PLgel凝胶色谱柱使用指南.

PLgel凝胶色谱柱使用指南

为了尽可能延长一根凝胶色谱柱的寿命，请在使用前仔细阅读本说明。本说明仅针对PL公司的PLGel凝胶色谱柱，如果您使用的是其它类型或其它公司的凝胶色谱柱，请注意并不是所有内容均适用。

柱子安装

一般使用1/16”不锈钢管来连接柱子，0.010”内径适用于分析柱，0.020”内径适用于制备，连接管线应该尽量短来避免死体积，会造成系统性能下降。柱连接接头应使用与Parker 兼容的1/16”锥箍和螺母，详见图1，请按照GPC柱的使用方向来连接，螺母应当在手拧紧后用扳手再拧1/4圈就足够了，过分拧紧并不会改善密封，反而会损坏螺纹造成泄漏。

图 1

Compatible Connectors

在图1中的X＝0.090”，约等于2.28毫米，螺母的最小长度应为0.210”，约为5.33毫米，请不要

使用Waters和Rheodyne公司的产品，他们与PL的柱子并不兼容。

图 2

在安装柱子时，请不要将扳手放在图2所示X处，应当放在柱未端六角处。在与其它的柱子相连之前，建议将柱子与泵相连，用少量流动相清洗一下连接管内部和接头。

流速

对于传统的7.5毫米内径的GPC柱子，1.0ml/min是一个最优化的流速，当柱子的内径增加或减少时，应当适当调整体积流速来保证等效的线速度。 表1给了大家一个推荐的流速，然而对于一些高粘度的流动相，应当适当减小或升高温度，如果要更换溶剂，流速要逐渐升高，无论如何，都不要在超过柱子的最大压力下使用柱子（详见表3）。

表 1

柱型 适用流速 (ml/min) 建议流速 (ml/min)

PLgel 7.5mm ID PLgel MiniMIX 4.6mm ID PLgel Prep 25mm ID 0.5 – 1.5

0.2 – 0.5

5.0 – 20.0

1.0

0.3

10.0

样品制备及进样

根据样品的分子量来优化样品浓度毫无疑问是最好的方式。宽分布样品通常可以比窄分布样品使用更大的浓度。过载并不会损坏柱子，但是你会得到不好的峰型和错误的结果。为了避免堵塞，我们推荐样品用0.52微米的过滤器过滤样品，当然预柱同样会保护您的分析柱。 进样量过大会造成谱带展宽，降低系统效能，尤其是对于高效柱和窄口径柱，PL推荐的进样量详见表2。

表 2

柱子类型 推荐百分比浓度(%) 推荐进样量 (µl)

PLgel 7.5mm ID PLgel MiniMIX 4.6mm ID PLgel Prep 25mm ID 0.05 – 0.50

0.01– 0.20

0.5 – 5.0

20 – 200

1 – 50

500 –2000

表 3

柱子类型 PLgel

3µm

PLgel

5µm

PLgel

10µm

PLgel

20µm

PLgel

Prep 10µm

通常工作压力 (bar)1 50 30 10 3 25

最大工作压力 (bar) 180 150 150 150 150

最大工作温度 (°C)2 110 150 210 210 150

注1：THF at 20°C, PLgel 300x7.5mm at 1.0ml/min,

PLgel MiniMIX250x4.6mm at 0.3ml/min,

PLgel Prep 300x25mm at 10ml/min.

注2：在非常高的温度下使用柱子，寿命会有所缩短。

流动相

PLgel适用的有机溶剂非常广泛，可以在溶解参数7－14间任意选择，也可以使用混合溶剂，但是水是一定要避免的，如果一定要使用水做为混合溶剂的一部分，一定要少于10%体积比。所有的溶剂一定要使用高纯度，用前要过滤和脱气。PL的柱子一般随运溶剂是甲苯，除非另有说明，可以直接用0.5ml/min的流速向THF过渡，但是不加稳定剂的THF不推荐使用，例如HPLC级的THF。PLgel柱子可以进行溶剂转换而不会影响柱效，但是在转换时要认真考虑溶剂之间的溶解性和粘度，对于7.5mm的柱子，请参照下表，其它内径的柱子要进行调整。但请注意，在加热或冷却PLgel柱子时,请使用0.1ml/min这样的小流速进行。

PLgel 7.5MM ID 凝胶柱溶剂转换指南

流速转换

PLgel 7.5mm ID PLgel MiniMIX 4.6mm ID PLgel Prep 25mm ID

0.2ml/min 0.08ml/min 2.0ml/min

0.5ml/min 0.18ml/min 5.0ml/min

1.0ml/min 0.38ml/min 10.0ml/min

柱效测试和指标

每一根PLgel凝胶柱都会随附一个测试证书，内有测试条件和柱效，计算公式如下：

T：出峰时间

W½ ：半峰高的峰宽

W5σ：4.4%峰高处的峰宽

L： 柱长（单位为米）

a and b：在峰两边10%峰高处的峰宽

柱子存储

当把柱子从GPC系统中拆除时，要尽快用死堵将柱子两端封闭，防止柱内溶剂挥发，死堵只需用手拧紧即可，以上所述的溶剂都可以用做存储柱子的溶剂，但是未加稳定剂的THF除外。

柱子保养

如果柱床损坏，或者柱头筛板堵塞，就会表现出柱效下降。如果只是筛板堵塞，可以将柱子反接，用1.0ml/min冲1分钟来去除堆积在筛板外侧比较松散的样品，如果反冲后仍然表现出堵塞，请按照如下步骤尝试更换筛板，或者将柱子退回。

筛板更换流程（详见图3）

1将柱内流动相置换为甲苯，然后将出口封闭，将进口封端打开，小心移除。

2请用PL专用的筛板移除工具将旧的筛板移除，并用溶剂冲洗掉不必要的填料，换上新 的筛板。

3大约2mm左右的胶粒会从柱子里胀出，那么在柱端用少量PLgel repair gel进行回填，并滴少量甲苯。

4将柱子向下倾斜45度，将封端拧紧。

5用0.5ml/min流动相反冲，排出安装时进入到柱子中的空气，然后检查流出物中是否含有填料颗粒，以确保密封良好。