地骨皮治疗小鼠皮肤烫伤的药效学研究

地骨皮治疗小鼠皮肤烫伤的药效学研究
李志勇1 ，刘洪超2 ，周凤琴3* （ 1. 中央民族大学中国少数民族传统医学研究院，北京 100081； 2. 山东临沂经济开发区芝麻墩社区卫生服 务中心，山东 临沂 276023； 3. 山东中医药大学药学院，山东 济南 250355）
摘要 目的： 观察地骨皮对实验性皮肤损伤与炎症反应的影响。方法： 采用透明质酸酶抑制试验观察地骨皮 不同提取物的体外抗炎效应； 采用蒸汽烫伤制备小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤模型，烫伤局部涂抹给药，检测创面等面积硫 酸纸重、计算愈合天数、皮肤 HE 病理染色及羟脯氨酸含量，观察地骨皮对皮肤创面愈合作用。结果： 地骨皮水提 物、乙醇提取物对透明质酸酶的活性有抑制效果； 地骨皮乙醇提取物能促进小鼠烫伤受损皮肤愈合，修复受损皮肤 结构； 在皮肤创伤修复第 15 天，地骨皮乙醇提取物、石油醚提取物和氯仿提取物能提高皮肤羟脯氨酸含量，促进胶 原沉积和皮肤修复。结论： 地骨皮具有明确的抑制皮肤炎症反应、促进小鼠烫伤皮肤创面愈合作用，但其修复皮肤 损伤的确切机制及有效成分仍须深入研究。
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Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 8 期 2011 年 8 月
步研究和开发利用提供了依据。
参考文献
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倍） ，以双蒸水 / 乙醇作空白。以 D（ λ） 值计算透明
质酸酶活性抑制率。
抑制率（ % ）
= D（ λ） c － D（ λ） s × 100% D（ λ） c
式中： D（ λ） c 为对照孔 D（ λ） 值，D（ λ） s 为试验孔 D（ λ）
值。
2. 3 小鼠烫伤模型的制备 小鼠腹背部褪毛，剔
苏木素液，北 京 中 杉 金 桥 生 物 工 程 有 限 公 司，批 号
115K4360； 中性树胶，上海锐谷生物科技有限公司，
批号： 16005； 凡士林，天津市永大化学试剂开发中
心，批号 20070919； 硫化二钠（ Na2 S） 、冰醋酸、二甲 苯、无水乙醇、氯化钠、氢氧化钠、硼酸钾、对二甲氨
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配成 8000 U / mL； 透明质酸钠，Sigma 公司，配成 1. 2
mg / mL； 戊 巴 比 妥 钠，北 京 化 学 试 剂 公 司，批 号
090522； 吐温 80，上海医药工业公司，批号 081102；
1 材料与仪器 1. 1 实验动物 SPF 级雄性 ICR 小鼠，体质量 20 ～ 25 g，北京维通利华实验动物有限公司提供，许可 证号： SCXK（ 京） 2009-2010。 1. 2 药物与试剂 地骨皮购自河北安国中药材市 场，经山东中医药大学周凤琴教授鉴定，为茄科植物 枸杞 Lycium chinense Mill. 的干燥根皮； 阿司匹林泡 腾 片，江 苏 无 锡 阿 斯 利 康 制 药 有 限 公 司，批 号 0904017； 湿润烧伤膏，汕头市美宝制药有限公司，批 号： 20090309； 羟脯氨酸试剂盒，南京建成生物工程 研究所，批号 20091009； 牛透明质酸酶，Sigma 公司，
酸钠 1 mL，混匀，37 ℃ 水浴 40 min，加 0. 4 mol / L 氢
氧化钠和 0. 04 mol / L 硼 酸 钾 各 400 μL，沸 水 浴 3
min，冷却至室温； 加入对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙
醇溶液，60 ℃ 水浴 1 h 显色； 紫外-可见光分光光度
法在波长 585nm 测 光 密 度 D （ λ） 值 （ 原 液 稀 释 1
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表 2 地骨皮氯仿提取物对透明质酸酶活性的抑制率
浓度 对照孔 0. 5%
1% 5%
平均值 0. 547 0. 581 0. 499 0. 526
抑制率 /% －
－ 6. 34 8. 72 3. 92
表 3 地骨皮乙醇提取物对透明质酸酶活性的抑制率
浓度ห้องสมุดไป่ตู้对照孔 0. 5%
1% 5%
平均值 0. 630 0. 582 0. 545 0. 530
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表 1 地骨皮石油醚提取物对透明质酸酶活性的抑制率
浓度 对照孔 0. 5%
1% 5%
平均值 0. 547 0. 530 0. 524 0. 557
抑制率 /% －
3. 11 4. 09 － 1. 80
［J］. 锦州医学院学报，1989，10 （ 1） ： 6-9. ［6］ 吴树勋，张建新，徐涛，等 . 酸枣仁、叶、肉与酸枣皂甙 A
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青岛海尔特种电器有限公司。
2 方法
2. 1 药品制备 称取地骨皮粉末 3 000 g，加 2. 5
倍量石油醚，连续回流提取 3 次，合并提取液，回收
溶剂，得石油醚提 取 物； 残 渣 加 3 倍 量 氯 仿，连 续
回流提取 3 次，合 并 提 取 液，回 收 溶 剂 得 氯 仿 提
取物； 残渣加 2. 5 倍量 70% 乙醇回流提取 3 次，
加水溶解，石油醚、氯仿提取物加无水乙醇溶解。各
反应管中加不同稀释浓度的药品 400 μL，空白对照
管加蒸馏水 / 乙醇 400 μL，各管加入牛透明质酸酶
200 μL，37 ℃ 水浴 20 min，12. 5 mmol / L 氯化钙 400
μL，37 ℃ 水浴 20 min； 透明质酸酶激活后，加透明质
收稿日期：2010-12-03
基金项目：国家海洋局 908 专项（ 908-01-ST12，908-02-05-04） ； 国家自然科学基金青年基金（ 81001693） 作者简介：李志勇（ 1978-） ，男，博士，助理研究员，主要从事中药的药效与物质基础研究； Tel： 010-68933254-839，E-mail： lizyong@ yahoo. cn。 * 通讯作者： 周凤琴，E-mail： zfq_sdzy@ 163. com。
除皮肤受损者。按 200 mg / kg 腹腔注射戊巴比妥钠 麻醉，将直径 15 mm 的打孔器置于水温 100 ℃ 的水 浴锅上方，小鼠背部皮肤暴露处置于打孔器上方，计 时 20 s，导致背部深Ⅱ度烫伤，烫伤区域规则，直径 均为 15 mm。腹 腔 注 射 200 mg / kg 灭 菌 的 生 理 盐 水，防止动物脱水死亡。 2. 4 皮肤创面愈合作用的观察 地骨皮的四种提 取物，5% 吐温-80 助溶，加水分散溶解后分别按在 原药材中的含量比例，与 1 ∶ 3 凡士林 / 麻油混合制 膏，阴性对照采用淀粉和凡士林 / 麻油混合制膏。将 皮肤深Ⅱ度烫伤模型小鼠随机分成 6 组，即阴性对 照组、湿润烫伤膏组、地骨皮石油醚提取物组、地骨 皮氯仿提取物组、地骨皮乙醇提取物组和地骨皮水 提取物组，在小鼠皮肤烫伤局部分别涂抹给予阴性 对照药膏、湿润烫伤膏、地骨皮石油醚提取物、氯仿 提取物、乙醇提取物、水提取物，每 2 ～ 3 h 涂 抹 1 次。给药后第 5、10、15 天用硫酸纸临摹小鼠创面， 剪下与烫伤面等面积的硫酸纸，称量质量，以纸质量 减轻程度反映创面面积愈合情况。 2. 5 皮肤病理观察 动物分组及给药同“2. 4”项， 在给药后第 10、15 天处死动物，剪取动物烫伤局部 皮肤，4% 多聚甲醛固定，石蜡包埋，做连续冠状切 片，切片厚度 5 μm，二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水 洗，苏木素染色浸泡 25 min，自来水冲洗，盐酸乙醇 分化 30 s，自来水浸泡 15 min，0. 5% 伊红染、脱水、 透明、封片、中性树脂封片。 2. 6 羟 脯 氨 酸 含 量 测 定 动 物 分 组 及 给 药 同 “2. 4”项，在给药后第 10、15 天处死动物，6 只 / 组， 剪取动物烫伤局部皮肤，精确称取皮肤组织块（ 湿 质量） 30 ～ 50 mg，剪碎，按试剂盒说明书检测组织中 羟脯氨酸的含量。 2. 7 统计学处理 数据以 x珋± s 表示，对各组数据 先进行方差齐性检验。如方差齐性，用 SAS for windows 8. 1 进行单因素方差分析； 如果方差不齐，进行 对数转化后，再进行方差分析。 3 结果 3. 1 体外抗炎实验 地骨皮提取物对透明质酸酶 的抑制作用，结果显示地骨皮水提取物对透明质酸 酶的抑制作用最显著，5% 的地骨皮水提物的透明质 酸酶抑制率最高； 乙醇提取物对透明质酸酶的抑制 作用弱于水提取物，亦以高浓度的抑制效果为佳； 氯 仿提取物和石油醚提取物对透明质酸酶无明显抑制 作用（ 表 1 ～ 4） 。 3. 2 皮肤创面愈合作用 在连续给药 10 d 后，与 阴 性对照组比较，地骨皮乙醇提取物组小鼠创面等
关键词 地骨皮； 烫伤； 药效研究 中图分类号：R285. 5 文献标识码：A 文章编号：1001-4454（2011）08-1266-05
地骨 皮 为 茄 科 植 物 枸 杞 Lycium chinense Mill. 和宁夏枸杞 Lycium barbarum L. 的根皮，味甘性寒， 归肺、肝、肾经，功效凉血除蒸、清肺降火，用于治疗 阴虚潮热、骨蒸盗汗、肺热咳嗽、咯血、衄血、内热消 渴等〔1〕。现代药理研究证实地骨皮具有降血糖、解 热、降 压、抗 菌、抗 病 毒、免 疫 调 节、镇 痛 等 作 用。 《证类本草 》提 出 地 骨 皮 能“补 疽”，《本 草 别 说 》曰 “治金疮”，《孙 真 人 备 急 千 金 方》曰“治 满 口 齿 有 血”〔2〕，提示地 骨 皮 对 皮 肤 创 伤 可 能 具 有 一 定 的 治 疗作用。本研究初步观察了地骨皮对小鼠皮肤深Ⅱ 度烫伤的治疗作用。
基苯甲醛、氯化钙等均为分析纯。
1. 3 主要仪器 RE-5203A 型旋转蒸发仪，上海亚
荣仪器厂； AR1530 型电子天平，美国 Ohaus 公司；
UV-4802H 型紫外可见分光光度计，美国 UNICO 公
司； BX51 型正置荧光显微镜，DP71 数码成像系统，
日本奥林巴斯株式会社； BD-370LT 型超低温冰箱，
回收溶剂后得乙醇提取物； 残渣加水 10 000 mL，
超声提取 1 h，反复 3 次，合并滤液，浓缩，冷冻干
燥，得水提取物； 各部位 浸 膏 研 成 细 粉，置 冰 箱 内
备用。 2. 2 体外抗炎试验〔3〕 地骨皮石油醚提取物、氯
仿提取物、乙醇提取物和水提物按 5% 、1% 、0. 5%
的比例配成供试溶液，其中，地骨皮乙醇、水提取物