第七章---蛋白质检验PPT课件

第七章 蛋白质检验
主讲：王保平 生化教研室
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本章内容概要：
第一节 概述 第二节 蛋白质检验
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本章教学要求：
1、掌握血浆蛋白质的组成、功能及分类；个别血浆蛋白质（前 白蛋白、白蛋白）的来源和生理功能；血清总蛋白和白蛋白的 测定方法和原理。 2、熟悉急性时相反应蛋白的概念和种类；血清球蛋白和纤维蛋 白原的测定方法
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功能：蛋白酶抑制物（具有90％的抑制蛋白酶活力）。如 糜蛋白酶，弹性蛋白酶，但此抑制作用有明显的pＨ依赖性。
参考值：成人：0.83－1.99g/L， 新生儿：1.45－2.7g/L
临床意义： 升高：感染性疾病(细菌性、病毒性)、恶性肿瘤、胶原病、妊 娠、外科手术、药物(雌激素、口服避孕药、肾上腺类固醇、 前列腺素等)，斑疹伤寒等。
理化性质：pI=4－5.8，肝细胞合成但不储存，半衰期为1519 天，占总蛋白的57%－68%，pＨ7.4时带负电。 测定方法：色素结合法:溴甲酚绿（BCG）， 溴甲酚紫（BCP）,盐析等。
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功能：营养作用，运输作用（高亲和力），维持血 浆渗透压和正常pＨ值。 临床意义：合成受食物影响，敏感性较低。 降低:在营养不良，肝功不全，急慢性肝疾病时; 增高:肾病综合征，少见,假性升高。 参考值：35-50 g/Ｌ
含量：人体固体成分的45%
种类：10万，3000~5000种/单细胞 功能：生长，代谢、血凝、运动、免 疫、信息传递等
疾病发生
体液蛋白质异常
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要判断异常
首先要清楚正常的血浆蛋白质组成，功能及分类及特点
一、血浆蛋白质的分类及功能
组成：
种类：1000种
500种
200种
含量：μg
mg
g
来源：肝脏是蛋白质主要的加工厂
参考值：０.25－2.0g/L 。
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（五）甲胎蛋白(AFP)
结构：590个aa残基构成的单链多肽， MW=6.5万～７万， 含4%的糖。
理化性质：pI 值４.7-４.8，在白蛋白和α1-球蛋白之间。胎 儿肝／卵黄囊合成，成人量微，升高由于肿瘤细胞合成。
测定方法： RIA、CLIA、 ELISA（常用）、 ECLIA（标本含量>400μg/L时 采用）等。
除免疫球蛋白、蛋白类激素。
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（一）血浆蛋白质的功能：
①营养作用，修补组织蛋白; ②维持血浆胶体渗透压：白蛋白维持75%～80%的血浆渗透压； ③作为PH缓冲系统的一部分：酸性或碱性蛋白质； ④运输作用：作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、药物等的载 体； ⑤体液免疫防御系统：抗体与补体等免疫分子； ⑥催化作用：酶的本质； ⑦代谢调控；作为底物、酶或中间产物抑制、激活组织蛋白酶； ⑧参与凝血与纤维蛋白溶解；除Ⅳ因子外均可。
3、了解其他蛋白质的来源和生理功能；尿液蛋白和脑脊液蛋白 的检测 。
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蛋白质概念：
蛋 白 质 (protein) 是 由 许多氨基酸(amino acids) 通过肽键(peptide bond) 相连形成的高分子含氮化合 物。
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第一节 概 述
机体主要的
机体蛋白质： 生物大分子 体液蛋白质的检测：
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（二）血浆蛋白质的分类： 依据来源、分离方法和生理功能
➢来源
肝生成：绝大多数血浆蛋白质 其他组织细胞生成：免疫球蛋白和蛋白类激素
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1.根据分离方法分类
盐析法：白蛋白和球蛋白（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液）
醋酸纤维素薄膜电泳：5种
分
电泳法： 琼脂糖凝胶电泳：13种
辨 率
聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种
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临床意义：
1.原发性肝癌患者诊断和鉴别（80%原发增高）
免疫扩散技术。
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功能：
营养指标（修补组织材料） 载体功能（甲状腺素／维生素Ａ）。
临床意义： 营养不良和肝功能不全的敏感性升高的指标； 降低：营养不良，肝功不全， 急性炎症，恶性肿瘤，
肝硬化及肾炎时。
参考值： 200—400mg/L 。
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（二）清蛋白（ALb） 急性时相反应蛋白
结构：585个aa残基构成单链多肽MW=66458，含17个二硫 键。
测定方法：免疫化学法（扩散,浊度）,化学法（间接法）， ELISA法等。
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功能：与免疫防御功能有关，机制不详；抑制血小板凝集 影响胶原纤维形成；参与脂类运输。
临床意义： 升高：急性炎症，组织损伤，风湿，肿瘤，AMI，溃疡性结 肠炎的最可靠指标； 降低：营养不良降低, 严重肝损伤、肾病综合征、消化道疾 病和雌激素作用。
增
SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：300种 高
-
纤维蛋白原
醋酸纤维素薄膜
+
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2.根据生理功能分类:
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二、血浆中几种重要的蛋白质 （一）前清蛋白（PA） 急性时相反应蛋白
结构： MW=54000，四个相同亚基构成的四聚体。 理化性质：pＩ＝4.7，肝细胞合成，半寿期12 小时。 测定方法：免疫比浊法
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功能：胎儿血浆主要蛋白质，调节肝细胞生长和脑细胞发 育；抑制细胞和体液的免疫反应；维持正常妊娠，防止母婴 排斥。
参考值：20-100μg/L(成人) < 5g/L(新生儿) 放射免疫电泳AFP正常值：≤25μg/L 放射免疫分析AFP正常值：≤20μg/L 酶联免疫法AFP正常值：≤25μg/L 最常用的定量试验为放射免疫法（正常值为0～25ug/L）， 若超过25ug/L为阳性，若再25～400 ug/L之间为低浓度阳 性，超过400ug/L即为高浓度阳性。
降低：α1-AT缺乏症、新生儿呼吸窘迫综合征、重症肝炎、 肾病综合征、蛋白丧失性胃肠症、营养不良、未成熟儿、肾 移植早期排斥反应等。
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（四）α1-酸性糖蛋白（AAG/α1-AG） 急性时相反应蛋白
结构：181个aa残基构成的单链多肽， MW=4万，含45% 的糖，其中唾液酸占11%－12%。
理化性质：pI 值2.7－3.5，肝合成，脓毒症时粒细胞和单核 细胞及某些肿瘤组织也可合成。 位于α1-球蛋白区带。
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（三）α1-抗胰蛋白酶（α1-AT/AAT） 具有蛋白酶抑制的急性时相反应蛋白
结构：394个aa残基构成的单链多肽，含10％～12% 的糖 MW=5.1 万。
理化性质：pI值为4.8，占α1-球蛋白区带显色的90％。 测定方法：免疫化学法（常用），电泳（酸性凝胶电泳或 等电聚焦电泳），利用蛋白酶抑制能力测定等。