高效液相色谱仪(HPLC)

1．高效液相色谱法与经典液相色谱法
（1）经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设备，流 速最高可达 10cm3·min-1. （2）对氨基酸分离，用经典色谱法，柱长约170cm，柱径0.9cm，流动相速度为 30cm3·h-1，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用HPLC，只需lh之内即可完 成。 （3）采用梯度洗脱，可在不到0.5h内分离出尿中104个组分.
4．检测系统
不同检测器特点如下：
检测器 UV-Vis 荧光 电化学 蒸发光散射 示差折光 质谱
检测下限 /(g/ml)
10-10
10-12～10-
11
10-10
10-9
线性范 围
103～10
4
103
103
选择 性
有
有
有
无
梯度 淋洗 可
可
困难
可
主要特点
对流速和温度变化敏感；池体积可 制作得很小；对溶质的响应变化大。 选择性和灵敏度高；易受背景荧光、 消光、温度、pH和溶剂的影响 选择性高；易受流动相pH值和杂 质的影响；稳定性较差。 可检测所有物质。
样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗 6、清洗色谱柱或长时间不采集数据之时，应将“灯”关闭，以延长“灯 ”之寿命，切忌频繁开关“灯”
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恳请各位评委批评指正！
HPLC优点：高速、高效、高灵敏度、高自动化。
2.HPLC与GC
（1）HPLC比GC的分析对象广泛：GC分析对象只限于分析气体和沸点较低的化 合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些高沸点 、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用HPLC进行分离和分析；
（2）HPLC的流动相对分析对象的分离作用很大，GC的流动相仅有运载作用； （3）GC一般都在较高温度下进行的，而HPLC法则经常可在室温条件下工作。
高效液相色谱法概述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分 析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。
HPLC是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、 高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特 点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较：
HPLC主要缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。
二、高效液相色谱仪的主要部件
4（6）个主要部分： 高压输液系统； 脱气装置； 梯度洗脱； 进样系统； 分离系统； 检测系统；
此外还配有自动进样及数据处理等辅助装置
1．高压输液系统
由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动 相较快流动，必须配备有高压输液系统。
高效液相色谱仪
High Performance Liquid Chromatography，HPLC
试讲人：袁长胜
01
02
03
04
高效液相色谱法 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪
概述
主要部件
运作流程
使用注意事项
CONTENTS
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它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压 力脉动阻力器等组成。
高压输液泵 核心部件。压力：150～350×105 Pa。 应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及 耐腐蚀等要求。
2．进样系统
HPLC流路中为高压力工作状态，因此，HPLC进样系统通常使用耐高压的六通 阀进样装置。如图所示：
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无 不可 可检测所有物质；不适合微量分析；
对温度变化敏感。
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无 可 主要用于定性和半定量。
三、高效液相色谱仪运作流程
四、高效液相色谱仪使用注意事项
1、必须正确开关机。 2、流动相：须使用色谱纯级溶剂，样品溶液和流动相需用0.45µm滤
膜过滤。 3、在每次分析时检查并记录压力是否在正常范围； 4、每次使用完毕后必须清洗系统； 5、为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进
3．分离系统——色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。
4．检测系统
在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。 一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有
响应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。 另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质
有响应，属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。