薄荷挥发油的提取与应用研究
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薄荷挥发油的提取与应用研究
摘要:文章以薄荷为材料,采用水蒸汽蒸馏法提取薄荷挥发油,分别考察了蒸馏时间和加水量两种因素对挥发油提取率的影响。并在接种了大肠杆菌的平板中分别放入沾了四个不同浓度挥发油和
无菌水的滤纸片,置于30℃温箱中培养24小时,证明薄荷挥发油对大肠杆菌具有抑菌作用。
关键词:挥发油;薄荷;水蒸汽蒸馏法
中图分类号:tq461 文献标识码:a 文章编号:1674-0432(2012)-11-0054-1
薄荷(peppermint),别名野薄荷,脣形科,薄荷属。多年生芳香草本,茎直立,高30~80cm。薄荷挥发油有较强的挥发性,本实验采用水蒸汽蒸馏法,提取薄荷挥发油进行相关研究。
1 材料与方法
1.1 实验材料与试剂
薄荷、大肠杆菌及lb固体培养基。
1.2 实验仪器
电子天平,恒温水浴锅,灭菌锅,恒温振荡培养箱,无菌操作工作台等。
1.3 实验方法
本实验采用水蒸汽蒸馏法[1]提取薄荷挥发油,分别对不同蒸馏时间、不同加水量,分别对薄荷挥发油进行提取。
工艺流程:材料→阴干→粉碎→过筛→水蒸汽蒸馏→油水混合
物→高速离心→移液器抽取→计算提取率→感官评价[2]。
1.4 实验步骤
1.4.1 薄荷挥发油的提取称取50g薄荷,剪碎,研磨成泥状物,然后安装蒸馏装置,安装完毕后开始加热。控制蒸馏的时间和速度,通常以每秒1~2滴为宜。当流出液无明显油珠时,澄清透明时,便可停止蒸馏。收集锥形瓶中的乳白色的乳浊液,然后用移液枪小心将薄荷挥发油取出移至另外的三角瓶中,并向其加入无水硫酸钠,吸去油层中含有的水分,放置过夜。计算出油率。出油率按以下公式计算:
精油含量(ml/g)=测得精油量(ml)/供试品量(g),重复测定3次取其平均值。
1.4.2 滤纸片法对抑菌性质的研究将保存大肠杆菌菌种反复转种2次备用。用无水乙醇与挥发油按照1:1的比例稀释后,再用无菌水依次稀释成浓度为7.5%、5%、
2.5%、1.25%、0.625%,备用。分别用不同浓度的乙醇溶液为对照。将干净的滤纸制成直径大小为0.6cm的小圆纸片,灭菌后备用。然后制备菌悬液。在超净台里将转接后生长良好的菌种用接种环将其接种于lb固体培养基中,放入37℃温箱中,24小时后观察是否有菌落生长。贴片:在超净台里将平板划分6个或3区,用无菌水做对照组。每两张滤纸片为一帖,贴在平板的指定位置,轻摁一下使其牢固,倒置放入30℃培养箱中培养,24h后观察结果。
数据分析:利用上述观察结果参照菌丝生长法用直尺测量菌圈
生长直径以无菌水做对照进行生长率的测定,计算公式:生长率=(对照组菌落直径-给药组菌落直径)/对照组菌落直径×100%
抑制率=1-生长率
2 结果与分析
2.1 水蒸气法提取精油出油率
2.1.1 不同蒸馏时间对挥发油提取结果的影响分别取经过
阴干、粉碎、过40目筛后的样品50g,加水300ml,蒸馏时间分别是:60min;90min;120min;150min;180min;210min和240min。观察其结果并记录,其结果如表1:
由表1可知,当蒸馏时间为210分钟时出油率达到最大。
2.1.2 不同加水量对挥发油的提取结果分别取经过阴干、粉碎、过40目筛后的样品50g,加水量依次分别为200ml;250ml;300ml,蒸馏时间为210min,按提取工艺流程提取,进行重复试验。观察结果并记录,提取结果如表2:
由表2可知,当投料量为50克时,加水量为5倍左右时出油率最高。
2.2不同稀释度薄荷挥发油对大肠杆菌的抑菌活性量效关系
2.2.1取一定量的薄荷挥发油,分别稀释成浓度为5%、2.5%、1.25%、0.625%、7.5%,进行重复试验,观察抑菌圈直径的大小并记录结果,见表3:
表3 不同挥发油浓度的抑菌圈直径
由表3可知抑菌圈的直径随挥发油浓度的增大而增大,在2.5%到5%之抑菌圈的直径增大的很明显,所以效果最好。
3 讨论
薄荷油是溶解于芳香植物的花,叶,枝,干,根和果实细胞液内通过蒸馏而得到的挥发油,通过上述实验表明,挥发油提取时,不同的外界因素,如提取过程中投料量、加水量、蒸馏时间等对挥发油的提取都有很大的影响,薄荷提取的最佳条件是加水量应为投料量的5倍左右,蒸馏时间为210分钟,这时出油量最多。从不同薄荷挥发油浓度对大肠杆菌的抑菌活性可看出,浓度越大,抑菌直径越大,在浓度达到2.5%到5%之间,抑菌圈的半径增大的很明显,所以效果最好。
参考文献
[1] 何坚,孙宝国.香料化学与工艺学[m].化学工业出版社,
1995,54-55.
[2] 杨红主编.中药化学实用技术.第2版.北京:科学工业出版社,2005,32-38.
作者简介:王红涛(1981-),女,吉林白山人,通化师范学院生命科学学院助教,研究方向:分子生物学、蛋白质与基因工程、环境微生物学研究。