药敏纸片的制备1
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
药敏学实验报告
一、实验目的1. 掌握药敏实验的基本原理和方法。
2. 学会正确操作药敏实验，提高实验技能。
3. 了解抗生素对细菌的敏感性，为临床合理用药提供依据。
二、实验原理药敏实验是利用抗生素对细菌生长抑制或杀灭作用的原理，通过观察细菌在含有不同浓度抗生素的培养基上生长情况，来测定细菌对不同抗生素的敏感性。
常用的药敏实验方法有纸片扩散法、微量稀释法等。
三、实验材料1. 细菌：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
2. 抗生素：青霉素、链霉素、氨苄西林等。
3. 培养基：营养琼脂、肉汤培养基等。
4. 实验仪器：无菌操作台、酒精灯、移液器、培养箱等。
四、实验方法1. 细菌培养：将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等分别接种于营养琼脂平板，置于37℃培养箱中培养18-24小时。
2. 制备药敏纸片：将抗生素粉末与无菌生理盐水按比例溶解，制成一定浓度的抗生素溶液。
用无菌移液器吸取适量抗生素溶液，滴加于无菌滤纸上，制成药敏纸片。
3. 药敏实验操作：将培养好的细菌菌落均匀涂布于营养琼脂平板上，用无菌镊子将药敏纸片贴于平板表面，距离菌落中心约15mm。
将平板置于37℃培养箱中培养18-24小时。
4. 观察结果：观察细菌在平板上的生长情况，测量抑菌圈直径，根据抑菌圈直径判断细菌对不同抗生素的敏感性。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、链霉素、氨苄西林的敏感性：青霉素抑菌圈直径为15mm，链霉素抑菌圈直径为20mm，氨苄西林抑菌圈直径为10mm。
结果表明金黄色葡萄球菌对青霉素、链霉素、氨苄西林均敏感。
2. 大肠杆菌对青霉素、链霉素、氨苄西林的敏感性：青霉素抑菌圈直径为10mm，链霉素抑菌圈直径为15mm，氨苄西林抑菌圈直径为20mm。
结果表明大肠杆菌对青霉素、链霉素、氨苄西林均敏感。
3. 分析：通过本次实验，我们可以了解到金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对青霉素、链霉素、氨苄西林均敏感，为临床合理用药提供了依据。
六、实验总结1. 本实验成功进行了药敏实验，掌握了药敏实验的基本原理和方法。
兽用药敏片的制作和应用
养殖场疾病控制的好坏，直接影响其场经济效益。
疾病控制踪疫苗接种外，药物治疗也十分重要，而做好药敏试验很关键。
市场上购买药敏片不方便，即使购买到药敏片，已用的药品与本场买到药品不是同一厂家生产，疗效也不一致。
我们一般多应用自制的药敏滤纸片，即实用又省钱，经临床实践，效果较好。
现介绍如下：1 制作方法1 穗纸片选用新华t号(或其他质量好的)定性滤纸片，用打孔机打成直径为6 1l"11"]1的小圆纸片，根据需要将数片包成一纸包，或放人带棉塞的小瓶或小平皿内，在160℃干热灭菌1 h或121 ℃灭菌l5 min．置60℃干燥箱内烘干备用。
1．2 药液的配制．1 稀释荆抗生素的稀释剂通常用蒸馏水，但有些抗生素可用其他溶剂作初步溶解。
如：呋喃西林，每片首先用l mo L／I，氢氧化钠1 ml 溶解，再用水稀释到所需浓度。
痢特灵先以二甲基酰胺或丙酮溶解。
1．2 2 药液浓度注射粉荆一般1 g药品加蒸馏水L000 mI稀释；注射针剂，用蒸馏水作100倍稀释。
其他药物按使用说明书上的配料或饮水舍量．换算按1 g需加多少毫升水或配多少毫克料，就相当于配制药液所加蒸馏水毫升数。
如10 g本品可拌50 kg饲料，其换算方法为：1 g本品加5 000 mI 蒸馏水。
1 3 配制方法在无菌条件下，准确称取药量， I g为一个基本单位．为了方便最好将药物先稀释成10 mI ，然后作倍比稀释，如lO0倍稀释药物，在1 g药物中加人l0mI 蒸馏水．然后取l mI 本液加人9 m1 蒸馏水即可。
将无菌滤纸片用无菌镊子摊布于无菌平皿中，每张滤纸片饱和吸水量为0．叭m1，计，每50张滤纸片加人药液0 5 mI ，不时翻动，使滤纸将药液均匀吸净，一般浸泡30 min即可。
然后取出含药纸片置于一纱布中放置37℃孵箱中烘干，烘烤的时间不宜过长．以免某些抗生素失效。
青霉素、金霉素宜在低温真空干燥。
烘干后立即装人无菌的小瓶中加塞置一20℃或家用冰箱中保存，少量供工作用的滤纸片从冰箱中取出后放置室温中1 h，使纸片温度和室温接近。
药敏纸片如何制作
药敏纸片如何制作
更新时间：2009-10-24 19:04:11 浏览次数：519
1、纸片的选择与制作
在医药公司购买新华1号定性滤纸，用打孔器把滤纸打成直径为6毫米的圆形纸片，装入干洁的青霉素小瓶内，每瓶装入5O只，将若干个装有纸片的小瓶放入高压锅内进行高压灭菌121度20分钟，冷却后置4～8℃条件下保存。
2 、药袖浓度的配比
选择现有的抗菌药物，根据药物的说明进行配比浓度，如规格为100克装的抗菌物，包装说明兑水400斤，即用天平称药物1克加50毫升的灭菌注射用水置于灭菌平皿内，充分溶解后吸出1毫升置于另一个灭菌容器中再加入39毫升的灭菌注射用水。
3 、纸片的浸泡与干燥
取配好的药物溶液放入盛有纸片的青霉素小瓶内 (药液的多少以最透纸片为宜)，浸泡24小时后，将多余的药液倒掉，放在无菌条件下晾干或放在37℃的恒温箱内烘干，而后加盖置4～8℃的冰箱中保存备用。
药敏片制作方法
药敏纸片的制作方法1、纸片的制作及灭菌选用质量较好的滤纸片(定量滤纸)，用打孔器打成直径为6毫米的圆片，每l00片放入一小瓶中，l60℃干热灭菌1-2小时或高压灭菌(15磅30分钟)后，在60℃条件下烘干备用。
2、抗菌药物浓度的配制2.1计算最小浓度值按药物使用说明上的配料或饮水比例换算成一个基本单位药量(以能准确称量药品的最小值为宜，如0.5克、l克、2克等)能配多少料或饮多少水，相当于配制浸泡药片的药品浓度时所加蒸馏水的毫升数。
例如，药品使用说明上标明5克本品可拌50千克饲料，其换算方法为l克本品可拌10千克饲料，也就是1克本品拌l0000克饲料，相当于药品浓度为l克本品加l0000毫升蒸馏水。
2.2浓度配制准确称取上述基本单位药量(片剂要研磨成粉末后再行称量)，在无菌条件下，按下列分列顶用蒸馏水进行倍比稀释。
根据以上换算l克本品加10000毫升蒸馏水，即l克本品加10×l0×10×l0毫升蒸馏水。
如出现l克本品拌321克饲料等情况，可改成1克本品拌320克饲料，即加l0×4×8毫升蒸馏水。
这样改动易形成分列项，并不影响实际效果，因为在配料时可按纸片浓度l克本品拌320克饲料进行拌料。
如所加蒸馏水量较少或现场蒸馏水充足，可不按上述倍比稀释法稀释，而直接按配料或饮水比例一次稀释而成。
3、药敏纸片的浸泡及保存取l毫升已配制好的药液注入已灭菌的含l00片纸片的小瓶中，置冰箱内浸泡1-2小时后取出烘干，并置冰箱中保存备用(可保存6个月)。
如何制作药敏纸片1、先用打孔器打出制作药敏纸片的小片若干；2、在高压锅内，高温120度，高压0.15帕斯卡，15-20分钟消毒所需器具，如培养皿或玻璃小瓶、玻璃棒、微量吸管、镊子、滤纸片等；3、在烘干箱或恒温箱内烘干24小时直至烘干；4、在培养皿中用不同的抗生素制成不同浓度的药液，抗生素可交叉应用，每1ml 药液可浸透50个药敏片，按此比例把配置好的药液倒入培养皿或小瓶中，并用玻璃棒搅拌均匀，使药液浸透药敏片；5、把作好的药敏片放入小瓶或培养皿中，盖一层消毒后的滤纸，在恒温箱内37度，24-36小时烘干，烘干后分装备用；6、药敏片保存时间，常温下3-6个月。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药物敏感性实验
药物敏感性实验●学习内容●药物敏感实验¡ª¡ª纸片法●学习要求●掌握药物敏感实验的原理、方法及注意事项。
●抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：●用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。
常用最低抑菌浓度（MIC）表示，即体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度。
通常根据MIC结合常用剂量时体内该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗生素敏感或耐药的界限，给出S（敏感）、I（中介）、R（耐药）等定性的结果，方便临床用药。
●检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。
用于流行病学调查及院内感染的监控，控制和预防耐药菌株的流行。
为经验用药提供参考依据。
●方法：扩散法（纸片法）、稀释法（琼脂稀释法、宏量液体稀释法、微量液体稀释法）●药敏纸片的人工制作●定性滤纸用打孔器打成直径6mm的圆片，每100片放入一小瓶中，160℃干热灭菌1～2小时，或用高压灭菌（6.8kg 30min）后在60℃条件下烘干。
（此应提前做好）●抗菌药物的浓度（指有效药物浓度）青霉素200U/mL 其它抗菌药物1000ug/mL磺胺类药物10mg/mL 中草药制剂1g/mL庆大霉素4万单位/mL，稀释为1000单位/mL。
●（临床上可按照药品使用说明书，如上面标明5g本品可拌50kg饲料，其换算方法为lg本品可拌10kg饲料，也就是1g本品拌l0000g饲料，相当于药品浓度为lg本品加l0000mL蒸馏水。
）●用无菌操作法将欲测的抗菌药物溶液1mL，加入100片纸片中，泡5～10分钟。
●培养皿烘干法：用无菌镊子将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于37℃的温箱内保持2～3小时即可干燥，或放在无菌室内过夜干燥。
●将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中，置冰箱内保存备用。
●干燥的药敏纸片可保存6个月。
●纸片法●每组约5个平皿（每人1个），每个平皿约20毫升琼脂培养基，即约120mL。
每平皿约5张纸片。
药敏试验实验报告
药敏试验实验报告概述：药敏试验是一种用来测试细菌对不同抗生素的敏感性的实验方法。
本实验旨在通过观察不同药物对细菌的杀菌效果，评估药物的抗菌活性。
通过实验结果，可以为临床医生提供选择合适药物治疗感染的依据。
实验步骤：1. 细菌培养：从临床患者的感染部位采集样本，进行无菌处理后，接种于含有丰富营养物质的琼脂培养基上，利用恒温培养箱在37摄氏度下培养。
2. 药物制备：根据实验要求选用常见的抗生素药物，配制合适浓度的药物溶液。
3. 药敏纸片实验：将药敏纸片铺在含有培养菌的琼脂平板上，利用吸管滴取一定量的药物溶液滴在药敏纸片上。
将琼脂平板放置在恒温培养箱中培养。
4. 结果观察：观察培养基上的药物液滴周围是否出现抑菌圈，测量抑菌圈的直径。
根据抑菌圈的大小和药物浓度的对应关系，判断细菌对药物的敏感性。
实验结果：通过对不同抗生素药物的实验观察，我们得到了如下结果：1. 对照组：在没有添加药物的培养基上，细菌在一定时间内呈现正常生长。
2. 敏感性试验：观察到在添加了某些药物后，细菌周围出现了抑菌圈。
抑菌圈的直径越大，说明细菌对该药物的敏感性越高。
根据抑菌圈的直径，我们判断药物的敏感性分为不同级别。
3. 抗药性试验：观察到在添加了某些药物后，细菌周围未出现抑菌圈，或抑菌圈的直径很小。
这说明细菌对该药物的敏感性较低，甚至产生了抗药性。
讨论和分析：通过药敏试验的结果，我们可以根据细菌对不同药物的敏感性来选择合适的抗生素治疗感染。
药敏试验是临床医生进行抗生素选择的重要依据之一。
根据不同细菌的敏感性结果，医生可以根据药物的目标细菌的敏感性，选择合适的药物和剂量进行治疗。
同时，药敏试验也可以帮助医生监测和了解细菌对药物的抗药性情况。
随着抗生素的广泛使用，一些细菌逐渐产生了对药物的抗药性。
通过药敏试验，可以及早发现和监测细菌的抗药性情况，为防控细菌抗药性提供依据。
然而，药敏试验也存在一些限制。
首先，该试验只能测试抗生素对细菌的杀菌效果，不能完全模拟临床环境中抗生素的药效。
医学检验药敏实验报告
一、实验名称药敏试验二、实验目的1. 了解本次实验所选细菌对多种抗生素的敏感性。
2. 为临床合理用药提供依据。
三、实验原理药敏试验是指在体外条件下，测定抗生素对细菌的抑制作用，以判断细菌对某一种或几种抗生素的敏感性。
实验原理主要基于抗生素对细菌生长的抑制作用，通过观察细菌生长情况，确定抗生素的最小抑菌浓度（MIC）。
四、实验材料1. 细菌菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗生素：氨苄西林、头孢噻肟、阿莫西林、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星等。
3. 琼脂平板、无菌棉签、移液器、酒精灯、培养箱等。
五、实验方法1. 将细菌菌种接种于琼脂平板上，培养至适宜生长。
2. 在琼脂平板上均匀涂布抗生素纸片，用无菌镊子轻轻压紧。
3. 将平板倒置放入培养箱，培养24小时。
4. 观察并记录细菌生长情况，确定抗生素的抑菌圈直径。
六、实验步骤1. 菌种培养：将细菌菌种接种于琼脂平板，培养24小时。
2. 药敏纸片制备：将抗生素纸片用无菌镊子取出，均匀涂布于琼脂平板上。
3. 观察与记录：将平板倒置放入培养箱，培养24小时后观察并记录抑菌圈直径。
七、实验结果1. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
2. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
八、讨论与分析1. 本次实验结果显示，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌对多种抗生素的敏感性存在差异。
2. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗大肠杆菌感染的首选药物。
3. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药，提示金黄色葡萄球菌感染需选用其他抗生素。
4. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗肺炎克雷伯菌感染的首选药物。
药敏纸片制备方法
药敏纸片制备方法嘿，咱今儿就来唠唠药敏纸片的制备方法，这可真是个有意思的事儿呢！药敏纸片，就像是医生手里的秘密武器，能帮咱找到对付细菌的最佳办法。
那怎么制备呢？首先，咱得有优质的药敏纸片原材料，这就好比做饭得有好食材一样。
然后就是调配，这可不能马虎，得精确再精确，就跟调鸡尾酒似的，比例不对可不行。
把药液均匀地涂在纸片上，这可不是随便涂涂就行的，得有耐心，得细致，不然这药敏纸片可就不灵光啦。
想象一下，要是涂得不均匀，那结果能准吗？那肯定不行呀！接着呢，得让这些涂好药液的纸片好好地干燥一下。
这就像是让它们去晒晒太阳，把水分都赶跑。
但可别晒过头了，不然它们可能就变得脆脆的，一碰就碎了。
等干燥好了，还得把它们好好保存起来。
这保存也有讲究呢，得放在合适的环境里，不能太潮湿，也不能太干燥，就像咱人得待在舒服的环境里一样。
不然，这些药敏纸片可能就失效啦。
你说这药敏纸片制备是不是挺有意思的？就好像在打造一件件小小的艺术品。
咱得用心，得认真，才能做出好用的药敏纸片来。
这可不是随便搞搞就能行的事儿呀！在这个过程中，每一步都很关键呢。
从选择材料到最后的保存，哪一个环节出了问题，都可能让药敏纸片失去作用。
这就跟盖房子一样，一块砖没砌好，可能整座房子都不牢固。
咱做药敏纸片制备的时候，可不能偷懒，不能敷衍。
这可是关系到能不能准确找到对抗细菌的方法呢！要是因为咱没做好，导致结果不准确，那可就麻烦啦。
所以啊，大家一定要认真对待药敏纸片制备这个事儿。
这不仅是一项技术活，更是一份责任呢！咱要为了能更好地对抗细菌，为了大家的健康，把药敏纸片制备得妥妥当当的。
总之呢，药敏纸片制备方法虽然听起来有点复杂，但只要咱用心去做，就一定能做好。
这就像生活中的很多事情一样，只要我们有决心，有耐心，就没有做不到的。
大家加油吧！让我们一起把药敏纸片制备这件事儿做得漂漂亮亮的！。
药敏反应实验报告
一、实验目的1. 了解药敏试验的基本原理和操作流程。
2. 掌握最小抑菌浓度（MIC）的测定方法。
3. 分析细菌对不同抗菌药物的敏感性，为临床合理用药提供依据。
二、实验原理药敏试验是一种体外试验方法，用于检测细菌对特定抗菌药物的敏感性。
通过观察细菌在含有不同浓度抗菌药物的培养基中的生长情况，可以确定最小抑菌浓度（MIC），即抑制细菌生长的最低药物浓度。
根据CLSI标准，将细菌对药物的敏感性分为敏感、中介和耐药三种。
三、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗菌药物：青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星等。
3. 培养基：MH肉汤、MH琼脂、MH培养基。
4. 仪器：恒温培养箱、微量移液器、无菌操作台、显微镜等。
四、实验方法1. 菌株培养：将待测菌株接种于MH肉汤培养基中，37℃培养24小时，备用。
2. 制备药敏纸片：将不同浓度的抗菌药物溶解于无菌生理盐水中，制成药敏纸片。
3. 点种细菌：将培养好的菌株用无菌棉签涂布于MH琼脂平板上，待菌落生长后，用无菌镊子将药敏纸片贴于平板表面。
4. 观察结果：将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察细菌生长情况，记录抑菌圈直径。
5. MIC测定：将培养好的菌株用无菌生理盐水稀释至一定浓度，分别加入不同浓度的抗菌药物，观察细菌生长情况，记录抑制细菌生长的最低药物浓度。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感。
2. 大肠杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均中介。
六、讨论1. 药敏试验是临床合理用药的重要依据，通过测定细菌对药物的敏感性，可以指导临床医生选择合适的抗菌药物，避免滥用和误用。
2. 本实验结果显示，金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感，提示临床治疗金黄色葡萄球菌感染时，可以选择这些药物进行治疗。
药敏试验的实验步骤及结果判定方法
药敏试验的实验步骤及结果判定方法一、实验准备在进行药敏试验之前，需要准备以下物品：1. 抗菌药物纸片。
2. 药敏试验培养基（如MH琼脂）。
3. 待测菌株。
4. 无菌棉签。
5. 吸管或微量加样器。
6. 手套、口罩和实验服。
7. 药敏试验记录表。
二、菌株接种1. 使用无菌棉签蘸取待测菌株，轻轻涂布在MH琼脂表面，确保菌株分布均匀。
2. 将涂布好的培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
三、药物稀释1. 根据抗菌药物的说明书，配置好所需浓度的药物溶液。
2. 使用吸管或微量加样器，将药物溶液按比例稀释。
四、药敏片制备1. 准备抗菌药物纸片，根据说明书要求进行剪裁。
2. 将抗菌药物纸片放在无菌平皿中，每片纸片标记对应的药物名称。
五、药敏试验1. 在培养基上标记好菌株的名称和实验日期。
2. 使用无菌棉签或吸管，将菌株涂布在药敏试验培养基上，确保菌株分布均匀。
3. 用无菌镊子取抗菌药物纸片，轻轻贴在培养基表面，每个药物纸片间隔15-20mm。
4. 将培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
六、结果判定1. 在规定时间内观察并记录每个抗菌药物纸片周围的抑菌圈大小。
2. 根据抑菌圈大小，参照抗菌药物的敏感度判定标准，判断菌株对药物的敏感度（如敏感、中介或耐药）。
3. 综合不同抗菌药物的敏感度结果，给出最终的药敏试验报告。
七、结果记录将实验步骤和结果详细记录在药敏试验记录表中，以便后续分析和报告编写。
记录内容包括：菌株名称、实验日期、药物名称、药物浓度、抑菌圈大小、敏感度判断和实验员等信息。
八、结果解读根据药敏试验结果，临床医生可以了解菌株对不同抗菌药物的敏感性和耐药性，从而选择合适的药物进行治疗。
药敏试验结果也是抗菌药物合理使用的重要依据，有助于减少耐药性的产生和抗生素的滥用。
同时，实验室可以通过药敏试验结果的统计分析，了解地区或医院内常见病原菌的耐药情况，为抗菌药物的研发和使用提供科学依据。
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
作业指导书-K-B纸片琼脂扩散法药敏试验操作
操作顺序
检查要点
使用材料
1、试验操作前，提前把单人净化工作台的紫外灯打开，杀菌一个小时；
2、配制MH（A）培养基，121℃高压灭菌15min，取出后在净化工作台中倒入无菌平皿中，每个平皿倒入20ml左右，使培养基厚度约4mm左右；晾干后备用；
3、在净化工作台中进行试验操作，用移液枪取校正好的菌液100μl注入已制备好的MH培养基上，用玻璃涂棒涂抹均匀；
检查要点
使用材料
1）取定性滤纸，用打孔器打成直径为6mm的圆形纸片，放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎，经121℃高压灭菌30min后，放在60℃的烘箱中烘干备用；
2）试验操作前，提前把单人净化工作台的紫外灯打开，杀菌一个小时；药液配制方法参照CLSI抗微生物药物敏感性试验执行标准（2010版）中规定的配制；药液配制在净化工作台中进行；
操作安全
1.高压锅使用时禁止脱水操作、排气未尽时不要打开高压锅；2.所有带菌实验用品，须经有效的消毒灭菌处理后再洗刷。严禁污染下水道。
环境要求
外围：一般பைடு நூலகம்境
无菌操作：万级局部百级洁净
异常处理
1.操作过程中断电，已打开的物品应重新灭菌，以防污染；2.发现污染及时处理；3.操作仪器有异常，及时汇报并报修。
3.纸片在使用前1～2h从冰箱取出，暖至室温再打开，以避免出现冷凝水。纸片启封后应放入可密封的有干燥剂的容器中，纸片只能在有效期内使用，过期应弃去。
1.打孔机、手提式高压蒸汽灭菌锅、恒温干燥箱、电子天平；
2.无菌水、磷酸缓冲盐溶液等溶剂
3.新华定性滤纸
材料处理
1.将材料2及圆纸片放入高压锅，按高压蒸汽灭菌锅操作规程操作，灭菌121℃、30分钟；
药敏试验操作
药敏试验操作实验步骤一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦康凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1药敏片的准备：购买或自制2.1.1制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
2.2药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。
此稀释液即为用于做药敏试验的药液。
三、实验操作方法3.1药敏片法3.1.1在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密）3.1.2将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。
为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。
为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。
药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
自家药敏纸片制备方法的建立及应用效果观察
表 １ 不 同方 法制 备 药 敏 纸 片 的抑 菌 效 果 表
其 它 治 疗 量 的 试 验 药 物 的 抑 菌 效 果 具 有 不 同 的 针 对 性 ， 可 应 用 于 临 床 用 药 参考。
３ 讨 论
治 疗 量
２７
２ ５
３Ｏ
２馈 治疗薰
４倍 治疗 量
３ ０ ３ １
∞
喘 速 治
∞ ｍ
勰
＂ ｏ ｏ ＂ Ｈ Ｏ 拍
加
（ ）利 用 兽 医 临 床 常 用 抗 菌 药 物 ３
所 制 作 的 药 敏 纸 片 ．能 解 决 人 用 抗 菌 Ｈ 佗 ＂ 药 物 标 准 药 敏 纸 片 的 药 敏 试 验 的 结 果
对 兽医ｌ 临床 的 指 导 性 不 强 的 难 题 ．方
生 较 理 想 的 抑 菌 效 果 ， 与 喘 速 治 成 份
为 复 方 北 里 霉 素 可 溶 性 粉 的 抗 菌 特 性
…驾 一 一 黼 漕 一 鲥 雠 —徽
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呼 奇 灵
竹 ” 觋 加 ＂
拢 埒
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勰 觞
有 关 【。本 研 究 应 用 两 种 不 同 的 培 养 ９ ＝ Ｉ 】 ｏ
庆 大 霉 素
４ ２ ｌ ４ ２ １ ４ ２ １ ４ ２ ｌ ４ ２ ｌ ４ ２ ４ ２ ｌ ４ ２ ｌ ４ ２ ｌ
抑 菌效 果 上 升 而 引 起试 验误 差 。
× × × × × × × ×
垫 底 的 平 皿 中烘 干 ，密 封 备 用 。 （ ） 细 菌 学 检 查 ： 在 无 菌 条 件 下 ３ 取 烘 干 后 的 药 敏 纸 片加 人 到 灭 菌 的 肉
药敏实验器材及操作步骤
药敏实验器材及操作步骤
操作步骤：
一、药敏试纸片的制备:
1. 取定性滤纸,用打孔机打成直径6毫米的圆形小纸片.
2. 取圆纸片50片防入清洁干燥的青霉素空瓶中,瓶口以单层牛皮纸包扎.经15-20分钟121℃高压消毒后,
3. 放在37度恒温箱中数天,使其完全干燥.
二、药敏片的制备(商品药):
1. 按商品药的使用治疗量的比例配制药液.
2. 在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,翻动纸片时不能将纸片捣烂.同时在瓶口或瓶身记录药物名称,放37度温箱内过夜,干燥后即密盖。
3. 如有条件可真空干燥.切勿受潮,置阴暗干燥处存放,有效期3-6个月.
三、培养基的制备：
1. 取16.5g营养琼脂至500ML三角烧瓶中，加蒸馏水至485ML于三角烧瓶。
放置电子万用火炉上，不断搅拌至营养琼脂完全融化。
2. 瓶口以单层牛皮纸包扎.经15-20分钟121℃高压消毒,同时把清洗洁净的培养皿一起高压消毒。
3. 然后，每个培养皿中灌入18-20ML，室温凝固保鲜备用。
四、药敏操作：
1. 在净化工作台上，用动物肝脏或心脏的横断面置于培养基上均匀涂布。
2. 然后把七个不同的药敏片均匀分布在培养基上。
3. 置于恒温培养箱中37℃培养24H，然后观察结果。
药物敏感判定标准:
20以上极敏,15-20高敏,10-14中敏,10以下低敏,0不敏.
培养基:应根据实验菌的营养需要进行配制,倾注平板时,厚度合适,约5-6毫米,不可太薄,一般90毫米直径的培养皿,倾注培养基18-20毫升.。
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药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备
1.材料
抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等
2．方法
2.1 PBS的配制
A.制备0.2mol/L储备液
0.2mol/LNa
2HPO
4
：35.61g Na
2
HPO
4
.2H
2
O+1000 mL蒸馏水
或71.62g Na
2
HPO
4
.12H
2
O+1000 mL蒸馏水
0.2mol/L NaH
2PO
4
:31.2g NaH
2
PO
4
.2H
2
O+1000 mL蒸馏水
或27.6g NaH
2
PO
4
.H
2
O+1000 mL蒸馏水
B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用
0.2mol/L磷酸缓冲液的配制
2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限
2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限
抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃
青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周
半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周
头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周
氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周
四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周
多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周
林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周
12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用
pH7.8 PBS
1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用
pH6.0 PBS
12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0
PBS
万古霉素蒸馏水12803个月2周
两性霉素B 蒸馏水12803个月1周
12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶
解，再用蒸馏水
1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再
用蒸馏水稀释
2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水
稀释
2.2.2 配制方法
A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
例：要配制１２８０μg/mL 的庆大霉素５０毫升，所需要的纯抗菌药物质量为１２８０×５０＝６４０００μg
B.根据纯抗菌药物的重量和抗菌药物原粉的百分比计算出所需抗菌药物原粉的重量，方法是：纯抗菌药物的质量÷抗菌药物原粉的百分含量。
如:某庆大霉素原粉的含水量为4.19％，则需要庆大霉素原粉的质量为64000÷（1－ 4.19％）＝6.68×104 μg=66.8mg=0.0668g
C.各种抗菌药物按上述表进行溶解后定容。
D.无菌条件下过滤，4℃保存备用。
2.3 药敏纸片的制备
2.3.1空白纸片的制备
用打孔机将制作直径为6毫米左右的圆形滤纸，按50张一份，将制作好的滤纸分装到小西林瓶里，用牛皮纸封瓶口进行高压（121℃，15min）,烘干备用。
2.3.2 抗菌药纸片的制备
不同细菌对不同抗菌药纸片的药物含量要求标准
菌种抗微生物药纸片含药量（μg）肠杆菌科氨苄西林10
美洛西林75
哌拉西林100
替卡西林75
头孢唑啉30
头孢噻吩30
庆大霉素10
阿米卡星30
卡那霉素30
奈替米星30
链霉素10
四环素30
多西环素30
米诺环素30
环丙沙星或左氧氟沙星 5
吉米沙星 5
诺氟沙星10
氧氟沙星 5
西诺沙星100
奈啶酸30
磺胺药250或300
甲氧苄啶 5
A.根据不同药物药敏纸片的药物含量要求，计算出50片药敏纸片需要的药物总含量，方法是：５０×每张药敏纸片的含药量。
如：制备一份（５０片）含药量为１０μg的庆大霉素，所需的抗菌药物总质量为５０×１０＝5００μg
B.药物总含量除以抗菌药物原液的浓度，得出50片药敏纸片需要的抗菌药物原液的总体积，抗菌药物总质量÷抗菌药物原液浓度。
如：制备一份庆大霉素药敏纸片所需的抗菌药物原液的体积是5００÷１２８０＝０．390625mＬ即390.625μＬ
C.在无菌条件下，将各抗菌原液加入装有纸片的小西林瓶中，用纸密封瓶口。
D.置西林瓶37℃烘箱，将含药物的纸片烘干。
E.在无菌条件下，取一片烘干后的药敏纸片加入到灭菌的肉汤中，检查是否有细菌污染，并用西林瓶盖将西林瓶密封，并置4℃保存。
F.16小时后观察是否有细菌污染，将有污染的药敏纸片剔除，并重新再做；无污染的可用作纸片扩散法。
3.注意事项
⑴配抗菌药物原液前要清楚抗菌药物原粉的百分含量、批号和生产厂家。
⑵配制抗菌药物原液时，可能会遇到抗菌药物难溶的现象，这就要求用相应的助溶剂溶解。
⑶抗菌药物原液的终体积要用容量瓶定容。
⑷单位的换算（如强力霉素，含量887IU/mg，计算配制１２８０μg/mL 的强力霉素５０毫升，需要多少克强力霉素原粉？）
抗生素的效价通常以重量或国际单位（IU)来表示。
青霉钠1mg=1667 IU或1 IU＝0.6 μg
青霉素钾1mg=1559 IU或1 IU＝0.625 μg
制霉菌素1mg=3700 IU
其他抗生素多以重量为单位或1mg=1000 IU
⑸抗菌药物原液的终浓度可增大到5120μg/mL，这可缩减加入纸片中的抗菌药物原液的体积。
⑹根据标准，有时要求纸片的抗菌药物含量较低，加入的抗菌药物原液的量过少，不足以将50片纸片全部润湿时，应将抗菌药物原液用相应的灭菌PBS稀释到0.5mL，混匀后再加入西林瓶内。
⑺制作纸片时，要多做几份进行高压，以备试验失败重做时，节约时间。
⑻药敏纸片在37℃烘干，可能需要一到两天的时间，切勿将纸片放入高温中烘干，以防药物失效。
⑼密封纸片后，可放入4冰箱保存或置阴暗干燥处保存，切勿受潮。
二. 药敏试验方法
常用的药物敏感试验有纸片法，试管法、挖洞法、挖沟法、琼脂稀释法和泡沫塑料片法，纸片法是生产中常用的药敏试验方法，具有简便、易行、出结果快的特点，适合于基层实验室开展。
1材料
普通琼脂、营养肉汤、药敏纸片（自制）、灭菌试管、灭菌棉拭和镊子、被试细菌、灭菌生理盐水
2 方法
A.挑取单菌落接种于3mL营养肉汤中，37℃培养16小时。
B.用无菌生理盐水将培养好的菌液做1:20稀释。
C.用无菌棉拭蘸取稀释过的菌液，在试管壁上挤去多余液体，涂于营养琼脂表面，每次旋转平板60度，共涂3次，使整个平板涂布均匀，分别涂布两块平板。
D.平板放置3～5分钟后，用无菌镊子取药敏纸片，贴于一平板表面，并轻压一下纸片，使
其贴平，纸片间相距3mm左右。
E.于另一平板上，平均划分为6个区域，并在每个区域中贴同样的药敏纸片。
F.37培养16～18小时，用尺子量取抑菌圈的直径3次，计算其平均值即为试验结果。
另一方面，量取贴有同样纸片的平板上的抑菌圈的直径，看直径大小是否一致，检查所做的药敏纸片的含药量是否一致。
3 结果判断
结果判定可参照以下标准
抗微生物药抑菌圈直径（mm）
耐药中介敏感
氨苄西林≤13 14-16 ≥17
美洛西林≤17 18-20 ≥21
哌拉西林≤17 18-20 ≥21
替卡西林≤14 15-19 ≥20
头孢唑啉≤14 15-17 ≥18
头孢噻吩≤14 15-17 ≥18
庆大霉素≤12 13-14 ≥15
阿米卡星≤14 15-16 ≥17
卡那霉素≤13 14-17 ≥18
奈替米星≤12 13-14 ≥15
链霉素≤11 12-14 ≥15
四环素≤14 15-18 ≥19
多西环素≤12 13-15 ≥16
米诺环素≤14 15-18 ≥19
左氧氟沙星≤13 14-16 ≥17
环丙沙星≤15 16-20 ≥21
吉米沙星≤15 16-19 ≥20
诺氟沙星≤12 13-16 ≥17
氧氟沙星≤12 13-15 ≥16
西诺沙星≤14 15-18 ≥19
奈啶酸≤13 14-18 ≥19
磺胺药≤12 13-16 ≥17
甲氧苄啶≤10 11-15 ≥16
4.注意事项
⑴严格控制细菌培养的时间，以防过多的细菌而影响试验结果的可靠性。
⑵涂布已稀释的菌液时，切勿将棉拭挤压过干，要保证有足够的菌量。
⑶涂布前，可用记号笔将平板平分为六个区域，以便进行涂布。
⑷涂布时，注意用力不能太大，切勿将琼脂破坏。
⑸把纸片平贴于培养基后，应将平板倒置放入培养箱中培养。