饱和硝酸钠漂浮法测土壤中蛔虫卵
高州市长坡旧城2006~2010年土壤中土源性线虫卵污染情况论文
高州市长坡旧城2006~2010年土壤中土源性线虫卵污染情况分析【中图分类号】 r 383.1 【文献标识码】a【文章编号】1672－3783(2011)04－0364－02【摘要】目的：分析高州市长坡旧城土壤中土源性线虫污染情况，为从根本上防制人群土源性线虫病提供科学依据。
方法：每个监测点随机抽取10户，每户采集菜园、厕所周边、庭院、厨房四类地点的土样，镜检受精或未受精蛔虫卵，土壤培养法区别死活受精蛔虫卵。
结果：五年间共检查土壤样本200份次。
其中蛔虫卵阳性39份，阳性率为19.5%；钩虫卵阳性25份，阳性率12.5%；鞭虫卵阳性19份，阳性率9.5%；蛲虫卵阳性1份，阳性率0.5%。
结论：随着农村饮用水和居住条件的明显改善以及政府相关部门的重视与防治，我市的人群土源性线虫病感染率正稳步下降，但由于当地居民以种植业为主，养殖业为辅，农民仍以徒手操作为主，罹患土源性线虫病的风险仍然很大。
广东省高州市为粤西的一个农业大市，曾经是肠道寄生虫病及土源性线虫病高感染地区之一，寄生虫总感染率高于50%。
随着改革开放的深入和人民生活水平的提高，农村饮用水和居住条件的明显改善，以及政府相关部门的重视与防治，人群中的土源性线虫感染率已降至20%以下。
根据《全国土源性线虫病监测方案》，国家cdc、广东省cdc及茂名、高州市cdc于2006～2010年，在高州市长坡镇旧城村委会开展了为期五年的土源性线虫病监测工作。
现将5年来土壤中土源性线虫卵污染情况分析如下。
1 监测内容与方法1.1 土壤采样点：每个监测点采用单纯随机抽样方法抽取10户，每户采集菜园、厕所周边、庭院、厨房四类地点的土样。
1.2 采样量：每户每类地点1份，每份30克。
1.3 检查方法：镜检受精或未受精蛔虫卵，土壤培养法区别死活受精蛔虫卵。
1.4 指标：观察土壤中的蛔虫卵、受精蛔虫卵和培养后活受精蛔虫卵以及分辨各虫种并做好登记。
2 相关因素调查调查监测点的地理环境、气温、湿度、降雨、农作物、经济水平、卫生状况、防治措施等自然和社会因素。
粪便中犬弓首蛔虫卵饱和盐水卵漂浮法的改良研究
粪便中犬弓首蛔虫卵饱和盐水卵漂浮法的改良研究繁萍;张瑞强;仁措卓玛;杨卫霞;白玲英;刘斌;倪小敏;康明【摘要】[目的]提高粪便中犬弓首蛔虫卵的漂浮效果.[方法]对常用的饱和盐水漂浮法进行改良,对2份含犬弓首蛔虫卵的粪便进行漂浮和沉淀等处理.[结果]采用改良漂浮法2个粪便样本中虫卵的回收率分别为52.66％和38.90％,其回收效果较常规漂浮法有明显提高.[结论]采用吸取表层漂浮液的方式回收漂浮液,对虫卵的回收效果良好.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)021【总页数】3页(P145-147)【关键词】粪便;犬弓首蛔虫卵;饱和盐水漂浮法;改良【作者】繁萍;张瑞强;仁措卓玛;杨卫霞;白玲英;刘斌;倪小敏;康明【作者单位】清华大学生命科学学院,北京100083;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016;青海大学农牧学院,青海西宁810016【正文语种】中文【中图分类】S852.7StudyontheImprovementofFloatingMethodwithSaturatedSalinefor Toxocara canisEggsinFecesFANPing,ZHANGRui-qiang*, Rencuo Zhuoma et al (1. SchoolLifeSciences,Tsinghua University,Beijing 100083; 2. CollegeofAgricultureandAnimalHusbandry,Qinghai University,Xining,Qinghai 810016)KeywordsFeces; T. caniseggs;Saturatedsalinefloatingmethod;Improvement当代生物学研究中，微量样本作为研究材料的情况已经十分常见，与之适应的微量研究技术已逐步建立起来，但在一些研究工作中还存在不足之处。
土源性线虫监测
土源性线虫监测分析苍溪县土源性线虫病流行动态及影响因素，为制订防治对策和评价防治效果提供科学依据。
方法随机抽取1个行政村，整群抽取3周岁以上居民500人，不足500人的村全部检查，受检率不低于90%。
采用改良加藤厚涂片法（Kato–Katz法），1粪3检，检查土源性线虫卵，3～12周岁儿童加做透明胶纸法检测蛲虫卵，计算总感染率、分虫种感染率和感染度；另随机抽取该村10户居民，采集其菜园、厕所周边、厨房、庭园4类地点的土壤样各1份，采用改良饱和硝酸钠漂浮法进行人蛔虫卵污染情况监测。
结果调查点共检查508人，共发现4种土源性线虫，人群总感染率 5.71%(29/508)，其中：蛔虫3.15%(16/508)、钩虫2.56%(13/508)、鞭虫0.2%(1/508)、蛲虫5.56%(2/36)，各虫种之间感染率存在统计学差异（X2=9.82，P<0.05）；男、女性感染率分别为5.18%（13/251）和6.23%（16/257），其感染率差异无统计学意义（X2=0.26，P>0.05）;各年龄组和文化程度方面土源性线虫感染率无统计学意义（X2=2.13，P>0.05）和（X2=2.49，P>0.05）；以农民为职业的感染率最高达6.09%。
检测土壤样本40份，均未检出蛔虫卵。
结论苍溪县岳东镇土源性线虫的分布和虫种感染情况存在差异，感染率不存在性别、年龄等差异，为今后在诊断、治疗和制定防治方案提供了科学依据。
土源性线虫病是我国农村居民患病率较高的寄生虫病，其流行、分布与我国各地区的地形特征和经济发展，卫生状况和居民生活习惯有密切关系[1]。
为及时了解苍溪县土源性线虫病流行动态，掌握流行规律及其影响因素[2]，为制定防治策略和措施、考核防治效果和评价卫生城镇创建工作提供科学依据[3]以及更好地落实卫生部《2006-2015年全国重点寄生虫病防治规划》[4]，根据《四川省土源性线虫病监测实施方案（试行）》要求，于2011-11在苍溪县岳东镇守垭村进行了土源性线虫的监测，其结果报告如下。
肥料中蛔虫卵死亡率的测定
肥料中蛔虫卵死亡率的测定GB/T19524.2—20041范围本标准规定了肥料中蛔虫卵死亡率的测定方法。
2测定方法原理将碱性溶液与肥料样品充分混合，分离蛔虫卵，然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液，使蛔虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验。
3试验方法3.1仪器设备（略）3.2试剂（略）3.3检验程序3.3.1蛔虫卵分离称取5.0～10.0 g样品（颗粒较大的样品应先进行研磨），放于容量为50 mL离心管中，注入NaOH溶液25～30 mL,另加玻璃珠约10粒，用橡皮塞塞紧管口，放置在振荡器上，静置30 min后，以200～300 r/ min频率振荡10～15 min。
振荡完毕，取下离心管上的橡皮塞，用玻璃棒将离心管中的样品充分搅匀，再次用橡皮塞塞紧管口，静置15～30 min后，振荡10～15 min。
3.3.2离心沉淀从振荡器上取下离心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸馏水，将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲入管中，以2000～2500 r/ min速度离心3～5 min后，弃去上清液。
然后加适量蒸馏水，并用玻璃棒将沉淀物搅起，按上述方法重复洗涤三次。
3.3.3离心漂浮往离心管中加入少量饱和NaNO3溶液，用玻璃棒将沉淀物搅成糊状后，再徐徐添加饱和NaNO3溶液，随加随搅，直加到离管口约1 cm为止，用饱和NaNO3溶液冲洗玻璃棒，洗液并入离心管中，以2000～2500 r/ min速度离心3～5 min。
用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸馏水的烧杯中，约30次后，适当增加一些饱和NaNO3溶液于离心管中，再次搅拌、离心及移置液膜，如此反复操作３～４次，直到液膜涂片观察不到蛔虫卵为止。
3.3.4抽滤镜检将烧杯中混合悬液，通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤。
若混合悬液的浑浊度大，可更换滤膜。
抽滤完毕，用弯头镊子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下，置于载玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于低倍显微镜下对整张滤膜进行观察和蛔虫卵计数。
2017-2020年洛阳市土源性线虫病流动监测点人群感染情况分析
作者简介:李云霞,女,硕士,副主任医师,研究方向:寄生虫病流行病学。 E-mail:lyx1205@ 126. com; 宁超群,女,硕士在读,研究方向:寄生虫病流行病学。 E-mail:38291@ 126. com 李云霞与宁超群同为第一作者
热带病与寄生虫学 2021 年 6 月第 19 卷第 3 期 J Trop Dis Parasitol Jun. 2021 Vol. 19 No. 3
1 / 9 296 and 2. 42% 225 / 9 296 respectively for roundworm hookworm whipworm and pinworm and the highest infection with pinworm was seen in population in Luoning Country. There was no statistical difference in infection between males and females yet the difference was significant in pinworm infection in different age groups χ2 = 49. 520 P<0. 05 with the highest in children aged between 3 and 10 years old followed by population over 60 years. The infection rate of pinworm was statistically significant in people with diverse occupations χ2 = 27. 734 P<0. 05 and the highest in preschool children and elementary students. Infection with pinworm tended to decline in population with increased level of education χ2 = 30. 638 P<0. 05 . Anal swab and modified Kato-Katz thick smear tests respectively revealed infection rate of pinworm being 3. 95% 76 / 1 925 and 4. 40% 89 / 2 021 in children between 3 and 9 years old and additional modified Kato-Katz thick smear test demonstrated that the infection with pinworm was 1. 91% 136 / 7 275 in children aged from 3 to 9 and over 9 years old. The difference was significant χ2 = 41. 946 P<0. 001 . Fertilized and unfertilized eggs of roundworm were detected in the soils sampled from the monitoring sites yet the detected rate was low. Conclusion pinworm is the dominant species of soil-transmitted nematode diseases in population in Luoyang City and affects the most in residents in Luoning County. Children and the aged should be the key population in following prevention and control of soil-transmitted nematodes. Key words Soil-transmitted nematode Pinworm Surveillance Luoyang City
土壤中蛔虫卵的检测4.29
土壤中蛔虫卵检测一、背景卫生部于2006 年在全国设立了22个土源性线虫病监测点开展监测工作 ,监测方案中要求对每个监测点进行人群土源性线虫病监测的同时, 还需监测土壤中人蛔虫卵的污染情况。
2006～2010年的监测数据显示，土源性线虫病监测点土壤中人蛔虫卵检出率分别为37.1%，29.5%，25.9%，31.3%和24.4%，统计分析表明，土壤人蛔虫卵检出率与人群蛔虫感染率呈正相关，因此土壤中蛔虫卵的污染情况是评价环境卫生状况的一项重要指标。
二、原理先用碱性溶液与土壤样品充分混合以分离蛔虫卵与土壤颗粒，再加入比重较大的液体使得比重较轻的蛔虫卵漂浮在溶液表面，收集后镜检计数。
三、采样要求1分别从表面及2～3厘米深处采取土样，因为虫卵存活时间与土层深度有关；2在用人粪施肥的农场和菜地可分别在陇上和犁沟中取土样，同时还应取20厘米深处的土样，以确定虫卵附着在根块植物上的可能；3为了测定不同局部气候条件下虫卵存活率，要从有日光照射和荫蔽区采取土样；4厕所、庭院、厨房取表层土；5每份土样约100g。
四、步骤1土样处理：剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土样中的大颗粒；然后用孔径3mm的铜筛和孔径为2mm的铜筛过筛，收集过筛后的土样。
2分离：取50ml大离心管，放入过筛后的土样10g，加5%氢氧化钠溶液至40或45ml刻度线。
用橡皮塞紧塞管口，在振荡器上振荡15分钟，可反复3～4次，待充分混合后，以2000rpm,离心4min。
3漂浮：弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液充分搅拌混匀，2000rpm离心4min，再加饱和硝酸钠溶液满至管口，覆上18mm ×18mm盖玻片。
4 计数：静臵15min后，将盖玻片迅速翻转取下，臵于载玻片上镜检，同时再覆上第二张盖玻片，如此反复，共计数3～4张盖玻片。
五、影响土壤蛔虫检出率的因素1 漂浮液的比重：漂浮液的比重是影响蛔虫卵检出率的重要因素，用比重大的溶液作为漂浮液效果较为理想，与饱和硫酸锌、硫酸镁、氯化钠等盐溶液相比，饱和硝酸钠的比重最高，用作漂浮液蛔虫卵的检出率最高。
土壤中蛔虫卵的检查及活力测定法.
一、直接镜检法（死活蛔虫卵的形态比较）
含一个卵细胞 活受精蛔虫卵， 外包有乳头状 突起的蛋白膜
脱蛋白膜活 受精蛔虫卵
外包蛋白膜的 死受精蛔虫卵， 卵细胞移向一 端
脱蛋白膜的死 受精蛔虫卵， 卵细胞移向一 端
外包蛋白膜死受精蛔虫卵，卵内 脂肪变性，细胞质形成空泡
空泡化死受精蛔虫卵
含幼虫的活受精蛔虫卵
牛羊蛔虫卵
大小：69～95×60～77μm 形状：近球形，外有似蜂窝状蛋白膜。
人蛔虫卵
犬弓蛔虫卵
大小：75×90μm 形状：近球形，也常有呈卵形， 有粗糙凹凸不平卵壳，卵壳内充 满黑褐色到黑色的尚未分裂，呈 颗粒状内含物。
人蛔虫卵
猫弓蛔虫卵
大小：65×75μm 形状：同犬弓蛔虫卵。
人蛔虫卵
蛔虫卵活力测定方法
土壤中蛔虫卵检查及 活力测定方法
谢 红
检验土壤蛔虫卵的原理，是先用碱性溶液和已经处 理过的土壤样品充分混合，分离蛔虫卵，继用比重 较蛔虫卵比重大的溶液为漂浮液，使蛔虫卵漂浮在 溶液的表面，从而收集检验之；或加入清水，因蛔 虫卵的比重大于水的比重，使蛔虫卵沉在水底，从 中吸取蛔虫卵检验之。所用方法为改良饱和硝酸钠 漂浮监察法。
3、注意： M.E.B的PH值应在10左右，不宜太高； 脱蛋白膜后，应洗净次氯酸钠，否则影响碱性 染料的着色效果。
图中箭头所指为死的蛔虫卵
卵细胞 崩解的 死受精 蛔虫卵
卵细胞 崩解的 死受精 蛔虫卵
死蛔虫卵形态
卵细胞 不规则 裂开的 死受精 蛔虫卵
卵胚变 形的死 受精蛔 虫卵
内含物变 形死受精 蛔虫卵
卵壳内幼 虫变形的 死受精蛔 虫卵
二、染色法鉴别蛔虫卵死活
（一）原理 美蓝、伊红、硼砂染液（简称M.E.B）溶于 水呈碱性。 活虫卵可以还原碱性染料，降低着色力， 不易被染色。 死虫卵不能还原碱性染料，容易着色。 蛔虫卵外层蛋白膜容易被着色，染色前需 脱去蛋白膜。
HJ 775-2015 水质 蛔虫卵的测定 沉淀集卵法
中华人民共和国国家环境保护标准HJ 775-2015水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法Water quality Ascarid ova determination Nature sedimentation method（发布稿）本电子版为发布稿。
请以中国环境科学出版社出版的正式标准文本为准。
2015-12-04 发布 2016-01-01 实施 环境保护部发 布目次前言 (ⅱ)1 适用范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 方法原理 (1)4 试剂和材料 (1)5 仪器和设备 (1)6 样品 (2)7 分析步骤 (2)8 结果计算与表示 (3)9 精密度 (4)10 质量保证和质量控制 (4)11 废物处理 (4)12 注意事项 (4)附录A （资料性附录）硝酸钠水中溶解度、离心机离心力及转速计算公式 (5)附录B （资料性附录）蛔虫卵的鉴定 (6)附录C （资料性附录）蛔虫卵配制样品的制备 (8)前 言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护环境，保障人体健康，规范水中蛔虫卵的测定方法，制定本标准。
本标准规定了地表水和废水中蛔虫卵测定的沉淀集卵法。
本标准为首次发布。
本标准的附录A～附录C为资料性附录。
本标准由环境保护部科技标准司组织制订。
本标准主要起草单位：常州市环境监测中心。
本标准验证单位：上海市环境监测中心、江苏省环境监测中心、浙江省环境监测中心、苏州市环境监测中心、徐州市环境监测中心站和泰州市环境监测中心站。
本标准环境保护部2015年12月4日批准。
本标准自2016年1月1日起实施。
本标准由环境保护部解释。
水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法1适用范围本标准规定了测定水中蛔虫卵的沉淀集卵法。
本标准适用于地表水和废水中蛔虫卵的测定。
当取样体积为10 L时，本方法的检出限为5 个/10 L。
2规范性引用文件本标准内容引用了下列文件或其中的条款。
凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
人OCTN2原核表达载体PGEX-2T-OCTN2的构建及意义
而 王永顺 的结果 蛔虫卵为２２％；蒋 雪飞 等的结果 蛔虫卵为２％。 ． ７ ０
显示 不同地方 、不同场所 、对 粪便 的不 同处理方 式使 虫卵的 阳性率有 较 大的 差别 。作 者对 高校 新校 区的调 查 显示土 壤 中蛔虫 卵 阳性率 是
［】 蒋 雪 飞， 雁 ， 忠 ， ． 庆市 永 川农 村地 区 土源 性 线虫 感 ５ 熊鸿 肖邦 等 重
均 阳性率为２ ％，药生植 物园的蛔 虫卵阳性率 和鞭虫卵 阳性 率均达 到 ０ ３％。药生植物 园与湖边 之间 的蛔 虫卵阳性率 和鞭虫卵 阳性 率均无 显 ５
学 中人 口 多，存在着较大的、潜在的危险陛，甚至有土源性线虫爆发 众
感染的可能性。提示加强高校新校 区土壤的无害化处理 ，特别是对药生
染 与 土壤污 染现 况分析 ［ ． 带医学 杂志 ， １， （） ３—３ ． Ｊ热 ］ ２ ０１ ３： ３３ ５ ０ ０ ３
人Ｏ Ｔ ２ Ｃ Ｎ 原核 表达载体Ｐ Ｅ － Ｔ Ｏ Ｔ ２ Ｇ Ｘ ２ － Ｃ Ｎ 的构建及意义
龚 东明
（ 上海市浦东新 区中医医院外科 ，上海 ２ １０ ０ ２０）
３讨 论
不 良的生产 方式和 生活习惯 以及 使用未经无 害化处理 的人粪作肥 料 ，使 大量的虫 卵污染土壤 ，是土源性线虫病 流行主要 的原因 ，土壤 中虫卵 阳性率 与人体土源性线虫感染率有 显著相 关 。姜 唯生等 对农 户 土壤调 查 ，显示蛔 虫卵、鞭虫卵的 阳性 率分别是５． ％、７ ． ％ ； ８２ ０ ７６ ８
植物 园土壤的处理 ，以及使用无 害化处理的粪便为肥料 ，并加强校园绿
化管理工作 ，防止土源性 线虫感染人群 是一项重要而艰 巨的任务。
著性差异 （ 蛔＝． ３ Ｐ ０ ５ ） ｏ ７ ， ＞ ． ）， ｘ ２ ３， ＞ ． ；ｃ ． ６ Ｐ ｏ ５ 药生植物 ２ １ ０ ２ ４ 鞭＝ ０
HJ775-2015水质 蛔虫卵的测定 沉淀集卵法方法验证
方法验证报告项目名称：水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法方法名称：《水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法》HJ775-2015报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1实验室基本情况1.1人员情况实验室检测人员已通过标准《水质蛔虫卵的测定沉淀集卵法》HJ775-2015的培训，熟知标准内容、检测方法及样品数据采集和处理等，考核合格，得到公司技术负责人授权上岗。
表1参加验证人员情况登记表姓名性别年龄职务或职称所学专业从事相关分析工作年限1.2检测仪器/设备情况表2主要仪器基本情况设备编号设备名称规格型号计量/检定状态低速离心机百分之一天平相差显微镜旋转振荡器1.3检测用试剂情况表3主要试剂及溶剂基本情况试剂名称生产厂家级别规格备注吐温80乙酸乙酯硝酸钠冰乙酸结晶乙酸钠1.4环境设施和条件情况实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在标准要求范围内，满足检测环境条件。
另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。
2实验室检测技术能力2.1方法原理用06目筛网过滤去除样品中较大的杂质，利用蛔虫卵比重大于水和易于沉淀的特性过夜沉淀浓缩水样，用虹吸的方法弃去上清液，用表面活性剂吐温80作为残液及沉淀转移时的清洗剂，进一步离心浓缩转移的剩余物，收集到的浓缩物用乙酸-乙酸钠缓冲液混匀，控制溶液pH值，获得最佳亲水-亲脂平衡，加入乙酸乙酯吸收水中的脂肪类杂质，使蛔虫卵更易下沉。
再次离心浓缩样品并弃去上部脂肪杂质层及缓冲液层，获得的含卵沉淀层用饱和硝酸钠溶液混匀，于计数框中静置漂浮后镜检，即可测得水样中蛔虫卵的数量。
2.2分析步骤2.2.1过滤充分摇匀样品，转入不锈钢开口直壁容器10L刻度。
如样品中含有草梗、纸渣等较大杂质，需将样品用筛网过滤,并用吐温80溶液清洗筛网及杂质，洗液并入过滤后的10L样品中。
2.2.2沉淀样品在15℃～25℃室温下静置过夜沉淀12h～24h，用虹吸管小心吸取并弃去上清液，避免扰动，保留1L含沉淀物的样品，转入1000ml开口直壁量筒，分别用50ml吐温80溶液彻底清洗不锈钢开口直壁容器3次，洗液并入开口直壁量筒。
简单易行的饱和食盐水漂浮法
简单易行的饱和食盐水漂浮法
请先看下图:
图1 蠕虫卵、原虫卵包囊的比重
再了解一下饱和食盐水的比重：将食盐慢慢加入盛有沸水的容器内，不断搅动直到食盐不再溶解为止(100mL水加食盐35~40g)，其比重大约为1.2。
好了，下面进入正题，具体操作方法如下：
1从粪便不同的部位挑起如人蚕豆大小的粪便块，置于加有少量饱和盐水的漂浮瓶中(可用废弃的凝血试剂瓶或青霉素瓶等代替)。
2将粪便充分捣碎，并与盐水搅匀，再加饱和盐水至瓶口下端处，小心去除浮在液面上的杂质。
3滴加饱和盐水至略高于瓶口，但不溢出为止。
4取一张洁净的载玻片盖在瓶口上，静置约10-15分钟。
5垂直向上提起载玻片。
6快速翻转载玻片，再盖上盖片镜检。
大功告成，让我们一起来看看战果如何吧：
▲图为漂浮后的受精蛔虫卵与钩虫卵（标记为钩虫卵10×10）
▲图为漂浮后的受精蛔虫卵（40×10）
▲图为漂浮后的钩虫卵（10×10）
▲图为漂浮后的钩虫卵（40×10）
▲图为漂浮后的受精蛔虫卵与钩虫卵（40×10）
▲图为漂浮后的受精蛔虫卵与鞭虫卵（40×10）。
饱和盐水漂浮集卵法标准操作程序
饱和盐水漂浮集卵法标准操作程序1 检验目的辅助检查线虫卵及微小膜壳绦虫卵，以检查钩虫卵效果最好。
2 方法原理本法是运用虫卵在比重大的浓盐溶液中向上漂浮的原理而设计的，特别适用于钩虫卵的检出，但对鞭虫卵和蛔虫卵也有较好的浓集效果。
3 性能参数饱和盐水漂浮集卵试验是人工试验，目前还没有试验性能指标。
4设备和试剂4.1 试剂：饱和盐水溶液（食盐40克加水100ml）自配。
本试剂贮存于4∼30℃。
4.2 器材：竹签、载玻片、浮聚瓶、显微镜。
5 标本采集与签收取新鲜粪便标本于干燥洁净容器内送检，按标本签收程序签收。
6操作程序6.1 取粪便约蚕豆大一块，置于大青霉素瓶内，加食盐饱和溶液（粗食盐40克加水100毫升，加热至沸，冷却后取上清液应用。
如于每95毫升饱和盐水中加5毫升40％甲醛溶液，可起固定虫卵的作用，有利于吸虫卵的上浮）少许，调匀，再慢慢加食盐饱和溶液至液面与瓶口相平。
除去液面粪渣。
6.2 静置15分钟后，用一张玻片向下使恰好接触瓶口液面。
迅速平提，反转玻片，使粪液集于玻片中间，镜检。
7质量控制7.1 操作时瓶口与载玻片间不能存留气泡与粪渣，静置时间不宜太长或过短，载玻片翻转要平稳、迅速。
7.2 粪便量要足，需蚕豆大小。
7.3 食物残渣去掉。
7.4 厚薄程度：可透视字。
8 报告结果和参考范围8.1 报告结果：报告阴性（未见虫卵）或阳性（发现XX虫卵）。
8.2 生物参考区间：阴性（未见虫卵）。
9临床意义本法适用于检查线虫卵及微小膜壳绦虫卵，以检查钩虫卵效果最好。
不适用于吸虫卵及原虫包囊的检查，故应用范围不够广。
10参考文献叶应妩，王毓三，申子瑜. 全国临床检验操作规程. 第3版. 南京：东南大学出版社，2006：305-308.。
肥料中蛔虫卵死亡率的测定
肥料中蛔虫卵死亡率的测定肥料中蛔虫卵死亡率的测定 GB/T 19524.2—2004 1 范围本标准规定了肥料中蛔虫卵死亡率的测定方法。
2 测定方法原理将碱性溶液与肥料样品充分混合，分离蛔虫卵，然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液，使蛔虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验。
3 试验方法3.1 仪器设备(略)3.2 试剂(略)3.3 检验程序3.3.1 蛔虫卵分离称取5.0,10.0 g样品(颗粒较大的样品应先进行研磨)，放于容量为50 mL离心管中，注入NaOH溶液25,30 mL,另加玻璃珠约10粒，用橡皮塞塞紧管口，放置在振荡器上，静置30 min后，以200,300 r/ min频率振荡10,15 min。
振荡完毕，取下离心管上的橡皮塞，用玻璃棒将离心管中的样品充分搅匀，再次用橡皮塞塞紧管口，静置15,30 min 后，振荡10,15 min。
3.3.2 离心沉淀从振荡器上取下离心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸馏水，将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲入管中，以2000,2500 r/ min速度离心3,5 min后，弃去上清液。
然后加适量蒸馏水，并用玻璃棒将沉淀物搅起，按上述方法重复洗涤三次。
3.3.3 离心漂浮往离心管中加入少量饱和 NaNO溶液，用玻璃棒将沉淀物搅成糊状3后，再徐徐添加饱和 NaNO溶液，随加随搅，直加到离管口约1 cm为止，3用饱和 NaNO溶液冲洗玻璃棒，洗液并入离心管中，以2000,2500 r/ min3 速度离心3,5 min。
用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸馏水的烧杯中，约30次后，适当增加一些饱和NaNO溶液于离心管中，再次搅拌、离心3 及移置液膜，如此反复操作,,,次，直到液膜涂片观察不到蛔虫卵为止。
3.3.4 抽滤镜检将烧杯中混合悬液，通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤。
若混合悬液的浑浊度大，可更换滤膜。
抽滤完毕，用弯头镊子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下，置于载玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于低倍显微镜下对整张滤膜进行观察和蛔虫卵计数。
饱和盐水浮聚法。docx
饱和盐水浮聚法适用范围:适用于检查线虫卵（未受精蛔虫卵例外），也可检查带绦虫卵及膜壳绦虫卵，但不适宜检查吸虫卵和原虫包囊。
对检查钩虫卵效果尤佳，是诊断钩虫病的首选方法。
基本原理：利用比重较大的饱和盐水，使比重较小的虫卵，特别是钩虫卵，漂浮在溶液表面，而达到浓集目的。
材料准备：漂浮瓶、载玻片、竹签、滴管、饱和盐水、显微镜。
操作方法：用竹签取黄豆大小的粪便（约1g）置于含少量饱和盐水的漂浮瓶中（高3.5mm，直径2cm的圆筒形小瓶），也可用青霉素小瓶代替，将粪便充分捣碎并与盐水搅匀后，除去粪中的粗渣，再缓慢加入饱和盐水至液面略高于瓶口但不溢出为止，在瓶口覆盖载玻片一张，静置15分钟后，平持载玻片向上提起后迅速翻转，使有饱和盐水一面向上，立即镜检，以防标本干燥和盐结晶析出，妨碍镜检。
注意事项：①盐水的配制一定要饱和，将食盐徐徐加入盛有沸水的容器内，不断搅动，直至食盐不再溶解为止（100ml水中加食盐35~40g），冷却后用两层纱布滤去杂质，测量密度应达1.20；②粪便太多太少都影响浓集效果；③玻片要清洁无油，防止玻片与液面间有气泡或漂浮的粪渣；④漂浮的时间须按规定；⑤翻转玻片时要轻巧、适速。
附: 小管浮聚虫卵计数法本法适用于部分线虫卵，尤其适用于钩虫卵记数，故常用于测定钩虫在人体内的感染度。
此法简便、快速，使用器皿简单、便宜；洗涤容易、携带方便。
但每毫升粪便中虫卵少于10个时，此法不适用。
材料准备：平底小玻管或塑料管（直径15mm，高20mm）、0.1ml容积粪便定量器、载玻片、盖玻片、饱和盐水。
操作方法：用0.1ml小汤匙取粪便，用牙签刮入一直径15mm高为20mm的小平底玻璃管内。
加入少量饱和盐水，捣碎粪便，调匀,再加饱和盐水至满。
覆上盖玻片，10min后取下镜检记数，如此共检3张盖玻片。
将3次记数所得虫卵数之和乘10，再乘粪便性状系数，即为每ml粪便中虫卵数。
注意事项：除粪便定量（0.1m1）、虫卵计数外（记录盖玻片上全部虫卵数）。
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饱和硝酸钠漂浮法测土壤中蛔虫卵
一、原理
先用碱性溶液与土壤样品充分混合以分离蛔虫卵和土壤颗粒，再加入比重较大的溶液使得比重较轻的蛔虫卵飘浮在液体表面，收集后镜检计数。
二、方法
1.土壤样品处理：剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土壤中的大颗
粒；然后用孔径3mm的铜筛过筛，收集过筛后的土壤。
2.分离虫卵：取50mL大离心管，放入过筛后的土壤10g，加5%
氢氧化钠溶液至40或45mＬ刻度线。
用橡皮塞塞紧管口，在
振荡器上振荡15分钟，可反复3~4次，待充分混合后，以
2000rpm离心4min。
3.漂浮：弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液充分搅拌，
2000rpm离心4min，再加饱和硝酸钠溶液满至管口，覆上18m m
×18mm盖玻片。
4.计数：静置15min后，将盖玻片迅速翻转取下，置于载玻片上
镜检，同时再覆上第二块盖玻片，如此反复，共计数3~4张盖
玻片。
三、注意事项
1.漂浮液的比重：漂浮液的比重是影响蛔虫卵检出率的重要因
素，用比重大的溶液做为漂浮液效果较为理想，与饱和硫酸锌、硫酸镁、氯化钠等盐溶液相比，饱和硝酸钠的比重最高，用作
漂浮液，蛔虫卵的检出率最高。
2.土壤性质：土壤性质决定了蛔虫卵和土壤颗粒的粘合程度，蛔
虫卵检出率沙土最高，壤土次之，粘土最低。
3.离心的时间与次数：延长离心时间、提高离心速度或增加离心
次数均可以提高蛔虫卵与土壤颗粒的分离效果从而提高检出率。
美蓝、伊红、硼砂染色法
一、原理
美蓝、伊红、硼砂（简称Ｍ.Ｅ.Ｂ）溶于水呈碱性。
活虫卵可以还原碱性染料，降低着色力，不易被染色。
死虫卵不能还原碱性染料，容易着色。
蛔虫卵外层膜蛋白容易被染色，染色前需脱去膜蛋白。
二、配制
将0.2g美蓝加入100mL蒸馏水中煮沸10min，加入硼砂0.5g，再煮沸10min，冷却后加入伊红0.1g，待完全溶解后过滤备用，ＰＨ值为10~11，在室温中可放置1.5年。
三、步骤
1.脱膜蛋白：将收集的蛔虫卵加入30%次氯酸钠，作用数分
钟，并经常振荡，再用蒸馏水洗2次，即可脱掉蛋白膜。
2.染色镜检：吸取虫卵沉淀物一滴置于载玻片上，加Ｍ.Ｅ.Ｂ
染色液一滴，上覆盖玻片，静置3~5min后镜检。
或者，吸
取虫卵沉淀物一滴放入小试管内，加入染色液染30min再
用蒸馏水洗2~3次，吸取沉淀物镜检。
3.注意：Ｍ.Ｅ.Ｂ的ＰＨ值应在10左右，不宜太高：脱蛋白
膜后，应洗净次氯酸钠，否则影响碱性染料的着色效果。
4.鉴别死活：活卵内含物不着色，死虫卵内含物染成蓝色。
培养法
在直径10~12cm的玻璃平皿底部平铺一层厚约0.5cm的脱脂棉；脱脂棉上铺一张与平皿等大的普通滤纸；在滤纸上，再放一张直径2cm的小滤纸，将虫卵滴在小滤纸上。
加入２%福尔马林，以湿透滤纸和脱脂棉。
放入28~30℃温箱中培养一个月观察虫卵死活，培养一个月后自皿中取出小滤纸片，将虫卵置于载玻片上，滴加50%甘油溶液，使其透明后，根据其形态，鉴定卵的死活。
凡含有幼虫的，都认为是活卵；其它阶段的或单细胞的，都判为是死卵。