松蘑多糖超声波提取工艺研究

松蘑多糖超声波提取工艺研究
以松蘑为原料，采用超声波萃取技术提取松蘑多糖。

以苯酚-硫酸比色法测定多糖含量，通过单因素试验和正交试验，确定松蘑多糖超声波提取技术的最佳工艺条件，即：料液比1：15，提取温度50℃，超声波处理时间40min，超声波功率60W。

此工艺条件下，松蘑多糖提取率为10.56%。

标签：松蘑；多糖；超声波；提取
国内外研究证明，菌多糖为松蘑的主要成分之一，菌多糖是松蘑调节免疫功能的活性成分，是一种免疫增强剂。

近年研究表明，菌多糖可明显增强免疫系统的功能并有免疫抗肿瘤和辅助抗肿瘤活性。

另外，菌多糖还有降血糖以及调控血细胞生成的作用。

目前多糖的提取多采用常规提取法，提取率低，且费时费力。

故此，寻找较好的提取工艺，是目前有效地将松蘑中的活性物质菌多糖最大限度地提取和保留的关键。

超声波提取技术适用于天然产物，且提取过程中无化学反应，大大的保持了生物活性物质的活性。

本研究采用超声波萃取技术提取多糖，并对其提取工艺进行优化，旨在为松蘑多糖的工业化生产提供参考依据。

1 材料与方法
1.1 材料与试剂
松蘑（市售）：无水乙醇、浓硫酸、苯酚等所用化学试剂均为市售分析纯；葡萄糖标准品Sigma公司。

1.2 仪器与设备
DS200高速度组织捣碎机-上海标本模型厂；GB1302型电子精密天平-梅特勒·托利多仪器有限公司；spectrumlab53紫外可见分光光度计-上海棱光技术有限公司；HH-S水浴箱-巩义市予华仪器限公司；TDL-5-A离心机-上海安亭科学仪器厂；KQ-100DB型数控超声波清洗器-昆山市超声仪器有限公司.
1.3 方法
1.3.1 工艺流程
松蘑→粉碎（过40目筛）→脱脂→超声波辅助浸提→离心分离（5000r/min，20min）→取上清液→去蛋白（加三氯乙酸）→离心分离（4500r/min，20min）→醇沉→离心（5000r/min，10min）→抽滤→真空干燥→粗多糖→稀释→样品液→苯酚——硫酸法测定多糖含量。

1.3.2 松蘑脱脂处理
脂类的存在，影响多糖的提取效果，因此，采用适当的方法脱除松蘑中的脂类为多糖的提取创造良好条件。

称取松蘑适量，采用有机溶剂法脱脂处理。

以无水乙醚为溶剂，索氏提取6～8h，在索氏提取器下端用毛玻璃板接取一滴提取液，如无油斑则表明提取完毕。

1.3.3 葡萄糖标准溶液的配制
精密称取葡萄糖对照品100mg，定容至100mL，得浓度为1mg/mL的葡萄糖贮备溶液。

再准确移取10mL，用蒸馏水定容至100mL，得0.1mg/mL的葡萄糖溶液，备用。

1.3.4 苯酚溶液的制备
称取苯酚100g，加0.1g铝片和0.05g碳酸氢钠蒸馏，收集182℃馏分。

称取馏出液30g，加蒸馏水定容至500mL溶解混匀，得6%苯酚溶液，置棕色瓶中备用。

1.3.5 工作曲线回归方程的建立
采用苯酚-硫酸法。

取上述0.1mg/mL的葡萄糖使用液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL分别置于25mL具塞刻度试管中，加蒸馏水至2mL，在各加6%苯酚溶液1mL摇匀，迅速加入5.0mL浓硫酸，摇匀。

室温静置10min后，沸水浴20min，使其充分显色。

取出迅速冷却至室温，以2mL蒸馏水代替葡萄糖做空白参比，于490nm波长处测定吸光度。

以葡萄糖含量（X，μg/ml）为横坐标，吸光度A（Y）为纵坐标，得标准曲线的回归方程为Y=0.0136X+00415，R2=0.9991。

1.3.6 松蘑多糖得率计算
精密吸取样品液1.0mL按标准曲线的制作操作，在波长490nm处测定松蘑多糖吸光度。

重复3次，取平均值。

根据标准曲线回归方程求出样品液中松蘑多糖的含量，计算松蘑多糖提取率。

松蘑多糖提取率/% =松蘑多糖质量松蘑粉质量×100
2 结果与分析
2.1 正交试验因素水平的确定
由单因素试验结果可知，最佳液料比为1∶20、最佳提取温度为50℃、超声波最佳作用时间为40min、最佳超声波功率为60W。

在单因素试验结果的基础上，确定正交试验各因素的水平。

采用L9（34）正交试验筛选出最佳提取工艺条件，因素水平设计见表1。

2.2 提取工艺的优化
由表2中极差分析可知提取温度是影响松蘑多糖提取率主要因素，各因素对松蘑多糖提取率影响强弱次序为提取温度（℃）>提取时间>料液比>超声波功率。

各因素水平的优化组合为A1B2C2D2，即料液比1∶15，提取温度50℃，提取时间40min，超声波功率60W。

3 结论
正交试验结果显示，影响超声波辅助提取松蘑多糖提取率的因素强弱次序为提取温度>提取时间>料液比>超声波功率，其中提取温度的影响达到显著水平。

松蘑多糖超声波提取最佳工艺条件为提取温度50℃，料液比1∶15，提取时间40min，超声波功率60W。

此工艺条件下松蘑多糖提取率为10.56%。

参考文献
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