细胞培养过程中谷氨酰胺检测方法汇总

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动物细胞培养工艺过程的监测与控制

动物细胞培养工艺过程的监测与控制

动物细胞培养工艺过程的监测与控制在细胞培养的过程中,随着细胞的增殖、底物的消耗及产物的生成,整个培养系统的状态一直在产生变化。

而各种状态变量都有其限制范围,当超出其界限值时就会对培养过程产生消极的影响,降低培养效率。

例如培养基的PH值在培养全过程都应控制在6.8-7.4的范围内。

因此在动物细胞的培养工艺中,利用过程监测与控制技术使培养系统保持在最佳的状态也是整个工艺中重要的一环。

过程监测是指应用各种检测技术对培养过程中状态变量的变化进行追踪的行为。

当这些变量与预测值或与预期变化方式相偏离时,通过过程监测的手段便可以及早发现并开始利用已设定的模型计算如何改变培养状态以及时补偿这种偏离。

而过程控制则利用过程监测所提供的信息按照暨定方案进行调整,以使培养过程向更好的方向发展。

由于生物培养过程中许多关键变量的值不能够直接在线测得,因此过程监测的基本任务之一就是利用直接测得的变量值去估算间接变量的值,而这也就是状态估计的概念。

1、在线测量大规模动物细胞培养中由于大量细胞的代谢,细胞培养环境迅速改变,在线过程监控更为重要。

离线取样测定特别是产物浓度测定往往需要一天的时间,因此这种测定结果,不能用来及时指导生物反应器有关参数的控制和细胞培养环境的优化,而且频繁取样容易造成污染,增加费用。

因此在线测定生物反应器中培养条件、代谢产物和目的产物浓度等大量数据,并对测定结果进行分析处理,及时对培养系统进行反馈控制是成功进行大规模动物细胞培养的需要[[i]]。

在培养过程中对于过程监测与控制具有重要意义同时又可在线测量的参数主要包括:温度、PH值、pO2、搅拌速率、补料速率、罐压以及排出气体中O2和CO2的分压,等等。

因此,在工业上应用生物反应器进行动物细胞培养时,这些参数都是被在线测量的对象。

温度与PH值这两个参数对于细胞而言是最基本的影响因素,而在控制时往往与其它参数相独立。

温度的测量通常在生物反应器内部的单一位置,采用热敏电阻检测器(如Pt100热电阻)进行。

细胞培养基和发酵液中氨基酸的检测

细胞培养基和发酵液中氨基酸的检测

细胞培养基和发酵液中氨基酸的检测摘要:本文建立了一种采用离子色谱法,积分脉冲安培检测器测定细胞培养基和发酵液中的氨基酸的方法。

选择的色谱条件为:采用AminoPac PA10分析柱和AminoPac PA10保护柱,水、醋酸钠和氢氧化钠缓冲溶液梯度淋洗,积分脉冲安培检测。

该方法检测限(S/N=3)为0.8-4.0 μg/g,氨基酸在100mM(1.0nmol)以内都有线性,RSD0.15–0.69%,可用于具体样品的检测。

关键词:离子色谱;氨基酸;AminoPac PA10大多数氨基酸具有弱发光基团,需在高浓度时才可用紫外吸收检测。

发酵液或细胞培养基中的许多成分也具有发色团,用吸收法检测时它们的吸收会干扰氨基酸的直接检测。

氨基酸、糖类、乙二醇、乙醇、胺、含硫化合物都能够发生氧化反应,因此,可以用安培法直接检测这类物质。

安培检测法对在特定电压下发生氧化反应的分析物具有专一性,同时在此电压下,其它所有化合物都不能被检测。

积分脉冲安培法检测(IPAD)是一种强大的检测技术,它有很宽的线性范围和很低的检测限。

AAA-Direct.将阴离子交换(AE)和IPAD两种方法结合起来。

AminoPac PA10是一种高效阴离子交换柱,用它可以分离所有常见氨基酸。

对同时含有糖和氨基酸的成分复杂的样品,如细胞培养基和发酵液,利用AAA-Direct可以同时检测其中的糖、乙二醇、糖醇(醛醇)和氨基酸,而基本不受其他成分的干扰。

虽然基于柱前和柱后衍生的氨基酸分析方法在评价样品中氨基酸的含量方面有广泛应用,但是这些方法运行费用高,且不能同时分析糖和氨基酸。

AAA-Direct仅使用一种色谱方法,样品直接进样,就可实现细胞培养基和发酵液中所有常见氨基酸的同时检测。

酵母和细菌发酵液样品中同时存在糖、糖醇、乙醇、乙二醇成分的情况下,应用AAA-Direct分析其中的常见氨基酸。

酵母提取物-蛋白胨-葡萄糖培养液(YPD)和LB 培养液是培养真核和原核细胞的常用培养基,无血清无蛋白杂交瘤细胞培养基、MEM和胎牛血清常用于培养哺乳动物细胞或作为培养基的添加成分。

高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量

高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量

高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量摘要:建立高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的方法。

色谱柱为氨基柱,流动相为:0.05 mol/L的磷酸二氢钾(取磷酸二氢钾6.8 g,加水至1000 ml,用磷酸调节pH值为4.0)∶乙腈=70∶30,检测波长为215 nm,结果表明该方法在所试验的浓度范围内具有良好的线性关系,r为0.999,精密度RSD等于0.37%,平均回收率为98.3%。

关键词:谷氨酰胺高效液相色谱法测定谷氨酰胺(Glutamin)亦被称作麸酰胺酸,为人体中含量最丰富的非必需氨基酸。

临床上主要用于改善胃溃疡和十二指肠溃疡的症状。

常见的分析方法有毛细管电泳法[1]。

本文建立了通过高效液相色谱法测定谷氨酰胺的方法,实验证明该方法操作简便、专一性及灵敏度高,结果准确可靠。

1 材料与方法1.1 仪器HLPC色谱仪型号:LC-20A,色谱仪编号:L20134506488AE,分析天平型号:AE100 分析天平编号:LS012,超声波型号:AS3120A,检测波长:λ=215 nm。

1.2 色谱条件检测器型号:SPD-20A,检测器灵敏度:2.0AUFS柱温:35 ℃,进样体积:20 ul流速:1.0 ml/min,流动相:0.05 moL/L的磷酸二氢钾(取磷酸二氢钾6.8 g,加水至1000 ml,用磷酸调节PH值为4.0)∶乙腈=70∶30,色谱柱:NH¢4.6×250 mm,色谱柱号:312316。

1.3 材料与试剂乙腈(色谱纯,康科德公司),磷酸二氢钾(AR级),磷酸(AR级),谷氨酰胺对照品(山东宝齡生物技术有限公司),高纯水。

1.4 样品制备标准溶液的制备:精密称取谷氨酰胺标准品250 mg于50 ml容量瓶中,用纯化水稀释并定容至刻度,摇匀,再精密吸取2 ml于10 ml容量瓶中,用流动相稀释定容至刻度,摇匀,备用。

其浓度为1 mg/ml。

样品溶液的制备:称取本品约250 mg,精密称定于50 ml容量瓶中,用纯化水稀释并定容至刻度,摇匀,再精密吸取2 ml于10 ml容量瓶中,用流动相稀释定容至刻度,摇匀,备用。

细胞培养过程中的注意事项及试剂配制

细胞培养过程中的注意事项及试剂配制

细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备:单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品规(放置消毒过的物品)、包装台。

配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。

培养室的设备:液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。

必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO孵箱(孵育培养物)、2水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。

二.无菌操作无菌室的灭菌:1.定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。

2.CO孵箱(培养箱)灭菌:先用3‰新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者20.5%过氧乙酸,再用紫外灯照射3.实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌:用75%酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。

实验人员的无菌准备:1.肥皂洗手。

2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75%酒精棉球擦净双手。

无菌操作的演示:1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。

3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。

5.各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。

如吸管不能碰到废液缸。

6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。

三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消:(1)新的玻璃器皿的洗消:1.自来水刷洗,除去灰尘。

2.烘干、泡盐酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。

3.刷洗、烘干:12小时后立即用自来水冲洗,再用洗涤剂刷洗,自来水冲干净后用烤箱烘干。

细胞培养过程中谷氨酰胺检测方法汇总

细胞培养过程中谷氨酰胺检测方法汇总

细胞培养过程中谷氨酰胺检测方法汇总谷氨酰胺是一种基本的氨基酸,为其它氨基酸、脂类、细胞内蛋白质、抗体和核酸的合成提供碳源和氮源。

谷氨酰胺还可刺激抗体的转录后翻译过程。

在许多细胞的培养过程中,均发现了细胞生长对谷氨酰胺有依赖性,如在杂交瘤细胞培养过程中,谷氨酰胺浓度为零时,细胞快速死亡。

有一些细胞经过适应后,能在不含谷氨酰胺的培养基中生长,但细胞株之间的适应速率存在较大的差异。

细胞生长是否依赖于谷氨酰胺的关键在于细胞是否含有内源的谷氨酰胺合成酶,即是否具有将谷氨酸转化生成谷氨酰胺的能力;另外,谷氨酸的运输速率及谷氨酰胺的生成速率限制是导致细胞在无谷氨酰胺培养基中生长速率减慢的主要原因。

因此细胞培养中检测谷氨酰胺浓度具有重大价值,本文就目前常见的谷氨酰胺的检测方法做一个全面的汇总。

一、滴定法1.原理谷氨酰胺分子结构中既有羧基,又有胺基,但其酸碱性都较弱,故只有在非水溶剂中才能滴定其羧基或胺基。

为此,以乙酸(冰醋酸)为溶剂,用高氯酸滴定其胺基。

2电位滴定法称取预先在105℃干燥至恒重的样品0.15g ,精确至0.0001g ,置于干燥的烧杯中,加无水甲酸3mL 溶解后,再加入50mL 冰乙酸,用高氯酸标准溶液滴定,用电位滴定仪滴定至终点,滴定的结果用空白试验校正。

3.指示剂法取本品干燥品约0.15g ,精确至0.0001g ,加无水甲酸3mL 溶解后,加乙酸(冰醋酸)50mL ,加结晶紫指示液1滴,以高氯酸标准滴定溶液(0.1mol/L)缓缓滴定至显蓝色即为终点,记录滴定液消耗体积。

同法做空白试验,记录。

计算X%=()100100014.1460⨯⨯⨯-⨯m V V C 式中:X ——L-谷氨酰胺含量,%;C ——高氯酸标准滴定溶液浓度(mol/L);V ——滴定样品时消耗高氯酸标准滴定液体积数(mL);V 0——空白试验时消耗高氯酸标准滴定液体积数(mL);m ——样品质量(g);146.14——L-谷氨酰胺的摩尔质量(g/mol )。

细胞培养实验集合

细胞培养实验集合

实验一培养基的配制及细胞培养的条件一、培养基的特性-细胞生存的环境与条件1、温度条件(37 +0.5)2、pH条件(7.2-7.4)3、气体条件4、水的质量(三蒸)5、渗透压6、营养条件7、无菌条件℃二、培养基的分类1、平衡盐液2、天然培养基(小牛血清、胚胎液)3、合成培养基(化学成分清楚)三、RPMI1640培养基的配制1、RPMI1640 10 g2、丙酮酸钠 .0.11 g3、Hepes(羟乙基哌碃乙硫磺酸) 5.925 g4、NaHCO3 2 g5、三蒸水 1000 mL四、过滤出菌电磁搅仪器:不锈钢正压滤器材料:纤维素微孔虑膜(0.22 mm 孔径)装好后消毒五、完全培养基的配制RPMI 1640 培养液 85 mL小牛血清 10 mL谷氨酰氨 1 mL抗菌素(青、链霉素) 1万单位 1 mL实验二动物细胞培养细胞培养是指从生物体内取出组织或细胞,在体外模拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下,使之生存、生长和繁殖,并维持其结构和功能的方法。

由于体外培养的细胞其结构和功能接近体内情况,便于使用各种技术和方法进行研究,并能在较长时间内直接观察细胞生长、发育、分化过程中的形态和功能变化,而且可同时提供大量生物学性状相似的细胞作为研究对象。

所以细胞培养已经成为现代医学研究中一项非常重要的技术。

细胞培养不但是一门技术,也是一门科学,有它的基本理论、基本知识、和基本方法。

一、实验目的1. 使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识,了解动物细胞培养的基本操作过程;2. 学习动物细胞原代培养和传代培养的基本方法,掌握动物细胞培养中的无菌操作技术,以及培养细胞的形态分类特点;3. 以所培养细胞为材料,了解细胞冻存的几种简易方法并通过实验掌握其中的一种方法;4. 以所培养细胞为材料,学习动物细胞融合的几种方法并掌握其中的一种方法。

二、实验条件本实验在细胞工程实验室完成。

1、需要提供CO2培养箱,细胞融合仪,冷冻仪,研究用成像显微镜,体视成像显微镜,普通显微镜,生化培养箱,全自动高压灭菌锅,水浴锅,超声波清洗仪,超净工作台,真空泵,冷冻离心机,干燥箱,剪刀,镊子,液氮罐,纯水器,低温冰箱,普通冰箱等。

细胞谷氨酰胺酶1活性光度法定量检测试剂盒产品说明书(中

细胞谷氨酰胺酶1活性光度法定量检测试剂盒产品说明书(中

细胞谷氨酰胺酶1活性光度法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细胞谷氨酰胺酶1(glutaminase-1)活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过谷氨酰胺酶1和谷氨酸脱氢酶的酶偶联反应系统中,在谷氨酰胺酶1敏感性抑制剂存在与否的情况下,氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)还原后吸光峰值的增高,即采用光度法来测定细胞裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种人体细胞裂解悬液样品谷氨酰胺酶1的活性检测。

产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。

技术背景谷氨酰胺酶(glutaminase;EC3.5.1.2)是一种氨基酸水解酶(amidohydrolase),将谷氨酰胺脱氨基(deaminating)转化为谷氨酸。

其人体同工酶有2个,肾型(又称称I型;GLS1或KGA)和肝型(又称II型或LGA)。

其功能在肝细胞中产生的氨,用于合成尿素;在肾小管上皮细胞中产生的氨通过氨离子分泌,调节肾的酸碱平衡;同时在脑组织、肠道组织、脾脏组织中也有表达。

谷氨酰胺酶又分磷酸依赖型和磷酸非依赖型。

基于底物谷氨酰胺在谷氨酰胺酶1选择性抑制剂BPTES存在的情况下,受到谷氨酰胺酶1的作用,转化为谷氨酸和氨气,进而在谷氨酸脱氢酶的催化下,伴随着氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidized nicotinamide adenine dinucleotide;NAD+)转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH),产生的吸光峰值的变化(340nm 波长),来定量分析谷氨酰胺酶1的活性。

其酶偶联反应系统为:产品内容清理液(Reagent A)毫升裂解液(Reagent B)毫升反应液(Reagent C)毫升终止液(Reagent D)微升缓冲液(Reagent E)毫升酶促液(Reagent F)微升底物液(Reagent G)毫升专性液(Reagent H)微升产品说明书1份保存方式保存裂解液(Reagent B)、缓冲液(Reagent E)、酶促液(Reagent F)和底物液(Reagent G)和专性液(Reagent H)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;底物液(Reagent G)避免光照;终止液(Reagent D)具有腐蚀性,注意操作安全;有效保证6月用户自备1.5毫升离心管:用于样品制备和保存的容器15毫升锥形离心管:用于样品制备的容器细胞刮脱棒:用于细胞脱离(微型)台式离心机:用于样品操作培养箱:用于反应孵育比色皿或96孔板:用于光度分析的容器分光光度仪或酶标仪:用于光度分析实验步骤实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的裂解液(Reagent B)置入冰槽里融化。

细胞培养详细过程及注意事项

细胞培养详细过程及注意事项

细胞培养详细过程及注意事项细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下,使其生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术。

细胞培养的培养物可以是单个细胞,也可以是细胞群。

细胞培养目的与用途1、科学研究:药物研究开发与基础研究药物研究与开发(1) 新药筛选:如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。

(2) 疫苗研究与开发:如病毒性疫苗的研究与开发(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。

(3) 基因工程药物研究与开发:如干扰素研究与开发,细胞生长因子研究与开发等。

(4) 细胞工程药物研究与开发:生物活性多肽研究与开发,人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。

(5) 单克隆抗体制备:包括诊断用单克隆抗体,治疗用单克隆抗体。

基础研究(1) 药物作用机理(2) 基因功能(3) 疾病发生机理2、生物制药(1) 疫苗生产:如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等)、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。

(2) 基因工程药物生产:如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素、粒细胞生长因子、胸腺肽等(3) 诊断用和药用单克隆抗体生产(4) 细胞工程药物生产:生物细胞内的一些生物活性多肽,生物活性物质等细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。

2、优质血清目前,大多数合成培养基都需要添加血清。

血清是细胞培养液中最重要的成分之一,含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。

3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。

在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物质污染,或者自身代谢物质积累,可导致细胞中毒死亡。

因此,在体外培养细胞时,必须保持细胞生存环境无菌无毒,及时清除细胞代谢产物。

高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量

高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量

谷氨酰胺(Glutamine)是一种重要的氨基酸,它在生物体内有着广泛的生理功能。

作为一种重要的指标化合物,准确测定谷氨酰胺的含量对于生物医药领域具有重要意义。

在分析谷氨酰胺含量时,高效液相色谱法(HPLC)成为一种被广泛采用的方法,其结果准确可靠,操作简便,具有很高的敏感性和选择性。

本文将以深度和广度的方式探讨高效液相色谱法在测定谷氨酰胺含量中的应用。

一、什么是高效液相色谱法?高效液相色谱法是一种分离杂质的有效方法。

它利用液相不同成分对于固定相的相对亲和性不同,实现对混合物中各成分的分离。

高效液相色谱法在分析化学领域得到广泛应用,通过对不同成分在固定相上的吸附、分配、解吸和离子交换等过程进行控制,使得各成分被分离出来,并可以通过检测器进行检测。

二、高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的原理在测定谷氨酰胺含量时,一般采用离子对色谱法或手性色谱法。

离子对色谱法是指根据样品中阳离子、阴离子与离子对试剂形成离子对而产生的保留作用,用以分离成分的色谱方法。

而手性色谱法是利用手性色谱柱对立体异构体进行分离的方法。

通过高效液相色谱法,可以准确地测定谷氨酰胺的含量,并且对杂质的干扰具有很高的抵抗能力,确保分析结果的准确性。

三、高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的步骤1. 样品的制备:将待测样品按照规定的方法进行制备,保证样品的质量和含量。

2. 色谱条件的选择:选择适当的色谱柱、流动相和检测条件,确保样品的分离和检测。

3. 样品的进样和分离:将制备好的样品进样至色谱仪中,进行分离。

4. 谷氨酰胺含量的计算:根据峰面积和标准曲线,计算出样品中谷氨酰胺的含量。

四、高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的优势1. 准确可靠:高效液相色谱法在测定谷氨酰胺含量方面具有高准确性和可靠性,能够满足实际分析的需求。

2. 操作简便:相比其他分析方法,高效液相色谱法操作简便,不需要复杂的操作步骤和设备。

3. 敏感性和选择性高:高效液相色谱法可以在较低的浓度下进行分析,对于谷氨酰胺含量的测定具有很高的敏感性和选择性。

细胞培养的常见问题

细胞培养的常见问题
氨,对细胞亦有毒害作用
关于液体培养基保存温度
●液体培养基可以放-20℃保持吗?
答:不可以!因为在-20℃下,培养基中的盐容易析出, 培养基融化后,有的盐可能无法重新溶解,从而导致 培养基渗透压降低,培养细胞时,细胞容易破裂而死 亡。
●我自己新配制的液体培养基可以存放多久?
答:我们建议将新配制的培养基放置于4℃,避光保存 尽量在一周内使用完毕。培养基越新鲜越好。
经典培养基介绍
● BME(Basal Medium Eagle) 由Eagle发明,只有11种氨基酸和盐及一些维生素的最简单培养 基。最先用于培养小鼠的L细胞和人类的HeLa细胞,现在广泛应用 于各种细胞的培养。
● EMEM or MEM(Eagle’s Minimum Essential Medium) BME的升级版,氨基酸浓度是BME的两倍,适用于更多的细胞。
●培养用液渗透压是怎样影响细胞生长的?
答:当细胞内、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压。这种情 况下,水分通过渗透流入或流出细胞,从而改变细胞的内环 境。高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩,这种 情况会使DNA和蛋白遭到破坏,细胞周期停滞以及最终使细胞 死亡;反之,低渗透压使水分流入细胞内,使细胞肿胀破裂。
● RPMI 1640(Roswell Park Memorial Institute #1640) McCoy’s 5A的改进版,含有高浓度的肌醇。广泛用于悬浮细胞的培 养。如人类白细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞等血液来源的细胞。
● Ham’s F10(Ham’s Nutrient Mixture F10) 由Ham发明,用于人类2倍体细胞和仓鼠细胞的培养。
◆不含血清,蛋白,水解物,酯类等 ◆无血清/无蛋白培养基也可能不含

293细胞培养

293细胞培养

293细胞培养1.培养基DMEM ++丙酮酸钠++10%血清++青链霉素2.复苏:(1)37度融化后,擦干冻存管酒精擦,细胞加入15ml离心管,加5ml培养基,500g离心5min,弃上清,加1ml培养基重悬后加入到培养瓶中,5~6ml左右,记得晃匀。

3. 传代吸出旧培基,加5mlPBS洗1-2遍,用移液管加1ml胰酶,滚2遍吸出,37度放1min左右计时,看到变圆即加入新培基吹打,几下就好了,分到新瓶里。

我个人认为:293细胞贴壁后形成圆形,可能是细胞本身状态不是很好,细胞不够饱满,细胞的贴壁后的棱角不易显露出来,所以看上去类似圆形,而且细胞较小。

293细胞是用5型腺病毒75株系转化,含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系,是一种E1区缺陷互补细胞系。

它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与ey 于1976年用DNA转染技术构建而成。

293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞,表现出典型的腺病毒转化细胞的表型,细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。

哺乳细胞的大规模培养方式有三种:贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。

这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。

293细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长,也可生长在血清浓度降低的培养基中。

单层培养细胞在5-10%FBS-DMEM中能生长很好。

一般来讲,1:10传代后,一周可以长满。

严禁过度生长,这点很重要。

因为会导致细胞密度加大和堆积,影响病毒斑的形成和转染,传代时也不易打散。

悬浮的293细胞很容易大规模培养,但不容易长期保持稳定。

293细胞在传代120次以后,其表型可能改变,生长状况不再完全是单层的了,偶尔会形成局部的细胞成团聚集,应立即抛弃,重新引入新传代的细胞。

293细胞培养特性:1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9~7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。

一般用高糖的DMEM培养基。

2、传代:倒去废液,PBS洗一次(轻),用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化,生长良好细胞,培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s,然后吸去,再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化,反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。

细胞培养的操作步骤

细胞培养的操作步骤

细胞培养得操作步骤一、原代培养及其操作步骤原代分离细胞培养就是指从供体内取出组织后,经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群,使之在体外模拟人体生理环境,在无菌、适当温度与一定得营养条件下,生存、生长与繁殖。

原代培养细胞常有不同得细胞成分,生长缓慢,但就是更能代表所来源得组织细胞类型与表达组织得特异性特征。

利用原代细胞培养做各种实验,如药物测试、细胞分化及病毒学方面得试验效果很好。

其操作步骤如下。

1、剪切组织先将所取得得组织,用D-Hanks或Hanks液清洗,以去除表面血污,并用手术镊去除黏附得结缔组织等非培养所需组织。

再次清洗后,用手术刀将组织切成若干小块,移入青霉素小瓶或小烧杯中,加入适量缓冲液,用弯头眼科剪,反复剪切组织,直到组织成糊状,约1mm3大小。

静置片刻后,用吸管吸去上层液体,加入适当得缓冲液再清洗一次。

2、消化分离消化分离得目得就是将细小得组织块消化分离成细胞团或分散得单个细胞,以利于进一步得培养,常用得消化酶有胰蛋白酶与胶原酶。

3、培养细胞悬液用计数板进行细胞计数。

用培养液将细胞数调整为(2~5)×105 cells/ml,或实验所需密度,分装于培养瓶中,使细胞悬液得量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。

置CO2培养箱内,5%CO2,37℃静置培养。

一般3~5d,原代培养细胞可以黏附于瓶壁,并伸展开始生长,可补加原培养液量1/2得新培养液,继续培养2~3d后换液,一般7~14d可以长满瓶壁,进行传代。

4、注意事项(1)无菌操作:细菌或霉菌污染就是培养失败得常见原因,必须加强各个环节得无菌操作观念,以预防为主,一旦污染,一般很难消除。

(2)培养液:所用得培养液必须满足细胞生存与生长得必要条件。

由于细胞来源得动物种类、组织类型不同,对培养液得要求有一定得差异,必要时可用预实验得方法选择适当得培养液。

(3)小牛血清:小牛血清对于维持培养细胞得生存与促进细胞增殖起着关键性作用。

细胞培养过程中的注意事项及试剂配制

细胞培养过程中的注意事项及试剂配制

细胞培养过程中的注意事项及试剂配制细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备:单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品规(放置消毒过的物品)、包装台。

配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。

培养室的设备:液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。

必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。

二.无菌操作无菌室的灭菌:1.定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱(培养箱)灭菌:先用3‰新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸,再用紫外灯照射3.实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌:用75%酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。

实验人员的无菌准备:1.肥皂洗手。

2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75%酒精棉球擦净双手。

无菌操作的演示:1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。

3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。

5.各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。

如吸管不能碰到废液缸。

6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。

三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消:(1)新的玻璃器皿的洗消:1.自来水刷洗,除去灰尘。

2.烘干、泡盐酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。

细胞培养基本知识

细胞培养基本知识
3.2 用于基因治疗
细胞培养在基因治疗方面也有很大作用。本实验室利用 培养的SY5Y细胞,通过将早老素基因PS-1转染入SY5Y细胞;而后,用RT-PCR证明转染有PS-1基因的细胞内部有PS-1 mRNA转录,用单抗检测细胞PS-1蛋白的表达。而后可用以检测细胞是否有早老现象。再用类似方法,我们可以研究细胞的钙通道以及其它药物作用的膜通道,从而指导临床药物应用,并据此来研究新的药物。
1.2 细胞培养的实验室要求
细胞培养要求较高,目的是使细胞能在无菌条件下存活。提取细胞的手术器具在每次使用之前应高温、高压消毒,配培养液的水要求用灭菌双蒸水并加入双抗。所用培养瓶、离心管等器皿最好为一次性。要在无菌室超净台上操作。每次操作之前,要用紫外灯照射工作台20-30min,然后将手洗干净,换拖鞋进入无菌间,将手用新洁尔灭喷洗一遍再操作。
2 以人血管内皮细胞为例说明细胞培养
由于细胞本身性质不同,其分离和培养方法也会有差异。其来源一般是新鲜脐带的脐静脉(来自于产后24h以内),具体的分离方法是:取新生儿脐带血(25 cm左右),放入含青、链霉素各100U/mL的灭菌PBS中,4C保存,24h内进行实验。
2.1. 取材和原代培养
2009-05-29 17:35回复
白港人 ☆Gabri液体培养基的保存是冷藏好?还是冷冻好?
要冷藏!!因为液体培养基经冷冻后再经溶化时,其溶液的pH值会发生改变,溶液往往变碱,某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中,通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月~ 一年。
2. 液体培养基中谷氨酰胺的作用及使用方法。
几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20 ?C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ?C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml完全培养基中,其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色,-20?C保存。

74、谷氨酰胺检验规程

74、谷氨酰胺检验规程

光度。在一定温度下,(通常用 t 表示,可为 20℃或 25℃)一定波长光线(黄
色钠光谱用 D 表示,波长λ为 589.3nm)偏振光透每毫升含 1g 旋光性物质,
其厚度为 1dm (即 10cm)溶液时的旋光度称为比旋光度。
2.3.2 器材
2.3.2.1 数字式自动旋光仪(精度为±0.001°);
x=
m × 1000
204 . 2 × (V − V 0 )
式中:
m——邻苯二甲酸氢钾质量(g );
V——滴定时消耗高氯酸滴定液体积数(mL);
V0——空白试验时消耗高氯酸滴定液体积数(mL);
204.2——1mol 高氯酸滴定液相当基准邻苯二甲酸氢钾质量(g/mol)。
文件名称 谷氨酰胺检验规程 文件类别 作业指导书
编版页本号/码版次
CG-07-GAXA-120720-74 E/0 5/8
分炭化至无烟,然后置马费炉中,在 550℃±25℃灼烧 4h。冷至 200℃以下 后取出放入干燥器中冷却 30min,在称量前如灼烧残渣有炭粒时,向试样中 滴入少许水润湿,使结块松散,蒸出水分再次灼烧直至无炭粒即灰化完全, 准确称量。重复灼烧置前后两次称量差不超过 0.5mg 为恒量。 2.5.4 计算
c ——溶液浓度(100mL 溶液中所含物质的克数)。
2.3.5 允许差
同一试样两次测定,绝对值之差不得超过 0.02%。
2.3.6 注意事项
2.3.6.1 每次测定前应以溶剂作空白校正,测定后,再校正一次,以确定在
测定时零点有无变动。如有变动,应重新测定样品的旋光度。
2.3.6.2 样品溶解稀释后应澄清,否则应过滤。
冷却至 200℃以后,取出,放入干燥器中冷却至室温,准确称量,并重复灼

细胞培养知识

细胞培养知识

11.二价离子抑制胰蛋白酶活性吗?使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么?
二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前,用EDTA清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。
12.制备 lipid-DNA的方法会影响转染效率吗?
10.Qualified和 Certified 胎牛血清有什么差别?
Certified 胎牛血清包括了Qualified 胎牛血清执行的所有的标准检验程序,而且除了这些标准检测,Certified胎牛血清还有如下一些附加的检测:End-Point Determination of Endotoxin Content噬菌体检验生物化学检测 激素的检测血红蛋白检测Sf9 细胞生长促进及方法学检测
15.我可以使用固体形式的Murashige Skog 培养基吗?
如果使用固体形式的培养基,需要加入琼脂。琼脂加入前要先灭菌。应该避免MS培养基的直接灭菌,应该高压灭菌琼脂溶液,然后把融化的琼脂溶液加入到MS培养基中。
16. 20℃下配制的缓冲液,在较高或较低的温度下PH值会改变吗?
6.如何用台盼兰计数活细胞?
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升,在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色的细胞是死细胞。
7.如何消除组织培养的污染?
当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。

细胞培养技术考题整理

细胞培养技术考题整理

1.为什么要热灭活血清?加热可以灭活补体系统。

激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞核血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。

(在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

)2.谷氨酰胺在细胞培养中起什么作用及使用方法?作用:几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。

使用方法:谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4℃放置1周可分解50%,故应单独配制,置于-20℃保存,临用前加入培养液。

配制方法:谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液,充分搅拌溶解后,过滤除菌,分装小瓶,-20℃保存,使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。

3.如何用台盼兰计数活细胞?正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

(用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升,在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4%的台盼兰溶液。

轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。

)4.如何消除组织培养的污染?确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。

(一)认真做好外植体的选择和消毒工作,防止外植体带菌。

(二)改善接种室和培养室的环境条件,保证接种与培养环境清洁无菌。

(三)操作人员严格遵守无菌操作规程。

(四)培养基及接种工器具要严格灭菌,确保灭菌质量。

(五)在培养基中加入适量的抗生素。

(六)利用病毒在植株体内分布不均匀的原理,生产脱毒苗。

(七)利用培养基中高盐或高糖的浓度,抑制微生物的生长。

(八)减少培养基中的某些有机成分,可抑制微生物的生长繁殖。

细胞培养常用试剂

细胞培养常用试剂

器材与试剂干粉型培养基、胰蛋白酶,青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等具体步骤1. 水:细胞培养用水必须非常纯净,不含有离子和其他的杂质。

需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS (也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制):主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗溶解定容:将药品(NaCl 8.0g,KCl 0.2g,Na2HPO4·H2O 1.56g,KH2PO4 0. 2g )倒入盛有双蒸水的烧杯中,玻璃棒搅动,充分溶解,然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml,摇匀即成新配制的PBS溶液。

用HCl或NaOH调PH到7.4。

移入溶液瓶内待消毒:将PBS倒入溶液瓶(大的吊针瓶)内,盖上胶帽,并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。

注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。

3. 胰蛋白酶溶液:胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。

不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。

胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为8.0、温度为37℃时,胰酶溶液的作用能力最强。

使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。

因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。

终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。

称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度为0.25%,用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调PH到7.2左右)或PBS(D-hanks)液中。

搅拌混匀,置于4℃内过夜。

用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器(0.22微米微孔滤膜)抽滤除菌。

然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。

4. 0.05%胰蛋白酶-0.02%EDTA溶液称取胰蛋白酶粉末(1:250)0.05g,EDTA 0.02g,加入PBSA 100ml,0.22um微孔滤膜过滤除菌,分装,于-20℃保存。

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细胞培养过程中谷氨酰胺检测方法汇总
谷氨酰胺是一种基本的氨基酸,为其它氨基酸、脂类、细胞内蛋白质、抗体和核酸的合成提供碳源和氮源。

谷氨酰胺还可刺激抗体的转录后翻译过程。

在许多细胞的培养过程中,均发现了细胞生长对谷氨酰胺有依赖性,如在杂交瘤细胞培养过程中,谷氨酰胺浓度为零时,细胞快速死亡。

有一些细胞经过适应后,能在不含谷氨酰胺的培养基中生长,但细胞株之间的适应速率存在较大的差异。

细胞生长是否依赖于谷氨酰胺的关键在于细胞是否含有内源的谷氨酰胺合成酶,即是否具有将谷氨酸转化生成谷氨酰胺的能力;另外,谷氨酸的运输速率及谷氨酰胺的生成速率限制是导致细胞在无谷氨酰胺培养基中生长速率减慢的主要原因。

因此细胞培养中检测谷氨酰胺浓度具有重大价值,本文就目前常见的谷氨酰胺的检测方法做一个全面的汇总。

一、滴定法
1.原理谷氨酰胺分子结构中既有羧基,又有胺基,但其酸碱性都较弱,故只有在非水溶剂中才能滴定其羧基或胺基。

为此,以乙酸(冰醋酸)为溶剂,用高氯酸滴定其胺基。

2电位滴定法称取预先在105℃干燥至恒重的样品0.15g ,精确至0.0001g ,置于干燥的烧杯中,加无水甲酸3mL 溶解后,再加入50mL 冰乙酸,用高氯酸标准溶液滴定,用电位滴定仪滴定至终点,滴定的结果用空白试验校正。

3.指示剂法取本品干燥品约0.15g ,精确至0.0001g ,加无水甲酸3mL 溶解后,加乙酸(冰醋酸)50mL ,加结晶紫指示液1滴,以高氯酸标准滴定溶液(0.1mol/L)缓缓滴定至显蓝色即为终点,记录滴定液消耗体积。

同法做空白试验,记录。

计算X%=()1001000
14.1460⨯⨯⨯-⨯m V V C 式中:X ——L-谷氨酰胺含量,%;
C ——高氯酸标准滴定溶液浓度(mol/L);
V ——滴定样品时消耗高氯酸标准滴定液体积数(mL);
V 0——空白试验时消耗高氯酸标准滴定液体积数(mL);
m ——样品质量(g);
146.14——L-谷氨酰胺的摩尔质量(g/mol )。

允许误差平行测定结果绝对值之差不得超过0.3%;取算术平均值为分析结果。

高氯酸标准溶液浓度校正当滴定样品与标定高氯酸标准溶液时,温度之差可超过10℃,则应重新标定高氯酸标准溶液的浓度:温度之差不可超过10℃可按下式加以校正。

C 1=)
010
t -t (0011.01⨯+C 式中:C 1——滴定样品时高氯酸的浓度,mol/L ;C 0—标定标准溶液时高氯酸的浓度,mol/L ;
t 1——滴定样品时高氯酸的温度,℃;t 0——标定标准溶液时高氯酸的温度,℃;
0.0011——冰乙酸的膨胀系数
二、试剂盒比色法
1.检测原理:谷氨酰胺和羟胺在谷氨酰胺合成酶的作用下生成谷氨酰氧肟酸和氨,通过显色反应可测定谷氨酰胺的含量。

2.操作步骤:
3.计算公式:
(1).血清(浆)中谷氨酰胺的计算:
谷氨酰胺(mmol/L=(测定管OD值-空白管OD值)/(标准管OD值-空白管OD值)×标准浓度(2mmol/L)×样本测定前稀释倍数
(2)组织中谷氨酰胺的计算:
谷氨酰胺浓度(mmol/gprot)*=(测定管OD值-空白管OD值)/(标准管OD值-空白管OD值)×标准浓度(2mmol/L×样本测定前稀释倍数÷蛋白含量(gprot/L)**
*mmol/gprot=毫摩尔/克蛋白
**gprot/L=克蛋白/升
三、高效液相色谱法(HPLC)
1.原理:通过谷氨酰胺与双(1,1-三氟乙酸基)碘苯(BTI)反应后酸水解,再用异硫氰酸苯酯衍生后,用HPLC检测
2.操作步骤
2.1样品制备将各种乳制品稀释10倍,进行检测。

2.2Gln残基保护反应取100μL标准肽(2.5mg/mL)或样品溶液,加入100μL新配制的BTI乙腈溶液,并加入25μL的吡啶水溶液(50μmol/mL),混合均匀后充氮,50℃反应4h,室温吹干备用。

2.3蛋白质的酸水解向BTI处理过的样品中加入浓度为6mol/L的HCl200μL,置于管内,高温封管后,110℃水解24h,水解后切开封管口,室温氮气吹干备用。

2.4异硫氰酸苯脂(PITC)衍生酸水解样用100μL的乙腈-吡啶-三乙胺-水(10∶5∶2∶3)缓冲液溶解,氮气吹干后加入250μL的同样缓冲液,并加20μL PITC,50℃反应1h后,加入正己烷200μL,混匀,封置分层,从下层吸取200μL移入3mL样品管中,加入2800μL稀释液,混匀后即可上机分析。

四、酶膜电极法
1.原理:利用谷氨酰胺合成酶能将谷氨酰胺转变成谷氨酸和氨的特性,检测谷氨酸的含量记为A值,再利用谷氨酸电极去检测细胞培养液中谷氨酸的含量记为B值,A-B的差值即为细胞培养液中谷氨酰胺的含量。

2.操作步骤详见仪器使用说明书
五、总结
在细胞培养中谷氨酰胺参与能量代谢时的脱氨反应和谷氨酰胺的自然降解导致氨的产生。

多数人认为,当氨浓度大于4mmol/L时,可抑制细胞的生长,这一数据主要来自不同氨浓度条件下的细胞培养实验。

但Martineell和Hgagsrtom认为细胞代谢过程中产生的氨比培养基中添加的氨对细胞毒性更大,即使氨浓度小于4mmol/L也可能对细胞生长产生明显的抑制作用。

因此选择一种高效、快速、简便、准确的检测方法成为细胞培养能否成功的关键因素。

通过以上几种方法的介绍我们发现滴定法具有简单、投资小等优点,但是一般针对高纯度谷氨酰胺的检测,对于组分复杂的细胞培养液,检测结果偏差较大;高效液相色谱作为实验室常规仪器,实验室必备,多数细胞实验室可以采用该方法准确检测谷氨酰胺浓度,但是存在操作复杂、前处理时间长等问题,严重制约细胞培养过程的调控和预判。

酶膜电极法作为一种简单、快速、准确的检测方法,广泛应用于临床诊断。

西尔曼科技公司作为一家创新型公司推出了M100、M800、M900等不同规格、配置的产品来满足不同客户的需求。

酶电极法可以在20秒内检测出细胞培养液中谷氨酰胺的浓度,误差和准确性在2%以内,单次检测成本只有0.18元,是细胞培养过程生化指标检测的理想之选。

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