药品无菌检查
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查。若检验程序或产品发生变化可能影 响检验结果时，应重新进行方法适用性 试验。 菌种：金葡、大肠、枯草、生孢、白念、 黑曲 方法：1、薄膜过滤
2、直接接种
药品无菌检查法
薄膜过滤法 试验组：取每种培养基规定接种的供试
品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最 后一次冲洗液中加入小于100cfu的试验菌 ，过滤。将培养基加至滤筒内。 对照组：另取一装有同体积培养基的容 器，加入等量试验菌，培养时间不得超 过5天。
药品无菌检查法
药品无菌检查法
培养基适用性检查
无菌性—每批次培养基取不少于5瓶（支），培养14天， 应无菌生长。
灵敏度 6种菌（<100cfu）
金、铜绿、生孢---------流乙醇酸盐流体
支，
7支，12ml/支，每种菌接种2支，阴性一
枯草、白念、黑曲----------胰酪大豆胨液体 7支，每种菌接 种2支，9ml/ 支，一支阴性
只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤
抗生素样品选用低吸附的滤膜
水溶性供试品过滤前先将少量冲洗液过滤 以润湿滤膜
油类供试品的滤膜和滤器在使用前应充分 干燥
冲洗量一次一般为100ml，总冲洗量不得超 过1000ml，以免膜上的微生物受损。总冲 洗量特别大时应尽量减小流速。
药品无菌检查法
药品无菌检查法
特点
无菌检验结论为一次性，药典规定为不得复 试，为什么不得复试，菌落的分布具有不均 匀性，检验过程是破坏性的，不具有重复性 。---------------对操作过程的要求非常高。
过程的控制----------1、环境控制；2、操作影 响，人员、物流是否引入外源性污染？
过程控 制
药品无菌检查法
直接接种法
取流乙醇酸盐流体培养基（不少于15ml）6管，分别加 入金葡、大肠、生孢各2管，其中一管接入供试品， 另一管作为对照，TSB（不少于10ml）6管，分别加 入枯草、白念、黑曲各2管，其中一管加入供试品， 另一管作为对照，培养时间不得超过5天。
结果判断：
与对照管比较，试验组的试验菌生长良好，则说明供 试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或抑菌 作用可以忽略不计； 如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢 或不生长----供试品的该检验量在该检验条件下有抑 菌作用-----增加冲洗量、培养基用量、中和剂或灭 活剂、更换滤膜品种，重新进行方法适用性试验。
环境保 证
培养基保 证
SOP操 作
有效的 方法
无菌性 检查
灵敏度 检查
方法学 验证
有效的 结果
可靠的 结论
结果判 断
药品无菌检查法
培养基
配制后采用验证合格的灭菌程序灭菌。
什么是验证合格的？
保存条件：2-25℃、避光，非密闭容器在3周内使用 ，密闭容器一般在1年内使用。
流乙醇酸盐流体：供试品接种前，培养基氧化层不 超过深度的1/5，否则100℃水浴加热至粉红色消 失（不超过20分钟），只能加热一次，培养结束 后氧化层不超过1/2
水溶性的液体-----直接过滤或混合至含不少于100ml适宜稀释液的无菌 容器中，混匀，立即过滤，如供试品有抑菌作用，须冲洗一般不少于 三次。
水溶性的固体----溶取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签复溶。 非水溶性供试品-----直接过滤，或乳化后（加吐温80等）立即过滤，
用含0.1-1%吐温80的冲洗液冲洗，培养基中可加入吐温80 可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和黏性油性供试品-----溶解于适量无菌
药品无菌检查法
无菌制剂比非无菌制剂存在更高的风险 一系列的药品不良事件 2006年的“欣弗事件”---安徽华源生产的“克林霉
素磷酸酯葡萄糖注射液”引起了11人死亡，93人感 染，企业倒闭，总经理自杀。未按批准的工艺参数 灭菌，降低灭菌温度、缩短灭菌时间，增加灭菌柜 装载量，影响了灭菌效果，经中检所检验，发现无 菌不合格。 2012年10月，美国新英格兰合成制药中心生产的注 射用类固醇霉菌污染，造成数百人感染真菌脑炎， 至年底统计死亡39人。 这些事故促使无菌制剂GMP监管的进步，同时也对 无菌检验提出更高更严的要求。
十四烷酸异丙酯中，过滤，加热仍然没法过滤的，萃取，静置，取水 层过滤
无菌气雾剂---ห้องสมุดไป่ตู้在-20℃冷冻1小时，取出在容器上钻一小孔释放抛射剂 后再无菌开启容器，转移至无菌容器中。
装有药物的注射器供试品——注意应采用适宜的方法进行包装中所配 带的无菌针头的无菌检查
带有导管的医疗器具（输血、输液袋等）---每个最小包装用50-100ml 冲洗液分别冲洗内壁，过滤冲洗液。同时注意应采用直接接种法对配 带的无菌针头做无菌检查
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的 药品、生物制品、医疗器具、原料、辅 料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明 了供试品在该检验条件下未发现微生物 污染。也并不表示所有的产品都是无菌 的。
反之，当供试品中检出微生物污染，则 可以认为批产品的微生物污染风险相当
药品无菌检查法
供试品的无菌检查
检验数量：一次试验所用供试品最小包装容器的数量 出厂产品按表1，上市产品监督检验按表2 最少检验数量不包括阳性对照用的。
检验量：按表3，采用薄膜过滤法时，只要供试品特性允 许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
药品无菌检查法
1、薄膜过滤法
封闭式薄膜过滤器
药品无菌检查及相关知识
吉林省药品检验所微生物室
主要内容
1、药品无菌检查法基础 2、2015年版药典无菌检查法的变动 3、洁净实验室微生物的监测和控制 4、菌种的管理 5、二级生物安全实验室
药品无菌检查法
定义及特点 培养基、冲洗液 方法学验证 供试品的无菌检查 无菌检查的要点
药品无菌检查法
流乙醇酸盐流体培养3天，胰酪大豆胨液体 5天， 空白对 照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判断该 培养基的灵敏度符合规定
药品无菌检查法
冲洗液 0.1%蛋白胨水溶液 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 可选用其他经验证过的适宜的溶液
药品无菌检查法
方法适用性试验 证明所采用的方法适合于该产品的无菌检
2、直接接种
药品无菌检查法
薄膜过滤法 试验组：取每种培养基规定接种的供试
品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最 后一次冲洗液中加入小于100cfu的试验菌 ，过滤。将培养基加至滤筒内。 对照组：另取一装有同体积培养基的容 器，加入等量试验菌，培养时间不得超 过5天。
药品无菌检查法
药品无菌检查法
培养基适用性检查
无菌性—每批次培养基取不少于5瓶（支），培养14天， 应无菌生长。
灵敏度 6种菌（<100cfu）
金、铜绿、生孢---------流乙醇酸盐流体
支，
7支，12ml/支，每种菌接种2支，阴性一
枯草、白念、黑曲----------胰酪大豆胨液体 7支，每种菌接 种2支，9ml/ 支，一支阴性
只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤
抗生素样品选用低吸附的滤膜
水溶性供试品过滤前先将少量冲洗液过滤 以润湿滤膜
油类供试品的滤膜和滤器在使用前应充分 干燥
冲洗量一次一般为100ml，总冲洗量不得超 过1000ml，以免膜上的微生物受损。总冲 洗量特别大时应尽量减小流速。
药品无菌检查法
药品无菌检查法
特点
无菌检验结论为一次性，药典规定为不得复 试，为什么不得复试，菌落的分布具有不均 匀性，检验过程是破坏性的，不具有重复性 。---------------对操作过程的要求非常高。
过程的控制----------1、环境控制；2、操作影 响，人员、物流是否引入外源性污染？
过程控 制
药品无菌检查法
直接接种法
取流乙醇酸盐流体培养基（不少于15ml）6管，分别加 入金葡、大肠、生孢各2管，其中一管接入供试品， 另一管作为对照，TSB（不少于10ml）6管，分别加 入枯草、白念、黑曲各2管，其中一管加入供试品， 另一管作为对照，培养时间不得超过5天。
结果判断：
与对照管比较，试验组的试验菌生长良好，则说明供 试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或抑菌 作用可以忽略不计； 如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢 或不生长----供试品的该检验量在该检验条件下有抑 菌作用-----增加冲洗量、培养基用量、中和剂或灭 活剂、更换滤膜品种，重新进行方法适用性试验。
环境保 证
培养基保 证
SOP操 作
有效的 方法
无菌性 检查
灵敏度 检查
方法学 验证
有效的 结果
可靠的 结论
结果判 断
药品无菌检查法
培养基
配制后采用验证合格的灭菌程序灭菌。
什么是验证合格的？
保存条件：2-25℃、避光，非密闭容器在3周内使用 ，密闭容器一般在1年内使用。
流乙醇酸盐流体：供试品接种前，培养基氧化层不 超过深度的1/5，否则100℃水浴加热至粉红色消 失（不超过20分钟），只能加热一次，培养结束 后氧化层不超过1/2
水溶性的液体-----直接过滤或混合至含不少于100ml适宜稀释液的无菌 容器中，混匀，立即过滤，如供试品有抑菌作用，须冲洗一般不少于 三次。
水溶性的固体----溶取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签复溶。 非水溶性供试品-----直接过滤，或乳化后（加吐温80等）立即过滤，
用含0.1-1%吐温80的冲洗液冲洗，培养基中可加入吐温80 可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和黏性油性供试品-----溶解于适量无菌
药品无菌检查法
无菌制剂比非无菌制剂存在更高的风险 一系列的药品不良事件 2006年的“欣弗事件”---安徽华源生产的“克林霉
素磷酸酯葡萄糖注射液”引起了11人死亡，93人感 染，企业倒闭，总经理自杀。未按批准的工艺参数 灭菌，降低灭菌温度、缩短灭菌时间，增加灭菌柜 装载量，影响了灭菌效果，经中检所检验，发现无 菌不合格。 2012年10月，美国新英格兰合成制药中心生产的注 射用类固醇霉菌污染，造成数百人感染真菌脑炎， 至年底统计死亡39人。 这些事故促使无菌制剂GMP监管的进步，同时也对 无菌检验提出更高更严的要求。
十四烷酸异丙酯中，过滤，加热仍然没法过滤的，萃取，静置，取水 层过滤
无菌气雾剂---ห้องสมุดไป่ตู้在-20℃冷冻1小时，取出在容器上钻一小孔释放抛射剂 后再无菌开启容器，转移至无菌容器中。
装有药物的注射器供试品——注意应采用适宜的方法进行包装中所配 带的无菌针头的无菌检查
带有导管的医疗器具（输血、输液袋等）---每个最小包装用50-100ml 冲洗液分别冲洗内壁，过滤冲洗液。同时注意应采用直接接种法对配 带的无菌针头做无菌检查
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的 药品、生物制品、医疗器具、原料、辅 料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明 了供试品在该检验条件下未发现微生物 污染。也并不表示所有的产品都是无菌 的。
反之，当供试品中检出微生物污染，则 可以认为批产品的微生物污染风险相当
药品无菌检查法
供试品的无菌检查
检验数量：一次试验所用供试品最小包装容器的数量 出厂产品按表1，上市产品监督检验按表2 最少检验数量不包括阳性对照用的。
检验量：按表3，采用薄膜过滤法时，只要供试品特性允 许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
药品无菌检查法
1、薄膜过滤法
封闭式薄膜过滤器
药品无菌检查及相关知识
吉林省药品检验所微生物室
主要内容
1、药品无菌检查法基础 2、2015年版药典无菌检查法的变动 3、洁净实验室微生物的监测和控制 4、菌种的管理 5、二级生物安全实验室
药品无菌检查法
定义及特点 培养基、冲洗液 方法学验证 供试品的无菌检查 无菌检查的要点
药品无菌检查法
流乙醇酸盐流体培养3天，胰酪大豆胨液体 5天， 空白对 照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判断该 培养基的灵敏度符合规定
药品无菌检查法
冲洗液 0.1%蛋白胨水溶液 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 可选用其他经验证过的适宜的溶液
药品无菌检查法
方法适用性试验 证明所采用的方法适合于该产品的无菌检