鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的制备和检验
鸡传染性法氏囊病抗体检测诊断方法。
鸡传染性法氏囊病抗体检测诊断方法。
原理：可溶性抗原和抗体的可以在琼脂凝胶中扩散，当抗原、抗体相遇时发生特异性结合，在最适处发生沉淀，此沉淀物因颗粒较大而不扩散，形成肉眼可见的白色沉淀带。
材料与试剂普通琼脂平板、打孔器、针头、加样枪、枪头、V型血凝板、玻璃板、生理盐水鸡法氏囊阳性血清、法氏囊标准抗原、待检卵黄抗体/血清方法1.琼脂板的制备：1g优质琼脂溶于含0.1%石炭酸的8%氯化钠溶液100ml。
用时倒在平皿内或置于玻片上，琼脂厚度2.5~3mm。
2.打孔：用打孔器在琼脂平板上打孔，中央1个孔,周围6个孔，形成梅花形图案。
要求：孔径4mm，孔距3mm。
3.挑出孔内琼脂。
4. 封底：在火焰上缓缓加热，使孔底的琼脂略熔化封底，避免加样后液体从孔底渗漏。
5.卵黄液进行倍比稀释。
V型板先在第一排每孔加生理盐水50μl，再在第一孔加50μl的卵黄液, 反复吹吸3次后，吸50μl混和液加入第2孔，吹吸混匀，依次倍比稀释至第4孔……最后一孔吸50μl弃去，这样1至4孔的抗体稀释倍数依次为1:2、1:4、1:8和1:16……。
6.加样：在中心孔加法氏囊标准抗原约50μl。
第1孔加法氏囊标准阴性血清；第2孔加法氏囊标准阳性血清。
3、4、5、6孔分别加原液、1:2、1:4、1:8、1:16……的待检卵黄液。
每孔以加满为度。
7.加毕后，盖上平皿盖，将平皿翻过来，置湿盘中，在37℃下自由扩散24-48小时。
结果判定：若待检血清与抗原孔之间出现白色沉淀线，则表示阳性，若不出现沉淀线，为阴性。
若用于检测血清效价，则以出现沉淀线的血清最高稀释倍数表示（2n）。
用于两种抗原比较时，沉淀线有多种情形，应具体分析。
注意事项1. 做好标记，防止顺序混乱。
2. 挑剔琼脂时注意不要挑破琼脂边缘。
3.加样时，注意不要产生气泡，以加满为度。
否则影响反应结果。
卵黄抗体的制作和应用(精)
卵黄杭体是治疗鸡新城疫(ND 和传染性法氏囊病 (IBD的一种特效药。
卵黄抗体的作用诊断作用:卵黄抗体具有沉淀素的特性,当诊断时,若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病, 可采取病料 5克,加灭菌生理盐水 10毫升,研磨,加抗菌剂抑菌,置于冰箱过夜,作为未知抗原,制作备用琼脂板,打成梅花状七孔后,同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份,约 0.5毫升, 25℃放置 24小时~72小时,出现肉眼可见白色沉淀线,为阳性反应。
强阳性反应时 ,24小时后就可见到沉淀线,即可判定试验鸡群发生了传染性法氏囊病。
治疗作用:当鸡群发生新城疫或传染性法氏囊病时, 可立即皮下注射卵黄抗体1~2毫升, 肉鸡可口服卵黄抗体 2毫升/只,能阻止病毒进入细胞,形成再感染,中和病毒数量,经 2小时就可发现鸡群精神好转,食欲增加,粪便恢复正常。
目前,是治疗鸡新城疫、传染性法氏囊病的特效药物。
预防作用:卵黄抗体的使用,在免疫学理论中可成为被动免疫。
当免疫缺陷、疫苗缺乏及免疫失败时,可利用卵黄抗体注射、口服替代主动免疫接种,发挥抗病作用。
制作方法 :将新城疫 I 系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次, 第一次 1个免疫量,第二次 2个免疫量,第三次 3个免疫量。
待 3周后收集母鸡所产的蛋,无菌术取蛋黄, 加灭菌生理盐水稀释成 1:20的混悬液, 测定效价, 加入抑菌剂, 然后进行分装, 在 0℃以下保存备用。
卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体 ,IgG 抗体。
是母体血液中小分子抗体 IgG 通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。
保存入卵的蛋黄中,若孵化出鸡雏,则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。
这种抵抗作用称为抗体,其分子结构称为单体 Ig, 由 2条多肽重链和 2条多肽轻链组成。
沉淀系数 7S ,分子量 160000 ~180000,含糖 2.5%。
现已发现有四种 IgGT 型重链同种异型, 也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。
法氏囊高免卵黄抗体在制作和使用中应注意的几个问题[1]
![法氏囊高免卵黄抗体在制作和使用中应注意的几个问题[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/37a35f49c850ad02de804100.png)
24周龄光照渐增到15216h 2,光照强度为223瓦 h ,一般每10m 2安一个25瓦灯泡,灯泡要常擦,坏了要及时更换。
该光照管理制度培育种鸡开产提前一周,产蛋量、种蛋种苗质量均符合本品种要求。
笔者认为:肉种鸡整个育成期光照虽日渐增加,成熟稍有提前,但肉种鸡体重大、种蛋重、成熟较蛋鸡、蛋种鸡晚,利用期一般为一个产蛋年,故蛋小、早衰现象不明显,不影响种用价值。
所以肉种鸡育成14周龄前采用自然光照、特15周龄后增加光照时间是可行的,适合于农村及小型鸡场采用。
可见,控制饲养管理是肉种鸡成功育成的关键,同时还要提供科学合理的营养水平、适宜的饲养密度,抓好卫生防疫、疾病防治等,为种鸡繁殖奠定良好的基础。
法氏囊高免卵黄抗体在制作和使用中应注意的几个问题俞炳梅(德州市德城区畜牧局 253006) 传染性法氏囊病,是一种高度接触性传染病。
是危害养鸡业的重大疾病之一。
因该病无特效药物治疗,往往给养鸡户造成重大经济损失。
我们在临床实践中,用自制的法氏囊高免卵黄抗体治疗,效果较好。
近十年来,我们累计制作该抗体2500万m l ,用于2万多个鸡群,近2000万只鸡,取得了满意的治疗效果。
获得了较好的经济效益,同时也获得了较好的社会效益。
现将法氏囊高免卵黄抗体制作和使用过程中应注意的问题总结如下:1、用于高免鸡群的法氏囊灭活苗,我们认为以当地采集的法氏囊病料制作的组织灭活苗效果较好,而用其他地区的病料而制成的灭活苗,免疫效果不理想。
制作的卵黄抗体效价必须在1:64以上。
2、在制作抗体过程中,必须做到无菌操作,并加入防腐剂和足够的抗生素。
制成的抗体应进行无菌检验,确保无菌后方可使用。
31抗体在储存和运输过程中,必须保持低温。
冷冻保存有效期为一年,2210℃保存有效期10天。
4、鸡群一旦发生传染性法氏囊病,应迅速全群肌注该抗体。
对早期感染的有效率达95%以上,对中期感染的治愈率达90%以上,对晚期病鸡虽有治愈率,但效果不理想。
鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架
鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架1. 引言1.1 疾病背景鸡传染性法氏囊病，又称鸡传染性喉头囊病，是由法氏囊病病毒引起的一种急性传染病。
该病主要发生在家禽，尤其是鸡的中耳囊和腭垂，并且可导致气管和支气管的病变。
临床上主要表现为呼吸困难、喘鸣、咳嗽、粘稠鼻涕等症状。
传染性法氏囊病对家禽的生长发育和生产性能具有严重影响，因此在养殖业中造成了重大经济损失。
传染性法氏囊病的防控工作对于保障家禽养殖业的稳定发展至关重要。
在疾病防控过程中，及时准确的现场检验检疫是非常关键的一环。
本文旨在探讨鸡传染性法氏囊病的现场检验检疫构架，为提高疾病的早期检测和及时控制提供技术支持。
通过全面分析疾病的病原学特性、临床症状观察、实验室检验方法以及现场检测方法，本文将为疾病的防控工作提供重要参考，有助于保障家禽养殖业的健康发展。
1.2 研究目的研究目的：本文旨在探讨鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架，通过分析疾病的病原学特性、临床症状观察以及实验室检验方法，建立一套快速、准确的现场检测方法，提高鸡类养殖行业对传染性法氏囊病的检测效率和防控水平。
具体研究目的包括：1. 分析鸡传染性法氏囊病的病原学特性，揭示其传播途径和致病机制；2. 观察疾病的临床症状，为早期诊断和防控提供依据；3. 探索一种适用于现场的快速检测方法，减少检测时间和成本，提高检测准确性；4. 对检测数据进行分析，验证现场检验检疫的重要性，并探讨未来研究的方向。
通过本研究，希望为鸡类养殖行业提供一套完善的现场检验检疫方案，为预防和控制传染性法氏囊病提供理论和技术支持。
2. 正文2.1 病原学特性分析鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）是由法氏囊病病毒（IBDV）引起的一种急性传染疾病，主要感染幼年鸡，尤其是3-6周龄的幼鸡。
病毒主要通过口-粪传播途径传播，也可通过空气传播。
病原体法氏囊病病毒是一种非包膜的双链RNA病毒，属于Birnaviridae科，造成感染性法氏囊病的唯一原因。
鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架
鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架鸡传染性法氏囊病是一种由法氏囊病病毒引起的高度传染性疾病，对鸡类养殖业造成了巨大的经济损失。
在现场检疫检验中，通过对鸡群的观察与检测样品分析，可以及时发现病情，采取有效的预防和控制措施，为鸡类养殖业保驾护航。
本文将介绍鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架。
I. 病情观察在现场检疫检验中，首先要进行鸡群的病情观察。
通过观察鸡群的生长状态、精神状态、羽毛状态、饮食情况等，判断鸡群是否有异常情况。
特别要注意鸡群中是否出现病死鸡或频繁死亡现象，以及是否有部分鸡群生长缓慢、体重下降等情况。
II. 样品采集在鸡群病情观察的基础上，要对疑似感染鸡进行样品采集，进行后续的实验室检测。
我们通常会采集以下样品：1. 血清样品：血清样品是检测鸡体内病毒抗体和病毒核酸的重要样品。
通常采用静脉血获取，每只鸡取0.5~1mL；2. 病死鸡体组织样品：病死鸡体组织可以用于病原体的分离和鉴定，通常采集肝、脾、肺、肾、心等多个组织样品；3. 分泌物样品：包括鸡冠液、泪液、鼻涕、口腔分泌物等，可用于检测病原体在呼吸道、消化道等部位的分布情况。
III. 实验室检测样品采集完成后，要将样品送往实验室进行检测。
主要检测方法有：1. PCR检测：PCR是指聚合酶链反应，可以检测病原体的核酸。
通过PCR检测，可以快速、准确地检测出病毒核酸，具有高度敏感性和特异性；2. 病毒分离：通过将采集的病死鸡体组织样品接种入鸡胚，培养出病毒，并进行病原学鉴定；3. 血清学检测：通过酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法，检测血清中的病毒抗体水平。
实验室检测结果出来后，需要对病情进行评价。
根据检测结果，确定鸡群感染状态，判断病情是否为初发病，是否已扩散。
同时，还需要对鸡群进行分类管理，实施集中隔离和治疗措施。
V. 预防控制在进行病情评价的基础上，制定相应的预防控制措施，包括：1. 隔离措施：针对已感染鸡群，进行集中隔离，避免病毒扩散。
卵黄抗体液口服治疗鸡传染性法氏囊病
床 疗临 诊卵黄抗体液口服治疗鸡传染性法氏囊病司福存 李久庆(山东省滕州市畜牧兽医技术服务中心 277500) 作者用卵黄抗体液口服治疗鸡传染性法氏囊病,经临床试验并与注射法相比较,效果与注射法相同,但口服法比注射法省工、省时、使用方便,且避免了应激反应。
1 材料与方法1.1 材料 卵黄抗体液由本单位制备,具有鸡传染性法氏囊病、新城疫双价抗体。
传染性法氏囊病抗体效价为1 128(琼脂扩散法)。
用生理盐水稀释为1 1的混悬液。
1.2 鸡群 同批同栏自然发病的商品代A A 肉鸡1500只,40日龄,体重2kg ±0.2kg,包括300只卧地丧失觅食能力的病重鸡。
1.3 分组与治疗方法 首先把鸡群中病重的300只与尚有觅食能力同群感染的1200只鸡分开,然后再各自随机等分为2组,每组病重鸡150只、病轻的600只,一组按2mL /kg 体重剂量口服卵黄液,另一组按1mL /kg 体重剂量注射卵黄液。
1.3.1 对口服组中的病鸡,用接有2cm 长的软管注射器,抽取20m L 补液盐溶液及4～5mL 卵黄液,经口腔直接顺食管投入嗉囊内,然后放到能充分饮食的宽阔场地隔离饲养;对病轻的600只鸡,将预先计算好的卵黄液倾入估计2h 可饮服完的(30mL /只)补液盐溶液中充分搅均,分皿供饮。
1.3.2 注射组逐只肌肉注射,并充分供给补液盐水,对150只病重鸡注射的同时同样经口腔投服20mL 补液盐水,放一宽阔场地隔离供水观察。
试验各鸡群在相同条件下饲养,只用一次卵黄液治疗。
1.4 观察指标与方法 记录治疗后5d 内的日采食量,算出平均数与标准差;统计5d 内病死只数,算出病死率。
1.5 统计学处理 数据以平均数±标准差(X -±S)表示,计量资料用t 检验,计数资料用X 2检验。
中图分类号 S858.31 收稿日期 1997-05-042 结果同群感染的口服组600只鸡,供给卵黄液、补液盐溶液后均能即刻饮服,而注射组600只鸡需3人2h 才能完成全部注射。
当前鸡传染性法氏囊病的诊治要点及高免卵黄抗体的制作
家禽科学２００６．０４从２００５年夏季以来，因为传染性法氏囊病毒野毒毒力增强，鸡舍消毒不严，环境卫生控制差，疫苗选取和使用不当，种鸡免疫程序不合理使雏鸡母源抗体低下等诸多因素导致育雏鸡发病，而且在全国较大范围内雏鸡和肉仔鸡发病呈蔓延和上升趋势。
在治疗时滥用高免卵黄抗体或使用劣质高免卵黄抗体无治疗效果，更有多次因卵黄抗体污染导致鸡只死亡的病例出现。
笔者将多年来对本病的预防和控制经验做一总结，并介绍一下高免卵黄抗体的制作方法，供大家参考。
１鸡传染性法氏囊病的发病原因分析、诊断要点和治疗方法１．１发病的主要原因分析１．１．１强毒力和超强毒力野毒的存在养鸡场、鸡舍等环境强毒力或超强毒力传染性法氏囊病病毒野毒的广泛存在以及近几年中等毒力疫苗株的广泛使用，使鸡只的免疫压力增强，经常出现对弱毒力疫苗的不应答。
同时中等毒力疫苗株在鸡群使用后还出现毒力返强现象，如果鸡舍环境消毒不严，极易导致强毒力野毒的大量存在。
这是本病发生的主要原因。
１．１．２消毒不严是发病的另一重要原因养鸡场没有建立良好的消毒程序，特别是育雏鸡舍空舍后没有进行彻底清洗、冲刷和熏蒸消毒。
鸡粪和鸡毛清除冲刷不干净，再消毒不严，羽毛和粪便存留病毒，一批发病后极易造成同一舍的批批发病。
如果鸡场对粪便和路面环境消毒不严，会导致鸡场内每个鸡舍都发病。
有的肉鸡场鸡舍在空舍后从来不进行福尔马林和高锰酸钾的熏蒸消毒，因消毒不严大大增加了传染性法氏囊病的发病机会。
在饲养过程中若不经常带鸡消毒，该病的发病机会也增多。
所以，必须经常进行带鸡喷雾消毒、饮水消毒和清粪后的地面和粪盘消毒。
１．１．３疫苗选用和免疫方法不当应选用质量好的国产疫苗或进口疫苗，一般情况下蛋雏鸡和肉仔鸡要免疫两次，两次间隔１周或１０ｄ。
如果两次都选用国产弱毒苗或都选用进口的中等毒力疫苗，发病机会也会加大，临床上这种情况发病较多。
选用疫苗以适用和免疫效果好、不发病为原则，国产质量好的疫苗也很好。
滥用进口中等毒力疫苗不仅不能防止发生本病，而且如果两次都使用进口中等毒力疫苗时容易造成法氏囊的破坏，更容易继发新城疫、肾型传染性支气管炎、大肠杆菌病和败血支原体病等。
鸡传染性法氏囊病冻干卵黄抗体治疗效力试验报告
２ ２． ０ ０７
畜 牧兽 医
饲料兽药
中和指数＝ 试验组 Ｅ Ｄｏ 照组 Ｅ Ｄ。 Ｌ 对 ／ Ｌ 。
察法 氏囊没有病变 ，说 明本试验 过程没有任何因
注 ： １组 ： ０ ６ １批 ， ２００ ２组 ： ０ ６ ２批 ， ２０ ０ ３组 ： ２ ０ ０ 批 ，组 ： 性对照 ， 组 ： ０６３ ４ 阳 ５ 阴性 对 照
３ 小 结
３ １ 通 过 试 验 检 测 ，３批 冻 干 卵 黄 抗 体 每 羽 份 ．
通过肌 肉注射冻干卵黄抗体稀释液 １ 羽份 ，１ ｄ ，
败发生法 氏囊 病时 ，经常使用法 氏囊 卵黄抗 体进 １２ 方 法 ．
行治疗 。市售 的法 氏囊卵黄抗体 为液体制剂 ，辽 １ ２ １ 中和试 验 （ ． ． 固定抗体稀 释 病毒 法 ） 分 别
宁 益康 生 物股 份 有 限公 司研 制 成功 冻 干 卵黄 抗 将 ２ ０ ０ 、２ ０ ０ 和 ２ ０ ０ 批 冻干 卵黄抗 体用 ０６ １ ０ ６２ ０６３
畜 牧 兽 医
饲料兽药
鸡传染性法氏囊病冻干卵黄抗体 治疗效 力试验报告
张 亚坤 ’ ，胥桂 华 ’ ，张 勇飞 ，李 阳 ’ 秀伟 ’ ，舒 ，项 伟’ ，夏春 雷 ’ （． 宁益康 生物 股份 有 限公 司 ，辽 宁 １辽 辽 阳 １１０ ； １００ １０ ８ ） ００ １
１ ７ — ６ ２２ １ ）７ ０ ５ — ２ ２ ９ ９ （０ ０ — ０ ５ ０ ６ ２
１２ ２ 冻干 卵黄抗体 试验 用品配制 冻干 卵黄 素干 扰 （ 果 见 表 １ 。 ． ． 结 ）
钴-60辐射工艺在鸡传染性法氏囊病浓缩冻干卵黄抗体中的建立与应用
—
丽
检 项目 — 验
— ＿ —
— —
２ ３２ 对照样 品检验结果 当辐射剂量设 １ Ｇ ．． ６ ｙ ｋ 当辐 射 剂 量 设 ８ｋ ｙ 时 ，鸡 新城 疫中等毒力活疫苗 中新城疫病毒 已完 Ｇ 时，鸡新城疫 中等毒力活疫苗 中新城疫病毒 已完 全失活；猪 多杀性 巴氏杆菌 病活疫苗中的猪多杀
检验 项 目
０７ ２ ０ ０６Ｐ
疫
眠
中等 勤
２ 结果 与分 析 ２１ ． Ａ组 ８ ｋ ｙ Ｇ检验结果
２ １ １ 试 验 样 品检 验 结 果 ．． 当辐 射 剂 量 设 ８ｋ ｙ Ｇ
病体活验 疫毒完 姜 原灭检 病已全 耍
长
蓄 墓
． Ｃ ６ ｋ ｙ 时，物理性状为淡黄色块状 ，但是包装瓶颜色有 ２ ３ 组１ Ｇ 检验结果 ．． ６ｋ ｙ 些 加深 ；只有 ２ ０ ０ ０７ ２批鸡 传染性 法 氏囊病纯 化 ２ ３ １ 试验 样 品检 验 结 果 当辐 射 剂 量 设 １ Ｇ
浓缩冻干卵黄抗体具有 较强 的耐辐射性 。
３ 结 论
试验结果表明，当鸡传染性法 氏囊病浓缩冻干 素 能 杀 灭 一 切 存 在 于物 质 中 的微 生物 体 。该 技 术 卵黄抗体实验室产 品接受钴一 Ｏ ６ 辐照剂量为 １ Ｇ 具 备 不 产 生 热 效 应 、无 污 染 、无 残 留 、方 便 、 快 ２ ｙ ｋ
畜牧 兽医
试验综迹
检验 将 本活疫苗稀 释 １ ，采用 尿囊腔 接种 ０倍
检 验项 目
表 ３ 试验样品检验结果
—
１ ０日龄 Ｓ Ｆ 胚，３ Ｐ鸡 ７℃培养 １８ｈ ６ ，记录存活情 况 ，同时吸取 活胚 尿囊液做 Ｈ Ａ试验 。判定有无
鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架
鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）是一种由传染性法氏囊病病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）引起的严重传染病，致使鸡隻的囊上腺发炎、坏死和衰竭，从而产生免疫抑制。
该疾病对鸡养殖业具有重要的经济影响，对鸡隻的生产性能和免疫力造成严重影响。
对鸡隻进行传染性法氏囊病的现场检疫检验非常重要。
一、疫情调查进行传染性法氏囊病的现场检疫检验首先需要进行疫情调查。
通过对饲养鸡隻的情况进行调查，了解饲养密度、养殖方式、鸡隻的健康状况、疫苗接种情况等信息，对鸡场的疫情进行了解。
同时要了解周围地区的传染性法氏囊病的疫情情况，进行疫情预警和分析。
二、临床症状观察进行传染性法氏囊病的现场检疫检验时，需要对鸡隻的临床症状进行观察。
传染性法氏囊病的临床症状主要包括：鸡隻出现萎靡、贫血、疲劳、死亡率增加；囊上腺呈现红肿、软化、坏死；免疫功能下降等。
通过对临床症状的观察，可以初步判断鸡群是否可能感染了传染性法氏囊病。
三、病死鸡尸体检验对疫情严重的鸡场，可以进行病死鸡尸体的检验。
通过对病死鸡尸体的外观、内脏器官的观察，对传染性法氏囊病的病理变化进行初步了解。
并且可以收集样本送实验室进行病原学检查，确认是否为传染性法氏囊病病毒的感染。
四、环境检验除了对鸡隻的检验外，还需要对鸡舍的环境和设施进行检验。
传染性法氏囊病病毒可以在环境中长期存活，对鸡场的环境进行检验可以了解鸡场的卫生状况，是否有传染性法氏囊病病毒的存留。
五、血清学检验进行传染性法氏囊病的现场检疫检验时，还需要对鸡场的鸡隻进行血清学检验。
通过对鸡隻的血清样本进行ELISA检测，可以了解鸡群的免疫状态，是否已经感染了传染性法氏囊病病毒。
血清学检验是确认鸡场是否出现传染性法氏囊病的重要手段。
六、流行病学调查在进行传染性法氏囊病的现场检疫检验时，需要进行流行病学调查。
鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架
鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）是由传染性法氏囊病病毒引起的一种急性传染病，主要感染鸡的法氏囊和淋巴组织，引起免疫功能紊乱，严重影响鸡的生长和产蛋性能，严重时会导致群体性死亡。
为了及时发现并控制鸡传染性法氏囊病的流行和暴发情况，对其进行现场检疫检验是非常必要的。
下面将介绍一份关于鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架。
一、现场调查1.1 病情调查通过实地走访、询问相关饲养员和养殖户，了解各鸡场的养殖情况和鸡传染性法氏囊病的发病情况，包括感染的程度、病死率、疫苗接种情况等。
1.2 环境调查对鸡场的环境卫生情况进行检查，包括饲料和水源的卫生情况、禽舍的通风和排污情况、病鸡和正常鸡的隔离情况等。
1.3 样品采集选择有疑似感染的鸡场进行样品采集，包括病死鸡、疑似感染鸡、法氏囊组织、粪便等，以便后续的实验室检测。
二、实验室检测2.1 病毒检测对采集的样品进行法氏囊病病毒的检测，包括病毒分离、PCR检测和免疫组化等方法，确定是否存在法氏囊病病毒。
2.2 免疫学检测对感染鸡进行免疫学检测，包括抗体检测和细胞免疫功能的检测，评估鸡的免疫状态。
2.3 病原学检测对感染鸡的法氏囊进行病原学检测，包括病理学检查和组织学检查，了解法氏囊病病毒的侵害情况。
三、数据分析3.1 流行病学分析结合现场调查和实验室检测结果，对鸡传染性法氏囊病的流行情况进行分析，包括感染的程度、传播途径、易感群体等。
3.2 风险评估评估鸡传染性法氏囊病对鸡场养殖的风险，包括经济损失、免疫防控的效果、鸡场的环境卫生等。
3.3 措施建议根据数据分析的结果，提出鸡场防控鸡传染性法氏囊病的建议，包括疫苗接种、环境卫生改善、隔离治疗等措施。
以上就是一份关于鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架，通过现场调查、实验室检测和数据分析，可以及时发现并控制鸡传染性法氏囊病的流行和暴发情况，保障鸡场养殖的健康发展。
鸡法氏囊和腺病毒精制卵黄抗体制备与应用
2019.05作者简介:吴卫东(1979-),山东省菏泽市人,研究生,兽医师,主要从事动物疫病预防控制工作。
*通信作者:魏中锋(1978-),陕西省扶风县人,研究生,兽医师,主要从事动物疫病预防控制工作。
鸡法氏囊和腺病毒精制卵黄抗体制备与应用吴卫东1魏中锋2※徐梅2蔡文利1(1,山东省菏泽市食品药品检验检测研究院274000;2,山东省菏泽市动物疫病预防控制中心2740001)摘要:利用当地分离的禽法氏囊和腺病毒流行株制备二联油乳剂灭活疫苗后制备高免精制卵黄抗体,通过多次加强免疫,以PEG6000沉淀提取和微滤孔滤膜过滤获得精制卵黄抗体,并对卵黄抗体的质量进行检验和临床试验,结果表明,卵黄抗体的预防和治愈效果较好。
关键词:鸡;法氏囊;腺病毒;卵黄抗体;试验鸡法氏囊病(IBD)是一种急性、高度传染性可引起免疫抑制性的鸡的烈性传染病[1]。
近几年,鸡法氏囊和腺病毒对目前鸡养殖业已造成重大危害,尤其在有些地区还存在禽法氏囊和腺病毒混合感染的情况。
本试验用从当地分离的鸡法氏囊和腺病毒流行株病毒制备成二联油佐剂灭活疫苗后,经过对150日龄的蛋鸡进行3次免疫后,制备出抗鸡法氏囊和腺病毒二联精制卵黄抗体,有望对当地鸡法氏囊和腺病毒疫情进行有效控制。
1材料1.1毒株及疫苗毒株为由本实验室分离鉴定的当地流行株,疫苗为本实验室制备的鸡法氏囊和腺病毒二联灭活油乳剂疫苗。
1.2试验鸡卵黄抗体鸡有本地某种蛋鸡养殖场提供150日龄产蛋鸡50只,SPF 鸡购自济南斯帕法斯家禽有限公司。
1.3试验主要仪器电子天平购自日本岛津(Shimadzu)公司、高速冷冻离心机购自德国SIGMA/西格玛公司。
1.4试验试剂法氏囊琼扩标准抗原、法氏囊琼扩标准阳性血清,鸡腺病毒I 亚群IV 型琼扩标准抗原与标准阳性血清,购江苏农科院家禽研究所。
聚乙二醇6000购自江苏省海安石油化工厂。
2方法2.1产蛋鸡免疫对试验产蛋鸡每只鸡颈部皮下注射鸡法氏囊和腺病毒二联灭活疫苗0.5ml/只,2周后加强免疫胸部肌肉注射灭活疫苗0.5ml/只,在第4周后进行最后一次加强免疫颈部皮下和腿部肌肉各注射灭活疫苗0.5ml/只。
卵黄抗体的制作
卵黄抗体的制作卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。
目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。
制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。
待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。
卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。
是母体血液中小分子抗体IgG 通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。
保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。
这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。
沉淀系数7S，分子量160000-180000，含糖2.5%。
现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。
具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。
由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。
卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。
卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约0.5毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。
鸡抗传染性法氏囊病卵黄抗体的ELISA及琼脂扩散检测
抗) : 北京经科生物制品有限公司; B SA : 上海化学 试剂公司; IBD 琼扩抗原及阳性血清: 中国兽医药品 监察所; 琼脂, TM B , 其余试剂均为A. R. 级。酶联免 疫 检测仪 M K3: W ELL SCAN (荷兰) ; 聚苯乙烯酶 标板 (上海塑料三厂) ; 移液枪; 微量进样器; 平皿; 恒 温水浴锅, 漩涡混合仪等。 1. 2 鸡的免疫[1] 以 IBD N F 8 株免疫健康鸡, 共 免疫四次, 每次间隔 10 天。 首免后开始每日收集鸡 蛋编号, 于 4℃下保存。 1. 3 间接 EL ISA 方法的建立 由于卵黄中存在大 量的脂类, 因此 EL ISA 检测卵黄抗体前需使用氯仿 去脂: 用 2 倍生理盐水稀释卵黄液, 再加入等体积的 氯仿, 充分振荡后, 37℃水浴 30 m in, 其间搅拌 2～ 3 次, 4 000 r m in 离心 20 m in, 取上层水相待测。 1. 3. 1 间接 EL ISA 方法流程 如图 1。
图 1 EL ISA 检测流程
使用 0. 05 m o l L pH 9. 6 的碳酸盐缓冲液稀释 琼扩抗原, TM B 为底物显色。 1. 3. 2 实验条件优化 (1) 酶标二抗工作浓度: 以 100 ng m l 标准鸡 IgG 包被酶标板, 空白孔为对照, 酶 标兔抗鸡 IgG (1∶50～ 1∶800) 倍比稀释加入。 (2) 抗原包被浓度: 将琼扩抗原进行稀释 (1∶10, 1∶ 20, 1∶50, 1∶100, 1∶200) , 包被酶标板, 加入 1∶ 300 稀释的阴阳性卵黄待测液。 (3) 封阻剂浓度: 分 别采用 1%、1. 5% 及 3. 0% 的B SA 封闭, 比较效果。 以上分别按照 EL ISA 流程测试。 1. 3. 3 间接 EL ISA 法测 IgY 效价 卵黄原液经去 脂处理后, 待测液倍比稀释, 以阴性卵黄稀释 5 000 倍为对照, 间接 EL ISA 方法监测鸡群的抗 IBD 卵黄 抗体变化情况。 以OD 450值大于阴性对照平均值 2. 1
鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的制备和检验
鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的制备和检验鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的制备和检验【实训目标】（1）学习和掌握卵黄抗体的制各方法。
（2）学习和掌握卵黄抗体的检验方法。
【实训材料】1、材料（1）抗原与血清：鸡传染性法氏囊强毒油乳剂灭活苗；传染性法氏囊病毒阴、阳性血清。
（2）动物：4～8周龄SPF鸡或4～8周龄健康鸡、健康产蛋母鸡及其所产蛋；小鼠。
（3）主要器材；超净工作台、恒温箱、高压锅、离心机、微量加样器、平皿、酒精灯、烧杯、吸管、玻棒、三角瓶、纱布、记号笔、碘酒棉、酒精棉、镊子、1～5ml注射器和pH 试纸等。
2、试剂0.2%～0.5%新洁尔灭、5%碘酊、75%酒精、灭菌生理盐水、青霉索、链霉索、氯仿、琼脂糖；鲜血琼脂平板、马丁肉汤和厌氧肉肝培养基等。
【内容与方法】（一）鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的制备1、高免鸡蛋的准备选择SPF或临诊健康产蛋鸡，每只皮下或肌肉注射鸡传染性法氏囊强毒油乳剂灭活苗1ml，一般免疫2～3次，每次间隔10～14d，待卵黄抗体的琼脂扩散实验（AGP）效价达1：128以上即可收蛋。
收集所产蛋，置4℃冰箱保存（不宜超过1周）。
2、卵黄抗体的制备收集一定数量的高免蛋后，用0 2%～0.5%的新洁尔灭或高锰酸钾水溶液洗净蛋壳表面，再用5%碘酊消毒，最后用75%的酒精脱碘两次。
在无菌条件下打开蛋壳，分离卵黄，将卵黄移至无菌量杯或有刻度的烧杯中，加入等量灭菌生理盐水混合。
粗制卵黄抗体：将生理盐水与卵黄的等量混合物，加青霉素、链霉索、硫柳汞，使其终浓度分别为1 000IU／ml、100ug／ml和0.01%.充分搅拌。
—20℃储存备用。
（二）卵黄抗体的检验1、理化性状粗制卵黄抗体：鲜黄色，冰冻溶解后有少量卵黄沉淀。
2、无菌检验取高免卵黄抗体0.2ml，分别接种于鲜血琼脂平板、马丁肉汤和厌氧肉肝培养基，37℃培养48h，均应无菌生长。
3、安全检驻用体重18-22g小鼠5只，每只皮下注射本品0.5ml；用14日龄SPF雏鸡5只，每只皮下注射本品10ml；观察l0d小鼠和雏鸡均应全部健活。
传染性法氏囊病卵黄抗体效价的测定
实训目标
掌握鸡传染性法氏囊病卵黄抗体效价的测定 方法
仪器设备
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
氯化钠、琼脂粉、培养皿、打孔器、酒精灯、鸡 蛋、96孔血凝板、微量移液器、烧杯、带盖瓷盘、 注射器、生理盐水、蒸馏水、标准抗原等
方法步骤
（一）1%琼脂平板制备 （二）稀释卵黄 （三）加样 （四）反应
3. 封底： 用酒精灯轻烤平皿底部至微烫，封闭孔底部，以防侧 漏。
4. 编号：
在平皿底用蜡笔编号，第一组编号 1 ～ 6 ，第二组编号 7～12。
（二）稀释卵黄
先用微量移液器在 96 孔血凝板加生理盐水，每孔 50 微升，共加 1~12 孔；再于第一孔加 50微升卵黄，倍比稀 释至12孔。
（三）加样
（一）1%琼脂平板制备
1. 制板： 用8～10%氯化钠溶液配制1%琼脂溶液，电炉加热使之 充分溶化后，倒入直径 90 mm 培养皿，制成厚度为 2.5 ～ 3mm琼脂平板；平置，在室温下冷却凝固后打孔。
2. 打孔： 在琼脂板上按 7孔一组的梅花形打孔（中间1 孔，周围6 孔），孔径 5mm，孔距 2 ～ 5mm，将孔内的琼脂用 8 号针头 斜面向上轻轻将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。 一般打孔两组。
中央孔加入传染性法氏囊病病毒标准抗原，加样量 以“满而不溢”为原则。用微量移液器小心的将 96 孔血 凝板中不同浓度卵黄液小心加至琼扩板的周边孔上，血 凝板孔号与琼扩板孔号要一一对应，加样从低浓度开始 加样，每加一个浓度，吸嘴尽量喷干净
（四）反应
将琼扩板静置1～2min，加盖、倒置入湿盒中，放入 37℃的温箱中24～48h。
（五）结果判断
24～48h后，观察出现白色沉淀线的卵黄 稀释度，即是IBD抗体效价。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的制备和检验
【实训目标】
（1）学习和掌握卵黄抗体的制各方法。
（2）学习和掌握卵黄抗体的检验方法。
【实训材料】
1、材料
（1）抗原与血清：鸡传染性法氏囊强毒油乳剂灭活苗；传染性法氏囊病毒阴、阳性血清。
（2）动物：4～8周龄SPF鸡或4～8周龄健康鸡、健康产蛋母鸡及其所产蛋；小鼠。
（3）主要器材；超净工作台、恒温箱、高压锅、离心机、微量加样器、平皿、酒精灯、烧杯、吸管、玻棒、三角瓶、纱布、记号笔、碘酒棉、酒精棉、镊子、1～5ml注射器和pH 试纸等。
2、试剂0.2%～0.5%新洁尔灭、5%碘酊、75%酒精、灭菌生理盐水、青霉索、链霉索、氯仿、琼脂糖；鲜血琼脂平板、马丁肉汤和厌氧肉肝培养基等。
【内容与方法】
（一）鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的制备
1、高免鸡蛋的准备选择SPF或临诊健康产蛋鸡，每只皮下或肌肉注射鸡传染性法氏囊强毒油乳剂灭活苗1ml，一般免疫2～3次，每次间隔10～14d，待卵黄抗体的琼脂扩散实验（AGP）效价达1：128以上即可收蛋。
收集所产蛋，置4℃冰箱保存（不宜超过1周）。
2、卵黄抗体的制备收集一定数量的高免蛋后，用0 2%～0.5%的新洁尔灭或高锰酸钾水溶液洗净蛋壳表面，再用5%碘酊消毒，最后用75%的酒精脱碘两次。
在无菌条件下打开蛋壳，分离卵黄，将卵黄移至无菌量杯或有刻度的烧杯中，加入等量灭菌生理盐水混合。
粗制卵黄抗体：将生理盐水与卵黄的等量混合物，加青霉素、链霉索、硫柳汞，使其终浓度分别为1 000IU／ml、100ug／ml和0. 01%.充分搅拌。
—20℃储存备用。
（二）卵黄抗体的检验
1、理化性状
粗制卵黄抗体：鲜黄色，冰冻溶解后有少量卵黄沉淀。
2、无菌检验取高免卵黄抗体0.2ml，分别接种于鲜血琼脂平板、马丁肉汤和厌氧肉肝培养基，37℃培养48h，均应无菌生长。
3、安全检驻用体重18-22g小鼠5只，每只皮下注射本品0.5ml；用14日龄SPF雏鸡5只，每只皮下注射本品10ml；观察l0d小鼠和雏鸡均应全部健活。
4、效力检验
AGP抗体效价测定：8%氯化钠溶液中加入1g琼脂粉，加热融化后，浇制凝胶板。
中央l孔外围6孔打孔，孔径3mm，间距4mm。
将卵黄抗体用生理盐水做倍比稀释，取1:8、1: 16、1: 32和1：64稀释度的卵黄抗体，分别加入周围4个孔；另外2个孔分别加入IBDV阳性和阴性血清作为对照；中间孔加1BDV AGP抗原，l5～20ul／孔。
然后置37℃湿盒孵育24h，在室温放置24～48h。
结果判定；与标准抗原形成白色沉淀线的抗体最大稀释度即为卵黄抗体的效价。
AGP 抗原效价应>1: 32。
【思考与练习】
1、卵黄抗体的质量受哪些因素的影响？应如何克服？
2、精制卵黄抗体与粗制卵黄抗体有何不同，制备过程中应注意什么问题？。