食品微生物检验的基本程序
微生物检验(完整版)
微生物检验(完整版)微生物检验是一种用于检测和鉴定微生物的方法，它在医学、食品安全、环境保护等领域都有着重要的应用价值。
微生物检验可以帮助人们了解微生物的种类、数量、分布以及对人类和环境的影响，从而采取相应的控制和预防措施。
本文将从微生物检验的基本原理、常见方法和应用领域等方面进行介绍。
一、微生物检验的基本原理。
微生物检验的基本原理是通过对样品中的微生物进行分离、培养、鉴定和计数，从而得到微生物的种类和数量。
其主要包括以下几个步骤：1. 取样，首先需要从待检样品中取得适当的样品，如食品、水、空气、土壤等。
取样的方法和条件需根据具体的检验要求和标准来确定。
2. 分离，将样品中的微生物分离出来，通常采用的方法有稀释涂布法、滤膜法、过滤法等。
分离出的微生物可以进行后续的培养和鉴定。
3. 培养，将分离出的微生物进行培养，提供适当的营养物质和环境条件，促使微生物的生长和繁殖。
培养的时间和温度等条件需根据不同的微生物种类来确定。
4. 鉴定，对培养出的微生物进行形态学、生理学和生物化学特性等方面的鉴定，确定其种属和数量。
常用的鉴定方法有显微镜观察、生化试验、分子生物学方法等。
5. 计数，对培养出的微生物进行计数，得到微生物的数量。
常用的计数方法有平板计数法、膜过滤法、涂片计数法等。
二、微生物检验的常见方法。
微生物检验的常见方法主要包括传统方法和现代方法两大类。
1. 传统方法，传统方法主要包括涂布法、滤膜法、过滤法、薄层法等。
这些方法简单易行，成本低廉，适用于一般的微生物检验需求。
但传统方法通常需要较长的培养周期，且对微生物的种类和数量有一定的限制。
2. 现代方法，现代方法主要包括PCR法、蛋白质质谱法、流式细胞术等。
这些方法具有高灵敏度、高特异性和高通量的特点，能够快速准确地检测和鉴定微生物。
但现代方法的设备和技术要求较高，成本较高，适用于对微生物检验有较高要求的领域。
三、微生物检验的应用领域。
微生物检验在医学、食品安全、环境保护等领域都有着重要的应用价值。
试析食品微生物检验关键程序及操作要点
试析食品微生物检验关键程序及操作要点王周明（合浦县食品药品检验检测中心，广西北海 536100）摘 要：食品微生物检验是通过对食品中的微生物进行检验，确保食品中微生物的种类及数量符合要求，保证食品的质量及安全。
本文介绍了食品微生物检验的内容以及特点，分析了食品微生物检验的关键程序，并给出了食品微生物检验的操作要点，旨在为食品检验工作提供一些有益的参考，提升微生物检验的水平与效率，促进食品检验行业的发展。
关键词：食品；微生物；检验Analysis of Key Procedures and Operational Points for FoodMicrobiological TestingWANG Zhouming(Hepu County Food and Drug Inspection and Testing Center, Beihai 536100, China) Abstract: Food microbiological inspection is through the inspection of microorganisms in food, to ensure that the type and quantity of microorganisms in food meet the requirements, to ensure the quality and safety of food. This paper introduced the contents and characteristics of food microbiological inspection, analyzed the key procedures of food microbiological inspection, and gave the operation points of food microbiological inspection, aiming to provide some useful references for food inspection work, improve the level and efficiency of microbiological inspection, and promote the development of food inspection industry.Keywords: food; microorganisms; inspection食品中微生物的存在及含量关系着食品的质量及安全。
食品微生物检验基本程序
制定检验计划和方案
确定检验目的和 要求
了解样品来源和 种类
制定检验方案和 标准
准备检验设备和 试剂
准备检验设备和试剂
检验设备的准备： 选择合适的设备， 如显微镜、培养箱、 天平等，并进行校 准和维护
试剂的准备：根据 检验项目和要求， 准备相应的试剂和 培养基，并确保其 质量和有效性
实验环境的准备： 保持实验室的清洁 和消毒，确保实验 过程的安全和卫生
数据分析：对鉴定和 计数结果进行综合分 析，判断食品中微生 物的污染程度和卫生 质量
结论：根据数据分析 结果，得出食品中微 生物的鉴定和计数结 论，为食品生产和质 量控制提供依据
微生物检验报告撰写
检验报告撰写内容和要求
实验依据：说明实验 所依据的法规、标准、
方Hale Waihona Puke 等实验设备：列出实验 所用的仪器、设备及 其编号和校准证书等
人员准备：对检验 人员进行培训和考 核，确保其具备相 应的技能和知识， 并遵守实验室规范 和操作规程
做好人员培训和防护措施
人员培训：对检验人员进行微生物检验相关知识和技能的培训，确保他们具备足够的技能和 知识进行检验。
防护措施：确保检验人员在检验过程中采取适当的防护措施，如穿戴防护服、戴手套、口罩 等，以避免与有害微生物接触。
微生物分离和纯培养
划线分离法
微生物分离方法
稀释分离法
选择培养基分离法
膜过滤法
组织分离法
微生物纯培养方法
划线法：通过在培养基上进行多次划线，将微生物逐步稀释，获得单个菌落的方法。
稀释涂布平板法：将微生物悬液进行连续稀释，然后涂布到培养基上进行培养，获得单个菌落 的方法。
平板划线法：通过在已经长有微生物的平板上进行划线，使微生物在培养基上进行纯培养的方 法。
食品微生物检验的关键程序与操作要点分析
食品科技食品微生物检验的关键程序与操作要点分析高 攀（河南中航泰洁科技有限公司，河南郑州 451162）摘 要：食品微生物检验是保障公众健康和食品安全的重要手段之一。
随着人们对食品质量和安全的关注日益增加，食品微生物检验显得至关重要。
微生物污染不仅会影响食品的口感和质量，还可能引发食源性疾病，危害消费者的健康。
因此，建立科学规范的食品微生物检验体系对确保食品安全具有重要意义。
本文旨在探讨食品微生物检验的关键程序与操作要点，深入分析检验过程中的关键环节，揭示食品微生物检验的核心内容和操作要点，从而有效提高食品安全监管工作的水平，保障广大消费者的餐桌安全。
关键词：食品微生物；检验关键程序；操作要点Analysis of Key Procedures and Operational Points in FoodMicrobiological TestingGAO Pan(Henan Zhonghang Taijie Technology Co., Ltd., Zhengzhou 451162, China) Abstract: Food microbiological testing is one of the important means to safeguard public health and food safety. With the increasing concern for food quality and safety among people, food microbiological testing has become crucial. Microbial contamination not only affects the taste and quality of food but also can lead to foodborne illnesses, posing risks to consumer health. Therefore, establishing a scientifically standardized food microbiological testing system is of great significance in ensuring food safety. The purpose of this paper is to explore the key procedures and operation points of food microbiological inspection, to analyze the key links in the inspection process, and to reveal the core content and operation points of food microbiological inspection, so as to effectively improve the level of food safety supervision and ensure the safety of consumers’ tables.Keywords: food microbiology; key procedures for testing; operational points随着经济的发展，人们对生活质量和食品安全的关注度越来越高。
食品微生物检验技术GB4789.2-2010 菌落总数测定
(4) 按 (3) 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀 液。每递增稀释一次，换用 1 次 1 mL 无菌吸管 或吸头。 (5) 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个～3 个 适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）， 在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液 于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时， 分别吸 取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内 作空白对照。 (6) 及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46 ℃的平板计 数琼脂培养基（可放置于 46 ℃±1 ℃恒温水浴 箱中 保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
2. 培养 (1) 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h。水产品 30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h。 (2) 如果样品中可能含有在琼脂培养基表 面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂 表面覆盖一薄层 琼脂培养基（约 4 mL）， 凝固后翻转平板，按 36 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h（水产品 30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h）条件进行培养。
GB 4789.2-2010 食品安全国家标 准 食品微生物学检验 菌落总数测定
一、设备和材料 二、培养基和试剂 三、检验程序 四、操作步骤 五、结果与报告
一、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和 材料如下： (1) 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 (2) 冰箱：2 ℃～5 ℃。 (3) 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 (4) 天平：感量为 0.1 g。 (5) 均质器。 (6) 振荡器。 (7) 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 (8) 无菌锥形瓶：容量 250 mL、500 mL。 (9) 无菌培养皿：直径 90 mm。 (10) pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 (11) 放大镜或/和菌落计数器。
食品中微生物检测操作规程
微生物检测操作规范1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法本标准适用于食品生产线微生物控制及验证计划。
本标准适用于食品产品菌落总数、大肠菌群检测。
2 规范性引用标准GB 4789.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》。
GB/T 4789.3-2003《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》。
GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。
4 设备和材料恒温培养箱：36℃±1℃。
恒温水浴箱：46℃±1℃。
天平：感量为0.1g。
无菌吸管：1ml（具有0.01ml刻度）、10ml（具有0.1ml刻度）。
无菌培养皿：直径90mm。
无菌锥形瓶：容量500ml；或225ml塑料稀释瓶（带内垫，可高温灭菌）。
灭菌试管：16mm×160mm；或10ml-20ml无菌管。
显微镜：10×-100×4 培养基和试剂平板计数琼脂培养基：GB 4789.2-2016 附录A.1。
无菌生理盐水：GB 4789.2-2016 附录A.3。
乳糖胆盐发酵管：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。
伊红美蓝琼脂平板：按GB/T 4789.3-2003中4.25规定。
乳糖发酵管：按GB/T 4789.3-2003中2.2规定。
EC肉汤：按GB/T 4789.28-2003中4.11规定。
格兰仕染色液：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。
5菌落总数检验程序实验前准备移液管、三角瓶、试管包扎、灭菌移液管：洗净烘干后在吸管粗头顶端约0.5cm处，塞上一小段棉花，后用4-5cm宽的报纸或牛皮纸将其以下图所示包扎好。
三角瓶包扎图例将包扎后的器具放入灭菌锅，121℃ 15min灭菌。
a.样品处理面饼样品经粉碎机粉碎后，称取25g粉碎样加入装有225ml无菌生理盐水的稀释瓶内，充分振摇，做成1:10的均匀稀释液。
注意：①实验前无菌室提前30min打开紫外灯进行消毒，进入无菌室前洗手消毒，开始试验、样品处理前使用装有75%酒精的喷壶进行手部消毒。
微生物检验流程及操作标准
微生物检验流程及操作标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：微生物检验是一种重要的实验室技术，用于检测食品、水质、环境等样品中的微生物存在情况。
微生物检验需要严格遵守一系列操作标准和流程，以确保检验结果的准确性和可靠性。
下面我们将介绍一下微生物检验的流程及操作标准。
一、样品采集1. 样品的采集需要采用无菌工具，并保持样品在采集过程中不受到外界环境的污染。
2. 样品的采集过程应尽量避免接触到任何可能引入外源微生物的物质，比如皮肤、空气等。
3. 采集的样品应标明正确的标识信息，包括样品名称、采集地点、采集日期等。
二、样品处理1. 样品收到实验室后，需要尽快进行处理，避免样品内的微生物增殖或死亡。
2. 样品处理过程需要保持在无菌条件下进行，使用无菌工具进行操作。
3. 样品处理过程中需要按照检验要求进行适当的稀释，以确保实验得出准确的结果。
三、培养基准备1. 培养基的制备需要按照标准的配方和步骤进行，以确保培养基的质量符合要求。
2. 制备培养基时需要严格遵守无菌操作规范，避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
3. 制备好的培养基需要在适当的条件下保存，确保培养基的稳定性和有效性。
四、接种操作1. 在进行微生物检验之前，需要准备好无菌的接种环、移液器等工具。
2. 采取适当的方法将处理好的样品接种到培养基上，避免接种时引入外源微生物。
3. 接种操作需要在无菌条件下进行，避免培养物受到任何污染。
五、培养与观察1. 接种后的培养基需要置于适当的温度和湿度条件下进行培养，促使样品中的微生物生长。
2. 定期观察培养基上的生长情况，记录生长的数量和形态，用于后续的分析和鉴定。
3. 在观察过程中需要注意反复进行无菌操作，避免细菌、真菌等外源微生物的污染。
六、鉴定与结果解读1. 当样品中的微生物生长到一定程度时，需要进行鉴定和分析，确定其种属和数量。
2. 鉴定过程需要参考相关的鉴定手册和标准，进行适当的试验和测试。
3. 根据鉴定结果进行结果解读，判断样品中微生物的种类和数量是否符合标准要求。
3-微生物检测一般流程
• 例如：
n=5,c=0，m=0 意味着有5个样品被检验某一病原体，如果有 一个样品中含有该病原体，则该批产品不可接 受。 n=5,c=0，m=102
意味着有5个样品被检验某一病原方案
有一个额外的参数，附加指标值M，用于区分可 接受的临界值和不可接受的值 在任何一个样品中，大于或等于M的值都是不可 接受的 根据被检测到的微生物的浓度，三级抽样方案 将食品分成三级 • 若计数小于m，则可接受 • 若计数大于m，小于M ，则处于可接受的临界处 • 若计数大于M ，则可接受
四、样品的处理
Sample Treatment
1、基本要求
（1）需将供试品制备成供试溶液或悬浮液。 供试液的制备不得改变污染微生物的数量和种类。 （2）做多项检验（微生物、化学、药理） 时：首先取出规定量的供试品供微生物学检验， 其余部分做其他检验。 （3）供试品收检后，应及时检验，否则，应存放在规定 的储存条件下。 （4）在检验之前，应保持原包装状态，严禁开启。 （5）供试品的取样必须在净化条件下，无菌操作。 （6）含有抑菌成分的供试品，消除抑菌成分的干扰。
C、人畜共患病病原微生物检验的取样方案
当怀疑某一动物产品可能带有人畜共患病病原体时，应结 合畜禽传染病学的基础知识，采取病原体最集中、最易检出的组 织或体液送实验室检验。
国际食品卫生规范委员会
International Commission on Microbiological Specification for Food, ICMSF
第二章 微生物检验的基本程序
Microorganism examination procedures
采集样品
样品保存
样品处理
选择参考菌群
食品微生物检测基本流程
食品微生物检测基本流程一、样品采集和处理食品微生物检测的第一步是样品采集和处理。
样品的采集应遵循严格的卫生规范和操作流程，避免外界污染。
常见的食品样品包括生肉、蔬菜水果、乳制品等。
采集后的样品需要进行处理，如剁碎、搅拌、稀释等，以便后续的检测分析。
二、微生物培养微生物培养是食品微生物检测的核心步骤之一。
在适当的培养基上，将样品接种并进行培养，以促进微生物的生长和繁殖。
培养基的选择应根据不同的微生物种类和检测目的进行。
常见的培养基有营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等。
培养条件如温度、湿度、氧气含量等也需要根据不同的微生物进行调整。
三、微生物分离和鉴定在微生物培养的基础上，需要进行微生物的分离和鉴定。
首先，将培养基上生长的菌落进行分离，得到纯培养物。
然后，通过形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学方法等手段，对微生物进行鉴定和分类。
鉴定结果可以帮助我们了解食品中的微生物种类和数量，判断是否存在食品安全隐患。
四、微生物计数微生物计数是食品微生物检测的重要环节。
通过将经过适当稀释的样品接种在含有特定培养基的琼脂平板上，培养一定时间后，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，进行计数。
微生物计数可以反映食品中微生物的数量，对判断食品是否合格具有重要意义。
五、微生物毒素检测除了微生物的数量，食品中的微生物毒素也是需要检测的重要指标之一。
某些微生物在生长繁殖过程中，会产生一些有害的化合物，称为微生物毒素。
常见的微生物毒素有霉菌毒素、致病菌毒素等。
微生物毒素的检测可以使用生物学方法、化学方法等进行，以保证食品的安全性。
六、数据分析和评估在完成微生物检测后，需要对检测结果进行数据分析和评估。
根据相关标准和规定，对微生物数量、毒素含量等指标进行评估，判断食品的卫生安全和质量合格与否。
同时，还可以通过对不同批次、地区等样品的比较分析，了解食品微生物污染的趋势和变化，为食品安全管理提供科学依据。
食品微生物检测的基本流程包括样品采集和处理、微生物培养、微生物分离和鉴定、微生物计数、微生物毒素检测、数据分析和评估等步骤。
食品微生物检测(计数法)
大肠菌群操作步骤1
25g(mL) 样品
吸取1mL 225mL0.85% 灭菌生理盐水 9mL0.85% 灭菌生理盐 水
1:10
1:100
10mL 10mL 10mL 双料 双料 双料
5mL 单料
5mL 5mL 单料 单料
5mL 单料
5mБайду номын сангаас 单料
5mL 单料
36℃±1 ℃,培养24h ±2h
4.
2.
称样品
2.1手部的消毒 2.2镊子、剪刀、勺子的消毒。 2.3样品包装口的消毒（一个样品换一把镊子、剪刀或勺 子）。
3.
实验结束后的消毒
3.1用过的实验器材经高温消毒后再清洗。 3.2实验台面用消毒水擦洗干净。 3.3清洗双手：先用肥皂清洗双手，在消 毒水中浸泡双手3min后用水冲洗，再 用肥皂清洗双手。 3.4打开紫外灯消毒30－60min。
6.
7. 8. 9. 10. 11.
三．
培养基和试剂
营养琼脂 0.85％灭菌生理盐水 75％酒精棉球
1. 2. 3.
四．
检验程序
检样稀释及培养
1.
1.1以无菌操作将检样25g（mL）剪碎放于含有225mL灭菌 生理盐水的塑料瓶内，经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中处理。 1.2用1mL灭菌吸管吸取1：10的稀释液1mL，沿管壁徐徐注 入含有9mL灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及 管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。 1.3另取1mL灭菌吸管，按1.2操作方法，做10倍递增稀释， 如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。
霉菌和酵母菌计数操作步骤
食品微生物检验五个基本工作流程
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5食品安全国家标准食品微生物学检验
中国兰平板
深蓝色；浅蓝色；中心深蓝色
麦康凯平板
桃红色；粉红色、中心桃红色
大肠杆菌、大肠菌群选择性显色培养基--COLI ID 用于在37℃下对食品中大肠菌群和大肠杆菌进行检
测、计数及大肠杆菌的鉴定
四、大肠菌群检验方法及操作方法
国家标准：
三步法：乳糖胆盐发酵试验→分离培养 →证实试验(乳糖发酵试验)
群备
菌培
动物试验
养
第一节 食品中菌落总数的测定
1、菌落总数
定义： 是指食品检样经过处 理，在一定条件下培 养后，所得1mL(g)或 1cm2面积检样中所含 菌落的总数。
2、菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染 的程度及卫生质量。 2、预测食品储存期限的 长短。 3、了解细菌在食品中的 繁殖动态。
革兰氏染色
EMB平板
麦康凯琼脂平板
表1 粪大肠菌群在几种常用分离培养上的菌落特征
培养基
菌落特征
伊红兰培养基(EMB)
品红亚硫酸纳 (远藤氏平板)
紫黑色、有金属光泽；紫黑色、不带或略 带光泽；淡紫红色、中心紫黑色、黑红或 深紫红色
紫红色、有金属光泽；深红色、不带或略 带金属光泽；淡红色、中心较深。
► 不可用其他胆盐代替指定的胆盐。
THANKS
谢谢聆听
革兰氏染色
乳糖发酵管
革兰氏阳性 革兰阳性 大肠杆菌阴性
报告
报告
报告
新国家标准 GB/T4789.3
检样 稀释处理 LST肉汤管（36±1）℃，（48±2）h
产气 BGLB肉汤（36±1）℃，（48±2）h
不产气 不产气
产气
大肠杆菌阴性
大肠杆菌阳性
报告
报告 LST:月桂基硫酸盐胰蛋白胨 BGLB：煌绿乳糖胆盐肉汤