粪大肠菌群检测方法20110520
粪大肠菌群的测定
15.7mg硫代硫酸钠可去除样品中1.5mg活性氯，硫代硫酸钠用量可 根据样品实际活性氯量调整。
4 .无菌水:取适量实验用水，经 高压蒸汽灭菌20min， 备用。 5. 硫代硫酸钠( Na2S2O3.5H2O)。 (去除游离氯) 6.乙二胺四乙酸二钠(C10H14N2O8Na2 .2H2O)。 7.乙二胺四乙酸二钠溶液: ρ (C10H14N2O8Na2 .2H2O) =0.15 g/ml 称取15g乙二胺四乙酸二钠,溶于适量水中，定容至100ml,此溶液可保存 30d。 8.硫代硫酸钠溶液: ρ ( Na2S2O3.5H2O) =0.10 g/ml 称取15.7g硫代硫酸钠， 溶于适量水中，定容至100ml，临用现配。
2. 浓缩乳糖蛋白胨培养液： (此溶液用于检验大肠菌群) 按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外，各组分用量 增加至三倍。 (即按上述配方比例三倍 (除蒸馏水外) ，配成三倍浓 缩的乳糖蛋白胨培养液)
①在何种情况下用多少三倍浓度的培养基接种？ 答：接种体积为10ml时，试管内应装入有3倍浓度乳糖蛋 白胨培养液5ml。
• 三、肯定要加塞子的，我们用的塞子是软材料 (好像是软橡胶？ 白色的，塞子中间另有一 个可以活动的塞子，能保证加塞后的试管透气，其实用什么材料不重要的。
• 四、需要的仪器设备为：生化培养箱、无菌操作台 (空气精华级别100) 、高压灭菌锅、 冰箱、干燥箱。
五、干扰和消除
1.
,能破坏微生物细胞内的酶活性，导
若接种量过高，培养液应加倍成分。这是由于样品的量大 的情况下，培养液稀释大,各种成分的相对浓度就会不足， 就不能满足细菌的生长要求，存在实验失败的概率。因此， 合理调整样品量和营养液浓度的比例需要反复实验和多组 对照。
粪大肠菌群数测量方法-概念解析以及定义
粪大肠菌群数测量方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以描述该篇文章的研究背景以及粪大肠菌群数测量方法的重要性。
可以参考以下内容进行撰写：概述粪大肠菌群数（Fecal coliform count）是评估水体、食品和环境卫生安全的重要指标之一。
粪大肠菌群数测量方法的准确性和可靠性对于保障公众健康和环境质量至关重要。
随着生活水平的提高和环境污染问题的日益严重，对粪大肠菌群数测量方法的研究与探索变得尤为重要。
本文旨在详细介绍目前常用的三种粪大肠菌群数测量方法，即第一种测量方法、第二种测量方法和第三种测量方法。
通过比较这三种方法的原理、步骤以及各自的优缺点，可以帮助读者更全面地了解和选择合适的测量方法。
本文结构本文分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分对粪大肠菌群数测量方法的研究背景和意义进行了概述。
正文部分详细介绍了三种测量方法的原理、步骤以及优缺点。
结论部分对本文的主要观点进行总结，并对未来相关研究进行展望。
通过本文的阅读，读者可以对粪大肠菌群数测量方法有一个全面的了解，并对选择适合自己研究对象的测量方法具备一定的指导意义。
希望本文能够为相关领域的研究工作者提供有价值的信息和启示，推动粪大肠菌群数测量方法的改进和发展。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括对整篇文章的大致框架进行介绍，即各个章节及其内容的概览。
在文章结构部分中，可以简要介绍文章的组成和布局，以帮助读者更好地理解整篇文章的结构和内容安排。
此外，可以提及各个章节的主要目标和内容，以及各个章节之间的逻辑关系。
具体编写文章结构部分的内容如下：文章结构：本文共分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分主要概述了本文的研究背景和目的，同时简要介绍了大纲中各个章节的内容安排。
正文部分详细介绍了三种粪大肠菌群数测量方法：第一种测量方法、第二种测量方法和第三种测量方法。
每种测量方法都包括了原理、步骤和优缺点的详细介绍。
通过对这三种测量方法的讨论和比较，读者可以全面了解不同测量方法的特点和应用情况。
肥料中粪大肠菌群的测定
肥料中粪大肠菌群的测定一：前期准备一次性帽子、口罩、脚套1， 移液管10ml 量筒100ml ｝玻璃珠 三角瓶 培养皿2， 乳糖胆盐发酵培养基（用于乳糖发酵） 乳糖发酵培养基（用于复发酵）伊红美蓝培养基（用于分离培养） } 121℃，15min无菌水 } 121℃，15min二：实验过程无菌条件下进行：10.0g 固体样品/10ml 液体样品↓三角瓶（带玻璃珠，90ml 无菌水）1:10=10-1↓200r/min 振荡30min↓吸取10-1—5ml ，加入45ml 无菌水（提前准备）1:100=10-2↓吸取吸取10-2—5ml ，加入45ml 无菌水（提前准备）1:1000=10-3↓……依次稀释得到10-4，10-5等浓度稀释液（每个稀释度必须更换无菌移液管）↓选取三个连续适宜稀释液，分别吸取1.0ml 加入到乳糖胆盐发酵管内（装有乳糖胆盐发酵培养基）（每一稀释度接种3支发酵管）↓培养箱45℃，24h↓结果：产酸，颜色变；产气，导管有气泡不产酸，不产气，为粪大肠菌群阴性↓分离培养：从产酸产气或只产酸的发酵管中挑取发酵液在伊红美蓝培养基平板上划线↓培养箱36℃，18-24h↓证实实验：从平板上挑取可以菌落，进行革兰氏染色。
结果：染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性↓革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中（装有乳糖发酵培养基）↓培养箱44.5℃，24h↓结果，不产气为粪大肠菌群阴性，产气为粪大肠菌群阳性↓证实为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN 检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数 ｝160℃，4h ｝115℃，15min。
粪大肠菌群的测定
粪大肠菌群的测定1 卫生学意义粪大肠菌群测定的卫生学意义：一、与大肠菌群相比，粪大肠菌群在人和动物粪便中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。
因此，粪大肠菌群的存在表明食品近期内可能直接或间接的受到了粪便的污染；二、作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性；三、常用做贝类和贝类养殖用水的卫生指标。
2 检验方法2.1 术语与定义一群在44.5 °C培养24h-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
卫生学概念，又称为耐热大肠菌群，主要是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属等。
2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：(1)恒温培养箱：36C±1C。
(2)冰箱：2C〜5C。
( 3)恒温水浴箱：46C±1C。
( 4)天平：感量0.1g 。
(5)无菌吸管：1mL(具0.01m该U度)、10mL(具0.1m该U度)或微量移液器及吸头。
( 6)无菌锥形瓶：容量500mL。
( 7)无菌培养皿：直径90mm。
(8) pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.3 培养基和试剂(1)月桂基硫酸盐胰蛋白胨(Lauryl Sulfate Tryptose , LST)肉汤：1) 成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0g ;氯化钠：5.0g ;乳糖：5.0g ;磷酸氢二钾(KHPO): 2.75g ;磷酸二氢钾(KHPQ): 2.75g ;月桂基硫酸钠：0.1g ; 蒸馏水：1000mL; pH：6.8±0.22) 制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。
分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。
121 C高压灭菌15 min。
(2)EC肉汤(E.coli , BGLB :1)成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0 g; 3号胆盐或混合胆盐：1.5 g；乳糖:5.0g ;磷酸氢二钾(K2HPQ) : 4.0g ;磷酸二氢钾(KHPQ) : 1.5g ;氯化钠：5.0g ; 蒸馏水：1000mL pH:6.9 ± 0.1。
粪大肠菌群的测定步骤
粪大肠菌群的测定1、半个月前配好初、复发酵所需培养液2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口3、操作（1） 培养液初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨 10 g牛肉浸膏 3 g乳糖 5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml调节PH 为7.2—7.4（NaOH ）6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml （三倍是5ml ）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。
共190个（1900ml ）单倍，65个三倍（325ml ）。
双月10个地表水，2个创业。
共130个（1600ml ）单倍，50个三倍（250ml ）。
创业的水一个月采两次水样复发酵 EC 培养液胰胨 20 g乳糖 5 g胆盐三号 1.5 g磷酸氢二钾 4 g磷酸二氢钾 1.5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml充分混匀后 10ml 分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
三倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml（2）做样初发酵：地表水15根管为一个水样。
5根为一组。
第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。
（10、1、0.1的取样量）创业，每个水样15根单倍。
同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、0.001ml。
将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。
观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。
复发酵：呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。
粪大肠菌群的测定步骤
粪大肠菌群的测定1、半个月前配好初、复发酵所需培养液2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口3、操作（1） 培养液初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨 10 g牛肉浸膏 3 g乳糖 5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml调节PH 为7.2—7.4（NaOH ）6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml （三倍是5ml ）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。
共190个（1900ml ）单倍，65个三倍（325ml ）。
双月10个地表水，2个创业。
共130个（1600ml ）单倍，50个三倍（250ml ）。
创业的水一个月采两次水样复发酵 EC 培养液胰胨 20 g乳糖 5 g胆盐三号 1.5 g磷酸氢二钾 4 g磷酸二氢钾 1.5 g氯化钠 5 g蒸馏水 1000ml充分混匀后 10ml 分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。
三倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml（2）做样初发酵：地表水15根管为一个水样。
5根为一组。
第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。
（10、1、0.1的取样量）创业，每个水样15根单倍。
同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、0.001ml。
将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。
观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。
复发酵：呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。
医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法
医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法A1 仪器和设备高压蒸汽灭菌器。
干燥灭菌箱。
培养箱：37℃。
恒温水浴箱。
电炉。
天平。
灭菌平皿。
灭菌刻度吸管。
酒精灯A2 培养基和试剂乳糖胆盐培养液A2.1.1成分蛋白胨20g猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g乳糖5g％溴甲酚紫水溶液蒸馏水1000mLA2.1.2 制法将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH到，加入指示剂，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。
115℃下灭菌20min。
贮存于冷暗处备用。
三倍浓度乳糖胆盐培养液A2.2.1成分蛋白胨60g猪胆盐（或牛、羊胆盐）15g乳糖15g％溴甲酚紫水溶液蒸馏水1000mLA2.2.2 制法制法同附录A2.1.2。
伊红美兰培养基（EMB培养基）A2.3.1 成分蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾2g琼脂20g2％伊红水溶液20mL％美蓝水溶液13mL蒸馏水1000mLA2.3.2 制法将琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨，混匀使溶解，再加入蒸馏水补足至1000mL，调整pH至～。
趁热用脱脂棉和砂布过滤，再加入乳糖，混匀，定量分装于烧瓶内，115℃灭菌20min。
作为储备培养基贮存于冷暗处备用。
临用时，加热融化储备培养基，待冷至60℃左右，根据烧瓶内培养基的容量，加入一定量的已灭菌的2％伊红水溶液和％美蓝水溶液，充分摇匀（防止产生气泡）。
倾注平皿备用。
乳糖蛋白胨培养液A2.4.1成分蛋白胨10g牛肉膏3g乳糖5g氯化钠5g％溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水1000mLA2.4.2 制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH到～，加入％溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。
115℃下灭菌20min。
贮存于冷暗处备用。
革兰氏染色液A2.5.1 结晶紫染色液结晶紫1g95％乙醇溶液20mL1％草酸铵水溶液1000mL将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵水溶液混合。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法粪大肠菌群检测是指对人体粪便中的大肠菌群进行检测分析，以了解肠道微生态的状况。
粪大肠菌群的平衡与人体健康密切相关，因此对其进行检测具有重要意义。
目前，有多种方法可用于粪大肠菌群检测，本文将对常见的几种方法进行介绍和比较。
首先，传统的培养法是一种常见的粪大肠菌群检测方法。
该方法通过在特定培养基上培养粪便样本中的细菌，然后根据形态、生理生化特性进行鉴定和计数。
这种方法简单易行，能够得到各种细菌的数量和种类，但是需要较长的培养周期，且无法培养一些难以培养的菌种，因此在一定程度上存在局限性。
其次，分子生物学方法在粪大肠菌群检测中得到了广泛应用。
其中，16SrRNA基因测序是一种常用的方法，通过对粪便样本中的细菌DNA进行测序，可以得到细菌的种类和数量信息。
这种方法具有高通量、高灵敏度的特点，能够检测到微生物群落的整体结构，但是需要较高的技术水平和设备支持。
另外，代谢组学方法也被应用于粪大肠菌群检测。
这种方法通过检测粪便样本中的代谢产物，了解肠道微生物的代谢活动情况，从而推断微生物群落的组成和功能。
代谢组学方法能够直观地反映微生物群落的代谢活动，但是受到代谢产物的多样性和复杂性的限制，需要较高的分析技术和数据处理能力。
此外，基于人工智能的分析方法也逐渐应用于粪大肠菌群检测。
这种方法通过建立粪便微生物组的数据库和模型，利用人工智能算法对样本数据进行分析和预测，从而实现对微生物群落的快速、准确的检测。
人工智能方法具有高效、自动化的特点，但是需要大量的数据支持和算法优化。
综上所述，粪大肠菌群检测方法多种多样，各有优缺点。
在实际应用中，可以根据具体需求和条件选择合适的方法进行检测。
随着科技的不断发展，相信粪大肠菌群检测方法会越来越完善，为人体健康提供更多的帮助。
粪大肠菌群的测定
LPEMS⁄ZYA-43-2011生活饮用水中耐热大肠菌群、总大肠菌群、大肠埃希氏菌的测定——酶底物法一、实验原理该革新的检测技术利用分别由大肠菌群β-半乳糖苷酶及大肠杆菌β-葡萄糖醛酸酶代谢的两种「营养剂─指示剂」：邻硝基苯-β-D-半乳派喃糖（ONPG）及甲基香豆基葡糖醛酸苷（MUG），作为Colilert试剂的主要碳源。
1、利用大肠菌群细菌能产生β2 半乳糖苷酶分解ONPG 使培养液呈黄色，检测大肠菌群；2、利用大肠埃希氏菌产生β2 葡萄糖醛酸酶分解MUG 使培养液在波长366nm 紫外光下产生蓝色荧光，检测大肠埃希氏菌；3、改变培养温度，可检测耐热大肠菌群。
因为大多数非─大肠杆菌属菌类没有这些酶，所以无法在Colilert试剂里生长及干涉这些物质。
而有这些酶的少数非─大肠杆菌属菌类会受到Colilert 特殊配方的基质选择性的抑制作用（专利技术）。
二、仪器和试剂耗材1、检测设备—程控定量封口机Quanti-TraySealer Model 2X 美国IDEXX；2、可充电紫外灯，6W，220V，366nm；3、紫外线防护镜；4、DST酶底物法24小时Colilert试剂美程控定量封口机国IDEXX；5、51孔定量盘（无菌）；97孔定量盘（无菌）6、阳性标准比色瓶，阳性51孔标准比色盘；7、100mL含硫代硫酸钠无菌取样袋/瓶；M U G试剂（科立得）定量盘（51孔或者97孔）取样瓶8.记号笔；9.无菌剪刀；10.无菌夹子；11.一次性医用无菌手套。
四、实验步骤1.操作流程图酶底物法即可以作定性又可以作定量分析，同时检测两个指标，总大肠菌群（total coli）和大肠埃希氏菌（Escherichia coli），方法简便，快速，结果准确。
2.操作说明注意：如果不按照说明使用机器，可能会有人员伤害、机器损害、其他财产损害以及出现检测结果不准确。
（1）操作前后或离开实验室必须用肥皂或消毒液洗手。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测是一项非常重要的检测方法，可以帮助医生了解肠道菌群的健
康状况，对于一些肠道疾病的诊断和治疗具有重要的指导意义。
目前，常见的粪大肠菌群检测方法主要包括传统培养法、分子生物学方法和代谢产物分析法。
传统培养法是最早被使用的检测方法之一，其原理是将粪便样本在特定的培养
基上进行培养，然后观察和计数不同菌种的数量。
这种方法简单易行，但是存在着检测时间长、无法培养一些难以培养的菌种等缺点。
分子生物学方法是近年来得到广泛应用的一种检测方法，其原理是通过PCR
扩增、测序等技术，对粪便样本中的微生物DNA进行检测和分析。
这种方法可以
快速、准确地获取肠道微生物的信息，但是需要专业的设备和技术人员进行操作，成本较高。
代谢产物分析法是一种新兴的检测方法，其原理是通过检测粪便中微生物代谢
产物的种类和含量，来推断肠道微生物的组成和功能状态。
这种方法无需培养微生物，可以直接反映微生物的活动情况，但是目前仍处于研究阶段，需要更多的临床验证。
除了以上几种方法外，近年来还出现了一些新的粪大肠菌群检测技术，如16S rRNA测序技术、宏基因组测序技术等，这些新技术在提高检测灵敏度、准确性和
全面性方面具有一定优势，但是也存在着技术门槛高、设备昂贵等问题。
总的来说，粪大肠菌群检测方法在不断地发展和完善，不同的方法各有优缺点，应根据具体的临床需求和实际情况选择合适的检测方法。
未来随着技术的不断进步，相信粪大肠菌群检测方法会更加快速、准确、全面，为肠道健康的评估和疾病的诊断治疗提供更好的帮助。
粪大肠杆菌群测定方法
火量粪大肠菌群的测定之阳早格格创做℃温度下能死少并收酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群.用普及培植温度的要领，制成不利于去自自然环境的大肠菌群死少的条件，使培植出去的菌主要为去自粪便中的大肠菌群，进而更准确天反映出火量受粪便传染的情况.粪大肠菌群的测定不妨用多管收酵法战滤膜法.第一篇多管收酵法1. 适用范畴本尺度适用于天表火、天下火及兴火中粪大肠菌群的测定.2. 本理多管收酵法是以最大概数（most probable number）简称MPN去表示考查截止的.本量上它是根据统计教表里，预计火体中的大肠杆菌稀度战卫死品量的一种要领.如果从表里上思量，而且举止洪量的沉复检定，不妨创制那种预计有大于本量数字的倾背.没有过只消每一稀释度试管沉复数目减少，那种好别便会缩小，对付于细菌含量的预计值，大部分与决于那些既隐现阳性又隐现阳性的稀释度.果此正在真验安排上，火样考验所央供沉复的数目，要根据所央供数据的准确度而定.3. 培植基战试剂本尺度所用试剂除另有证明中，均为切合国家尺度的分解杂化教试剂；真验用火为新制备的去离子火.3.1单倍乳糖蛋黑胨培植液：身分：蛋黑胨 10g牛肉浸膏 3g乳糖 5g氯化钠 5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL蒸馏火 1000mL制法：将蛋黑胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏火中，安排pH为7.2～7.4，再加进1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分拆于含有倒置的小玻璃管的试管中，于下压蒸汽灭菌器中，正在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用.3.2 三倍乳糖蛋黑胨培植液：按上述配圆比率三倍（除蒸馏火中），配成三倍浓缩的乳糖蛋黑胨培植液，制法共上.3.3 EC培植液：身分：胰胨 20g乳糖 5g胆盐三号 1.5g磷酸氢两钾（K2HPO4） 4g磷酸两氢钾（KH2PO4） 1.5g氯化钠 5g蒸馏火 1000mL制法：将上述身分加热溶解，而后分拆于含有玻璃倒管的试管中.置下压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min.灭菌后pH应为6.9.3.4 培植基的存搁正在稀启瓶中的脱火培植基兴品要存搁正在大气干度矮、温度矮于30℃的暗处，存搁时应预防阳光曲交映照，而且要预防杂菌侵进战液体挥收.当培植液颜色变更，或者体积变更明隐时兴弃没有必.4. 步调4.1 火样交种量将火样充分混匀后，根据火样传染的程度决定火样交种量.每个样品起码用三个分歧的火样量交种.共一交种火样量要有五管.相对付已受传染的火样交种量为10mL、1mL、0.1mL.受传染火样交种量根据传染程度交种1mL、0.1mL、0.01mL 或者0.1mL、0.01mL、0.001mL等.使用的火样量可参照下表1.表1 交种用火量参照表＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿交种量(mL）火样种类检测要领 100 50 10 1 0.1 10-210-310-4 10-5井火多管收酵法×××河火、塘火多管收酵法×××湖火、塘火多管收酵法×××都会本污火多管收酵法×××＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿如交种体积为10mL，则试管内应拆有三倍浓度乳糖蛋黑胨培植液5mL；如交种量为1mL或者少于1mL，则可交种于一般浓度的乳糖蛋黑胨培植液10mL中.4.2 初收酵考查将火样分别交种到衰有乳糖蛋黑胨培植液的收酵管中.正在37℃±℃下培植24h±2h.产酸战产气的收酵管标明考查阳性.如正在倒管内产气没有明隐，可沉拍试管，有小气泡降起的为阳性.4.3 复收酵考查℃±℃温度下培植24h±2h（火浴箱的火里应下于试管中培植基液里）.交种后所有收酵管必须正在30min内搁进火浴中.培植后坐时瞅察，收酵管产气则证据为粪大肠菌群阳性.5．截止的预计根据分歧交种量的收酵管所出现阳性截止的数目，从表2或者表3中查得每降火样中的粪大肠菌群.交种火样为100mL2份、10mL10份、总量300mL时，查表2可得每降火样中的粪大肠菌群；交种5份10mL火样、5份1mL火样、5份0.1mL火样时，查表3供得MPN指数，MPN值再乘10，即为1L火样中的粪大肠菌群.。
粪大肠杆菌群测定方法
水质粪大肠菌群的测定℃温度下能发展并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群.用进步造就温度的办法,造成晦气于来自天然情形的大肠菌群发展的前提,使造就出来的菌重要为来自粪便中的大肠菌群,从而更精确地反应出水质受粪便污染的情形.粪大肠菌群的测定可以用多管发酵法和滤膜法.第一篇多管发酵法1. 实用规模本尺度实用于地表水.地下水及废水中粪大肠菌群的测定.2. 道理多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN来暗示实验成果的.现实上它是依据统计学理论,估量水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种办法.假如从理论上斟酌,并且进行大量的反复检定,可以发明这种估量有大于现实数字的偏向.不过只要每一稀释度试管反复数量增长,这种差别便会削减,对于细菌含量的估量值,大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度.是以在实验设计上,水样磨练所请求反复的数量,要依据所请求数据的精确度而定.3. 造就基和试剂本尺度所用试剂除尚有注明外,均为相符国度尺度的剖析纯化学试剂;实验用水为新制备的去离子水.3.1单倍乳糖蛋白胨造就液：成分：蛋白胨 10g牛肉浸膏 3g乳糖 5g氯化钠 5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL蒸馏水 1000mL制法：将蛋白胨.牛肉浸膏.乳糖.氯化钠加热消融于1000mL 蒸馏水中,调节pH为7.2～7.4,再参加 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL,充分混匀,分装于含有倒置的小玻璃管的试管中,于高压蒸汽灭菌器中,在115℃灭菌20min,贮存于暗处备用.3.2 三倍乳糖蛋白胨造就液：按上述配方比例三倍（除蒸馏水外）,配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨造就液,制法同上.3.3 EC造就液：成分：胰胨 20g乳糖 5g胆盐三号 1.5g磷酸氢二钾（K2HPO4） 4g磷酸二氢钾（KH2PO4） 1.5g氯化钠 5g蒸馏水 1000mL制法：将上述成分加热消融,然后分装于含有玻璃倒管的试管中.置高压蒸汽灭菌器中,115℃灭菌20min.灭菌后pH应为6.9.3.4 造就基的存放在密封瓶中的脱水造就基成品要存放在大气湿度低.温度低于30℃的暗处,存放时应防止阳光直接照耀,并且要防止杂菌侵入和液体蒸发.当造就液色彩变更,或体积变更显著时放弃不必. 4. 步调4.1 水样接种量将水样充分混匀后,依据水样污染的程度肯定水样接种量.每个样品至罕用三个不合的水样量接种.统一接种水样量要有五管.相对未受污染的水样接种量为10mL.1mL.0.1mL.受污染水样接种量依据污染程度接种1mL.0.1mL.0.01mL或0.1mL.0.01mL.0.001mL等.应用的水样量可参考下表1.表1 接种用水量参考表＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿接种量(mL）水样种类检测办法 100 50 10 1 0.1 10-210-310-4 10-5井水多管发酵法×××河水.塘水多管发酵法×××湖水.塘水多管发酵法×××城市原污水多管发酵法×××＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿如接种体积为10mL,则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨造就液5mL;如接种量为1mL或少于 1mL,则可接种于通俗浓度的乳糖蛋白胨造就液10mL中.4.2 初发酵实验将水样分离接种到盛有乳糖蛋白胨造就液的发酵管中.在37℃±℃下造就24h±2h.产酸和产气的发酵管标明实验阳性.如在倒管内产气不显著,可轻拍试管,有吝啬泡升起的为阳性.4.3 复发酵实验℃±℃温度下造就24h±2h（水浴箱的水面应高于试管中造就基液面）.接种后所有发酵管必须在30min内放进水浴中.造就后立刻不雅察,发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性.5．成果的盘算依据不合接种量的发酵管所消失阳性成果的数量,从表2或表3中查得每升水样中的粪大肠菌群.接种水样为100mL2份.10mL10份.总量300mL时,查表2可得每升水样中的粪大肠菌群;接种5份10mL水样.5份1mL水样.5份0.1mL水样时,查表3求得MPN指数,MPN值再乘10,即为1L水样中的粪大肠菌群.。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测是一种常用的微生物检测方法，用于评估肠道内大肠埃希杆菌等菌群的数量和组成。
以下介绍几种常见的粪大肠菌群检测方法：
1. 传统培养法：该方法通过将粪便样本接种在含有特定培养基的培养皿中，利用培养皿中的营养物质、温度等条件，使大肠菌群等菌种在培养基上生长。
然后通过观察培养皿中的菌落形态、颜色等特征，或进行进一步的生化试验，来鉴定和计数菌群。
这种方法操作简便，但需要较长时间（通常需要2-3天）。
2. PCR法：PCR（聚合酶链反应）是一种快速、高效的核酸扩增技术，可用于检测微生物的DNA或RNA。
在粪大肠菌群检测中，可以选择一种或多种特异引物，通过PCR扩增粪便样
本中的大肠菌群DNA片段。
扩增后的产物可以进行电泳分析，根据特定的条带模式来鉴定和计数菌群。
相比传统培养法，PCR法的优势在于快速、高灵敏度和特异性。
3. 16S rRNA测序法：16S rRNA是细菌基因组中高保守的区域，其序列具有物种特异性。
基于16S rRNA序列的差异，可以通
过测序技术快速准确地鉴定粪大肠菌群的组成。
该方法可通过提取粪便样本中的总DNA，进行PCR扩增和纯化后，进行高
通量测序。
测序结果可以使用相应的数据库比对，识别和计数样本中的各种大肠菌群。
总结来说，传统培养法、PCR法和16S rRNA测序法是常见的
粪大肠菌群检测方法。
其中，PCR法和16S rRNA测序法更加
快速、准确，逐渐成为主流的检测方法。
这些方法的应用有助于揭示肠道微生物群落的组成和功能，为相关疾病的诊断和治疗提供依据。
粪大肠、总大肠、细菌总数的测定
一、微生物分析的总体要求（一）、采样瓶及玻璃器皿的清洗1、新购置的玻璃器皿，因含游离碱，2%的盐酸浸泡数小时，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，沥干。
2、培养细菌后的玻璃器皿，应先经高压蒸汽灭菌，趁热倒出培养基，用洗涤剂刷洗干净，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，沥干。
3、洗涤吸管时可高压蒸汽灭菌30min，用洗涤剂刷洗干净，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，沥干。
用牛皮纸包好，可干热灭菌（于烘箱中160℃烘150min）和高压蒸汽灭菌（121℃灭菌20min）。
备用。
所有的吸管上端要用少量普通棉花填塞，注意松紧度，取液时使其准确快速的流出）4、洗涤采样瓶时，用刷子刷洗干净，自来水冲洗，蒸馏水冲洗干净，再烘箱烘干，用牛皮纸包好（鸡肠带捆好），可干热灭菌（于烘箱中160℃烘150min）和高压蒸汽灭菌（121℃灭菌20min）5、培养皿：洗净后，用烘箱烘干，用牛皮纸包好进行灭菌，待冷后放入冰箱中备用。
（二）、培养基的制备1、单倍乳糖蛋白胨培养液-液体培养基用量筒量取1000mlUP水，加23g营养物质，沿烧饼边沿搅拌，使其完全溶解。
用移液管移取9ml培养液分装于试管中，用针管将小导管从底部注满营养液，斜扣入试管中，用胶塞塞紧，用牛皮纸每十个进行包扎。
2、三倍乳糖蛋白胨培养液：营养物质加入69g，用移液管移取5ml培养液分装于试管中，用针管将小导管从底部注满营养液，斜扣入试管中，用胶塞塞紧，用牛皮纸每十个进行包扎。
3、EC培养液（配制过程同乳糖蛋白胨培养液）(称取37g)-液体培养基4、无菌水，吸取9ml新鲜UP水于试管中，其余包扎过程同乳糖蛋白胨培养液。
5、上述培养基及无菌水准备好后高压蒸汽灭菌（121℃灭菌20min）。
灭菌后等室温再放入冰箱。
6、伊红美蓝培养基（EMB培养基）(固体培养基-平板)①称取42g营养物质，加入到1000mlUP水中，加热溶解，用三角瓶分装，盖上绵塞，至于高压蒸汽灭菌锅内，121℃灭菌20min。
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法
大肠菌群是人体内重要的微生物群落之一，它对于维持肠道健康、消化食物、
合成维生素等方面起着重要作用。
因此，对大肠菌群进行检测具有重要的临床意义。
本文将介绍几种常见的大肠菌群检测方法，帮助读者更好地了解大肠菌群检测的原理和应用。
首先，常见的大肠菌群检测方法之一是通过粪便样本进行分析。
粪便样本是最
常用的样本类型，采集方法简单、成本较低，并且能够全面反映肠道微生物的情况。
通过对粪便样本中的细菌进行培养和鉴定，可以获得大肠菌群的组成和数量信息。
其次，分子生物学方法也被广泛应用于大肠菌群的检测中。
例如，通过16S rRNA基因测序可以对肠道微生物进行分类和鉴定，从而了解大肠菌群的多样性和
丰度。
此外，还可以利用荧光原位杂交技术（FISH）直接在样本中观察和定量大
肠菌群的情况。
除了以上两种方法，近年来，基于高通量测序技术的宏基因组学分析也成为大
肠菌群检测的重要手段。
这种方法可以对肠道微生物的整个基因组进行测序和分析，揭示大肠菌群的功能和代谢特点，为肠道微生物相关疾病的诊断和治疗提供重要依据。
总的来说，大肠菌群检测是一项复杂而又重要的工作，不同的方法各有优劣。
在实际应用中，可以根据具体情况选择合适的检测方法，结合临床病情进行综合分析，从而更好地指导临床诊疗工作。
希望本文介绍的大肠菌群检测方法能够为相关人士提供一定的参考价值，促进大肠菌群检测技术的进一步发展和应用。
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法粪大肠菌群检测是一项非常重要的检测方法，它可以帮助我们了解肠道内的微生物组成情况，对于肠道健康的评估和疾病的诊断具有重要意义。
在进行粪大肠菌群检测时，我们可以采用多种方法来获取准确的检测结果。
下面将介绍几种常见的粪大肠菌群检测方法。
首先，传统的培养法是一种常用的粪大肠菌群检测方法。
通过将粪便样品接种到含有特定培养基的培养皿中，然后进行培养和计数，可以得到不同菌群的数量和种类。
这种方法操作简单，成本较低，但需要一定的培养时间，并且只能检测到能够在特定培养条件下生长的菌群，对于一些无法在常规培养条件下生长的菌群无法检测到。
其次，分子生物学方法也是常用的粪大肠菌群检测方法之一。
包括PCR、实时荧光定量PCR、16S rRNA基因测序等技术，可以对粪便中的微生物DNA进行扩增和测序，进而对菌群进行鉴定和数量分析。
这种方法可以检测到更多种类的微生物，具有更高的灵敏度和特异性，但相对来说操作复杂，成本较高。
另外，近年来，基于高通量测序技术的宏基因组学方法也逐渐应用于粪大肠菌群检测。
通过对粪便样品进行高通量测序，可以获得更全面、更深入的微生物组成信息，包括细菌、真菌、病毒等。
这种方法可以帮助我们更好地了解肠道微生物的多样性和功能，但需要较高的测序深度和数据分析能力。
除了上述方法外，还有一些新兴的粪大肠菌群检测方法，如代谢组学、蛋白质组学等，可以通过检测粪便中的代谢产物和蛋白质组成来评估肠道微生物的活动和功能。
这些方法在研究肠道微生物与宿主健康的关系方面具有重要意义。
综上所述，粪大肠菌群检测方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用范围。
在进行粪大肠菌群检测时，应根据具体的研究目的和实际情况选择合适的方法，以获得准确、全面的检测结果。
希望通过不断的技术进步和方法改进，粪大肠菌群检测能够更好地为肠道健康的评估和疾病的诊断提供帮助。
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测是一项非常重要的检测方法，可以帮助我们了解
肠道健康状况，及时发现和预防一些疾病。
目前，常见的大肠菌群
检测方法包括肠道菌群分析、粪便菌群检测、肠道菌群DNA测序等。
这些方法各有特点，下面将逐一介绍。
首先，肠道菌群分析是通过采集粪便样本，利用生物信息学技
术对肠道菌群进行分析。
这种方法可以快速、准确地了解肠道内的
微生物组成，包括细菌、真菌、病毒等。
通过肠道菌群分析，可以
发现肠道菌群失衡的情况，及时进行调理和治疗。
其次，粪便菌群检测是通过对粪便样本进行培养和鉴定，来检
测肠道内的细菌种类和数量。
这种方法可以直观地了解肠道内的细
菌情况，包括有益菌和有害菌的比例，从而评估肠道健康状况。
同时，粪便菌群检测还可以帮助医生判断肠道疾病的类型和严重程度，为治疗提供依据。
最后，肠道菌群DNA测序是通过对肠道菌群的DNA进行测序分析，来了解肠道内微生物的种类和基因信息。
这种方法可以全面地
揭示肠道菌群的多样性和功能特点，有助于深入研究肠道微生物与
宿主健康的关系，为个性化治疗提供参考依据。
总的来说，大肠菌群检测方法多种多样，可以从不同角度全面
了解肠道内微生物的情况，有助于预防和治疗相关疾病。
在选择检
测方法时，需要根据具体情况和需求进行综合考虑，以获得最准确、全面的检测结果。
希望本文介绍的内容对大家有所帮助，谢谢阅读！。
粪大肠菌群检测
粪大肠菌群检测一、室所用设备、器皿1、无菌区工作台2、恒温培养箱3、高压蒸汽灭菌器4、冰箱5、酒精灯6、天平7、电炉8、采样广口瓶9、烧杯、玻璃棒10 、玻璃发酵管11、试管架12、移液管13、锥形瓶二、药品:乳糖胆盐培养基三、前期准备1、玻璃器皿灭菌(高压蒸汽灭菌)所用采集水样的广口瓶、玻璃试管、移液管、玻璃棒、锥形瓶等玻璃器皿均需放入高压锅灭菌。
广口瓶:将清洗干净的采样瓶盖好瓶盖,用牛皮纸、报纸等防潮纸将瓶盖、瓶顶和瓶颈处包裹好,用绳子绑好,置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。
玻璃试管、移液管、玻璃棒:用牛皮纸、报纸等防潮纸将其包裹好,置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。
2、采样采取水样时,可握住瓶子下部直接将已灭菌的带盖采样瓶插入水中,约距水面10~15cm处,拔瓶盖,瓶口朝水流方向,使水样灌入瓶内然后盖上瓶盖,将采样瓶从水中取出。
如果没有水流,可握住瓶子水平前推,直到充满水样为止。
采好水样后,迅速盖上瓶盖和包装纸。
采好的水样,应迅速运往实验室,进行检验,一般从取样到检验不宜超过2h,否则应使用10℃以下的冷藏设备保存样品,但不得超过6h。
四、实验步骤(多管发酵法)1、配制乳糖胆盐培养基试制(注:做15管的话,10ml的要配双料的,如:30g配1000ml,就应称取60g配1000ml,其他1ml、0.1ml的配制成单料的),配制试剂时不用定容,只需大概体积即可。
2、称取12g乳糖胆盐培养基溶于200ml蒸馏水中,置于电炉上加热至溶解完全为止,冷却至室温后,分装于玻璃发酵管里。
(5管10ml)3、称取6g乳糖胆盐培养基溶于100ml蒸馏水中,置于电炉上加热至溶解完全为止,冷却至室温后,分装于玻璃发酵管里。
(10管10ml)5、所有发酵管盖好盖子,包裹好置于高压锅灭菌15 分钟(第一次曝气开始计时)6、分别加入5管10ml、5管1ml、5管0.1ml的水样于已冷却至室温的发酵管中,并置于恒温培养箱里培养24小时(温度为44.5℃)五、结果根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目,从MPN表中查得相应的MPN 指数,按总大肠菌群的计算方法计算每升水中粪大肠菌群细菌的MPN值。
粪大肠菌群检测方法20110520
粪大肠菌群的测定（多管发酵法）一、检测限二、试剂(均为分析纯)1、配制单倍乳糖蛋白胨培养液（1份量）(因有固体培养基，以下配置方法仅做参考)单倍乳糖蛋白胨培养液成分：蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL、碳酸钠10.6g。
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液（1mL）：称取溴甲酚紫1.6g倒入小烧杯，用少量95%乙醇溶解，移至100mL容量瓶，用95%乙醇多次洗小烧杯，洗液移入容量瓶，最后用95%乙醇定容至100mL，摇匀备用。
（滤纸、100mL小烧杯2只、100mL容量瓶1只、95%乙醇、玻璃棒、药匙、天平、滴管、溴甲酚紫）碳酸钠（10.6g）：称取10.6g碳酸钠溶于蒸馏水，并定容到100mL。
（100mL容量瓶1个、100mL小烧杯2只、碳酸钠）将单倍乳糖蛋白胨培养液成分蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、乳糖5g、氯化钠5g加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2~7.4（用10%碳酸钠调节），再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管(10mL左右)中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用（冰箱中可存放3个月）。
(>1L锥形瓶1只、1mL移液管1根、pH计、电炉、倒置的小玻璃管的试管60套（小试管(12x150mm ）+小套管（杜氏小管）（约6mm × 36mm )）、高压蒸汽灭菌器、试管架（10只入）、纱布和棉花)2、三倍配制单倍乳糖蛋白胨培养液：制法同上，除蒸馏水外，其余配方比例三倍。
3、EC培养液（1份量）将EC培养液所需成分胰胨20g、乳糖5g、胆盐三号1.5g、磷酸氢二钾（K2HPO4）4g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1.5g、氯化钠5g，加热溶解于1L烧杯中，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。
用10%Na2CO3调节pH以防止培养基灭菌后pH上升0.2左右（确定值需要前期在实验室寻找规律）。
粪大肠杆菌的测定方法
粪大肠杆菌的测定方法1. 引言粪大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，它存在于人和动物的粪便中。
粪大肠杆菌可以作为一种指标微生物，用于评估水质、食品卫生以及环境污染等方面。
准确测定粪大肠杆菌的数量对于公共卫生和食品安全具有重要意义。
本文将介绍几种常用的粪大肠杆菌测定方法，并对它们的优缺点进行评述。
2. 常用的粪大肠杆菌测定方法2.1 琼脂平板计数法琼脂平板计数法是目前最常用的粪大肠杆菌测定方法之一。
该方法基于将样品在富含营养成分和抑制其他细菌生长的琼脂培养基上进行培养，然后通过数落形成的典型淡紫色或淡红色菌落来计算细菌数量。
优点： - 适用于各种样品类型，包括水、食品和环境样品等。
- 直观可见，易于操作。
- 成本低廉。
缺点： - 需要较长的培养时间，通常需要24-48小时。
- 无法区分粪大肠杆菌的不同菌株。
2.2 膜过滤法膜过滤法是另一种常用的粪大肠杆菌测定方法。
该方法通过将样品过滤到孔径为0.45微米的膜上，然后将膜放置在富含营养成分的琼脂平板上进行培养。
通过数落形成的典型淡紫色或淡红色菌落来计算细菌数量。
优点： - 快速，通常只需6-8小时。
- 可以测定低浓度的粪大肠杆菌。
- 可以进行进一步的分析和鉴定。
缺点： - 对于含有高浓度其他细菌或颗粒物的样品，可能会发生堵塞。
- 器材和耗材成本较高。
2.3 PCR法PCR（聚合酶链式反应）法是一种基于DNA扩增的粪大肠杆菌测定方法。
该方法通过提取样品中的DNA，并使用特异性引物扩增粪大肠杆菌特有的DNA片段。
通过测定扩增产物的数量来计算粪大肠杆菌的数量。
优点： - 快速，通常只需几个小时。
- 高度特异性和敏感性。
- 可以鉴定粪大肠杆菌的不同菌株。
缺点： - 对实验技术要求较高，需要专门的实验室设备和技术支持。
- 成本较高。
3. 结论根据以上介绍，可以看出不同的粪大肠杆菌测定方法各有优缺点。
琼脂平板计数法适用于常规检测，操作简单且成本低廉；膜过滤法适用于对低浓度样品的快速测定；PCR法具有高特异性和敏感性，适用于对不同菌株进行鉴定。
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粪大肠菌群的测定（多管发酵法）
一、检测限
二、试剂(均为分析纯)
1、配制单倍乳糖蛋白胨培养液（1份量）(因有固体培养基，以下配置方法仅做参考)
单倍乳糖蛋白胨培养液成分：蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL、碳酸钠10.6g。
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液（1mL）：称取溴甲酚紫1.6g倒入小烧杯，用少量95%乙醇溶解，移至100mL容量瓶，用95%乙醇多次洗小烧杯，洗液移入容量瓶，最后用95%乙醇定容至100mL，摇匀备用。
（滤纸、100mL小烧杯2只、100mL容量瓶1只、95%乙醇、玻璃棒、药匙、天平、滴管、溴甲酚紫）
碳酸钠（10.6g）：称取10.6g碳酸钠溶于蒸馏水，并定容到100mL。
（100mL容量瓶1个、100mL小烧杯2只、碳酸钠）
将单倍乳糖蛋白胨培养液成分蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、乳糖5g、氯化钠5g加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2~7.4（用10%碳酸钠调节），再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管(10mL左右)中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用（冰箱中可存放3个月）。
(>1L锥形瓶1只、1mL移液管1根、pH计、电炉、倒置的小玻璃管的试管60套（小试管(12x150mm ）+小套管（杜氏小管）（约6mm × 36mm )）、高压蒸汽灭菌器、试管架（10只入）、纱布和棉花)
2、三倍配制单倍乳糖蛋白胨培养液：制法同上，除蒸馏水外，其余配方比例三倍。
3、EC培养液（1份量）
将EC培养液所需成分胰胨20g、乳糖5g、胆盐三号1.5g、磷酸氢二钾（K2HPO4）4g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1.5g、氯化钠5g，加热溶解于1L烧杯中，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。
用10%Na2CO3调节pH以防止培养基灭菌后pH上升0.2左右（确定值需要前期在实验室寻找规律）。
再将分装试管置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min。
灭菌后pH应为6.9。
（>1L烧杯1只）
在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。
当培养基颜色变化，或体积明显变化时废弃不用。
三、耗材和仪器
1、仪器：高压蒸汽灭菌器、生化培养箱（恒温箱）（25-44℃）、无菌操作台、天平
2耗材：倒置的小玻璃管的试管70套（小试管(12x150mm）+小套管（杜氏小管）（约6mm × 36mm )）；与小试管配套的棉塞或纱布和棉花；药匙、电炉、3mm接种环3根、吸耳球、牛皮纸、酒精灯1个、火柴、镊子2个、笔、试管架、滤纸（1盒）、、1mL及10mL移液管各2支
三、实验步骤
1、水样接种量
将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。
每个样品至少用三个不同的水样量接种。
同一接种水样量要有五管（平行）。
（如接种体积为10mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL；如接种量为1ml或少于1mL，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL中）
2、初发酵试验
将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管（含有玻璃倒管的试管）中（取原水样1mL，加如到9mL无菌生理盐水中混匀。
这时候得到的稀释液1mL就相当与0.1mL，
再按这个方法再稀释一次，就可以得到1mL相当于0.01ml的稀释液了。
这时候取1mL加入发酵管中即可）。
在37℃±0.5℃下培养24h±2h（箱内温度一定要达到所要求的温度(37.5±0.5℃)时，方可放入，下同）。
产酸和产气的发酵管表明试验阳性。
（培养液中加入溴甲酚紫作为酸度指示剂，细菌产酸后，培养液即由原来的紫色变成黄色。
）产酸产气的发酵管表明试验阳性。
如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。
（需20支同规格试管）
3、复发酵试验
轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用3mm接种环或灭菌棒(2-3环)将培养物转接到EC培养液中。
在44.5℃±0.5℃下培养24h±2h（水浴箱的水面应高于试管中培养基液面，提高培养温度可造成不利于来自自然环境的大肠菌群的生长）。
接种后所有发酵管必须在30min内放进水浴中。
培养后立即观察，发酵管产气则证实为菌群阳性。
记录：复发酵阳性管数
Ps:接种过程（亦有参考视频可供学习）
①接种前的准备工作。
a．检查接种工具，进行环境消毒。
b．在欲接种的培养基试管上贴好标签，标上接种的菌名、操作者、接种日期等。
c．将培养基、接种工具和其他用品全部放在实验台上摆好，进行环境消毒。
②接种方法
接种方法：斜面接种
将菌种试管与待接种的试管培养基依次排列，挟于左手的拇指与其他四指之间，用右手的无名指与小指和手掌边拔出棉塞并挟住。
置试管口于酒精火焰附近。
将接种工具垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰3次，然后再放入有菌试管内，在管壁上停留片刻待其冷却。
取少许菌种置于另一支试管中，按一定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。
取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。
重新塞上棉塞。
烧死接种工具上的残余菌，把试管和接种工具放回原处。
4、计算（参考HJ/T 347-2007）
其他问题：
1、样品的保存：采样用的容器使用前应盖好瓶盖，用牛皮纸将瓶盖和瓶颈处包裹好，置干燥箱160℃-170℃干热灭菌2h，或用高压蒸汽灭菌器121℃灭菌15min。
采样后水样的正确保存也很重要，如保存不当可使样品中的大肠菌群细菌死亡或在一定条件下再生长，这些都将影响检测结果的准确性。
检测室接到水样后，应立即检测，如因故不能检测时，应立即将样品置于冰箱内(2℃-10℃)并于2小时内检测。
2、多管发酵法所用的发酵管、小玻璃倒管和塑料盖可在清洗、高压灭菌和紫外线消毒后重复使用。