_霉菌和酵母计数
霉菌和酵母菌计数的注意事项
霉菌和酵母菌计数的注意事项1. 在进行霉菌和酵母菌计数时，确保实验室环境干净整洁，避免外部细菌的污染。
2. 使用适当的培养基进行霉菌和酵母菌计数，以确保得到准确的结果。
3. 对于悬浮在液体中的霉菌和酵母菌，必须充分混合样品以保证样品的均匀性。
4. 采用适当的离心机参数对悬浮在液体中的霉菌和酵母菌进行沉淀，以便于后续的计数和分析。
5. 在进行霉菌和酵母菌计数时，需要对悬液进行适当的稀释以避免高浓度下产生过多的交叉效应。
6. 霉菌和酵母菌计数前要进行质量控制，确保培养基和其他实验条件符合标准。
7. 在进行霉菌和酵母菌计数时，要遵循标准的微生物计数方法和技术，如平板计数法或膜过滤法等。
8. 经常进行实验室设备的维护和保养，确保设备的准确性和可靠性。
9. 实验人员需要接受相关的培训和教育，熟悉霉菌和酵母菌计数的方法和技术，以确保实验的准确性。
10. 实验室中应有标准操作程序（SOP）来规范霉菌和酵母菌计数的步骤，确保每个实验的一致性和准确性。
11. 霉菌和酵母菌计数应该在合适的温度和湿度条件下进行，以模拟真实环境中的生长条件。
12. 在进行霉菌和酵母菌计数前，对样品进行适当的处理和制备，以确保样品的完整性和可测性。
13. 霉菌和酵母菌计数要注意避免阳光直射，避免对微生物产生影响。
14. 在进行霉菌和酵母菌计数时，及时记录实验数据并进行数据分析，以便对结果进行验证和解释。
15. 实验过程中要小心操作，避免对实验人员和环境造成交叉污染。
16. 采用适当的培养基和生长条件来促进霉菌和酵母菌的生长，以便进行可靠的计数。
17. 霉菌和酵母菌计数时，注意样品的来源和保存条件，避免因为样品质量问题造成误差。
18. 在霉菌和酵母菌计数前进行适当的预处理，如破碎细胞壁、杀菌等，以确保样品中微生物的完整性。
19. 实验室中应建立完善的实验记录和档案，便于追溯实验过程和结果。
20. 实验室应遵循相关的卫生和安全标准，确保实验操作对实验人员和环境无害。
GB 4789.15霉菌和酵母计数
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霉菌和酵母的基本特性
相对于低等的细菌来说，霉菌 和酵母生长缓慢，竞争能力较弱， 故霉菌和酵母常在不利于细菌生长 繁殖的环境中形成优势菌群。由于 霉菌和酵母的细胞较大，新陈代谢 能力强，故10２～10４个酵母即可引 起一克食物的变质，而细菌则需要 100倍于此数的细胞。
6.1 计算两个 平板菌落数的 平均值，再将 平均值乘以相 应稀释倍数计 算。
6.6 报告：每克(或 毫升)食品所含霉
菌和酵母数以 cfu/g(mL)表示。
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6 结果与报告
6.1.2 若所有平板
6.6 报告：每克
6.3 取1 mL1:10稀释 液注入含有9 mL灭
菌水的试管中，另 换一支1 mL灭菌吸 管吹吸5次，此液为 1:100稀释液。
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5 操作步骤
5.1 样品的稀释
5.1.4 按5.1.3操作程 序，制备10倍系列稀 释样品匀液。每递增 稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管。
6.5 计算方法：通常选择 菌落数在10～150之间的 平皿进行计数，同稀释 度的2个平皿的菌落平均 数乘以稀释倍数，即为 每克(或毫升)检样中所含 霉菌和酵母数。稀释度 选择及菌落报告方式可 参考GB/T 4789.2。
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后开始观察，共培 养观察5 d。
食品中霉菌、酵母菌计数PPT
酵母菌污染可能导致食品发酵、膨胀 等不良后果，影响食品的品质和安全 性。
霉菌污染可能导致食品腐败变质，产 生有毒代谢产物，如黄曲霉素等，对 人体健康造成危害。
结果与食品保质期的关系
霉菌、酵母菌计数结果在一定程度上可 以反映食品的保质期。一般来说，计数
结果越低，食品的保质期越长。
霉菌和酵母菌的生长繁殖会导致食品腐 败变质，缩短食品的保质期。因此，通 过控制霉菌、酵母菌计数可以有效延长
计数方法的局限性
不同食品的霉菌、酵母菌计数方法可能存在差异，导致计数结果不 一致。
解决方案
标准化计数方法
制定统一的霉菌、酵母菌计数 标准，规范计数流程，提高计
数的准确性和可靠性。
培训专业人员
对从事食品微生物检测的人员 进行专业培训，提高他们的技 术水平，确保计数的准确性。
使用先进仪器
采用自动化、智能化的微生物 检测仪器，减少人为误差，提 高计数的效率和准确性。
对于霉菌计数，如果结果高于限量标准，可能说明食品已经受到霉菌污染，存在食 品安全风险。
对于酵母菌计数，如果结果高于限量标准，可能说明食品已经受到酵母菌污染，可 能影响食品的感官品质和保质期。
结果与食品安全的关系
霉菌、酵母菌计数结果与食品安全密 切相关。如果计数结果超标，可能意 味着食品已经受到有害微生物的污染， 可能引发食品安全事故。
02
霉菌、酵母菌计数方法
培养基选择
培养基类型
根据食品种类和检测目的选择适 宜的培养基，常用培养基有沙氏 葡萄糖琼脂（SDA）、孟加拉红
培养基等。
培养基成分
培养基应含有霉菌、酵母菌生长所 需的营养成分，如碳源、氮源、维 生素等，以保证菌种的正常生长。
培养基质量
霉菌与酵母菌计数方法(2015版药典)
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液得制备与使用(以白色念珠菌为示例)白色念珠菌(0)代↓传代培养↓实验菌液得制备:沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基,培养温度20～２5℃,培养时间2~3天↓计数培养基适用性检查:胰酪大豆胨琼脂培养基,培养温度３0～3５℃,培养时间不超过5天,接种量不大于10０cｆu↓计数方法适用性试验:胰酪大豆胨琼脂培养基(ＭPＮ法不适用),培养温度３０～３5℃,培养时间不超过５天,接种量不大于10０cfu 注:当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌与酵母菌总数时,应进行培养基适用性检查,检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基1.１菌种试验用菌株得传代次数不得超过５代(从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性。
1。
2菌液制备(按表1规定程序培养各试验菌株)取白色念珠菌得新鲜培养物↓用pH7、0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液制成适宜浓度得菌悬液取黑曲霉得新鲜培养物↓加入3～５ｍｌ含0.０５%聚山梨酯80得pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱↓采用适宜得方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含0。
05％聚山梨酯80得pＨ7.０无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0。
９%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度得黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置,应在2小时内使用;若保存在２~8℃,可在24小时内使用、稳定得黑曲霉孢子悬液可保存在2~８℃,在验证过得贮存期内使用、1。
３阴性对照为确认试验条件就是否符合要求,应进行阴性对照试验,阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长,应进行偏差调查、2、培养基适用性检查按表1规定,接种不大于100cｆu得菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表１规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时,用相应得对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上得菌落平均数与对照培养基上得菌落平均数得比值应在0。
霉菌和酵母菌计数
— 1—
• 样品的制备
检
1.固体和半固体样品的制备：
测
称取25 g样品,加人225 mL无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液),
方
充分振摇,或用拍击式均质器拍打1 min-2min，制成1 : 10的样品匀液。
法
— 1—
• 样品的制备
检
2.液体样品的制备：
测
以无菌吸管吸取25 mL样品至盛有225 mL无茵稀释液(蒸馏水或生理盐水
方
或磷酸盐缓冲液)的适宜容器内(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)
法
或无菌均质袋中,充分振摇或用拍击式均质器拍打1 min-2 min,制成1-
10的样品匀液。
— 1—
• 接种及培养
检
1.系列稀释：
测
取1 mL 1: 10样品匀液注人含有9mL无菌稀
25ml
1ml
方
释液的试管中,另换一支1mL无菌吸管反复吹
告
和酵母。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌
落蔓延。
— 1—
• 结果报告
① 计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值,
计
再将平均值乘以相应稀释倍数。
数 报
② 若有两个稀释度平板上菌落数均在10 CFU-
告
150 CFU之间,则按照GB 4789.2的相应规定进行
计算。
③若所有平板上菌落数均大于150 CFU,则对稀释
方 法
倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1 mL样品
匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1 mL无菌稀释
液加人2个无菌平皿作空白对照。及时将20 mL-25
mL冷却至46 ℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼
脂(可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温)倾注
霉菌和酵母菌计数的注意事项
霉菌和酵母菌计数的注意事项进行霉菌和酵母菌的计数是在微生物学、食品工业和制药等领域中常见的实验操作。
以下是在进行这类计数时需要注意的事项：1.标本采集：•标本采集的过程需要注意采集的样本的代表性，以确保实验结果具有可靠性。
采样器具和采样手法也应经过消毒，以防止外源微生物的污染。
2.实验室环境控制：•实验室空气和工作台表面应该保持清洁，以防止实验样品受到外源污染。
使用层流罩或生物安全柜可以降低空气中微生物的污染。
3.消毒和灭菌：•所使用的培养基、培养器皿和仪器设备需要经过严格的消毒和灭菌处理，以防止实验中的交叉污染。
4.菌种的选择：•选择适当的霉菌和酵母菌菌种用于实验。
确保所选的菌种与实验目的一致，并且经过适当的质量控制。
5.菌落计数方法：•使用适当的计数方法，如涂布法、滤膜法等，以确保准确可靠的计数结果。
根据实验的需要，可以选择不同的计数方法。
6.培养条件：•控制培养条件，包括温度、湿度、pH等，以促进霉菌和酵母菌的生长。
这可以通过使用恒温箱、培养箱等设备来实现。
7.实验时间：•在培养过程中，确定合适的培养时间以确保菌落充分生长。
同时，注意不要过度培养，以防止菌落过于密集。
8.质量控制：•进行质量控制实验，包括使用标准菌株进行验证实验，以确保实验的可靠性和重复性。
9.记录和分析：•记录实验的详细过程，包括样品信息、培养条件、计数结果等。
进行统计学分析以获取可靠的数据。
通过严格控制这些因素，可以确保霉菌和酵母菌计数实验的可靠性和准确性，从而为相关领域的研究和应用提供可信赖的数据。
霉菌和酵母计数的流程
霉菌和酵母计数的流程一、准备工作。
咱得先把要用的东西都准备好呀。
像培养皿，这个可不能少，就像是霉菌和酵母的小房子一样。
还有培养基，这可是它们的食物来源呢，得按照正确的配方去调配。
比如说马铃薯葡萄糖琼脂培养基就很常用，调配的时候得小心翼翼的，各种成分的量都要精准，就像做饭放调料一样，少一点多一点味道就不对啦。
另外，还需要准备接种环或者移液器之类的工具，这些就像是小助手，能帮助我们把要检测的样品放到合适的地方。
二、样品采集。
这一步也很关键哦。
样品的来源可就多啦，可能是食物，像面包呀、果酱之类的；也可能是环境中的一些东西。
如果是从食物里采样品，要注意取有代表性的部分呢。
不能只取表面看起来坏的地方，要从不同的部位都取一点，这样才能准确知道整个食物里霉菌和酵母的数量。
要是从环境中采，像空气里的话，可能要用专门的空气采样器，感觉就像捕捉小幽灵一样，把那些看不见的霉菌和酵母抓住放到我们的检测体系里。
三、样品处理。
采集到样品之后，就到处理这一步啦。
如果是固体样品，可能需要先把它弄碎，弄成均匀的小颗粒。
就像把一大块饼干掰成小碎块一样。
然后呢，要进行稀释，这个稀释可重要啦。
因为如果不稀释的话，霉菌和酵母太多了，长出来就会密密麻麻的，根本数不清。
一般会用生理盐水或者磷酸盐缓冲液来稀释，就像给它们换个适合居住的环境一样。
要按照一定的比例来稀释，比如说1:10、1:100这样的比例，一步一步来，直到得到合适浓度的样品液。
四、接种。
现在就可以把处理好的样品液接种到培养皿里啦。
把培养基先在培养皿里铺好，就像铺好柔软的小床一样。
然后用接种环或者移液器吸取一定量的样品液，轻轻滴在培养基上。
要小心哦，不能让液体流得到处都是，不然就乱套啦。
接种的量也要控制好，太多了会让霉菌和酵母长得太拥挤，太少了又可能看不到它们的身影。
五、培养。
接种好之后，就把培养皿放到合适的环境里去培养啦。
霉菌和酵母比较喜欢温暖湿润的环境，一般温度会设定在25 - 28摄氏度左右，湿度也要适中。
霉菌与酵母菌计数方法(2015版药典)
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液的制备和使用（以白色念珠菌为示例）白色念珠菌（0）代↓传代培养↓实验菌液的制备：沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度20～25℃，培养时间2～3天↓计数培养基适用性检查：胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu↓计数方法适用性试验：胰酪大豆胨琼脂培养基（MPN法不适用），培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu 注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基适用性检查，检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基1.1菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
1.2菌液制备（按表1规定程序培养各试验菌株）取白色念珠菌的新鲜培养物↓用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液取黑曲霉的新鲜培养物↓加入3～5ml含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱↓采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
1.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。
2.培养基适用性检查按表1规定，接种不大于100cfu的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表1规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好3计数方法适用性试验供试液制备：水不溶性非油脂类供试品↓取供试品，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基↓制备成1:10供试液。
《霉菌和酵母计数》课件
在生物领域中，霉菌和酵母起着重要作用。本课件将介绍计数方法的基本原 理和实验步骤，以及在工程和医学中的应用。
计数方法
平板计数法
通过将微生物样品均匀涂布 在琼脂平板上，结合菌落计 数原理，用于测定微生物的 数量。
筛选计数法
通过过滤和筛选微生物样品， 用显微镜观察计数，可用于 测定微生物的浓度。
2
对参与学习者的要求
说明参与学习此课程的学习者应具备的知识和技能，以及学习的态度和动力。
3
后续学习建议及扩展阅读资料
提供参与学习者继续学习的建议和推荐扩展阅读资料，以进一步拓展知识。
浓度计算公式
根据样品中微生物的计数结 果，进行浓度计算，以了解 微生物的分布情况。
现场实验
实验设备及 时所需要使用的实验设备和试剂。
详细阐述进行霉菌和酵母计数实 验的步骤及操作指南。
数据处理及分析
介绍如何处理实验数据并进行统 计和分析，以得出可信的结果。
结论及应用
1 结论简述
总结霉菌和酵母计数实验 的结果，并提出对微生物 数量的评估和判断。
2 工程及医学中的应用 3 发现与尚未解决的问
题
探讨霉菌和酵母计数在工
程和医学领域中的应用，
讨论与霉菌和酵母计数相
如食品工业和制药工业等。
关的挑战和待解决的问题，
为未来的研究提供方向。
总结
1
概括本课程的重点
对本课程的核心内容进行概括，强调学习目标和要点。
_霉菌和酵母计数
项目三食品中霉菌和酵母菌计数一、实验目的1.掌握测定霉菌和酵母菌的方法和技能2.熟练无菌操作技术。
二、实验原理酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。
霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。
霉菌和酵母也可造成中腐败变质。
由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现，这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。
由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素。
霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。
例如，酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。
因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。
目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。
我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。
霉菌和酵母菌的测定是指食品检样经过处理，在一定条件培养后，所得1g或1ml检样中霉菌和酵母菌菌落数。
三、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：冰箱恒温培养箱均质器恒温振荡器显微镜电子天平无菌锥形瓶无菌广口瓶无菌吸管无菌平皿无菌试管无菌牛皮纸袋、塑料袋培养基和试剂马铃薯葡萄糖琼脂培养基孟加拉红培养基：４检验程序霉菌和酵母计数的检验程序见图１。
５操作步骤５．１样品的稀释５．１．１固体和半固体样品：称取２５ｇ样品至盛有２２５ｍＬ灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为１∶１０稀释液。
或放入盛有２２５ｍＬ无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打２ｍｉｎ，制成１∶１０的样品匀液。
５．１．２液体样品：以无菌吸管吸取２５ｍＬ样品至盛有２２５ｍＬ无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成１∶１０的样品匀液。
霉菌和酵母计数
项目三食品中霉菌和酵母菌计数一、实验目的1.掌握测定霉菌和酵母菌的方法和技能2.熟练无菌操作技术。
二、实验原理酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。
霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。
霉菌和酵母也可造成中腐败变质。
由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现，这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。
由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素。
霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。
例如，酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。
因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。
目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。
我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。
霉菌和酵母菌的测定是指食品检样经过处理，在一定条件培养后，所得1g或1ml检样中霉菌和酵母菌菌落数。
三、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：冰箱1 / 7恒温培养箱均质器恒温振荡器xx电子天平无菌锥形瓶无菌xx瓶无菌吸管无菌平皿无菌试管无菌牛皮纸袋、塑料袋培养基和试剂葡萄糖xx培养基马铃薯xx红培养基：４检验程序霉菌和酵母计数的检验程序见图１。
５操作步骤５．１样品的稀释５．１．１固体和半固体样品：称取２５ｇ样品至盛有２２５ｍＬ灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为１∶１０2 / 7稀释液。
或放入盛有２２５ｍＬ无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器∶１０的样品拍打２ｍｉｎ，制成１匀液。
５．１．２液体样品：以无菌吸管吸取２５ｍＬ样品至盛有２２５ｍＬ无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适１０的样品匀液。
霉菌和酵母计数
霉菌和酵母计数1、原理、定义、目的：霉菌和酵母数的测定是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所的霉菌和酵母菌落数（粮食样品是指1g粮食表面的霉菌总数）。
霉菌和酵母数主要作为判定食品被污染程度的标志，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
本方法适用于所有食品。
2.仪器设备与器具：参照大肠杆菌群的检测标准。
3.试剂：3.1 霉菌和酵母菌培养基的配置：3.1.1 称取30g虎虹琼脂培养基加入蒸馏水1000ml，摇动灭菌。
3.1.2 以棉塞或硅胶塞，牛皮纸包封好瓶口，3.1.3 置于高压杀菌釜内，以116℃30分钟灭菌。
3.1.4 取出培养基自然冷却至不烫手后（约45℃）备用。
3.2稀释液：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，高压灭菌121℃、15分钟。
4.测定方法：4.1.检样稀释及培养：4.1.1以无菌操作将检样25g（ml）放于含有225 ml灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预放置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳体内，经充分震摇或研磨成1：10的均匀稀释液。
4.1.2用1 ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1 ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，用定量加液器在试管内鼓气三至四次使其混合均匀，作成1：100的稀释液。
4.1.3另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液，每递增一次，换用一支1 ml灭菌吸管。
4.1.4根据食品卫生标准要求或对污染情况的估计，选取三个适宜稀释度，分别在10倍递增的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1 ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做二个平皿。
4.1.5培养皿上分别注明样品编号，稀释度等。
4.1.6稀释液移入平皿后，注入冷却到45℃虎红琼脂约15 ml，水平徐徐震摇，使培养基检液混合均匀后，同时将虎红琼脂培养基倾入加有1 ml稀释液的灭菌平皿内做空白对照。
4.1.7待虎红琼脂凝固后，翻转平板，置25至28℃培养箱中培养3天后观察，共培养观察五天。
霉菌和酵母计数检验原始记录(平板计数法)
霉菌和酵母计数检验原始记录（平板计数法）
1.菌落数按“四舍五入”原则修约。
菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10T00之间时，采用两位有效数字报告。
2.菌落数大于或等于100时，前第3位数字采用“四舍五人”原则修约后，取前2位数字，后面用。
代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有救数字。
3.若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。
4.称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/m1.为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。
报告人报告日期复核人复核日期。
_霉菌和酵母计数
４检验程序
霉菌和酵母计数的检验程序见图１。
５操作步骤
５．１样品的稀释
５．１．１固体和半固体样品：
称取２５ｇ样品至盛有２２５ｍＬ灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为１∶１０
稀释液。或放入盛有２２５ｍＬ无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打２ｍｉｎ，制成１∶１０的样品
匀液。
５．１．２液体样品：
项目三食品中霉菌和酵母菌计数
一、实验目的
1.掌握测定霉菌和酵母菌的方法和技能
2.熟练无菌操作技术。
Байду номын сангаас二、实验原理
酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。
霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。
霉菌和酵母也可造成中腐败变质。由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现，这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素。霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。例如，酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。
其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。
６．２．３称重取样以ＣＦＵ／ｇ为单位报告，体积取样以ＣＦＵ／ｍＬ为单位报告，报告或分别报告霉菌和／或
霉菌和酵母计数
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，通系电1，力过根保管据护线生高0不产中仅工资2艺料22高试2可中卷以资配解料置决试技吊卷术顶要是层求指配，机置对组不电在规气进范设行高备继中进电资行保料空护试载高卷与中问带资题负料2荷试2，下卷而高总且中体可资配保料置障试时2卷，32调需3各控要类试在管验最路；大习对限题设度到备内位进来。行确在调保管整机路使组敷其高设在中过正资程常料1工试中况卷，下安要与全加过，强度并看工且25作尽52下可22都能护可地1关以缩于正小管常故路工障高作高中；中资对资料于料试继试卷电卷连保破接护坏管进范口行围处整，理核或高对者中定对资值某料，些试审异卷核常弯与高扁校中度对资固图料定纸试盒，卷位编工置写况.复进保杂行护设自层备动防与处腐装理跨置，接高尤地中其线资要弯料避曲试免半卷错径调误标试高方中等案资，，料要编试求5写、卷技重电保术要气护交设设装底备备置。4高调、动管中试电作线资高气，敷料中课并设3试资件且、技卷料中拒管术试试调绝路中验卷试动敷包方技作设含案术，技线以来术槽及避、系免管统不架启必等动要多方高项案中方；资式对料，整试为套卷解启突决动然高过停中程机语中。文高因电中此气资，课料电件试力中卷高管电中壁气资薄设料、备试接进卷口行保不调护严试装等工置问作调题并试，且技合进术理行，利过要用关求管运电线行力敷高保设中护技资装术料置。试做线卷到缆技准敷术确设指灵原导活则。。：对对在于于分调差线试动盒过保处程护，中装当高置不中高同资中电料资压试料回卷试路技卷交术调叉问试时题技，，术应作是采为指用调发金试电属人机隔员一板，变进需压行要器隔在组开事在处前发理掌生；握内同图部一纸故线资障槽料时内、，设需强备要电制进回造行路厂外须家部同出电时具源切高高断中中习资资题料料电试试源卷卷，试切线验除缆报从敷告而设与采完相用毕关高，技中要术资进资料行料试检，卷查并主和且要检了保测解护处现装理场置。设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
细菌霉菌和酵母菌计数
细菌霉菌和酵母菌计数1 简述细菌、霉菌和酵母菌计数是检测非规定灭菌制剂及原、辅料受微生物污染程度的方法。
也是评价生产企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。
细菌、霉菌和酵母菌计数除另有外均采用平板菌落计数法，这是活菌计数的方法之一，也是目前国际上常用的一种方法。
以琼脂平板上的细菌、霉菌和酵母菌形成的一个独立可见的菌落为计数依据。
该法测定结果只反映在规定条件下所生长的细菌（嗜中温、需氧和兼性厌氧菌）、霉菌和酵母菌的菌落数，不包括对营养、氧气、温度、pH 和其他因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。
一个细菌、霉菌和酵母菌的菌落均可由一个或多个菌细胞生长繁殖而成。
因此供试品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单位数（colony forming unity，cfu）不应理解为细菌、霉菌和酵母菌的个数。
在进行本法测定时，必须严格按本法所规定的条件操作，以免产生实验误差。
2 设备、仪器2.1 设备2.1.1 无菌室微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。
2.1.1.1 结构和要求见无菌检查法2.1.1.2 操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间的净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9pa。
操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。
2.1.1.3 缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。
缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。
2.1.1.4 洁净级别及检查方法通常采用尘粒数及浮游菌数或沉降菌数测定法（参照《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌、和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
洁净级别尘粒数/m3 浮游菌（个）/ m3沉降菌（个）/（∮90mm·0.5h）微粒直径≥0.5µm 微粒直径≥5µm100级10000级100000级≤3，500≤350，000≤3，500，000≤0≤2000≤20，000≤5≤100≤500≤1≤3≤10沉降菌数测定（Ⅱ法）无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～35℃预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方式（或经传递箱）移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30min后将盖盖上，在30～35℃培养箱内倒置培养48h，取出检查。
霉菌与酵母菌计数方法(2015版药典)
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液得制备与使用(以白色念珠菌为示例)白色念珠菌(0)代↓传代培养↓实验菌液得制备:沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基,培养温度20～２5℃,培养时间2~3天↓计数培养基适用性检查:胰酪大豆胨琼脂培养基,培养温度３0～3５℃,培养时间不超过5天,接种量不大于10０cｆu↓计数方法适用性试验:胰酪大豆胨琼脂培养基(ＭPＮ法不适用),培养温度３０～３5℃,培养时间不超过５天,接种量不大于10０cfu 注:当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌与酵母菌总数时,应进行培养基适用性检查,检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基1.１菌种试验用菌株得传代次数不得超过５代(从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性。
1。
2菌液制备(按表1规定程序培养各试验菌株)取白色念珠菌得新鲜培养物↓用pH7、0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液制成适宜浓度得菌悬液取黑曲霉得新鲜培养物↓加入3～５ｍｌ含0.０５%聚山梨酯80得pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱↓采用适宜得方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含0。
05％聚山梨酯80得pＨ7.０无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0。
９%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度得黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置,应在2小时内使用;若保存在２~8℃,可在24小时内使用、稳定得黑曲霉孢子悬液可保存在2~８℃,在验证过得贮存期内使用、1。
３阴性对照为确认试验条件就是否符合要求,应进行阴性对照试验,阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长,应进行偏差调查、2、培养基适用性检查按表1规定,接种不大于100cｆu得菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表１规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时,用相应得对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上得菌落平均数与对照培养基上得菌落平均数得比值应在0。
图解GB 4789.15霉菌和酵母计数
GB 4789.15－2016霉菌和酵母计数野兽食品伙伴网应用概况1标准修订2标准详解3质控要求4CONTENTSPART 1霉菌和酵母概况Overview of mould and yeastNational Food Safety Standard Food Microbiological Examination病毒原核生物原生生物真菌植物动物生物六界分类法真菌（菌物）已发现七万多种大型真菌是各类蕈类，小型真菌包括霉菌和酵母。
与动物、植物主要的区别是，真菌有细胞壁，主要成分为甲壳素（几丁质）。
相对于低等的细菌来说，霉菌和酵母生长缓慢，竞争力较弱，故只能在不利于细菌的环境中形成优势。
霉菌和酵母基本特性少数对人类有益，绝大多数不造成直接危害，但可导致食品的腐败变质，极少数能够致病或产生真菌毒素，危害极大。
细胞较大，代谢能力比细菌强100倍以上，故标准限量更严格。
危害生长水活度细菌0.90酵母0.87霉菌0.70卫生学意义霉菌和酵母计数主要用于判定样品被真菌污染程度，也可用于监测样品中真菌的性质和繁殖动态，进行样品的卫生学综合评价。
Mould and YeastPART 2检验方法标准修订Revision of Inspection Method Standard National Food Safety Standard Food Microbiological ExaminationGB 4789.15－84卫生部食品卫生监督检验所归口并负责起草。
主要起草人：罗雪云GB/T 4789.15－2003起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。
主要起草人：罗雪云、李风琴、李玉伟GB 4789.15－94卫生部食品卫生监督检验所归口并负责起草。
主要起草人：罗雪云GB 4789.15－2010未公布检验方法标准制修订GB 4789.15－2016起草单位：国家食品安全风险评估中心。
主要起草人：李凤琴、韩小敏、江涛、赵熙等参考国内外标准情况GB 4789.15－2010主要的技术性变化，就是培养温度从25℃～27℃修改为28℃。
霉菌和酵母计数考试试题
霉菌和酵母计数考试试题一、填空题（每空2分，共20分）1、与需检测霉菌酵母的产品标准是（），对应限量值是（）。
_________________________________2、菌落形成单位用（）来表示。
_________________________________3、粘度大于生乳粘度的样品，不得用（）取样，需要用（）取样。
_________________________________4、孟加拉红培养基中，孟加拉红可（）霉菌菌落的蔓延生长。
_________________________________5、酵母菌的菌落特征：（）（）（）（），比细菌的菌落大而厚。
_________________________________二、选择题（每题5分，共40分）1、霉菌和酵母计数检测依据的国标号为（）A、GB4789.15-2010B、GB4789.15-2016(正确答案)C、GB4789.35-2010D、GB4789.35-20162、霉菌和酵母检测，固体样品称量标准中要求使用的天平感量为（）A、0.1g(正确答案)B、0.01gC、0.001gD、0.0001g3、检测脱脂乳粉霉菌和酵母计数，所有稀释度均未长菌，则报告（）A、＜1B、＜10(正确答案)C、0D、未检出4、根据对样品污染状况的估计，选择（）适宜稀释度的样品匀液A、1个B、2个C、3个D、2个～3个(正确答案)5、选取菌落数在（）的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母[单选题]10 CFU～150 CFU(正确答案)15 CFU～150 CFU30 CFU～300 CFU10 CFU～300 CFU6、若一部分平板菌落数为160，一部分平板菌落数为9，即报告为（）。
A、90CFU。
B、250CFU。
C、130CFU。
D、160CFU。
(正确答案)7、霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为（）。
A、多不可计B、结果无效C、菌落蔓延(正确答案)D、1×相应稀释倍数8、霉菌和酵母通常适宜的生长温度是（）。
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在进行１０倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取１ｍＬ样品匀液于２个无菌平皿内。
同时分别取
１ｍＬ样品稀释液加入２个无菌平皿作空白对照。
５．１．６及时将１５ｍＬ～２０ｍＬ冷却至４６ ℃的马铃薯葡萄糖 琼脂或孟加拉红培养基（可放置于
１．５测微器：
具标准刻度的玻片。
２操作步骤
２．１检样的制备： 取定量检样，加蒸馏水稀释至折光指数为１．３４４７～１．３４６０
（即浓度为７．９％～
８．８％），备用。
２．２xx标准视野的校正：将显微镜按放大率９０倍～１２５倍调节标准视野，使其直径为 １．３８２ｍｍ。
２．３涂片：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，以
霉菌和酵母菌的测定是指食品检样经过处理，在一定条件培养后，所得1g或1ml检样中霉菌和酵母菌菌落数。
三、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
冰箱
恒温培养箱
均质器
恒温振荡器
xx
电子天平无菌锥形瓶
无菌xx瓶
无菌吸管
无菌平皿
无菌试管
无菌牛皮纸袋、塑料袋
培养基和试剂
马铃薯 葡萄糖xx培养基
以无菌吸管吸取２５ｍＬ样品至盛有２２５ｍＬ无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适
当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成１∶１０的样品匀液。
５．１．３取１ｍＬ１∶１０稀释液注入含有９ｍＬ无菌水的试管中，另 换一支１ｍＬ无菌吸管反复吹吸，此液为１∶１００稀释液。图１霉菌和酵母 计数的检验程序５．１．４按５．１．３操作程序，制备１０倍系列稀释样品 匀液。每递增稀释一次，换用１次１ｍＬ无菌吸管。
６．２．３称重取样以ＣＦＵ／ｇ为单位报告，体积取样以ＣＦＵ／ｍＬ为单位报告，报告或分别报告霉菌和／或
酵母数。附录犃
（规范性附录）
培养基和试剂
犃．１马铃薯葡萄糖xx
犃．１．１成分
马铃薯（去皮切块）３００ｇ
葡萄糖２０．０ｇ
xx２０．０ｇ
氯霉素０．１ｇ
蒸馏水１０００ｍＬ
犃．１．２制法
将马铃薯去皮切块，加１０００ｍＬ蒸馏水，煮沸１０ｍｉｎ～２０ｍｉ ｎ。用纱布过滤，补加蒸馏水至
１０００ｍＬ。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装后，１２１ ℃ 灭菌２ ０ｍｉｎ。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯
霉素加入培养基中。
犃．２xx红培养基犃．２．１成分蛋胨５．０ｇ葡萄糖１０．０ｇ
磷酸二氢钾１．０ｇ
硫酸镁（无水）０．５ｇ
xx２０．０ｇ
xx红０．０３３ｇ
氯霉素０．１ｇ
蒸馏水１０００ｍＬ
犃．２．２制法
上述各成分加入蒸馏水中，加热溶化，补足蒸馏水至１０００ｍＬ，分装 后，１２１ ℃ 灭菌２０ｍｉｎ。倾注
平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。
附录（资料性附录）
霉菌直接镜检计数法 常用的为郝氏霉菌计测法，本方法适用于番茄酱罐头。
１设备和材料
１．１折光仪。
１．２xx。
１．３xx计测玻片：
具有标准计测室的特制玻片。１．４盖玻片。
项目三食品中霉菌和酵母菌计数
一、实验目的
1.掌握测定霉菌和酵母菌的方法和技能
2.熟练无菌操作技术。
二、实验原理
酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆 状。
霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。 霉菌和酵母也可造成中腐败变质。由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故 常常在不适于细菌生长的食品中出现，这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖 高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。由于霉菌和酵母能抵抗 热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌 的物质，而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒 素。霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。例如，酵母在新鲜的和加工 的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气 泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。因此霉菌和酵母也作为评价 食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。目前 已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。我国已制订了一些食 品中霉菌和酵母的限量标准。
备观察。
２．４观测：将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测，一般每一检样观察
５０个视野，同
一检样应由两人进行观察。
２．５结果与计算： 在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野（１．３８２ｍｍ）
的１／６或三根菌 丝总长度超过标准视野的１／６（即测微器的一格）时即为阳性（＋），
否则为阴性（－），按１００个视野计，其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。
４６℃±１℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
５．２培养
待琼脂凝固后，将平板倒置，２８ ℃±１℃培养５ｄ，观察并记录。
５．３菌落计数
肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。
以菌落形成单位（ｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔｓ，ＣＦＵ）表示。
选取菌落数在１０ＣＦＵ～１５０ＣＦＵ的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。
霉菌蔓延生长
覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。
６结果与报告
６．１计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计
算。
６．１．２若所有平板上菌落数均大于１５０ＣＦＵ，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多
不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
６．１．３若所有平板上菌落数均小于１０ＣＦＵ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
６．１．４若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于１乘以最低稀释倍 数计算；如为原液，则以小于１
计数。
６．２报告
６．２．１菌落数在１００以内时，按“四舍五入 ”原则修约，采用两位有 效数字报告。
６．２．２菌落数大于或等于１００时，前３位数字采用“四舍五入 ”原则修约后，取前２位数字，后面用０代
替位数来表示结果；也可用１０的指数形式来表示，此时也按“四舍五入 ” 原则修约，采用两位有效数字。
xx红培养基：
４检验程序
霉菌和酵母计数的检验程序见图１。
５操作步骤
５．１样品的稀释
５．１．１固体和半固体样品：
称取２５ｇ样品至盛有２２５ｍＬ灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即 为１∶１０
稀释液。或放入盛有２２５ｍＬ无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器 拍打２ｍｉｎ，制成１∶１０的样品
匀液。
５．１．２液体样品：