴 壁 ２４ ｈ，加 入 Ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ药 液 ，使 终 浓 度 为 １．０、１．５、２．０、２．５、 ３．０ ｇ／ｍｌ，并 设 对 照 组 （０ ｇ／ｍ１），继 续 培 养 ７２ ｈ 后 加 入 ＭＴＳ试 剂 ，放入 温箱 孵 育 ３ ｈ后 用 酶标 仪 检 测 ４９０ ｎｍ 处 吸光 度 。 同上 述 方法 种 ９６孔 板 ，加 人
等 －５］。ＴＬＲｓ家族 的 信 号 机 制 是 依 赖 于 胞 质 区 的 接 头 蛋 白分 子 和激酶 进行 信号 转 导 。根 据接 头蛋 白 的不 同 ，可 以分 为衔 接 蛋 白 （ＭｙＤ８８）依 赖 性 和 非依 赖 性途 径 。定 位 于 胞 内 的 ＴＬＲ７与 配 体 识 别 后 ，募 集 ＴＩＲ结 构域 ，激 活有 丝 分 裂 原激 活蛋 白激 酶 和 核 转 录 因子 （ＮＦ．ＫＢ）信 号 途 径 ，进 而 调 控 促 炎性 细胞 因子 基 因 的表 达 ，发挥 其抗 病毒 及抗 肿 瘤作 用 Ｊ。 咪 唑 喹啉类 （Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）是 一 种 新 型 的 具有 核苷 类 似 物结 构 的家 族 成 员 之 一 ，可 以激 活 ＴＬＲ７信 号 通 路 ，但 其 机 制 尚 不 完 全 清 楚 。 咪 唑 喹 啉 衍 生 物 （Ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ）与 Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ都 是 ＴＬＲ７激 动 剂 ，能 够 激 活 ＴＬＲ７信 号 途 径 ，但 与 Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ相 比较 ， Ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ在 肿瘤 治 疗 中展 现 出更 大 的潜 在 发 展 性 。前 期研 究 显示 Ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ能够 促 进 Ｈｅｌａ 细胞 增 殖 ，该 研 究 进 一 步 探 讨 了 Ｇａｒｄｉｑｕｉｍｏｄ激 活 ＴＬＲ７通 路促 进 Ｈｅｌａ细 胞增殖 的分子机 制 。
Toll样受体7激动剂治疗过敏性疾病的研究进展
Toll样受体7激动剂治疗过敏性疾病的研究进展王玲;蔡铠红;詹文珠;殷国干;叶琳【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2024(43)5【摘要】Toll样受体(TLR)7是TLR家族中的一员,是Ⅰ型跨膜糖蛋白,由细胞质Toll/白细胞介素-1受体同源性(TIR)信号传导结构域和包含19~25个串联富含亮氨酸重复基序的外部抗原识别结构域组成。
人体内TLR7主要分布在浆树突状细胞(pDC)和B细胞的胞体内体膜上,通过高尔基体的囊泡从内质网穿梭至内体。
内体膜上的TLR7与病毒来源的单链RNA分子或咪唑啉类似物结合从而被激活,进一步诱导Ⅰ型干扰素的合成,从而启动辅助性T淋巴细胞(TH)1细胞的激活,快速招募炎症细胞到感染部分,发挥抗病毒、抗肿瘤以及抗过敏的功能。
TLR7激活后由于具有调节TH1/TH2细胞比例的作用,其配体用于治疗过敏性疾病的研究日益受到关注。
该文围绕TLR7激动剂对过敏性哮喘、过敏性鼻炎以及过敏性脑炎的临床前研究和临床试验研究进行综述,以期为过敏性疾病的治疗提供新思路。
【总页数】5页(P769-773)【作者】王玲;蔡铠红;詹文珠;殷国干;叶琳【作者单位】暨南大学附属深圳市眼科医院眼病防治研究所;武汉大学深圳研究院病毒学重点实验室深圳研发中心;暨南大学附属深圳市眼科医院眼整形泪器病科【正文语种】中文【中图分类】R976;R969.3【相关文献】1.Toll 样受体在过敏性疾病、感染性疾病及肿瘤中的研究进展2.Toll样受体激动剂在变应性气道炎性疾病治疗中的研究进展3.Toll样受体激动剂在变应性鼻炎免疫治疗中的研究进展4.Toll样受体8激动剂在树突状细胞抗肿瘤免疫治疗中的研究进展5.Toll样受体激动剂作为佐剂在恶性肿瘤治疗性疫苗中的应用研究进展因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Toll样受体信号通路与抗病毒免疫研究进展
Toll样受体信号通路与抗病毒免疫研究进展作者：窦颖来源：《现代养生·下半月》2017年第08期[摘要]Toll样受体（Toll-likereceptor，TLRs）是一类受体蛋白，其家族成员通过识别各自特异的病原体相关分子模式（PAMP）来启动天然免疫和获得性免疫应答，从而抵抗病原微生物对机体的入侵。
对于TLRs在抗感染免疫中所起的作用及其可能的机制已经进行了大量的研究。
本文将对TLRs与抗病毒免疫应答的研究进行综述，这将有助于更好地理解Toll样受体介导的抗病毒免疫机制，为预防、干预、治疗病毒感染性疾病新策略新方案的提出提供指导。
[关键词]Toll样受体;天然免疫;抗病毒免疫;信号转导Toll样受体（TLR）是一类广泛表达于哺乳动物细胞表面的跨膜信号转导蛋白，其最初是在果蝇中被发现。
之后Hoffmann小组成功克隆出果蝇的Toll受体，并证实其能够识别并抑制真菌繁殖，这一发现，也证实了Janeway在1989年所提出的学说，即模式识别受体（patternrecognitionreceptor，PRR）可特异性的识别与其相对应的病原相关模式分子（pathogen-associatedmolecularpattern，PAMP）。
其后科学家们发现人类同样存在Toll受体，并有多个成员，故将其统称为Toll样受体家族（TLRs）。
TLRs通过对相应PAMP的识别，来激活天然免疫系统，同时通过炎症因子释放等途径诱导适应性免疫应答建立，来共同抵抗病原微生物的入侵，所以Toll样受体被认为是连接天然免疫应答和获得性免疫应答的桥梁。
对于Toll受体的研究自其发现开始就与感染的研究密不可分，之前的研究主要集中在其对细菌感染的作用，后来由于呼吸道合胞病毒（Respiratorysyncytialvirus，RSV）的F蛋白被发现的为TLR4所识别的病毒性PAMP，使的TLRs与病毒感染关系的研究日益增多。
Toll样受体7
肌
酐 ６ ０
３ ０
言能够导致Ｄ ＮＡ自身抗体的出现 。专家还同时观察到 了经Ｃ Ｇ－ ｐ
Ｏ Ｎ 激Ｔ Ｒ 活 化能造 成ＭＲ ．ａ １ｒ 小 鼠肾脏病情 恶化 口 Ｄ 刺 Ｌ９ ＬＦｓ（ ｐ ） 】 。 在 结合 狼疮 鼠模 型对 肾组 织 Ｔ Ｒ 展开 分析得 出 ，存在 肾炎 的狼疮 Ｌｓ 鼠 。其 肾组织Ｔ Ｒ 得到 了明显 的增 长 ，所 出现 的集体 反应 主要集 Ｌ９
反应已成为治疗的主要问题。Ｔ Ｒ Ｌ 家族利用感染、或非感染性分
子引出的信号识别系统能够对 肾脏疾病发病机制产生较大的作
用 。根据 当前 的 医学观 察可 知 ，Ｔ Ｒ Ｅ 多 肾脏疾 病 的形 成过 程 Ｌ ￣许
吉 林 医学２ １￣２Ｊ ２ ０ ： 第３ 卷第６ １ 期
ｌ ７ ０８
生 的影 响 ，这 能够 给 医生 的治疗带 来很 大的帮 助 。
１ 资料与方法
１ 一 般 资料 ：本 次研 究 共选 择 混合 骨 髓 干细 胞 移植 实 验后 的 ， １ ＭＲ ／ ｒ 疮 鼠３ 只 ，将 其 肾组织 标 本采 用 免疫 组 化Ｓ Ｂ 法 处 ＬＩ 狼 ｐ ６ Ａ Ｃ
理，分为空 白对照组３ 只 （ Ｂ 代替 ）和阴性对照组６ （ Ｏ ＰＳ 只 昆明
１ ６ Ｏ８
吉林医学２ ｌ年２ Ｏ １ 月第３ 卷第嘲 ２
Ｔ ｌ 受体７ 在狼 疮 肾炎发 病机 制 中作 用 的研 究 ｏｌ 样 ，９
崔 晓，刘冠贤 ，董光 富 ，石 咏军 ，倪 丽 （ 广东省惠州市中心人 民医院儿科 ，广东 惠州 ５ ６ ０ ） １０ １
Toll样受体信号传导通路的研究进展
Toll样受体信号传导通路的研究进展马思慧;杨欢;吴天成;崔焕忠;张辉;李雨萌;洪盼;郑鑫【摘要】Toll样受体(tolllike receptors,TLRs)能识别病原微生物相关分子模式,募集含有Toll/白介素-1受体(TIR)结构域的接头蛋白分子,通过髓样分化蛋白88(MyD88)依赖性信号传导通路或由β-干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)依赖性信号传导通路启动信号传导,继而引发特异性的免疫应答.作者就TLRs的结构特征、分布、配体识别、参与信号传导的接头蛋白分子及介导的信号传导通路的最新研究进展进行综述.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2014(041)008【总页数】5页(P160-164)【关键词】Toll样受体;TIR结构域;信号传导通路【作者】马思慧;杨欢;吴天成;崔焕忠;张辉;李雨萌;洪盼;郑鑫【作者单位】吉林农业大学生命科学学院,吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春 130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春 130118【正文语种】中文【中图分类】Q952先天免疫系统是保护宿主的第一道防线，通过触发炎症反应，诱导T细胞和B细胞杀伤病原体微生物。
Toll样受体（toll like receptors，TLRs）是最早发现的模式识别受体（PRRs），它们在特异性的识别病原体相关分子模式（PAMPs）后，随即募集含有Toll/白介素-1受体（TIR）结构域的接头蛋白分子，启动下游的信号传导通路，引起炎性细胞因子、Ⅰ型干扰素（IFN-Ⅰ）、趋化因子和抗菌肽的分泌，激活噬中性粒细胞和巨噬细胞直接杀伤病原体（Akira等，2004）。
Toll样受体7激动剂在肝脏疾病中的研究
ｍ ｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｐ ａ ｔ ｔ ｅ ｒ ｎ ， Ｐ Ａ Ｍ Ｐ ） 并 与其结 合 ， 这 一刺 激信 号可 引起
机体防御基 因表达。Ｔ Ｌ Ｒ按 所在部位 主要分 为两 类 ： 表 达于
细胞表面的 Ｔ Ｌ Ｒ １ 、 Ｔ Ｌ Ｒ ２ 、 Ｔ Ｌ Ｒ ４ 、 Ｔ Ｌ Ｒ ５ 、 Ｔ Ｌ Ｒ ６ ， 能 识 别 细菌 和 真
Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ Ｔ ｏ ｌ ｌ — Ｌ ｉ ｋ ｅ Ｒｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ７； Ａｇ ｏ ｎ ｉ ｓ ｔ ； Ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ； Ｉ ｍｍｕ ｎ ｉ ｔ ｙ
Ｔ ｏ ｌ ｌ 样受体 （ Ｔ ｏ ｌ ｌ — ｌ ｉ ｋ ｅ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ， Ｔ Ｌ Ｒ） 是一种胞 内具有保 守Ｔ ｏ ｌ ｌ ／ Ｉ Ｌ 一 １ 受体 （ Ｔ Ｉ Ｒ） 结构域 和胞 外 富含 亮 氨酸重 复序列 的膜结合蛋 白 ， 目前 已鉴 定 出 １ ０种 人 Ｔ Ｌ Ｒ。Ｔ Ｌ Ｒ家族 主要 识别 多 种 保 守 的 病 原 相 关 分 子 模 式 （ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ． ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ
胃肠 病 学 ２ ０ １ ７年第 ２ ２卷 第 ４期
Ｔ ｏ ｌ ｌ 样 受体 ７激 动剂 在 肝脏 疾 病 中的研 究
郭 素 倩 李 燕 妮 张 瑜。 王 国林
天津医科大学总医院麻醉科’ （ ３ ０ ０ ０ ５ ２ ） 消化 科 。 Nhomakorabea摘要
Ｔ ｏ ｌ ｌ 样受体 ７ （ Ｔ Ｌ Ｒ ７ ） 是参与 固有免疫 的一类重 要蛋 白分 子 ， 也是连 接 固有免 疫与适 应性免疫 的桥梁 。
ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｎ ａ ｔ ｅ ｉ ｍｍｕ ｎ ｉ ￣ａ ｎ ｄ ａ ｄ ａ ｐ ｔ ｉ ｖ ｅ ｉ ｍｍｕ ｎ ｉ ｔ ｙ ．Ｗｈ ｅ ｎ Ｔ Ｌ Ｒ７ ｉ ｓ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｅ ｄ．ｉ ｔ ｃ ａ ｎ ｅ ｘ ｅ ｒ ｔ ｉ ｔ ｓ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｎ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈ
Toll样受体及其信号通路研究进展
Toll样受体及其信号通路研究进展摘要：Toll样受体（TLRs）是一类模式识别受体，可以识别微生物并对其作出反应。
TLRs家族成员在免疫系统中起着重要作用，既是参与先天免疫的重要分子，也是连接先天免疫和特异性免疫的桥梁。
该受体可以特异性地识别微生物，并启动免疫应答。
本文对TLRs结构、功能和信号通路等方面进行综述。
关键词：Toll样受体免疫系统信号通路在天然免疫系统的研究中，Toll样受体的发现是最重要的进展之一。
TLRs 最早是1980年在果蝇胚胎中发现的，此基因决定了果蝇背腹侧的分化[1]。
1991年Gay等发现，TLRs蛋白的结构与哺乳动物中IL-1具有同源性[2]。
随后，TLRs 被发现能够激活获得性免疫[3]。
至今，已经发现21种TLRs，其中人13种(TLR1-13)，小鼠12种(TLR1-9及TLR11-13)，斑马鱼18种(TLR1-9、TLR11-14和TLR18-22)。
1、TLRs的结构TLRs结构由三部分组成，胞外区、跨膜区和胞浆区。
胞外区是亮氨酸富集的重复序列，识别病原体细胞表面的分子；跨膜区富含半胱氨酸；胞浆区与哺乳动物IL-1受体高度同源，称为TIR[5]。
TIR的构型与病原识别相关，不同种类TLRs，识别不同种类的微生物。
2、TLRs的功能TLRs是抵御感染性疾病的第一道屏障，在免疫系统中起识别微生物的作用。
TLRs通过TIR识别相应的配体来激活免疫反应。
TLR1可识别细菌的三酰脂肽；TLR2可识别革兰氏阳性细菌的脂蛋白、肽聚糖等；TLR3主要识别dsDNA；TLR4能识别革兰氏阴性菌的脂多糖；TLR5特异识别细菌的鞭毛蛋白；TLR6主要识别细菌的肽聚糖；TLR7、TLR8可识别单链RNA病毒；TLR9可识别CpGDNA。
另外树突细胞可表达TLRs。
TLRs在识别脂多糖、肽聚糖、脂蛋白及病毒后，树突细胞被活化并成熟，提供获得性免疫的共刺激信号。
TLRs是微生物成分引起树突细胞活化的桥梁。
TOLL样受体7表达在系统性红斑狼疮发病机制中的作用
TOLL样受体7表达在系统性红斑狼疮发病机制中的作用杨京芝;梁鸣;柯莉;李剑文;傅君舟【期刊名称】《临床和实验医学杂志》【年(卷),期】2011(010)002【摘要】目的探讨TOLL样受体7在系统性红斑狼疮(SLE)狼疮肾炎的发病机制中的作用.方法利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量方法检测30例SLE患者及15例健康对照组外周血中TLR7mRNA的表达水平.结果 SLE患者缓解期组外周血TLR7 mRNA表达水平与正常对照组相比,未显示出统计学差异(P>0.05);外周血TLR7 mRNA 表达水平在SLE患者活动期组与正常对照组相比,SLE 患者中显著升高(P<0.01);SLE患者外周血TLR7 mRNA的表达水平与SLE活动指数呈正相关,具有统计学意义(r=0.92,P<0.01).结论提示外周血TLR7 mRNA表达水平升高与SLE 活动存在联系,TLR7 可能参与SLE 的发病过程.%Objective To study the role of Toll - like receptor 7 ( TLR7 ) in pathogenesis of lupus nephritis. Methods The expression levels of TLR7mRNA in 30 SLE patients and 15 healthy rontrols were measured with semi - quantitative reverse transcription - polymerase chain reaction ( RT - PCR ). Resluts There was no significant difference in peripheral blood level of TLR7mRNA between SLE remission group and control group ( P ＞0. 05 ), and the peripheral blood level of TLR7mRNA in patients with active SLE group was significantly higher than that of patients in control group ( P ＜0. 01 ). There was significant positive correlation between peripheral blood level of TLR7mRNA and SLEDAI srores in patients of SLE group , and the differencebetween SLE group and normal control group was statistically significant ( r = 0. 92 , P ＜ 0. 01 ). Conclusion The high expression of TLR7mRNA in peripheral blood is considered to be associated with the activitv of SLE, thus it suggests that TLR7 may be involved in the process of pathogenesis of SLE.【总页数】3页(P84-86)【作者】杨京芝;梁鸣;柯莉;李剑文;傅君舟【作者单位】广州市第一人民医院肾内科,广东,广州,510080;广州市第一人民医院肾内科,广东,广州,510080;广州市第一人民医院肾内科,广东,广州,510080;广州市第一人民医院肾内科,广东,广州,510080;广州市第一人民医院肾内科,广东,广州,510080【正文语种】中文【相关文献】1.核酸识别Toll样受体特性及在系统性红斑狼疮中的作用 [J], 魏伟;章意亮;郭瀛军;黄金凤;孙树汉2.Toll样受体7在系统性红斑狼疮合并高危人乳头瘤病毒感染中的作用 [J], 于水莲;陶怡;黄文辉;黄成辉;唐翔3.Toll样受体2、4/MyD88/NF-κB信号通路及相关分子在COPD发病机制中的作用及临床意义 [J], 杨丽霞;贾钦尧;陈艳;宋珊4.Toll样受体在肠易激综合征发病机制中的作用 [J], 牛冰玉;魏薇;姚树坤5.Toll样受体7及I型干扰素通路在系统性红斑狼疮中的作用研究 [J], 邓筠;王元;唐元家;崔慧娟;郭彦芝;沈南因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Toll样受体7激动剂在肝脏疾病中的研究
Toll样受体7激动剂在肝脏疾病中的研究郭素倩;李燕妮;张瑜;王国林【摘要】Toll样受体7(TLR7)是参与固有免疫的一类重要蛋白分子,也是连接固有免疫与适应性免疫的桥梁.TLR7被激活后可通过不同信号通路对肝脏疾病产生作用.近年TLR7激动剂在肝脏疾病中的研究和应用不断增多.本文就TLR7激动剂在不同肝脏疾病中的研究进展作一综述.%As an important protein molecule for innate immunity,Toll-like receptor 7 (TLR7) is also a bridge between innate immunity and adaptive immunity.When TLR7 is activated,it can exert its effect on liver diseases through different signaling pathways.Studies on the role and application of TLR7 agonist in liver diseases are increasing in recent years.This article reviewed the research on TLR7 agonist in liver diseases.【期刊名称】《胃肠病学》【年(卷),期】2017(022)004【总页数】4页(P249-252)【关键词】Toll样受体7;激动剂;肝疾病;免疫【作者】郭素倩;李燕妮;张瑜;王国林【作者单位】天津医科大学总医院麻醉科 300052;天津医科大学总医院麻醉科消化科 300052;天津医科大学总医院麻醉科 300052;天津医科大学总医院麻醉科300052【正文语种】中文Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)是一种胞内具有保守Toll/IL-1受体(TIR)结构域和胞外富含亮氨酸重复序列的膜结合蛋白，目前已鉴定出10种人TLR。
toll受体7和toll受体9的有关研究进展
1.报道提示TL R7识别双链RN A，但很多实验结果支持，TL R7和TL R8的天然配体尚未发现，由于在细胞内部表达，TL R7和TL R8被认为与一些合成的小分了抗病毒成分【【【咪唑哇琳】】】相结合，近来也有研究发现，在自身免疫性疾病SL E患者中，能够识别一些高度保守自身snRNA片断[8」。
TL R9以同源_聚体的形式识别非甲基化的CpGDNA. -----------《Toll样受体的研究进展200604》。
爱沙托立宾(一种TLR7受体激动剂)2.TLR3 ,TLR7 ,TLR8和TLR9识别的PAMP是病毒和细菌的核酸，TLR3识别在大多数病毒感染过程中产生的双链RNA,TLR9识别细菌DNA所特有的非甲基化DNA二核昔酸一CPG,TLR7和TLR8可以识别单链RNA，并且TLR7和TLR8还可以识别小分子干扰RNA (siRNA)-RNA干扰的主要效应器。
TLR3,TLR7,TLR8和TLR9介导MyD88依赖型信号通路，并且TLR2还可介导MyD88非依赖型信号通路。
3.TLR3,TLR7和TLR8识别RNA病毒中的分子标志，通过对感染人类流感病毒的大鼠注射TLR8/9增强剂，可以有效抑制病毒在肺部的滴度，比注射重组的IFN-a更有效nu。
在正常情况下，对TLR刺激会引起免疫系统各种细胞的活化，能引起和增强保护性的TH-1型免疫应答，然而在某些易感基因的遗传背景下，TLR的刺激可以诱导自身免疫病，在对系统性红斑狼疮模型小鼠的研究中发现，TLR9缺失会导致自身抗体从抗核抗体向TLR7依赖的抗核糖体抗体IgG2a和IgG2b转变，加快了疾病进程和致死性，因此TLR的信号传导不仅能诱导自身免疫，而且能调节耐受[pz}。
同样在对患狼疮的小鼠的研究中，发现TLR9的缺失会加重病情，而TLR-7的缺失却会改善病情[13]。
这些结果给了我们在自身免疫病中TLR直接治疗的重要提示。
----------《Toll样受体的研究进展200808》。
Toll样受体介导的细胞内信号通路及其免疫调节功能
Toll样受体介导的细胞内信号通路及其免疫调节功能Toil样受体（TLR）通过富亮氨酸重复序列识别不同病原体表面共有且进化高度保守的特定分子结构，引发细胞内信号传导及炎症递质释放，启动宿主的免疫反应，而TLR介导的牙髓细胞内信号通路对机体的免疫反应具有重要的调控作用。
本文就TLR在牙髓组织中的表达，TLR信号通路，TLR在牙髓炎症治疗中的应用前景等研究进展作一综述，以期丰富牙髓炎的发生机制，为牙髓炎的临床药物研发提供新的思路。
标签：Toll样受体；免疫调节；牙髓炎【文献标志码】AToll样受体（Toll-likereceptor，TLR）是一类重要的天然免疫识别受体，属于I型跨膜糖蛋白，由富含亮氨酸重复片段的细胞外区（leucine-richrepeat，LRR）、跨膜区和细胞内区（Toll／inter-leukin-1receptor domain，TIR）三部分组成。
TLR通过LRR识别不同病原体表面共有且进化高度保守的病原相关分子模式，如细菌胞壁成分脂磷壁酸（lipoteichoic acid，LTA）和脂多糖（lipopolysac-charide，LPS）等，引发细胞内信号传导及炎症递质释放，启动宿主的免疫反应。
TLR一旦与特异的病原相关分子模式结合后，将会改变自身的异构形态，以利于TIR 结合衔接分子。
TLR通过磷酸化和遍在蛋白化或蛋白质与蛋白质间的交互作用激活下游信号通路，最大程度地激活炎性转录因子，调节炎性基因表达，参与介导宿主炎症或免疫防御反应。
迄今为止，已发现10个TLR家族成员。
1TLR在牙髓组织中的表达人体各器官包括口腔组织均存在着TLR，且TLR与牙髓炎密切相关。
Staquet 等通过反转录聚合酶链反应和基因测序证实，TLR-2、3和4均表达于牙髓组织内的成牙本质样细胞和成纤维细胞，其表达水平与LTA、双链RNA和LPS等特异性细菌产物相关。
牙髓细胞受革兰阳性细菌感染后，细胞内TLR-2mRNA 表达上调，在9h达最高水平，至72h表达水平持续降低，故TLR-2在牙髓炎症早期发挥调控作用。
TLR7激活对Hela细胞增殖的影响
TLR7激活对Hela细胞增殖的影响李磊;程丰伟;王芳;金锐;罗欣;张胜权【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2014(49)7【摘要】目的：探讨Toll样受体7(TLR7)在Hela细胞中的表达以及激活TLR7后对Hela细胞增殖和MAPKs-ERK1/2及PI3K-AKT两条信号通路的 ERK 和 AKT磷酸化水平的影响。
方法采用Real-time PCR分析TLR7在Hela细胞中的表达；使用不同浓度的TLR7激动剂 Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞，采用MTS比色法分析其对Hela细胞增殖的影响； Western blot 分析Gardiquimod 对 Hela 细胞ERK1/2及 AKT 蛋白磷酸化水平的影响。
结果 TLR7在Hela细胞中呈组成性弱表达；TLR7激动剂Gardiquimod可促进Hela细胞的增殖，且呈时间及剂量依赖性； Gardiquimod激活TLR7后可以显著增加Hela细胞中ERK1/2和AKT的蛋白磷酸化水平。
结论 TLR7激动剂Gardiquimod能够活化MAPK-ERK1/2和PI3K-AKT信号通路的ERK1/2和AKT蛋白磷酸化水平，并促进Hela细胞的体外增殖。
%Objective To explore the expression of Toll like receptor 7 ( TLR7 ) on Hela cells, and the effect of TLR7 agonist-Gardiquimod on the proliferation of activation of TLR7 in Hela cells and related probable mechanism. Methods Firstly, using Real-time PCR to analyze the expression of TLR7 on Hela cells. Then, the cells were treated with different concentration of Gardiquimod for different times. MTS were performed to detect the impact of Gardiquimod on the proliferation of Hela cells. Using Western blot to analyze the variation of phosphorylationof ERK1/2 and AKT when Hela cells were treated with Gardiquimod. Results The constitutive expression of TLR7 on Hela cells was weak. The activation of TLR7 by its agonist of Gardiquimod could promote the proliferation of He-la cells apparently, and existing dose and time dependence. The protein level of phosphorylation of ERK1/2 and AKT enhanced after provoking the TLR7 in Hela cells. Conclusion The TLR7 ligand, Gardiquimod can promote proliferation through excitation protein level of phosphorylation of ERK1/2 and AKT of the signal pathway, MAPK-ERK1/2 and PI3K-AKT in vitro.【总页数】4页(P910-912,922)【作者】李磊;程丰伟;王芳;金锐;罗欣;张胜权【作者单位】安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室，合肥230032;安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室，合肥230032;安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室，合肥230032;安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室，合肥230032;安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室，合肥230032;安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室，合肥230032【正文语种】中文【中图分类】R341【相关文献】1.顺铂通过抑制转移抑制基因1-细胞外信号调节激酶及丝氨酸/苏氨酸激酶激活抑制HeLa细胞增殖 [J], 张思;刘元林;李雪;周向东;赵岳;张萍萍;童英;张毅2.TLR7激活上调细胞周期蛋白表达促进Hela细胞增殖 [J], 刘莉;李磊;顾亚男;周宏;罗欣;张胜权3.中电导钙激活钾通道渊IKCa通道冤在HeLa细胞中的表达及其对细胞增殖的影响 [J], 范凌晔;石磊;詹平;刘玲;聂丹;毛熙光4.激活的吲哚乙酸对HeLa细胞增殖及MDA水平的影响 [J], 周芙玲;黄辰;宋土生;倪磊;王爱英;牛月英;李明众5.油酸激活Src基因诱导Hela细胞增殖、迁移和侵袭的研究 [J], 秦虹;张晓玉;罗旋;曾晗;陈压西;杨萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
211160330_Toll样受体7
畜牧兽医学报 2023,54(4):1490-1499A c t aV e t e ri n a r i a e tZ o o t e c h n i c aS i n i c a d o i :10.11843/j.i s s n .0366-6964.2023.04.013开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):T o l l 样受体7/8在公猪生殖系统中的表达及其配体对猪X /Y 精子分选效果评价吴昌华1,陈伟东1,杨文政1,莫健新2,洪林君1,张献伟2*,黄思秀1*(1.华南农业大学动物科学学院/国家生猪种业工程技术研究中心,广州510642;2.岭南现代农业科学与技术广东省实验室云浮分中心,云浮527400)摘 要:旨在分析T o l l 样受体7/8(T L R 7/8)在公猪精子及生殖器官中的表达情况,并探讨是否能通过其配体处理的方式分离猪X 精子和Y 精子㊂本研究采用q R T -P C R 分析3头健康成年公猪睾丸㊁附睾头㊁附睾体㊁附睾尾以及精子中T L R 7和T L R 8基因的m R N A 表达水平,利用免疫组化检测公猪睾丸和附睾中T L R 7和T L R 8蛋白的表达,并通过细胞免疫荧光分析其在不同物种(健康成年小鼠㊁公牛和公猪)精子中的表达情况,将其配体R 848与猪精子共孵育,研究其对精子活力以及X /Y 精子分离的影响㊂结果表明,T L R 7和T L R 8m R N A 在公猪睾丸㊁附睾头㊁附睾体㊁附睾尾组织以及精子中均表达;免疫组化结果显示,T L R 7/8蛋白在睾丸中主要表达于生殖细胞,在附睾中主要表达于柱状细胞微绒毛中;细胞免疫荧光结果表明,T L R 7和T L R 8蛋白只表达于小鼠和牛X 精子尾部,Y 精子中不表达,但T L R 7和T L R 8蛋白在公猪X 和Y 精子中都表达且表达模式无显著差异,T L R 7蛋白主要表达于猪精子头部顶体区域,T L R 8蛋白主要表达于猪精子尾部;与对照组相比,用T L R 7和T L R 8配体R 848孵育猪精子后,精子活力降低,但上层精子的性别比例无显著差异(P >0.05)㊂以上结果表明,T L R 7和T L R 8在猪X 精子和Y 精子间表达无显著差异,但其表达模式与小鼠和牛存在差异,因此T L R 7/8可能不适用于猪X 精子和Y 精子的分离㊂关键词:T L R 7/8;R 848;公猪;性别控制中图分类号:S 828.3 文献标志码:A 文章编号:0366-6964(2023)04-1490-10收稿日期:2022-09-22基金项目:广东省重点领域研发计划项目(2021B 0707010007);广东省乡村振兴战略专项 广东省畜禽地方品种保护与开发利用提升工程 (2018143)作者简介:吴昌华(1996-),男,苗族,湖南凤凰人,硕士,主要从事动物遗传育种与繁殖研究,E -m a i l :1697311946@q q.c o m *通信作者:张献伟,主要从事动物遗传育种与繁殖研究,E -m a i l :z x i a n w@163.c o m ;黄思秀,主要从事动物遗传育种与繁殖研究,E -m a i l :s x -h u a n g 815@s c a u .e d u .c n E x p r e s s i o no f T o l l -l i k eR e c e p t o r s 7/8i nB o a rR e p r o d u c t i v e S ys t e ma n d E v a l u a t i o no fE f f e c t o f t h e i rL i g a n d s o nB o a rX /YS p e r mS o r t i n gWU C h a n g h u a 1,C H E N W e i d o n g 1,Y A N G W e n z h e n g 1,MOJ i a n x i n 2,H O N GL i n ju n 1,Z H A N G X i a n w e i 2*,HU A N GS i x i u1*(1.N a t i o n a l E n g i n e e r i n g R e s e a r c hC e n t e r f o rB r e e d i n g S w i n e I n d u s t r y ,C o l l e g e o fA n i m a l S c i e n c e ,S o u t hC h i n aA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,G u a n gz h o u 510642,C h i n a ;2.Y u n f uB r a n c h ,G u a n g d o n g L a b o r a t o r yf o rL i n g n a nM o d e r nA gr i c u l t u r a l S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,Y u n fu 527400,C h i n a )A b s t r a c t :T h i s s t u d y a i m e d t o a n a l y z e t h e e x p r e s s i o no fT o l l -l i k e r e c e pt o r 7/8(T L R 7/8)i nb o a r s p e r ma n d r e p r o d u c t i v e o r g a n s ,a n d t o e x p l o r ew h e t h e r b o a rXs p e r ma n dYs p e r mc o u l db e s e pa -r a t e db y t h e i r l i g a n d t r e a t m e n t .I n t h i s s t u d y ,t h em R N Ae x pr e s s i o n l e v e l so f T L R 7a n d T L R 8g e n e s i n t e s t i s ,c a u p t ,c o r p u s ,c a u d ua n d s p e r mo f 3h e a l t h y a d u l t b o a r sw e r e a n a l y z e db yqR T -Copyright ©博看网. All Rights Reserved.4期吴昌华等:T o l l样受体7/8在公猪生殖系统中的表达及其配体对猪X/Y精子分选效果评价P C R.T h e p r o t e i ne x p r e s s i o n p a t t e r no fT L R7a n dT L R8i n t e s t i s a n d e p i d i d y m i s o f b o a rw a s i n-v e s t i g a t e db y i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y.T h e i re x p r e s s i o ni ns p e r m o fd i f f e r e n ts p e c i e s(h e a l t h y a d u l tm i c e,b u l l s a n db o a r s)w a s a n a l y z e db y c e l l u l a r i m m u n o f l u o r e s c e n c e.F i n a l l y,t h e e f f e c t s o f T L R7a n dT L R8o n s p e r m m o t i l i t y a n dX/Ys p e r ms e p a r a t i o nw e r e i n v e s t i g a t e db y c o-i n c u b a t i n g t h e i r l i g a n dR848w i t hb o a r s p e r m.T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t T L R7/8m R N A sw e r e e x p r e s s e d i nb o a r t e s t i s,c a u p t,c o r p u s,c a ud ua n ds pe r m.T L R7/8p r o t e i n sw e r em a i n l y e x p r e s s e d i n g e r mc e l l s i n t e s t i s a nd i n c o l u m n a r ce l lm i c r o v i l l i i n e p i d i d y m i s.T L R7/8p r o t e i n sw e r e o n l y e x p r e s s e d i n t h e t a i l o fm o u s e a n db u l l Xs p e r m,b u t n o t i nYs p e r m.H o w e v e r,T L R7/8p r o t e i n sw e r e e x-p r e s s e d i nb o t hb o a rXa n dYs p e r m sw i t hn os i g n if i c a n td i f f e r e n c e i ne x p r e s s i o n p a t t e r n.A n d T L R7p r o t e i nw a sm a i n l y l o c a t e d i n t h e a c r o s o m eo f b o a r s p e r m h e a d,w h i l eT L R8p r o t e i nw a s m a i n l y l o c a t e d i n t h e t a i l o f b o a r s p e r m.C o m p a r e dw i t h t h e c o n t r o lg r o u p,th e s p e r m m o ti l i t y o f t h e t r e a t e d g r o u p w i t hT L R7/8l i g a n dR848w a s r e d u c e d,b u t t h e s e xr a t i oo f t h eu p p e r s p e r m s w a s n o t s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t(P>0.05).I n c o n c l u s i o n,t h e r e a r e n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i n t h ee x p r e s s i o no fT L R7/8b e t w e e nb o a rXs p e r ma n dYs p e r m,b u t t h e i r e x p r e s s i o n p a t t e r n s a r e d i f-f e r e n t f r o mt h o s e o fm o u s e a n db u l l s p e r m,s oT L R7/8m a y n o t b e s u i t a b l e f o r t h e s e p a r a t i o no f b o a rXs p e r ma n dYs p e r m.K e y w o r d s:T L R7/8;R848;b o a r;s e x c o n t r o l*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r s:Z H A N G X i a n w e i,E-m a i l:z x i a n w@163.c o m;HU A N GS i x i u,E-m a i l: s x h u a n g815@s c a u.e d u.c n精原细胞经过有丝分裂和减数分裂形成携带X 染色体和Y染色体的精细胞[1-2]㊂研究发现,X精子和Y精子之间存在差异,包括体积大小㊁D N A含量㊁游动速度㊁表面电荷以及耐冻性[3-7]㊂据报道,X 染色体要比Y染色体具有更多的编码基因[8],为X 精子和Y精子之间表达产物差异提供了基础条件,说明两种不同的精子之间可能存在不同的蛋白㊂蛋白质组学技术的进步为研究X/Y精子的差异蛋白提供了有利条件㊂2012年,C h e n等[9]报道,公牛的X精子和Y精子间存在16个差异蛋白㊂随后几年,越来越多的公牛X/Y精子差异蛋白被报道出来[10-12]㊂此外,有研究者运用一种针对公牛Y精子表位蛋白的单克隆抗体与公牛精子孵育,Y精子头对头凝聚而沉淀到底部,对X精子无显著影响,进而将X/Y精子分离[13]㊂寻找X/Y精子的差异或特异蛋白是开发精子性别鉴定和分离免疫学方法的基础㊂通过抗原抗体反应来改变精子的功能或状态,有望建立高效㊁廉价㊁简便和低损伤的性控精子分离方法,这对于畜牧业意义重大㊂T o l l样受体(T o l l-l i k er e c e p t o r,T L R)是一类具有天然识别功能的受体,其广泛存在于抗原呈递细胞中,通过与微生物中特异分子相互识别进而在固有免疫或适应性免疫中发挥重要作用㊂T L R家族共有13个成员T L R1-13,其表达模式在物种间存在差异,如在小鼠中不表达T L R10,在人类中不表达T L R11-13[14]㊂T L R s在人类疾病的研究中较多,然而在精子上的报道相对较少㊂最近有报道称,位于X染色体上的T o l l样受体7/8(T L R7/8)基因在小鼠X精子上特异表达,将T L R7/8的共同配体R848与小鼠精子共孵育,它通过抑制糖酵解途径使X精子产生A T P水平降低,进而降低X精子的活力,使X/Y精子分离[15]㊂此外,研究人员使用分离的X/Y精子进行体外受精和胚胎移植,得到的预期后代率高达81%以上㊂之后,利用T L R7/8分离牛和羊X/Y精子相继被报道,并取得了显著的效果[16-18]㊂然而,到目前为止,暂未发现T L R7/8蛋白在公猪精子上有相关报道㊂若T L R7/8在公猪精子上的表达模式与小鼠㊁牛精子相类似,可以借鉴R848分离小鼠和牛X/Y 精子的方法来分离公猪X/Y精子,这将有望开发一种简单廉价的生产猪性控精液的方法,对生猪养殖业的发展具有极大的推动作用㊂因此,本研究运用q R T-P C R和免疫组化方法探究T L R7/8在公猪性腺以及精子中的表达情况;运用细胞免疫荧光分析T L R7/8在公猪X/Y精子的表达模式,并与小鼠和牛精子相比较;R848孵育公猪精子探究其对分离猪1941Copyright©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷X/Y精子的作用,评价是否能通过T L R7/8配体来分离猪X/Y精子㊂1材料与方法1.1公猪、小鼠和牛精子以及公猪性腺组织的获取手握法采集的3头健康成年公猪精液和假阴道法采集的公牛精液装在保温杯中立即带回实验室,用计算机辅助精子分析仪(C A S A)进行常规质量评估,包括活力㊁活率和畸形率,合格的精子用于后续试验㊂公猪X精子和Y精子的分离在内蒙古赛科星家畜种业与繁育生物技术研究院进行㊂从附睾中采集健康成年小鼠精子,37ħ水浴锅中孵育20m i n 后,吸取上层精子用于后续试验㊂采集3头健康成年大白猪睾丸㊁附睾头㊁附睾体和附睾尾组织,使用预冷的P B S缓冲液冲洗,一部分用4%多聚甲醛固定,剩余部分分别装进冻存管中做好标记并立即置于液氮中冷冻,用于后续试验㊂1.2R N A提取与c D N A合成采用T R I z o l法提取公猪睾丸㊁附睾头㊁附睾体㊁附睾尾以及精子的R N A,通过N a n o d r o p2000检测R N A的纯度和浓度㊂然后,取1μg总R N A根据E v oM-M L V反转录试剂盒说明书合成c D N A用于后续试验㊂1.3精子D N A提取将含1000~2500个精子的精液在2000ˑg 条件下离心5m i n,弃上清,用5μL裂解液(200m m o l㊃L-1K O H,50m m o l㊃L-1D T T)重悬,并在P C R仪中65ħ孵育20m i n㊂加入5μL中和液(900m m o l㊃L-1T r i s-H C l,p H为8.3)终止反应,并用d d H2O稀释至40μL㊂1.4引物设计及q R T-P C R检测根据引物设计原则,用O l i g o7.0软件设计实时荧光定量P C R(q R T-P C R)引物(表1),由北京六合华大基因科技有限公司合成㊂q R T-P C R总反应体系为10μL:5μLP o w e r U p S Y B R G r e e n M a s t e r M i x,1μLc D N A,上游引物和下游引物各0.2μL, 3.6μLd d H2O㊂反应条件为95ħ10m i n;95ħ15s,60ħ20s,72ħ20s,共40个循环;72ħ7m i n㊂每个样本均设置3个生物学重复,用2-ΔΔC t 计算基因在不同样品间的相对表达量㊂表1引物信息T a b l e1P r i m e r s i n f o r m a t i o n引物名称P r i m e r sn a m e G e n B a n k序列登录号G e n B a n ka c c e s s i o nN o.引物序列(5'ң3')P r i m e r s s e q u e n c e退火温度/ħA n n e a l i n g t e m p e r a t u r eT L R7-F NM_001097434.1G T C A G T C T G G A T G C T C C G A A T G C62 T L R7-R A C T G G G T T T A A T C T G C T G C C T T C T G61 T L R8-F X M_021079509.1A C G C A A A G A C C A C C A C C A A C T T A G60 T L R8-R G A G C C A G G G C A G C C A A C A T A A C62 S R Y-F N C_010462.3T C A T A G C T C A A A C G A T G G A C G T G58 S R Y-R A C A C A A T G A A A G C G T T C A T G G G T C59 AM E L X-F N C_010461.5T C A T C A C C T G T C T C T A G A A G G T G G G62 AM E L X-R G T G G G G T T T G G A G A G C A A G A A G60β-A C T I N-F X M_021086047.1G T G T T G A A G G T C T C G A A C A T G A T59β-A C T I N-R C T G G C A C C A C A C C T T C T A C A A601.5石蜡包埋和组织切片采集的大白猪睾丸和附睾组织经过预冷的P B S 缓冲液冲洗干净后,立即用4%多聚甲醛进行固定12h以上,然后依次进行脱水㊁透明㊁浸蜡㊁包埋㊁切片㊁烘片㊂1.6免疫化学染色组织切片经过脱蜡和复水后,使用3%双氧水溶液于室温浸泡切片10m i n,蒸馏水冲洗;随后在柠檬酸盐抗原修复缓冲液中浸泡10m i n后再加热煮沸,待自然冷却至室温后,用P B S缓冲液在脱色摇床洗涤玻片3次,每次5m i n;使用免疫组化笔在组织周围画圈,将5%的B S A覆盖组织区域于室温封闭2h(以上均为免疫组织化学步骤)㊂精子经过P B S缓冲液洗涤两次后,取适量精子涂抹于载玻片2941Copyright©博看网. All Rights Reserved.4期吴昌华等:T o l l样受体7/8在公猪生殖系统中的表达及其配体对猪X/Y精子分选效果评价上并风干;使用免疫组化笔在精子样品周围画圈,将免疫荧光固定液覆盖精子样品区域于室温固定15m i n;然后吸去固定液,用P B S缓冲液在脱色摇床洗涤玻片3次,每次5m i n㊂T r i t o n X-100通透10m i n,按照上述方式洗涤玻片3次后,用5%的B S A室温封闭30m i n(以上均为细胞免疫荧光步骤)㊂将一抗A n t i-T L R7(B i o s s)和A n t i-T L R8(a b c a m)按照说明书推荐稀释比稀释后,滴加于精子上在湿盒内4ħ过夜孵育㊂吸去一抗并按照上述方式洗涤3次后,滴加对应的二抗并在湿盒内室温孵育1h(细胞免疫荧光在此步骤以及后续步骤均需避光)㊂吸去二抗并按照上述方式洗涤3次后,滴加D A P I染料,室温孵育5m i n㊂吸去染料并按照上述方式洗涤3次后,用抗荧光淬灭封片剂封片,用显微镜观察并拍照㊂参照张倩等[19]的方法,每种组织随机选取6张切片,使用I m a g e-P r o P l u s图像分析系统分析T L R7/8蛋白在睾丸㊁附睾头㊁附睾体和附睾尾中的平均光密度值㊂1.7R848孵育公猪精子新鲜的公猪精液经过C A S A评估质量合格后,用洗精液(0.1g B S A溶解于100μL的P B S缓冲液)洗涤两次(800r㊃m i n-1,3m i n),精子沉淀用1m L含不同浓度R848的精液分选液(葡萄糖37.15g㊃L-1,柠檬酸钠6g㊃L-1,E D T A1.25g㊃L-1,碳酸氢钠1.25g㊃L-1,氯化钾0.75g㊃L-1,超纯水1L)重悬,随后将精子置于5%C O2的37ħ细胞培养箱孵育2h㊂1.8精子活力测定吸取10μL待测精液滴加到37ħ预热的载玻片,使用C A S A分析精子的活力指标,每张玻片随机选择3个视野,总精子数大于1000,进行拍照分析㊂1.9数据统计所得到的数据用G r a p h P a dP r i s m9软件进行分析,精子性别比例数据进行t-检验,T L R7/8在组织中的表达水平数据用单因素方差分析并进行多重比较,结果用 m e a nʃS E M 表示,P<0.05表示差异显著㊂2结果2.1T L R7/8m R N A在公猪性腺和精子的表达模式T L R7/8的m R N A表达情况如图1所示, T L R7/8在猪的睾丸㊁附睾头㊁附睾体㊁附睾尾组织以及精子中均有表达,睾丸中T L R7m R N A表达量显著高于附睾组织(P<0.05),T L R8m R N A表达量在睾丸和附睾组织差异不显著(P>0.05)㊂A.T L R7的相对表达量;B.T L R8的相对表达量㊂不同字母表示差异显著(P<0.05),相同字母表示差异不显著(P>0.05),下同A.R e l a t i v ee x p r e s s i o no f T L R7m R N A;B.R e l a t i v ee x p r e s s i o no f T L R8m R N A.D i f f e r e n t l e t t e r sr e p r e s e n ts i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s(P<0.05),t h e s a m e l e t t e r r e p r e s e n t sn o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s(P>0.05),t h e s a m e a sb e l o w图1T L R7/8m R N A在公猪睾丸㊁附睾和精子中的表达水平F i g.1E x p r e s s i o n l e v e l s o f T L R7/8m R N Ai n t e s t i s,e p i d i d y m i s a n d s p e r mo f b o a r2.2T L R7/8蛋白在公猪性腺中的定位免疫组织化学检测结果如图2所示,在睾丸中,T L R7/8主要表达于生殖细胞中,包括精母细胞㊁圆形精子细胞和精子;在附睾头㊁体和尾组织中,T L R7/8主要在柱状细胞的微绒毛中表达㊂T L R7蛋白在睾丸中的表达水平显著高于附睾头㊁附睾体和附睾尾组织(P<0.05),而T L R8蛋白在上述组织中的表达无显著差异(P>0.05,图3)㊂3941Copyright©博看网. All Rights Reserved.畜 牧 兽 医 学 报54卷图2 T L R 7/8蛋白在睾丸和附睾中的表达模式(400ˑ)F i g .2 E x p r e s s i o n p a t t e r no fT L R 7/8p r o t e i n s i n t e s t i s a n d e p i d i d ym i s (400ˑ)A.T L R 7蛋白的表达水平;B .T L R 8蛋白的表达水平A.E x p r e s s i o n l e v e l o fT L R 7p r o t e i n ;B .E x pr e s s i o n l e v e l o fT L R 8p r o t e i n 图3 T L R 7/8蛋白在睾丸和附睾中的表达水平F i g .3 E x p r e s s i o n l e v e l s o fT L R 7/8p r o t e i n i n t e s t i s a n d e p i d i d ym i s 4941Copyright ©博看网. All Rights Reserved.4期吴昌华等:T o l l 样受体7/8在公猪生殖系统中的表达及其配体对猪X /Y 精子分选效果评价2.3 T L R 7在牛㊁小鼠和猪精子中的表达比较本研究对小鼠㊁牛和猪的精子进行免疫荧光染色,结果如图4所示,免疫荧光显示T L R 7蛋白在牛和小鼠的X 精子(黄色箭头标注)表达,在Y 精子(红色箭头标注)中不表达,T L R 7蛋白主要定位于X 精子的尾部前段(图4);在公猪的普通精子中,所有精子都出现阳性信号,各精子之间无荧光强弱差异,T L R 7蛋白主要在公猪精子头部表达,精子尾部表达较弱(图5A )㊂公猪X 精子和Y 精子中,T L R 7表达无显著差异(图5B ㊁5C )㊂A.小鼠精子;B .公牛精子㊂黄色箭头代表X 精子,红色箭头代表Y 精子A.M o u s e s p e r m ;B .B u l l s p e r m.Y e l l o wa r r o w s r e p r e s e n tXs p e r m ,r e da r r o w s r e p r e s e n tYs p e r m 图4 T L R 7在小鼠和牛精子中的定位F i g .4 L o c a l i z a t i o no fT L R 7i nm o u s e a n db o v i n e s pe rm A.未分选的精子;B .X 精子;C .Y 精子A.U n s o r t e d s p e r m ;B .Xs p e r m ;C .Ys p e r m 图5 T L R 7在公猪精子中的定位F i g .5 L o c a l i z a t i o no fT L R 7i nb o a r s pe r m 2.4 T L R 8在牛㊁小鼠和猪精子中的表达比较T L R 8蛋白的免疫荧光定位结果如图6所示,T L R 8蛋白在小鼠和牛的X 精子(黄色箭头标注)尾部表达,在Y 精子(红色箭头标注)中不表达;在公5941Copyright ©博看网. All Rights Reserved.畜 牧 兽 医 学 报54卷猪普通精子中无荧光强弱差异,主要表达在精子尾部(图7A )㊂公猪X 精子和Y 精子中,T L R 8表达无显著差异(图7B ㊁7C )㊂A.小鼠精子;B .公牛精子㊂黄色箭头代表X 精子,红色箭头代表Y 精子A.M o u s e s p e r m ;B .B u l l s p e r m.Y e l l o wa r r o w s r e p r e s e n tXs p e r m ,r e da r r o w s r e p r e s e n tYs p e r m 图6 T L R 8在小鼠和牛精子中的定位F i g .6 L o c a l i z a t i o no fT L R 8i nm o u s e a n db o v i n e s pe rm A.未分选的精子;B .X 精子;C .Y 精子A.U n s o r t e d s p e r m ;B .Xs p e r m ;C .Ys p e r m 图7 T L R 8在公猪精子中的定位F i g .7 L o c a l i z a t i o no fT L R 8i nb o a r s pe r m 2.5 R 848对公猪精子活力的影响不同浓度的R 848孵育精子结果如图8A 所示,精子活力随R 848添加量增加而逐渐降低㊂由于R 848添加浓度大于0.3μm o l ㊃L -1时,精子活力无明显变化,因此选择0.3μm o l ㊃L -1R 848孵育精子,并提取上层精子D N A ㊂针对X 染色体和Y 染色体特异序列基因AM E L X 和S R Y 设计引物,通过q R T -P C R 检测确定X 精子和Y 精子的比例㊂结果如图8B 所示,上层精子的X 精子占(46.49ʃ2.27)%,Y 精子占(53.51ʃ2.27)%,X 精子与Y6941Copyright ©博看网. All Rights Reserved.4期吴昌华等:T o l l 样受体7/8在公猪生殖系统中的表达及其配体对猪X /Y 精子分选效果评价精子比例无显著差异(P >0.05)㊂A.不同R 848添加量对精子活力的影响;B .添加0.3μm o l ㊃L -1R 848对上层精子性别比例的影响A.C h a n g e s o f s p e r m m o t i l i t y w i t hd i f f e r e n t a m o u n t s o fR 848a d d e d ;B .E f f e c t o f a d d i n g 0.3μm o l ㊃L -1o fR 848o n t h e s e x r a t i oo f u p p e r s pe r m a t o z o a 图8 R 848对精子活力及X /Y 精子分离的影响F i g .8 E f f e c t s o fR 848o n s p e r m m o t i l i t y a n dX /Ys p e r ms e pa r a t i o n 3 讨 论减数分裂完成后,在圆形精子细胞发生形态学变化而形成精子这一过程中,过渡蛋白开始出现并取代大部分的组蛋白,之后体积更小的鱼精蛋白出现并取代过渡蛋白,导致染色质高度浓缩,细胞核体积急剧缩小,精子的转录通道关闭,转录活性逐渐降低[20-21]㊂但是,并非所有转录通道就此关闭,越来越多的研究证实了精子R N A 的存在[22-23]㊂在本研究中,通过q R T -P C R 检测了T L R 7和T L R 8基因在睾丸㊁附睾以及精子中的转录水平,结果显示射出的精子中存在T L R 7/8的转录本㊂T L R 7的转录水平在睾丸中显著高于附睾组织,虽然T L R 8的转录水平在睾丸和附睾中无显著差异,但有递减的趋势㊂T L R 7/8在启动免疫反应中起着重要作用,并在巨噬细胞中表达水平较高[24-25]㊂有研究报道,附睾头㊁附睾体和附睾尾中的巨噬细胞数量依次递减[19],而巨噬细胞参与血-附睾屏障的构成,并且屏障作用从附睾头到附睾尾依次降低[26]㊂因此,T L R 7/8在附睾中表达趋势的变化可能与血-附睾屏障的作用有关㊂此外,有报道显示T L R 7/8在牦牛睾丸中表达水平较高,并推测其在抵御生殖系统感染过程中起重要作用[27]㊂本研究中,T L R 7在睾丸的表达水平显著高于附睾组织,推测其对睾丸的免疫系统有重要作用㊂T L R 7/8主要表达于心㊁脾㊁肺㊁淋巴结等组织以及各种免疫细胞中,如B 细胞㊁T 细胞和巨噬细胞等[28]㊂它们被报道主要与肿瘤㊁癌症的化学免疫治疗有关,而与精子功能相关的报道较少㊂2019年,U m e h a r a 等[15]发现,T L R 7/8在小鼠一半的精子中表达,并证实它们只在小鼠X 精子中表达,在Y 精子中不表达㊂T L R 7蛋白定位于小鼠X 精子尾部的前段和中段,T L R 8蛋白定位于小鼠X 精子尾部的前段㊂T L R 7和T L R 8蛋白在公牛X 精子均定位于精子的尾部[16]㊂近几年,虽然T L R 7/8在其他物种精子中的表达情况都相继被报道,并在分离X 精子和Y 精子上取得明显的效果,但T L R 7/8在公猪精子的表达情况还未知㊂本研究免疫荧光结果显示,T L R 7/8在小鼠和牛X 精子的尾部表达,在Y 精子中不表达,与前人报道类似[15-16]㊂T L R 7和T L R 8在公猪X 和Y 精子都有表达,荧光强弱无显著差异㊂有趣的是,T L R 7在公猪精子的头部表达较高,尾部表达非常低㊂在精子发生过程中,生殖细胞之间存在一种被称为细胞间桥的通讯通道,它能使精子之间彼此共享物质,包括R N A 和蛋白质,以此减小X 和Y 精子之间的差异,使得每个精子的成熟和功能基本相同[29-30]㊂本研究结果显示,T L R 7/8蛋白在两种性别精子中都有表达,说明在精子发生过程中,由X 染色体编码的T L R 7/8蛋白在两种性别精子中可能得到了共享,但这并不是所有物质都能得到共享[31]㊂猪精子的T L R 7/8蛋白表达模式与小鼠㊁牛精子存在着很大的差异,这可能是不同物种间的差异性导致同一蛋白表达模式差异的结果㊂精子主要通过氧化磷酸化和糖酵解两种途径来获得能量以保证正常功能的行使,如获能㊁顶体反应㊁受精以及鞭毛摆动等[32]㊂糖酵解途径的抑制可影响精子A T P 的产生,进而影响其活力㊂糖原合成酶激酶3α/β(G S K 3α/β)是T L R 7/8的下游通7941Copyright ©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷路[33],G S K3α/β的磷酸化能降低糖酵解途径的限速酶-己糖激酶的活性进而减少葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖和A T P的产生[15,34]㊂雷西莫特(R848)是T L R7/8受体的激活剂[35],U m e h a r a等[15-16]使用R848激活小鼠和牛X精子的T L R7/8蛋白,通过R848-T L R7/8-G S K3α/β-己糖激酶轴抑制糖酵解,降低X精子的A T P合成速率进而降低了其活力㊂本研究中,经R848孵育后精子的活力降低,上层两种性别精子的比例没有显著变化㊂最近关于猪X 和Y精子蛋白质组学的研究显示,在公猪的X/Y 精子差异蛋白中并未发现T L R7/8蛋白[36]㊂R848处理后的精子活力降低,可能是因为精子的糖酵解途径被抑制,产生的A T P减少而影响了精子的运动,而T L R7/8在猪的两种性别精子中都有表达,这可能使R848孵育后X/Y精子活力都受到影响而无法将其分离,这与免疫荧光显示T L R7/8在X/ Y精子中没有显著差异的结果相一致㊂4结论本研究发现,T L R7/8在公猪X/Y精子中的表达模式与小鼠和牛存在较大差异,并且在猪的X和Y精子间表达差异不显著㊂R848能降低公猪精子活力,但不能使X/Y精子分离,表明通过T L R7/8去分离猪X/Y精子的方法是不可行的,为后人通过其他途径开发分离猪X/Y精子的方法提供参考㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] O A K B E R G E F.D u r a t i o no fs p e r m a t o g e n e s i s i nt h em o u s ea n d t i m i n g o f s t a g e s o f t h e c y c l e o f t h es e m i n i f e r o u s e p i t h e l i u m[J].A mJA n a t,1956,99(3):507-516.[2] L E B L O N D C P,C L E R MO N T Y.D e f i n i t i o n o ft h es t a g e s o f t h ec y c l eo f t h es e m i n i f e r o u se p i t h e l i u mi nt h e r a t[J].A n nN YA c a dS c i,1952,55(4):548-573.[3] C U IK H,MA T T H E W SC D.Xl a r g e rt h a n Y[J].N a t u r e,1993,366(6451):117-118.[4]J O HN S O N L A,W E L C H G R.S e x p r e s e l e c t i o n:h i g h-s p e e d f l o wc y t o m e t r i c s o r t i n g o fXa n dYs p e r mf o rm a x i m u me f f i c i e n c y[J].T h e r i og e n o l o g y,1999,52(8):1323-1341.[5] E R I C S S O N R J,L A N G E V I N C N,N I S H I N O M.I s o l a t i o no ff r a c t i o n sr i c hi n h u m a n Y s p e r m[J].N a t u r e,1973,246(5433):421-424.[6] B O R OP,N A HA BC,MA D K A R A,e t a l.S e x i n g o fs e m e n i nb u l l s:a m i n i r e v i e w[J].I n tJ A p p lR e s,2016,2(4):460-462.[7]丁凤玲,上官爱哨,周扬,等.荷斯坦公牛X和Y精子核形态差异及其影响因素分析[J].畜牧兽医学报,2022,53(3):766-777.D I N G F L,S HA N G G U A N A S,Z H O U Y,e ta l.M o r p h o l o g i c a ld i f f e r e n c e so fX a n d Y s p e r m n u c l e ia n dt h e i ri n f l u e n c i n g f a c t o r si n H o l s t e i nb u l l s[J].A c t aV e t e r i n a r i a e tZ o o t e c h n i c aS i n i c a,2022,53(3):766-777.(i nC h i n e s e)[8] S O H Y Q S,A L FÖL D IJ,P Y N T I K O V A T,e ta l.S e q u e n c i n g t h e m o u s e Y c h r o m o s o m e r e v e a l sc o n v e r g e n t g e n e a c q u i s i t i o na n da m p l i f i c a t i o no nb o t hs e x c h r o m o s o m e s[J].C e l l,2014,159(4):800-813.[9] C H E N XL,Z HU H B,WU CJ,e t a l.I d e n t i f i c a t i o no fd i f f e r e n t i a l l y e x p r e s s e d p r o t e i n s b e t w e e n b u l l Xa n dYs p e r m a t o z o a[J].JP r o t e o m i c s,2012,77:59-67.[10] S H E N D,Z H O U C H,C A O M Y,e ta l.D i f f e r e n t i a lm e m b r a n e p r o t e i n p r o f i l ei nb o v i n eX-a n d Y-s p e r m[J].JP r o t e o m eR e s,2021,20(6):3031-3042.[11] S C O T TC,D ES O U Z AFF,A R I S T I Z A B A LV H V,e ta l.P r o t e o m i c p r of i l e o f s e x-s o r t e d b u l l s p e r me v a l u a t e db y S WA T H-M Sa n a l y s i s[J].A n i mR e p r o dS c i,2018,198:121-128.[12] L A X M I V A N D A N A R,P A T O L EC,S HA R MA TR,e ta l.D if f e r e n t i a l p r o t e i n s a s s o c i a t e d w i t h p l a s m am e m b r a n e i n X-a n d/o r Y-c h r o m o s o m e b e a r i n gs p e r m a t o z o ai n i n d i c u s c a t t l e[J].R e p r o d D o m e s tA n i m,2021,56(6):928-935.[13] C H OWD HU R Y M M R,X U LG,K O N G R,e t a l.I nv i t r o p r o d u c t i o n o fs e x p r e s e l e c t e d c a t t l e e m b r y o su s i n g am o n o c l o n a l a n t i b o d y r a i s e d a g a i n s t b u l l s p e r me p i t o p e s[J].A n i mR e p r o dS c i,2019,205:156-164.[14]刘志鹏.T L R7/8激动剂通过调节M D S C s向M1型巨噬细胞分化增强奥沙利铂在结直肠癌中的化疗疗效[D].广州:南方医科大学,2020.L I U Z P.T L R7/8a g o n i s te n h a n c e st h ee f f i c a c y o fo x a l i p l a t i n i n c o l o r e c t a l c a n c e r v i a d i r e c t i n g t h em y e l o i d-d e r i v e ds u p p r e s s o rc e l l st ot u m o r i c i d a l M1-m a c r o p h a g e s[D].G u a n g z h o u:S o u t h e r n M e d i c a lU n i v e r s i t y,2020.(i nC h i n e s e)[15] UM E HA R A T,T S U J I T A N,S H I MA D A M.A c t i v a t i o no fT o l l-l i k e r e c e p t o r7/8e n c o d e db y t h eXc h r o m o s o m e a l t e r s s p e r m m o t i l i t y a nd p r o v i de s an o v e l s i m p l et e c h n o l o g y f o rs e x i n g s p e r m[J].P L o SB i o l,2019,17(8):e3000398.[16] UM E HA R A T,T S U J I T A N,Z HU Z D,e ta l.As i m p l es p e r m-s e x i n g m e t h o dt h a ta c t i v a t e s T L R7/8o n X s p e r m f o rt h e e f f i c i e n t p r o d u c t i o n o fs e x e dm o u s eo rc a t t l ee m b r y o s[J].N a tP r o t o c,2020,158941Copyright©博看网. 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Toll样受体7在动脉粥样硬化中的研究进展
Toll样受体7在动脉粥样硬化中的研究进展
黄伟俊;黄裕立;胡允兆
【期刊名称】《中国动脉硬化杂志》
【年(卷),期】2015(23)7
【摘要】Toll样受体7(toll-like receptor-7,TLR7)是表达于哺乳动物细胞内的Ⅰ型跨膜蛋白受体,具有与其他TLR家族成员共同的结构特征及相似功能。
TLR7除了可通过MyD88信号依赖型通路调节病毒诱导的相关免疫反应外,也可调节巨噬细胞的自噬从而介导动脉粥样硬化的进展;各种配体及内源性分子,不仅可通过诱导Ⅰ型干扰素表达,也可作为自身抗原,激活T细胞、B细胞所介导的细胞、体液免疫反应,从而参与调控动脉粥样硬化的发生发展。
因此,对于TLR7在动脉粥样硬化的作用及机制研究必将是动脉粥样硬化防治一个重要的新起点。
【总页数】4页(P740-743)
【关键词】Toll样受体7;MyD88;动脉粥样硬化
【作者】黄伟俊;黄裕立;胡允兆
【作者单位】南方医科大学附属顺德第一人民医院心内科
【正文语种】中文
【中图分类】R54
【相关文献】
1.同型半胱氨酸、超敏C-反应蛋白、基质金属蛋白酶-9、溶血磷脂酸、Toll样受体4与动脉粥样硬化关系的研究进展 [J], 胡萍;牛建平
2.Toll样受体3在动脉粥样硬化中的作用研究进展 [J], 邹剑;刘培庆
3.TOLL样受体9在动脉粥样硬化中的作用研究进展 [J], 张伟;陈文利;周全;闫劝劝
4.Toll样受体在动脉粥样硬化中作用的研究进展 [J], 王杨;关秀茹
5.Toll样受体4在动脉粥样硬化中的作用研究进展 [J], 耿小勇;陈一文;秦明照因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Toll样受体7基因敲除对水疱性口炎病毒增殖的影响
Toll样受体7基因敲除对水疱性口炎病毒增殖的影响孟洁洁;宋月;樊文杰;杨乐;邢嘉友;王江;褚贝贝;杨国宇;王梦迪【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2022(49)6【摘要】【目的】探究敲除Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)基因对水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)复制的影响。
【方法】利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TLR7基因敲除的稳定猪肾上皮细胞(porcine renal epithelial cells,PK15)系。
通过构建pTLR7-sgRNA重组质粒并转染至HEK293T/17细胞,收获慢病毒并感染PK15细胞,经嘌呤霉素筛选后得到PK15-TLR7^(-/-)多克隆细胞,并在Western blotting鉴定后通过有限稀释法获得PK15-TLR7^(-/-)单克隆稳定细胞系。
为验证敲除TLR7基因稳定细胞系是否构建成功,分别利用光学显微镜和细胞毒性检测(cell counting kit 8,CCK-8)观察并检测PK15、PK15-TLR7^(-/-)细胞的形态与活力;利用荧光倒置显微镜和流式细胞术观察VSV-GFP感染PK15、PK15-TLR7^(-/-)细胞后病毒增殖情况;利用Western blotting和实时荧光定量PCR分别检测VSV-GFP感染PK15、PK15-TLR7^(-/-)细胞后GFP蛋白和VSV-N基因mRNA水平的表达情况;利用病毒滴度检测VSV-GFP感染PK15、PK15-TLR7^(-/-)细胞后子代病毒产生情况。
【结果】采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建的3种sgRNA均对TLR7进行了有效的编辑,其中sgRNA2的基因编辑效率最高,但敲除TLR7基因并不影响PK15细胞的形态及活力;当感染VSV-GFP后,通过荧光显微镜观察发现,荧光强度随着时间逐次增加,且PK15-TLR7^(-/-)细胞的GFP荧光强度强于PK15细胞。
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TOLL样受体7（TLR7）增殖分化信号通路论文
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【摘要】目的探讨TLR7的激活对HaCaT细胞增殖与分化的影响及其可能的机制。
方法培养HaCaT细胞，以不同剂量的TLR7配体Gardiquimod经不同的时间体外刺激HaCaT细胞，MTT及流式细胞术分析TLR7的激活对HaCaT细胞增殖的影响。
以不同剂量的TLR7配体Gardiquimod经不同的时间体外刺激HaCaT细胞，加入氯化钙诱导HaCaT细胞分化，Western-Blot分析HaCaT细胞的分化Markers（颗粒层：Keratin1，基底层：Keratin5和棘层：Involucrin）并以此分析TLR7的激活对氯化钙诱导HaCaT细胞分化的影响。
Western-blotting分析TLR7在HaCaT细胞中激活的信号通路
PI3K-AKT和RAS-MAPK等。
在TLR7配体Gardiquimod处理HaCaT细胞前1h，分别加入特异性阻断剂(PD98059及LY2940002)阻断TLR7配体Gardiquimod激活的相关信号通路，然后分析阻断剂对TLR7配体Gardiquimod调控HaCaT细胞增殖及分化影响，从而探讨PI3K-AKT 和RAS-MAPK信号通路在TLR7配体Gardiquimod对HaCaT细胞增殖及分化调控中的作用。
结果MTT及流式细胞分析结果显示：TLR7配体Gardiquimod促进HaCaT细胞增殖，且具有时间及剂量依赖性；TLR7配体Gardiquimod能够抑制氯化钙诱导的HaCaT细胞分化markers （Keratin1及Involucrin）的表达，存在时间效应及剂量效应；信号通路分析揭示TLR7配体Gardiquimod能够增加ERK1/2和MAPK的水平；阻断剂的研究发现TLR7配体Gardiquimod部分依赖PI3K-AKT
和RAS-MAPK途径发挥其促进增殖及抑制分化作用。
结论TLR7配体Gardiquimod部分依赖PI3K-AKT和RAS-MAPK途径发挥其促进增殖及抑制分化作用。
【关键词】HaCaT细胞；TOLL样受体7（TLR7）；增殖；分化；信号通路；
【篇名】TOLL样受体7（TLR7）激活对HaCaT细胞增殖和分化的影响
【目录】TOLL样受体7（TLR7）激活对HaCaT细胞增殖和分化的影响英文缩略词表5-8中文摘要
8-10Abstract10-11引言12-16材料与方法
16-40结果40-49讨论49-51结论51后续工作51-52参考文献52-56附录56-57致谢57-58综述 TOLL 样受体 7（TLR7）的研究进展58-67 1 TOLL 样受体的概念和种类59-61 2 TOLL 样受体 7（TLR7）的结构61 3 TOLL 样受体 7（TLR7）的配体及激活途径
61-64 4 TOLL 样受体 7（TLR7）与细胞增殖和分化的关系
64 5 TOLL 样受体 7（TLR7）与疾病的关系64-65参考文献65-67。