生物化学实验报告示范-3-5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线
生物化学实验报告示范-3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线
实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线马铃薯总糖含量测定实验目的1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法；2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法；3．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的原理及方法；4．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。
实验原理1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的及标准曲线定制原理3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物，该有色物质在540nm 处有最大吸光度，且在一定浓度范围内（一般OD值在0.2～0.8范围内线性较好），还原糖的量与反应液的颜色强度（吸光度OD值）呈线性关系，利用分光光度仪，以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品，在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度（OD值）大小，通过微机处理数据，定制葡萄糖标准曲线，确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程；2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理先将马铃薯去皮，经机械粉碎，过滤和清水漂洗，烘干制成马铃薯淀粉；再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖，经中和定容，配制成马铃薯总糖含量测定的待测液（即样品液）；再以标准曲线测定的加样操作方法，测定出样品待测液的吸光度大小，将测定的吸光度大小代入其回归方程，即可计算出样品待测液的显色浓度，根据稀释倍数关系，计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量，并测定出马铃薯总糖百分含量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
实验操作1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线（1）葡萄糖标准溶液的配制：（2mg/mL）准确称取2000mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL，冰箱保存备用（2）葡萄糖标准曲线定制加样操作及测定结果纪录（详见表1）按表1进行实验操作，在沸水浴中准确反应20min，取出后立即用冷水冷却，加蒸馏水定容至25mL，摇匀，用lcm的比色杯于540nm处测光密度值。
血糖标准曲线实验报告
一、实验目的1. 理解血糖测定的原理和方法。
2. 学习并掌握3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖的原理。
3. 建立血糖标准曲线，用于未知血糖样品的定量分析。
二、实验原理本实验采用3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖。
该法基于葡萄糖的还原性，在碱性条件下，3,5-二硝基水杨酸与葡萄糖反应生成棕红色化合物。
通过测定该化合物的吸光度，可以计算出葡萄糖的浓度。
三、实验器材1. 实验室天平2. 100ml容量瓶3. 移液管4. 烧杯5. 恒温水浴锅6. 分光光度计7. 3,5-二硝基水杨酸试剂8. 氢氧化钠溶液9. 标准葡萄糖溶液10. 未知血糖样品四、实验步骤1. 配制标准葡萄糖溶液：- 准确称取1.0g无水葡萄糖，溶解于100ml蒸馏水中，配制成10mg/ml的标准葡萄糖溶液。
- 分别取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0ml标准葡萄糖溶液，加入9.5ml蒸馏水，配制成浓度为0、0.5、1.0、1.5、2.0mg/ml的系列标准溶液。
2. 显色反应：- 向每个标准溶液中加入1.5ml 3,5-二硝基水杨酸试剂和1.5ml氢氧化钠溶液。
- 将混合液置于沸水浴中加热5分钟。
3. 吸光度测定：- 冷却后，用分光光度计在540nm波长下测定各溶液的吸光度。
4. 绘制标准曲线：- 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
5. 未知血糖样品测定：- 按照步骤2和3对未知血糖样品进行显色反应和吸光度测定。
- 根据标准曲线，计算未知血糖样品的葡萄糖浓度。
五、实验结果1. 标准曲线绘制：- 通过实验数据，绘制标准曲线，得出线性方程为：A = 0.0568C + 0.0031（R² = 0.9986）。
2. 未知血糖样品测定：- 对未知血糖样品进行测定，得到吸光度为0.85。
- 根据标准曲线，计算未知血糖样品的葡萄糖浓度为1.7mg/ml。
六、实验讨论1. 3,5-二硝基水杨酸法是一种简单、快速、灵敏的血糖测定方法，适用于临床和科研领域。
35二硝基水杨酸比色定糖法实验报告
35二硝基水杨酸比色定糖法实验报告35二硝基水杨酸比色定糖法实验报告一、引言糖是生命体内重要的能量来源之一，因此糖的检测对于生物学和医学研究具有重要意义。
35二硝基水杨酸比色定糖法是一种常用的糖类检测方法，本实验旨在通过该方法测定不同浓度的葡萄糖溶液。
二、实验原理35二硝基水杨酸（DNS）与糖类在碱性条件下反应生成有色产物，其吸光度与糖的浓度成正比。
在实验中，将待测样品与DNS溶液混合，加热反应后冷却，然后用紫外可见分光光度计测定吸光度，通过标准曲线可以计算出样品中糖的浓度。
三、实验步骤1.准备工作：将DNS溶液配制成适当浓度，标定不同浓度的葡萄糖溶液。
2.制备标准曲线：取一系列含有不同浓度葡萄糖的试管，分别加入适量DNS溶液，并用水稀释至一定体积。
将试管放入沸水中加热，反应5分钟后取出冷却至室温。
用紫外可见分光光度计测定吸光度，并记录数据。
3.测定待测样品：将待测样品与DNS溶液混合，按照步骤2中的方法进行反应和测定吸光度。
4.计算结果：利用标准曲线中的吸光度与浓度的关系，计算出待测样品中糖的浓度。
四、实验结果与讨论在本实验中，我们制备了一系列含有不同浓度葡萄糖的标准溶液，并利用35二硝基水杨酸比色定糖法测定了其吸光度。
通过绘制标准曲线，我们得到了吸光度与浓度之间的线性关系。
在测定待测样品时，我们按照相同的方法进行了实验，并测定了其吸光度。
通过标准曲线，我们可以计算出待测样品中糖的浓度。
实验结果显示，不同浓度的葡萄糖溶液在吸光度上呈现出明显的差异，与理论预期相符。
然而，在实际操作中，我们也遇到了一些问题。
首先，溶液的pH值对实验结果有一定影响，因此在实验过程中需要严格控制溶液的pH值。
其次，反应温度和时间也会对实验结果产生影响，需要进行优化。
此外，实验中使用的DNS 溶液也需要事先标定，以确保准确的测量结果。
五、结论通过35二硝基水杨酸比色定糖法，我们成功测定了不同浓度的葡萄糖溶液中糖的浓度。
标准葡萄糖DNS比色法测定.doc
标准准葡萄糖DNS比色法测定的方法采用3，5-二硝基水杨酸比色法测定水解液中还原糖含量，用752型分光光度计进行比色测定。
1葡萄糖DNS比色法的测定原理3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被的还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。
2测试药品（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂3测试方法（1）葡萄糖标准曲线制作①按下表制备9个试管。
②向9支试管中分别加入DNS试剂0.5ml，充分混合。
③将9支试管放入沸水浴中加热煮沸5min。
④将试管放入盛有冷水的烧杯中冷却。
⑤向各管中分别加入4mL蒸馏水，充分混合。
⑥以空白（1＃）管做对照，用分光光度计于540nm波长下分别测定各管溶液的OD值。
⑦以每管在540nm下的吸光值为纵坐标，每管所含的葡萄糖浓度为横坐标作图，即可得到一条通过零点的直线。
如果直线不通过零点则需重做。
标准葡萄糖曲线浓度的量取Tab.2.2 Preparation on standard curve of glucose试管编号标准葡萄糖溶液(mL) 蒸馏水(mL) 最终浓度(mg/mL)1 0 0.5 02 0.05 0.45 0.13 0.1 0.4 0.24 0.15 0.35 0.35 0.2 0.3 0.46 0.25 0.25 0.57 0.3 0.2 0.68 0.35 0.15 0.7 90.40.10.8（2）测定步骤①样品稀释。
②取2支试管，其中一支做对照，向样品试管中加入稀释后的样品溶液0.5mL ，空白不加。
③向两支试管中分别加入DNS 试剂0.5ml ，于沸水浴中加热5min ，然后冷却。
还原糖和总糖含量的测定(3,5 一二硝基水杨酸比色法)
还原糖和总糖含量的测定（3，5 一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3 ，5 一二硝基水杨酸比色法）作者：佚名文章来源：生物化学实验技术点击数：2132 更新时间：2021-5-13 11:29:24一、目的植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。
还原糖还能形成其他物质如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。
还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。
二、原理各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解度不同，可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与 3 ， 5 一二硝基水杨酸共热， 3 ， 5 一二硝基水杨酸被还原为 3-氨基 -5- 硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。
一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系， 540nm 波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
三、仪器、试剂和材料1 .仪器（ 1 ）刻度试管： 25 ml X 11（ 2 ）离心管或玻璃漏斗 X2（ 3 ）烧杯： 1OOml X 1（ 4 ）三角瓶： 100m1 X 1（ 5 ）容量瓶： 100ml X 3（ 6 ）刻度吸管： 1 ml X 1 ， 2m1 X 4, 10ml X 1（ 7 ）恒温水浴（ 8 ）沸水浴（ 9 ）离心机（过滤法不用此设备）（ 10 ）电子顶载天平（ 11 ）分光光度计2 .试剂（ 1 ） 1 mg/ ml 葡萄糖标准液：准确称取 100mg 分析纯葡萄糖（预先在8 0 ℃ 烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到 100ml 的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
实验二 还原糖的测定(3,5-二硝基水杨酸法)(4)
得标准曲线。（比色皿中装2/3液体即可）
管号 试剂 标准葡萄糖溶液/mL 蒸馏水/mL DNS试剂/mL 0 1.0 2.0 0.1 0.9 2.0 0.2 0.8 2.0 0.3 0.7 2.0 0.4 0.6 2.0 0.5 0.5 2.0 0 1 2 3 4 5
沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温 蒸馏水/mL 葡萄糖浓度/mg/mL A540nm 7.0 0 7.0 0.2 7.0 0.4 7.0 0..6 7.0 0.8 7.0 1.0
计
C1V1 m
算
按照下列公式分别计算面粉中还原糖和总糖的百 分含量：
ω=
X 稀释倍数X100%
式中， C1： 还原糖的质量浓度（mg/mL） V1： 样品中提取液的体积（mL） m： 样品的质量（mg）
实验二
还原糖和总糖的测定
（3,5-二硝基水杨酸法）
目
的
• 掌握还原糖和总糖的测定原理 • 学习还原糖和总糖的3,5-二硝基 水杨酸(DNS)测定法。
原
理
单糖和某些寡糖含有游离的醛基或 酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖 和蔗糖等属于非还原性糖。
原
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
理
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖
酸及其他产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原
用EXCEL作图、求R2和公式
1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 -0.2 0 0.5 1 1.5 系列1 线性 (系列1) y = 1.3727x - 0.0192 R2 = 0.9987
操
2、样品中还原糖提取：
作
准确称取0.2g面粉（或藕粉），加蒸馏水约3mL， 在研钵中磨成匀浆，转入100ml三角锥瓶瓶中，并用 20mL的蒸馏水冲洗研钵，洗出液也转入三角锥瓶中。
还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法实验_百替生物
碳水化合物
实验一 还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原
糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶
实验二 还原糖含量测定——砷钼酸比色法
一、目的 植物体内的还原糖主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳 水化合物的运转情况，而且也是合成其它成分碳架来源和呼吸作用的基质。此外，水果、蔬菜中含糖 量的多少，也是鉴定其品质的重要指标。其它碳水化合物，如淀粉、蔗糖等，经水解也生成还原糖。 因此，测定还原糖的方法在研究植物体内生理生化变化和测定植物体内碳水化合物方面都是很重要的。
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A、4％CuSO4•5H2O B、称取 24g 无水碳酸钠，用 850mL 水溶于大烧杯中，加入 2g 含 4 分子结晶水的酒石酸钾钠，待 全溶（应加热）后加入碳酸氢钠 16g，再加入 120g 无水硫酸钠（加热），全溶及冷却后加水至 900mL， 沉淀 1～2d，取上清液（要求严格时过滤）备用。 使用前将 A 与 B 按 1∶9 混匀即可使用。 （2）砷钼酸试剂：25g 钼酸铵 ( NH4)6Mo7O24·4H2O 溶于 450mL 蒸馏水中（加热溶解，但温度 接近 150℃时易分解），待冷却后再加入 21mL 浓 H2SO4 混匀。另将 3g 砷酸氢二钠(Na2HasO4·7H2O) 溶解于 25mL 蒸馏水中，然后加到钼酸铵溶液中，室温下放置于棕色瓶中可长期使用。 （3）200μg／mL 标准葡萄糖原液：准确称取分析纯葡萄糖 200mg，溶解定容到 1000mL。
3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖
3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖3,5-二硝基水杨酸比色法----标准曲线的制作 1.实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖10257 RP麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
2.实验材料、主要仪器和试剂2.1实验材料主要用到这些实验材料：红曲黄色素发酵液、钠虑膜浓缩后红曲黄色素液、旋转蒸发后红曲黄色素液。
2.2主要仪器本实验用到的实验仪器有：1) 具塞玻璃刻度比色管：25mL×19； 2) 烧杯：100mL×4； 3) 三角瓶：100mL×1；4) 容量瓶：100mL×3，50mL×3； 5) 刻度吸管：1mL×4；2mL×3；10mL×1； 6)沸水浴； 7) 冰浴； 8) 扭力天平；9) UV―2802SH型紫外可见分光光度计尤尼柯（上海）仪器有限公司；2.3实验试剂1) 1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
2) 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
实验一,3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定还原糖
3,5－二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定还原糖
一．原理
3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，再一定范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。
次法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较少，是一种很好的糖定量测定方法。
二．试剂
1. 3,5－二硝基水杨酸试剂(DNS试剂)
甲液－溶解6.9克结晶酚（苯酚）于15.2毫升10％氢氧化钠中，并稀释至69毫升，再此溶液中加入6.9克亚硫酸氢钠。
乙液－称取255克酒石酸甲钠，加到300毫升10％氢氧化钠中，再加入880毫升1％3,5－二硝基水杨酸溶液。
将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，保存于棕色试剂瓶中，在室温下放置7－10天后使用。
2.0.1％葡萄糖标准液
准确称取100毫克分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100毫升，保存于冰箱备用。
三.制作标准曲线
取9支大试管，分别按表一顺序加入各种试剂。
表一
将上述各管溶液混后，在紫外可见分光光度计上用绿色滤光片(520nm) 进行比色测定，用空白管溶液调零，记录光密度值。
以光密度值为横坐标，以葡萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
四.定糖
根据所取样品的个数来确定所需的试管数，在这里以7支试管为例，分别按表二顺序来加入各种试剂。
将各管混匀后，按制作标准曲线时的同样方法的操作，测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式计算出还原糖含量。
还原糖%= (还原糖毫克数⨯样品稀释倍数)/培养基中总含糖量⨯100
表二。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。
同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。
我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。
本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。
本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。
首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
实验八、3,5-二硝基水杨酸测定总糖
实验八、3，5-二硝基水杨酸测定总糖1．在样品的总糖提取时，为什么要用浓HCl处理？而在其测定前，又为何要用NaOH中和？总糖测定是建立在还原糖的测定的基础上的，经HCL处理是为了将所有的非还原糖水解还原成还原性糖，经过测定还原糖含量确定总糖含量。
用NaOH中和是因为HCL会消耗菲林试剂，所以必须要先中和来消除其影响2.标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什么要同步进行？时间差别大，吸光度会产生较大误差，虽然溶液在一定时间范围内是保持相对稳定的，但是分光光度计本身存在局限性，要求时间不能太长。
3.比色测定的操作要点是什么？方法的基本原理是什么？操作要点：1..用相同型号的比色管。
2.配制等体积的系列标准样品。
3.配制待测样品（与标准样品等体积）。
4.对比,找出相同的浓度。
基本原理：基于被测溶液的颜色显色剂后生成的有色溶液，其颜色强度和物质含量成比例。
溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应。
4.72型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么？原理：72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。
注意事项：1.保持其干燥，且不能置于高温环境使用。
2.定期使用，日常维护工作中要定期更换仪器的硅胶。
3. 每次装入比色皿的溶液不要过满,一般装2/3即可,并在每次倒溶液时应小心操作,减少对进光面的擦洗次数,以防进光面磨损而影响透过率。
4. 分光光度计是计量仪器,必须定期检定或校准,若经修理后必须重新检定,经检定合格后方可使用。
5.比色测定时为什么要设计空白管？减除溶液的差异，以便消除实验的误差。
6.3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖进行测定的?黄色的3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
35二硝基水杨酸比色定糖法实验报告
35二硝基水杨酸比色定糖法实验报告35二硝基水杨酸比色定糖法实验报告引言：糖是生命活动中必不可少的营养物质，它在人体内起着能量供应和维持正常生理功能的重要作用。
因此，糖的检测方法备受关注。
本实验旨在通过35二硝基水杨酸比色定糖法，对不同浓度的葡萄糖溶液进行定量测定，并探讨该方法的可行性和准确性。
材料与方法：1. 实验仪器：分光光度计、比色皿、移液管等。
2. 实验试剂：35二硝基水杨酸溶液、葡萄糖溶液、硫酸、去离子水等。
3. 实验操作：首先，准备一系列不同浓度的葡萄糖溶液，分别称取5 mL，加入比色皿中。
然后，加入相应体积的35二硝基水杨酸溶液，混匀后静置15分钟。
最后，使用分光光度计在波长540 nm处测定吸光度。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一系列不同浓度的葡萄糖溶液的吸光度数据，如下表所示：浓度（mg/mL）吸光度0.1 0.2340.2 0.4650.3 0.6980.4 0.9320.5 1.165根据实验数据，我们可以绘制出葡萄糖溶液浓度与吸光度之间的标准曲线。
通过对标准曲线的拟合，我们可以得到未知浓度的葡萄糖溶液的浓度。
该实验方法的原理是35二硝基水杨酸与葡萄糖在酸性条件下发生反应，生成红色化合物。
这种化合物的吸光度与葡萄糖的浓度成正比，因此可以通过测定吸光度来间接测定葡萄糖的浓度。
该方法的优点是简单、快速、准确，适用于大批量样品的测定。
然而，该方法也存在一些局限性。
首先，该方法只适用于葡萄糖的测定，对其他糖类的测定不适用。
其次，该方法对于溶液中存在的其他物质具有较强的选择性，因此在实际应用中需要注意样品的预处理。
结论：通过35二硝基水杨酸比色定糖法，我们成功地对不同浓度的葡萄糖溶液进行了定量测定，并得到了标准曲线。
该方法具有简单、快速、准确的特点，适用于大批量样品的测定。
然而，该方法的适用范围有限，对于其他糖类的测定不适用。
在实际应用中，还需要注意样品的预处理和选择合适的测定条件。
实验 纤维素酶活力的测定
实验 纤维素酶活力的测定（3,5-二硝基水杨酸法）一、实验目的掌握还原糖的测定原理，学习用3,5-二硝基水杨酸法测定纤维素酶活力的方法。
二、实验原理纤维素酶水解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3,5-二硝基水杨酸中的硝基还原成橙黄色的氨基化合物，故可利用比色法测定其还原物生成量来表示纤维素酶的活力。
三、主要仪器与试剂(一)实验仪器1. 25mL 比色管2. 722型分光光度计3. 滴管4.水浴锅5.移液枪6.电炉 (二)、试剂1. 3,5-二硝基水杨酸显色液：称取10.0 g 3,5-二硝基水杨酸，溶入200mL 蒸馏水中，加入20g 分析纯氢氧化钠，200g 酒石酸钾钠，加水至500mL ，升温溶解后，加入重蒸苯酚2.0g ，无水亚硫酸钠0.50g 。
加热搅拌，待全溶后冷却，定容至1000mL 。
存于棕色瓶中，放置一周后使用。
2. 0.1mol/L pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液。
3. 0.5%羧甲基纤维素钠水溶液，溶解后成胶状液，静置过夜。
使用前摇匀。
4. 葡萄糖标准溶液：称取干燥至恒重的无水葡萄糖100mg ，溶解后定容至100mL ， 此溶液含葡萄糖1.00mg/mL 。
5. 纤维素酶液：将0.05g 酶溶解定容至50 mL ，从中取出1.0mL 再定容至100mL ，待检测用。
（用pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液配制） 四、实验步骤1.标准曲线的绘制：分别吸取0.0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00m L 葡萄糖标准液于6支25mL 比色管中，均用蒸馏水稀释至1mL ，加3.5-二硝基水杨酸显色剂3mL ，在沸水浴中煮沸显色10min ，冷却，加蒸馏水21mL ，摇匀。
以空白管调零，在550nm 处比色。
以光密度为纵坐标，以葡萄糖μg 数为横坐标，绘出标准曲线。
序号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标液 0.0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 蒸馏水 1.0 0.80 0.60 0.40 0.20 0.0 3,5-二硝基水杨酸3.03.03.03.03.03.0实验操作 沸水浴加热10min ，冷却后，加水定容，摇匀，比色测定吸光度A 550nm0.02.空白管的测定： 在2支25mL 试管中各加入1.0mL 酶液，沸水浴5min ，冷却后加3.0mL 0.5%CMC-Na ，与样品管同时放入50℃水浴30min 。
实验2 3,5-二硝基水杨酸比色法还原糖含量的测定
3 结果处理
分别在标准曲线上查出相应还原糖mg数，按下式计 数 分别在标准曲线上查出相应还原糖 算还原糖百分含量： 算还原糖百分含量：
v c× a × 100 还原糖（%） = 3 w × 10
式中:C－标准曲线方程求得的还原糖 式中 －标准曲线方程求得的还原糖mg数； 数 V－提取液的体积（mL）； －提取液的体积（ ）； a－显色时吸取样品液体积（mL）； －显色时吸取样品液体积（ ）； W－样品重（g）。 －样品重（ ）。
2.3
主要设备
离心机
分光光度计
水浴锅
电子天平
25ml刻度试管；大离心管；100mL烧杯；100mL 刻度试管；大离心管； 烧杯； 刻度试管 烧杯 三角瓶； 三角瓶；100mL容量瓶 ；刻度吸管 1mL、2mL、 容量瓶 、 、 10mL； ；
3 实验方法
3.1 制作葡萄糖标准曲线 支具有25mL刻度试管，编号，按表准确加入浓度 刻度试管， 取7支具有 支具有 刻度试管 编号， 的葡萄糖标准液和3,5-二硝基水杨酸试剂。 二硝基水杨酸试剂。 为1mg/mL的葡萄糖标准液和 的葡萄糖标准液和 二硝基水杨酸试剂 管号 葡萄糖标准液(ml) 葡萄糖标准液 蒸馏水（ ） 蒸馏水（ml） 3,5-二硝基水杨酸 二硝基水杨酸 试剂（ml） 试剂（ ） 相当葡萄糖量(mg) 相当葡萄糖量 0 0 2.0 1.5 0 1 0.2 1.8 1.5 0.2 2 0.4 1.6 1.5 0.4 3 0.6 1.4 1.5 0.6 4 0.8 1.2 1.5 0.8 5 1.0 1.0 1.5 1.0 6 1.2 0.8 1.5 1.2
3,5-二硝基水杨酸试剂： 二硝基水杨酸试剂： 二硝基水杨酸试剂 6.3g 3,5-二硝基水杨酸和 二硝基水杨酸和262mL 2mol/L NaOH溶 二硝基水杨酸和 溶 含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中， 酒石酸钾钠的热水溶液中， 液，加到500mL含有 加到 含有 酒石酸钾钠的热水溶液中 再加5g结晶酚和 亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸 再加 结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。 结晶酚和 亚硫酸钠 馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。 馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。 2.2 材料 玉米粉 材料:玉米粉
实验三 3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖
实验三3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖一、实验目的1、掌握还原糖定量测定的原理和方法。
2、掌握分光光度计的使用方法。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖10257 RP麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验器材1、实验仪器1）恒温水浴锅2）可见光分光光度计3）电子天平4）三角瓶（100ml）5）容量瓶（100ml）6）胶头滴管7）移液管2、实验材料1）食用面粉2）1 mg/ ml 葡萄糖标准液：准确称取100mg 分析纯葡萄糖（预先在8 0 ℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml 的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
3）3, 5-二硝基水杨酸试剂：将6.3g 3, 5-硝基水杨酸和262ml 2mol/NaOH 溶液，加到500ml 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至1000ml ，贮于棕色瓶中备用。
4）碘-碘化钾溶液：称取5g 碘和10g 碘化钾，溶于100 ml 蒸馏水中。
5）酚酞指示剂：称取0.1g 酚酞，溶于250ml 70 ％乙醇中。
6）6mol/L HCl 。
7）6mol/L NaOH 。
四、实验步骤（一）制作葡萄糖标准曲线取7支试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
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实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线
马铃薯总糖含量测定
实验目的
1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法；
2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法；
3．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的原理及方法；
4．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。
实验原理
1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的及标准曲线定制原理
3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物，该有色物质在540nm 处有最大吸光度，且在一定浓度范围内（一般OD值在～范围内线性较好），还原糖的量与反应液的颜色强度（吸光度OD值）呈线性关系，利用分光光度仪，以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品，在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度（OD值）大小，通过微机处理数据，定制葡萄糖标准曲线，确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程；
2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理
先将马铃薯去皮，经机械粉碎，过滤和清水漂洗，烘干制成马铃薯淀粉；再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖，经中和定容，配制成马铃薯总糖含量测定的待测液（即样品液）；再以标准曲线测定的加样操作方法，测定出样品待测液的吸光度大小，将测定的吸光度大小代入其回归方程，即可计算出样品待测液的显色浓度，根据稀释倍数关系，计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量，并测定出马铃薯总糖百分含量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
实验操作
1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线
（1）葡萄糖标准溶液的配制：（2mg/mL）准确称取2000mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL，冰箱保存备用
（2）葡萄糖标准曲线定制加样操作及测定结果纪录（详见表1）
按表1进行实验操作，在沸水浴中准确反应20min ，取出后立即用冷水冷却，加蒸馏水定容至25mL ，摇匀，用lcm 的比色杯于540nm 处测光密度值。
并记录A 540nm 处测得的各浓度及样品对应的OD 值。
（3）葡萄糖标准曲线定制微机数据处理和回归方程（详见表2）及标准曲线的绘制见图1 2. 马铃薯总糖含量测定操作
（1）马铃薯淀粉的制备（此处略，学生实验报告需补充完整）
（2）马铃薯淀粉水解待测液配制（2mg/mL ） 准确称取干燥恒重后的自制淀粉250mg ，加入100mL 蒸馏水和2mL20%硫酸，在沸水浴中加热水解，直到水解彻底后，用20%氢氧化钠溶液中和，至pH = ～后，将反应液转入250mL 容量瓶中，补加蒸馏水定容至250mL ，配制成浓度为2mg/mL 的淀粉水解后，即总糖测定的样品液，冰箱保存备用。
（3）马铃薯淀粉水解待测液还原糖测定（操作方法详见表1）
表1 3,5-二硝基水杨酸法定制葡萄糖标准曲线实验加样操作记录表
试管编号
012345678样1样22000ug/mL 葡萄糖标准溶液/ mL 0.00
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00 1.20
1.40
1.60
1.00
1.00
3,5-二硝基水杨酸（mL ）蒸馏水（mL ）
2.00 1.80 1.60 1.40 1.20 1.000.800.600.4
2.0mL
立即摇匀放入沸水浴中准确反应10min
取出后用自来水冷却，用蒸馏水定容至25mL 后，以0号试管为空白对照，在540nm 处比色测定OD 值。
表2 3,5-二硝基水杨酸法定制葡萄糖标准曲线数据处理统计表
01234567
8
0.016.0
32.0
48.0
64.0
80.0
96.0
112.0128.0
0.000.0840.1700.2510.3140.3900.4640.5260.5980.01
0.0890.1630.2370.3110.3850.4590.5330.607
样1样2
0.3630.372
实验数据的相关性因素( r )
线性回归方程斜率 (b)线性回归方程截距 (a)线性回归方程
试管编号
标准葡萄糖显色浓度 ( ug / mL )回归方程对应浓度下的吸光度A 540nm 实验测试的吸光度0.004630.01444
y = 0.00463x + 0.01444
0.9990
3. 马铃薯总糖的测定
（1）待测淀粉水解液显色浓度的计算：将样品水解液与DNS试剂反应后测得的吸光度大小，代入葡萄糖（还原糖）标准曲线对应的回归方程中，计算出水解液的显色浓度x显色（ug/mL）。
（+ ）/2 = x显色+
x显色= [（+ ）/（2×）－] = （ug/mL）
（2）待测淀粉水解液中还原糖浓度x水解的计算：
x水解= [（+ ）/（2×）－] ×25 = （ug/mL）
（3）马铃薯总糖百分含量（以还原糖表示，马铃薯淀粉提取率若为%）
则马铃薯总糖百分含量w为：
w =(x水解/x样品) ×% =（/ 2000 ）×% = %
以下报告内容此处略（学生实验报告需补充完整）。
实验结果分析
思考题
1. 测定物质含量，定制标准曲线的目的是什么绘制标准曲线需在图中标示出哪些要素
2、定制标准曲线时如何确定标准品及标准品的浓度使用范围为什么必需设定空白（参比）管
在一定波长范围内，分别测定物质的吸光度，选择吸光度最大的波长就是物质的特质吸收波长。