关于动物取血问题

1、关于小鼠血液量的问题：

小鼠循环血量占体重的6%，或50-70ml/kg，采血占全血量的10%不会对机体造成严重的不良影响。3-4周后可以重新采集一次。特别注意的是：老年小鼠血量降低。疾病会加重不良反应，所以必须考虑这些影响因素。采血后应补充响应体积的液体，如果需要很短时间反复采血，比如每天一次，每次的采血量不应超过全血的1%。

2、关于取血方法的问题：

（1）尾尖取血：当所需血量很少时采用本法。固定动物并历出鼠尾，将鼠尾在45℃温水中浸泡数分钟，也可用二甲苯等化学药物涂擦，使局新血管扩张。将鼠尾擦干，剪去尾尖，血自尾尖流出，让血液滴入盛器或直接用移液器吸取。如需间隔一定时间，多次采取鼠尾尖部血液，每次采血时，将鼠尾剪去很小一段，取血后，先用棉球压迫止血并立即用6％液体火棉胶涂于尾巴伤口处，使伤口外结一层火棉胶薄膜，保护伤口。也可采用切割尾静脉的方法采血，三根尾势脉可交替切割，并自尾尖向尾根方向切割，每次可取0.2～0.3ml血，切割后用棉球压迫止血。这种采血方法在大鼠进行较好，可以较长的间隔时间连续取血，进行血常规检查。

（2）眼眶后静脉丛取血：当需中等量的血液，而又需避免动物死亡时采用此法。用左手固定鼠，尽量捏紧头部皮肤，使头固定，并轻轻向下压迫颈部两侧，引起头部静脉血液回流困难，使眼球充分外突（示眼眶后静脉丛充血），右手持毛细玻璃管，沿内眦眼眶后壁向喉头方向旋转刺入。刺入深度小鼠2～3mm，大鼠4～5mm。当感到有阻力时再稍后退，保持水平位，稍加吸引，由于血压的关系，血液即流人玻璃管中。得到所需的血量后，拨出毛细管。若手法恰当，小鼠约可采血0.2～0.3ml，大鼠约可采血0.4～0.6ml。

（3）断头取血：当需要较大量的血液，而又不需继续保存动物生命时采用此法。左手捉持动物，使其头略向下倾，右手持剪刀猛力剪掉鼠头，让血液滴入盛器。小鼠可采血0.8～1.0ml，大鼠可采用5～8ml。

（4）眶动脉和眶静脉取血：此法既能采取较大量的血液，又可避免断头取血法中因组织液的混入导致溶血的现象，现常取代断头取血法。先使动物眼球突出充血后，以弯头眼科镊迅速钳取眼球，并将鼠倒置，头向下，眼眶内很快流出血液，让血液滴入盛器，直至不流为止。此法由于取血过程中动物未死，心脏不断在跳动，因此取血量比断头法多，一般可取鼠体重4～5％的血液量，是一种较好的取血方法。

（5）心脏取血：动物仰卧固定在固定板上，剪去心前区部位的被毛，用碘酒酒精消毒皮肤。在左侧第3～4肋间，用左手食指摸到心搏处，右手取连有4～5号针头的注射器，选择心搏最强处穿刺，当针刺入心脏时，血液由于心脏跳动的力量自动进人注射器。此法要求实验者掌握以下要点：要迅速而直接插入心脏，否则，心脏将从针尖处滑脱；如第一次没刺准，将针头抽出重刺，不要在心脏周围乱探，以免损伤心、肺；要缓慢而稳定的抽吸，否则，太多的真空反而使心脏塌陷。若不需保留动物生命时，也可麻醉后切开动物胸部，将注射器直接刺人心脏抽吸血液。

（6）大血管取血：大、小鼠还可从颈动、静脉，股动、静脉和腋下动、静脉取血，在这些部位取血均需麻醉后固定动物，然后作动、静脉分离手术，使其暴露清楚后，用注射器沿大血管平行刺入（或直接用剪刀剪断大血管），抽取所需血量。切断动脉时，要防止血液喷溅。

3、关于抗凝剂的问题

取血清不用抗凝；若取血浆则用抗凝剂采血管（肝素按1mg等于100个国际单位，10个国际单位能抗凝1ml血液计，肝素的抗凝血作用很强，纯的肝素10mg能抗凝100ml血液。一般可配成1%肝素生理盐水溶液，取0.1ml加入试管内，加热80℃烘干，每管能使5～10ml血液不凝固。兔10mg·kg-1。而且这也是动物实验最常用的抗凝方法）。

4、关于血浆、血清制备的问题

血浆：抗凝血静置后红细胞开始沉降，血浆占3/5，半透明金黄色。下层红细胞2/5，暗红色。红细胞上层是白细胞和血小板，灰色薄层。分离方法：抗凝血4℃ 12h自然分离，或3000rpm/min 5-10min离心加速分离后，吸取上层。由采血6h内从全血分离的血浆低于-18℃保存6个月。

血清：静置2-4小时（4℃过夜），待血浆凝固后，血清析出，再3000转离心10分钟吸取血清（3500r，15min；5000r，10min；5000r，10min）。血液置室温中凝固1h，然后置4度过夜，使血块收缩。将血块自容器壁分离，将血清全部倾入离心管，4℃ 2500rpm离心血块30min，取上清与前面血清混合，4℃ 1500rpm离心全部血清部分，分装－20或－70度保存。但鸡血清不宜冻存。大鼠和小鼠的抗体与其它动物比较不稳定，因此血液凝固后立即分离。如果需要加叠氮钠防腐，应加至0.02％。将抗体分装于多个离心管，对于血清，每管适宜容量是100～500微升。（总结：最好离心2次，血清比较纯。要用粗针头以免溶血。放置37℃或4℃待凝块收缩。前者迅速，但得血清较少；后者时间长，有时还会出现溶血，但获得血清多，而且效价不会下跌）。

5、关于血清保存的问题

1）4摄氏度保存。用此法可以存放3个月到半年。效价高时一年之内不影响使用。将抗血清除菌后用液体状态保存与普通冰箱。保存时要加入0.01%硫柳汞或0.1%的叠氮钠防腐，若加入半量的甘油则保存期可延长。

2）低温保存。放在-20至-40摄氏度，五年之内效价不会有明显降低。切勿反复冻融。

3）冰冻干燥。制品内水分不高于0.2，一般在冰箱中保存5-10年，效价不会明显降低

4）解冻时，逐级解冻。