高效液相色谱法检测虾肉中硝基呋喃类药物残留毕业论文

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液相色谱-串联质谱法测定小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量的不确定度评定

0引言测量不确定度是指表征合理地赋予被测量之值的分散性与测量结果相联系的参数［1］。

《检验检测机构资质认定能力评价检验检测机构通用要求》（RB/T214—2017）中要求检验检测机构应建立相应的数学模型，给出相应检测能力评定测量不确定度的案例［2］。

硝基呋喃类药物是一类广谱抗生素，广泛应用于水产养殖［3］。

硝基呋喃类药物具有遗传毒性，有可能导致基因变异，我国已于2002年颁布禁止使用硝基呋喃类抗生素的禁令。

硝基呋喃类药物原型药在动物体内虽代谢迅速，但代谢物会与蛋白质紧密结合，形成稳定的残留物。

一般判定动物源性食品中硝基呋喃类药物的残留状况都是以其硝基呋喃类代谢产物的含量作为检测依据，硝基呋喃类药物主要有呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林，其对应的代谢物分别为3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）、5-甲基-吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）和氨基脲（SEM）。

液相色谱-串联质谱法因其灵敏度高、定性定量准确，成为目前硝基呋喃类代谢物主要的检测方法。

陈茹等［4］、吕燕［5］、蒙丽琼等［6］、林功师［7］、郭丽娜等［8］、李绪鹏等［9］、邢丽红等［10］都对液相色谱-串联质谱法测定硝基呋喃类代谢物的不确定度进行评定，但在对内标物引入的不确定度的分量上，未充分考虑内标法的特点，即内标物引入不确定度来自内标添加量的重复性。

本文根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1—2012）对《食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质谱法》（GB31656.13—2021）测定小龙虾中硝基呋喃代谢物残留量的不确定度进行评定，分析不确定度的主要来源，保证检测结果准确可靠。

1材料与方法1.1仪器与设备液相色谱-串联质谱联用仪（Xevo TQ-XS型号，配有电喷雾ESI离子源，美国Waters公司生产）；电子液相色谱-串联质谱法测定小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量的不确定度评定*吴祥庆，杨姝丽，吴明媛，黄鸾玉，谢宗升，蒙源，庞燕飞（广西壮族自治区水产科学研究院，广西南宁530021）摘要：文章根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1—2012），探讨采用《食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱－串联质谱法》（GB31656.13—2021）测定小龙虾中硝基呋喃代谢物残留量的不确定度，建立相应数学模型，评估不确定度的测定结果。

超高效液相色谱-串联质谱法测定凡纳滨对虾中的硝基呋喃代谢物残留

超高效液相色谱一串联质谱法测定凡纳滨对虾
中的硝基呋喃代谢物残留
赵艳，张凤枰，刘耀敏
（威股份有限公司，四川成都６０４）通１０１
摘要：采用超高效液相色谱一串联质谱（ＰＣＭ／），测定了凡纳滨对虾（ｉｐｎｅｓＵＬ — ＳＭＳ法Ｌｔｅａｕａ船眦中氨基脲ｏ）（Ｅ、１氨基－一ＳＭ）一２内酰脲（Ｈ、３氨基－一ＡＤ）－２唑烷基酮（Ｏ和５甲基吗啉一一ＡＺ）一３氨基一一２唑烷基酮（ＭＯ４种硝基ＡＺ）呋喃类代谢物。采用２硝基苯甲醛作为衍生化试剂，氘、碳一３一１、氮一５同位素标记的ＳＭ．一ＨＣ、１ＥＣＮ、ＡＤ ” ＡＺＤＯ — 和ＡＺＤ为内标物，样品经衍生、乙酸乙酯提取、正己烷净化，以甲醇０５ｍｏ・乙酸铵水溶液ｔｅｉｌｄｎ．％ｆｃａｉ，ａｄｔｅａｅｇｏｎａｌｉｉｉ．２．ｇｍ（０９９，ｈｍｉｏｏｉｍａｅｔｎｕｉ０１ｏｃａｃｇｍｉｄｎｙｈｖｏｄｌｅｒｅｔｎｗｔｎ０４～００ｎ。ＬＲ＞．９）ｔｌｔｆｈｉｒａｏｈｅｉ
（０１甲酸）含．％为流动相进行梯度洗脱，８ｍｎ可将４种目标化合物完全分离并测定。结果表明，４种待测物在ｉ
０４— ００ｎ。范围内线性关系良好（．２．ｇｍＬＲ＞０９９，检出限为０００１ｇｋ。在０５ｇｋ、１０ｇ．９）．３～．５・ｇ．・ｇ．・ｋ和２０ｖ・ｇ３个水平上进行加标回收试验，平均回收率为９．％～１７３，ＲＤ为３１一８７。采ｇ．ｇｋ２００．％Ｓ．％．％用该法参加ＦＰＳ国际水平测试，获得了满意的结果。ＡＡ关键词：硝基呋喃类代谢物；残留；凡纳滨对虾；超高效液相色谱一串联质谱法中图分类号：Ｔ５．Ｓ２４７文献标志码：Ａ文章编号：２９０８０５— ７０一（０１０ — ０５— ６２１）４０５０

HPLC-MS／MS法测定南美白对虾苗中硝基呋喃类代谢物残留

１６
第２３卷，第１期
ｌ４ｌ
化学分析计量
ＣＨＥＭＩＣＡＬＡＮＡＬＹＳＩＳＡＮＤＭＥＴＥＲＡＧＥ
Ｖｏｌ＿２３．ＮＯ．１Ｊａｎ．２０１４
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－－６１４５．２０１４．０１．００５
ＡＭＯＺ的检出限为０．１０ｇ／ｋｇ，ＳＥＭ，ＡＨＤ的检出限为Ｏ．２５ｇ／ｋｇ；ＡＯＺ，ＡＭＯＺ的定量下限为０．４Ｏｇ／，
ＳＥＭ，ＡＨＤ的定量下限为０．５０ＬＬｇ／ｋｇ。方法加标回收率在８８．２％－９７．６％之间，相对标准偏差在４．６％－８．１％（ｎ＝６）之间。该法检测灵敏度高，测量结果的精密度和准确度满足药物残留检测要求。关键词高效液相色谱串联质谱法；南美白对虾苗；硝基呋喃类代谢物中图分类号：０６５７．７文献标识码：Ａ文章编号：１００８－６１４５（２０１４）０１－００１６－０４
因代谢物（ＡＨＤ）、呋喃西林代谢物（ＳＥＭ）的高效液相色谱一串联质谱（ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）测定方法。以水解衍生并添加４种同位素内标的方法对样品进行处理，补偿了衍生化效率，提高了定量的准确性。实验结果表明，ＡＯＺ，
ＨＰＬＣ— ＭＳ／ＭＳ法测定南美白对虾苗中硝基呋喃类代谢物残留＊

高效液相色谱法检测饲料中的硝基呋喃类药物

因此．究建立饲料中多种硝基呋喃类药物的快研
２６混合型阳离子交换柱：．规格为６ｍ。０ｇ２７微孔滤膜：格为０２ｍ。．规．１ｘ２８呋喃西林（ｉｏｕａｏｅ：．Ｎ￣ｆｒｎ）纯度Ｉ９％。ｚ＞９２９呋喃妥因（ｉｏｕｎｉｎ：度Ｉ９％。．Ｎｔｆａｔ）纯＞９ｒｏ２１呋喃它酮（ｕＭａｏｅ：度＞９％。．０Ｆｒｔｄｎ）纯１９２１呋喃唑酮（ｕａｏｉｏｅ：度Ｉ９％。．１Ｆｒｚｌｎ）纯＞９ｄ２１２．２％甲酸溶液：甲酸＋＝＋８水２９。２１ｌ．３％氨水溶液：５３％氨水＋＝＋９水１９。２１固相萃取柱洗脱液：％氨水＋．４ｌ甲醇＝０７。３＋０２１硝基呋喃类药物混合标准贮备液（０ｍ￣．５１０ｍＬ：称取４种硝基呋喃类药物（．，．，）２８２９２１，．１各１０（确到０００ｇ于１ｍＬ容．２１）０．ｇ精０．１）００量瓶中。乙腈溶解定容。一０用２ ℃保存６个月。２１硝基呋喃类药物混合标准贮备液（０１／．６２０ｘｇ
中的硝基呋喃类药物。缩近干，２甲酸溶解，混合浓用％经
除非另有说明．分析中仅使用确认为分析在纯的试剂和Ｇ／６２２０（析实验室用水规ＢＴ６８ — ０８分格和试验方法》中规定的二级水。

HPLC—MS／MS法测定2017—2018年淮安地区小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量

HPLC—MS／MS法测定2017—2018年淮安地区小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量为了解淮安地区小龙虾中硝基呋喃类代谢物的残留情况，对2017和2018年该地区的小龙虾产品进行随机抽样检测。

结果表明，2017和2018年淮安地区小龙虾产品中，呋喃西林代谢物残留检出率高达63%，其他硝基呋喃类代谢物没有检出。

结果显示，在淮安地区的小龙虾养殖中呋喃西林仍然存在违规用药情况，呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃妥因几乎不用。

标签：HPLC-MS/MS法；硝基呋喃类代谢物；小龙虾；SEM硝基呋喃类抗生素因具有抑菌性和杀菌性，曾广泛用于水产养殖中传染病的预防和治疗[1]。

主要包括呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因四种，而其对应的代谢产物3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）、5-甲基吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）、l-氨基-2-内酰脲（AHD）都能与蛋白质紧密结合，形成稳定的残留物，残留时间达数周以上，甚至在蒸煮、微波加热等情况下仍然无法降解。

研究表明硝基呋喃类抗生素及其代谢产物对人体有潜在毒理性危害。

欧盟将其列为A类禁用药物[2]，且在2005年时又禁止在人类和动物中使用；美国在2002年将其禁用于食源性动物；日本也规定牛肉、猪肉、禽肉、虾肉都不得检出抗生素；我国农业部在2002年颁布禁令禁止将硝基呋喃类药物用在食源性动物身上。

江苏省淮安市盱眙县有着”中国龙虾之都”的美誉，自2001年至今，已举办了18界龙虾节。

盱眙境内年产龙虾10万吨，年交易量15万吨，交易额突破60亿元。

如今，盱眙80万人中有10万余人在龙虾产业链上淘金，龙虾已经成为盱眙县的支柱产业。

但是一些养殖场高密度饲养、养殖污水不处理等，导致疫病的爆发，为了预防和治疗病害，养殖户违法使用了硝基呋喃类抗生素。

本研究通过对淮安地区小龙虾产品中，硝基呋喃类代谢产物的残留量检测，为该地区小龙虾中违禁药物使用情况进行调查，以促进小龙虾产业的健康发展，保障人民的食品安全。

液相色谱－串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留量

液相色谱－串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留量广东省珠海市斗门区动物卫生监督所孟轩梁可昌【摘要】本文介绍液相色谱-串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类药物（呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林）代谢物残留方法。

试样中加入2-硝基苯甲醛溶液，在酸性条件下衍生，乙酸乙酯提取，涡旋离心提取，以乙酸胺和甲醇溶液进行梯度洗脱。

在浓度0.5～20.0纳克/毫升范围内，4种硝基呋喃类代谢物呈良好线性关系，相关系数均不小于0.995，检出限为0.5微克/千克。

在0.5微克/千克,1.0微克/千克,5.0 微克/千克添加水平下，目标分析物的加标回收率为82.0%～103%，相对标准偏差为0.996%～4.46%。

该方法具有操作简单、快捷、灵敏度高等特点，可用于水产品中硝基呋喃类等药物残留的批量检测。

【关键词】水产品；液相色谱-串联质谱法；硝基呋喃类硝基呋喃类药物是通过影响细菌体内的氧化还原酶体系，干扰细菌正常代谢的一类广谱抗生素，曾普遍应用于水产、畜牧业养殖等行业中疾病的预防和治疗。

后续学者陆续研究发现，该类药物对对人体具有致畸胎作用，可能诱发癌症等重大疾病。

为此，2019年12月农业农村部发布的第250号公告中将其归类为食品动物中禁止使用的药物。

硝基呋喃类常用的有４种：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林。

硝基呋喃类药物进入鱼体后的代谢产物分别为：3-氨基-2-恶唑烷基酮（AOZ）、5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）、氨基脲（SEM），由于这些代谢产物与蛋白质结合而相当稳定，所以目前主要通过检测代谢物的残留量，反映硝基呋喃类药物的残留状况。

目前检测兽药残留常见的方法主要有：高效液相色谱－串联质谱法、液相色谱法、常规理化检测法、酶联免疫法、毛细管电泳法等。

本研究基于《国家标准GB31656.13-2021食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质谱法》，结合实验室设备及当地检测需求，建立了准确、高效、快速的硝基呋喃代谢残留量检测方法。

高效液相色谱法检测虾肉中硝基呋喃类药物残留毕业论文

高效液相色谱法具备分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、检测器的重复性好、线性范围宽、分析速度快、操作自动化等特点，可用于分离高沸点、相对分子质量大、热稳定性差的有机化合物，还可用于各种离子的分离分析。
1.7.1.2
高效液相色谱仪的主要部件有：贮液罐、高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置。其基本的工作流程是：贮液罐中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来[15]。
2.3.4加标回收率和精密度9
3结果与分析9
3.1衍生温度的确定9
3.2提取方式的影响11
3.3提取时间的影响13
3.4线性关系、线性范围的确定14
3.5检测限的确定16
3.6加标回收率和精密度16
4讨论19
5小结与展望20
致谢21
参考文献22
1
1.1
我国是水产品生产与出口大国,自20世纪80年代以来,我国的水产品产量一直居世界首位，然而制约我国水产业发展的突出问题,其中之一便是水产品的质量安全问题，其中就包括药物残留超标。目前常见的因残留超标引起水产品质量安全事件的药物主要有氯霉素、孔雀石绿、硝基呋喃类代谢物和甲醛等,当人们食用了残留超标的水产品后,会出现不同程度的中毒反应,轻者影响健康,重者危及生命。而硝基呋喃类药物在水产品中的残留问题是近年来我国水产品出口中重点监控的项目[1]。
1.2
在我国，硝基呋喃类药物曾经得到广泛使用。呋喃唑酮在畜禽养殖、水产养殖上应用非常广泛，曾广泛用于防治畜禽肠道感染、防治水生动物疾病。作为医药，呋喃唑酮用于治疗细菌和原虫引起的腹泻、结肠炎和霍乱等[3]。呋喃西林一般用作外用消毒药物，也有拌饵投喂防治水生动物疾病的报道[4]。从藻类中提取的卡拉胶(食品增稠剂)中也存在呋喃西林[5]。此外，硝基呋喃类药物也有可能添加到化妆品种以实现某些功效。

高效液相色谱-质谱法检测肉和水产品中硝基呋喃类药物的代谢物残留量

高效液相色谱-质谱法检测肉和水产品中硝基呋喃类药物的代
谢物残留量
朱坚
【期刊名称】《质谱学报》
【年(卷),期】2003(024)0z1
【摘要】本工作建立了用LC-MS法测定肉和水产品中硝基呋喃类药物代谢物3-氨基-2-恶唑酮(AOZ)和3-氨基-5-吗啉代甲基-2-恶唑酮(AMOZ)残留量的方法,样品经酸水解,用邻氯苯甲醛衍生化.经SPE柱净化,用液相色谱MSD检测器检测.当添加浓度为1.5×10-8量级时,平均回收率为87.5%,检测低限为0.3×10-9量级.……
【总页数】2页(P121-122)
【作者】朱坚
【作者单位】上海出入境检验检疫局,上海 200135
【正文语种】中文
【中图分类】O6
【相关文献】
1.高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中硝基呋喃和硝基咪唑类药物残留量[J], 万建春;王文君;占春瑞;郭平
2.液相色谱-串联质谱法检测水产品中残留的硝基呋喃类药物的代谢物 [J], 王传现;丁卓平;黄帆;王敏;盛永刚;张缙;韩丽;宋青;李晓虹;徐敦明
3.水产品中硝基呋喃类代谢物残留量高效液相色谱串联质谱快速检测法的研究 [J], 周道志
4.超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪联用检测测定水产品中硝基呋喃类代谢物的残留量 [J], 黄宇;邱雄雄;刘嘉飞
5.高效液相色谱法检测水产品中硝基呋喃类代谢物残留量 [J], 王媛;蔡友琼;贾东芬;于慧娟;黄冬梅;史永富;钱蓓蕾;史志霞
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水产品中硝基呋喃类代谢物残留量高效液相色谱串联质谱快速检测法的研究

结果与分析
样品衍生条件的优化。4 种硝基呋喃的分子量在 75 ～ 201，在这个质量范围内质谱背景噪音很大，4 种代谢产物的电离效率比较低，因此它们的质谱检测灵敏度低。而在酸性条件下，利用邻硝基苯甲醛上的醛基 ( 一 CHO) 可以与 AMOZ、SEM、AHD、AOZ 等 4 种代谢物上的含氮亲核基团胺基 ( 一 NH ) 发生醛胺亲核加成反应，可以分别形成较好的特性衍生物，使衍生物的分子离子质荷比大于 200，处于相对适于检测的质量区域，质谱检测灵敏度会有很大提高。在实验室多年的硝基呋喃类检测的经验和参考相关资料的基础上，选择采用盐酸水解，邻硝基苯甲醛衍生化。本试验比较了 37℃恒温（空气浴）振荡 16h, 60℃恒温（空
分析步骤。（1）提取步骤。称取经肉类组织粉碎机粉碎的试样 2g （精确至 0.01g）于 50mL 离心管中，加入 10mL 0.2 Mol/ L 盐酸溶液在匀浆机上以 16000r/min 速度匀浆 15 秒，用 5mL 0.2 Mol/L 盐酸溶液洗涤匀浆刀 , 合并提取液。（2）样品恒温孵育提取。离心管中加入 400μL 100mMol/L 新配制的 2- 硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂振荡 1 分钟；放在 60℃恒温水浴锅中反应 0.5 小时。孵育过程要注意避光操作。（3）净化方法。离心管在 4500 r/min 下离心 10 min，上清液转入另一离心管中，残渣弃去。上清液中加入 5 mL 0.1 Mol/L KH2PO4 溶液，用 1 Mol/L KOH 溶液调节 pH 值在 7 ～ 7.5 范围。离心管中加入 10mL 乙酸乙酯，在振荡器上震荡 5 分钟，以 4500 r/min 速度离心 10 min，吸取 5mL 上层清液（相当于 1g 样品）移至吹氮浓缩仪的吹氮管中，在 50℃下用氮气将试管内的溶剂挥干，残渣用 1mL 纯净水溶解，漩涡振荡器上混漩 60 秒，加入 3 mL 正己烷，漩涡振荡器上混漩 60 秒，在 4500 r/min 下离心 10 min 后，样液经 0.22 μm 滤膜过滤后上机测定。仪器参数与测定。（1）色谱测定条件。色谱柱：菲罗门 C18，150 mm×2.0 mm（id），粒度 5µm，luna ；流动相：乙腈 +0.1% 甲酸水溶液，梯度洗脱模式。（2）质谱条件。离子源 ESI，正模式，多反应选择离子监测方式（MRM）。

水产品中硝基呋喃类药物残留的检测与控制

水产品中硝基呋喃类药物残留的检测与控制摘要介绍水产品中硝基呋喃类药物及其代谢物的残留危害，分析当前本类药物残留检测的最新方法：高效液相色谱、液相色谱质谱联用和酶联免疫吸附分析等。

同时从多方面对控制水产品中硝基呋喃类药物残留提出建议。

关键词水产品；硝基呋喃；残留；检测；控制近年来，我国水产养殖业发展迅猛，由于养殖集约化程度提高，养殖病害日益严峻，各类药物在生产中广泛使用，水产品药物残留问题日益突出。

硝基呋喃类药物（Nitrofurans）对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、真菌和原虫等病原体均有杀灭作用，曾经在水产养殖业中广泛使用。

但随着其毒副作用日益为人们所认识，作为水产养殖的药物已被大多数国家禁用。

不过由于此类药物价格低，药效好，很多养殖单位还在继续使用。

近年来，水产品硝基呋喃类药物残留超标事件屡屡发生，严重威胁着人民身体健康和我国水产品出口贸易。

加强对硝基呋喃类药物残留检测和控制有着十分紧迫的现实意义。

1药物概况1.1理化性质与作用机理硝基呋喃类药物是人工合成的具有5-硝基呋喃基本结构的广谱抗菌药物，主要是指呋喃唑酮（Furazolidone）、呋喃它酮（Furalta-done）、呋喃西林（Nitrofurazo-ne）、呋喃妥因（Nitrofuran-toin）。

代谢产物见表1。

呋喃类化合物均为性质稳定的黄色粉末，无味或味微苦。

呋喃西林难溶于水，微溶于乙醇，呋喃唑酮几乎不溶于水和乙醇；呋喃妥因几乎不溶于水，微溶于乙醇。

其抗菌作用是通过干扰细菌体内的氧化还原酶系统，使细菌代谢发生紊乱。

呋喃类药物抗菌谱较广，抗菌力不受血液、粪便、脓汁和组织分解产物影响，外用对组织刺激性小，细菌对本类药物亦较少产生耐药性。

1.2残留危害1.2.1对养殖动物有毒性作用。

大剂量或长时间使用硝基呋喃类药物均能对养殖动物产生毒性作用，其中呋喃西林的毒性最大，呋喃唑酮的毒性最小，为呋喃西林的1/10左右，以呋喃西林对动物体的毒性作用最常见。

液相色谱- 串联质谱法测定动物源性食品中硝基呋喃类代谢物多残留

液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中硝基呋喃类代谢物多残留倪瑞敏，张玉洁，王秀丽，都　颖（威海市食品药品检验检测研究院，山东威海 264209）摘　要：在农业部781号公告—4—2006的基础上进行优化，建立一种用于测定动物源性食品中呋喃唑酮（AOZ）、呋喃西林（SEM）、呋喃妥因（AHD）和呋喃它酮（AMOZ）代谢物多残留的液相色谱-串联质谱的分析方法。

本方法将试样经盐酸水解，以2-硝基苯甲醛衍生化处理16 h，经乙酸乙酯液液萃取，电喷雾正离子多反应监测，内标法定量。

结果表明，在0.5 μg/kg、1.0 μg/kg、5.0 μg/kg 3个添加水平，AOZ、AHD、SEM及AMOZ代谢物的回收率分别为92.0%～99.2%、86.0%～96.4%、90.0%～98.4%及82.0%～93.6%，相对标准偏差为1.8%～8.8%。

本方法操作简单，结果准确，适用于批量化检测动物源性食品中硝基呋喃类代谢物多残留。

关键词：动物源性食品；硝基呋喃类代谢物；液相色谱-串联质谱Determination of Multiple Residues of Nitrofuran Metabolites in Animal-Derived Food by Liquid Chromatography-TandemMass SpectrometryNI Ruimin, ZHANG Yujie, WANG Xiuli, DU Ying(Weihai Institute for Food and Drug Inspection and Testing, Weihai 264209, China) Abstract: On the basis of the Ministry of Agriculture Announcement 781—4—2006, a new method was established for the determination of furazolidone (AOZ), furaltadone (SEM), nitrofurazone (AHD) and nitrofurantoin (AMOZ) metabolites in animal-derived food by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. In this method, the sample is hydrolyzed by hydrochloric acid, derivatized with 2-nitrobenzaldehyde for 16 hours, subjected by liquid-liquid extraction with ethyl acetate, monitored by electrospray positive ion multiple reactions, and quantified by internal standard method. The results showed that the recoveries of AOZ, AHD, SEM and AMOZ metabolites were 92.0%～99.2%, 86.0%～96.4%, 90.0%～98.4% and 82.0%～93.6%, respectively, and the relative standard deviation was 1.8%～8.8% at three levels of 0.5 μg/kg, 1.0 μg/kg and 5.0 μg/kg. The method is simple in operation and accurate in results, and is suitable for batch detection of nitrofuran metabolites in animal-derived food.Keywords: animal-derived food; nitrofuran metabolites; liquid chromatography-tandem mass spectrometry硝基呋喃类药物是一类广谱抗生素，可以杀灭大部分病原体，而且不容易产生耐药性[1]。

液相色谱——串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的研究

研究与探讨Y 1962019年6月·下液相色谱——串联质谱法测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的研究孙玉飞（辽宁省检验检测认证中心 110000）摘要硝基呋喃类药物是一类合成的抗菌药物总称, 对多数革兰氏阳性、阴性细菌有抗菌作用，该药价格低廉，抗菌疗效好，曾被广泛应用于畜禽和水产养殖业，治疗由大肠杆菌或沙门氏菌所引发的疾病。

硝基呋喃类药物及其代谢物对人体危害较大有致畸、致突变和可疑致癌作用。

硝基呋喃类药物对光敏感，在动物体内代谢速度快，而代谢物以蛋白结合物的形式可以长期保持稳定状态，特别是水产品中硝基呋喃类代谢物残留会通过食物链进行富集，最终对人体健康产生危害，我国2002 年农业部第193 号公告禁止使用呋喃唑酮和呋喃他酮，2005 年农业部第560 号公告将呋喃妥因和呋喃西林列入首批《兽药地方标准废止目录》，硝基呋喃类药物及其代谢物的检测对保证食品安全具有重要意义。

关键词液相色谱-串联质谱法水产品硝基呋喃类代谢物研究由于硝基呋喃类药物代谢迅速，通常以硝基呋喃类药物代谢物为目标分析物。

液相色谱-质谱联用法具有检测限低、灵敏度高、抗干扰能力强、定性定量准确等特点，所以广泛应用于硝基呋喃代谢物的检测和确证。

我国已制定了很多相关标准如《兽药残留检测标准操作规程-2008 肌肉组织中硝基呋喃类代谢物残留检测方法——高效液相色谱-串联质谱法》、《农业部783号公告-1-2006 水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》、《GB/T 20752-2006 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，使用液液萃取方法对硝基呋喃代谢物进行提取，内标法定量，该方法操作简便，回收率良好，检测速度较快，适合开展水产品中硝基呋喃类代谢物的检测工作。

样品的制备：样品中脂肪对检测影响较大，在样品制备时要尽量选取水产品的肌肉部分充分均质。

水解和衍生化：称取2g均质后样品于50ml离心管中进行衍生，衍生试剂选择0.2mol/L的盐酸和2-硝基苯甲醛的二甲亚砜溶液。

高效液相色谱—串联质谱法同时测定水产品硝基呋喃类代谢物残留-2019年文档资料

高效液相色谱—串联质谱法同时测定水产品硝基呋喃类代谢物残留硝基呋喃类代谢物属于一种人工合成的广谱抗菌药物，它主要包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃它酮等.硝基呋喃类由于具有杀菌性而被广泛应用于畜禽和水产等动物传染病预防与治疗[13].该类药物半衰期短，在动物体内代谢速度快，与蛋白结合的代谢物产生稳定的残留，形成的代谢产物3氨基2噁唑烷酮（AOZ）、3氨基5吗咻代甲基2噁唑烷酮（AMOZ）、氨基脲（SEM）、1氨基乙内酰脲（AHD）均可使动物发生癌变和基因突变，人类长期使用可对其健康产生危害[46]. 欧盟在1995年已全面禁止呋喃类抗菌药物作为生长剂和杀菌剂用在饲料中，我国也于2002年颁布了禁止使用硝基呋喃类药物的公告.由于硝基呋喃在动物体内代谢速度快，不容易在动物组织中被检测到，通过14C标记表明[7]，硝基呋喃代谢物在动物体内以蛋白结合物的形式存在，在体内能残留数周，这些结合残留物可通过在适当的酸性条件下释放出来，以达到检测硝基呋喃残留的目的[8].由于液相色谱串联质谱方法灵敏度高，前处理方法简单快速，可同时用于产品的检测和确证，农业部颁布了相关的标准采用液质法应用于食品当中硝基呋喃类代谢物的残留检测[910].该方法操作简单，成本较低，回收率满足要求，但是由于水产品成分比较复杂，基质中含有大量的脂肪、蛋白质等杂质，前处理过程中没有采取进一步的净化，流动相溶解后会有乳化现象产生，容易产生基质效应，而且会对仪器造成污染影响结果的准确性，导致假阳性的情况出现.本文建立了水产品中硝基呋喃类代谢物的液相色谱串联质谱检测方法，通过在前处理过程中采取固相萃取柱进行净化，减少样品带来的基质效应，提高了色谱分析的功效，简单快速，灵敏度高，而且节约成本，能够实现药物残留的快速检测，可以满足水产品质检以及相关基础研究的要求.1实验部分1.1仪器与试剂Thermo TSQ Quantum液相色谱高分辨串联四级杆质谱联用仪（配用电喷雾离子ESI源）；旋转蒸发仪（瑞士布奇公司）；高速冷冻离心机（日本日立公司）；超声波清洗器（昆山超声波仪器厂）；精密电子天平（梅特勒—托利多称重设备系统XX公司）；微型漩涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）.标准储备液的配置：分别称取硝基呋喃类标准品各10.0 mg，用甲醇溶解后转移至100 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容配置成100 mg/L的标准储备液，在-18℃下避光保存.使用时将上述标准储备液混合，用甲醇稀释成0.5、1.0、5.0、10.0、25.0、50.0 mg/L不同浓度的标准工作液.内标储备液及使用液的配置：分别称取10.0 mg各内标标准品，用甲醇溶解并定容，配成100 mg/L的标准储备液，在-18 ℃下避光保存.准确吸取各内标储备液，用甲醇逐级稀释配成0.01 mg/L的混合内标使用液，在-18 ℃下避光保存.1.2色谱质谱条件采用电喷雾离子源（ESI）；喷雾电压：41 kV；离子传输毛细管温度：350 ℃；碰撞气氩气压力：0.1 Pa；鞘气流量：40 arb；辅助气流量：30 arb；扫描模式：多反应监测（SRM）；硝基呋喃类代谢物的母离子、子离子和碰撞能量见表2.1.3样品前处理称取2 g样品至于50 mL离心管中（精确至0.01 g），加入200 μL 0.01 mg/L的混合内标溶液，再加入5 mL 0.2 mol/L 盐酸溶液和0.2 mL 0.5 mol/L 2硝基苯甲醛溶液，在漩涡混合仪上充分混合1 min.置于恒温水浴振荡器中（37 ℃）避光振荡16 h，取出离心管冷至室温，加入5 mL 1.0 mol/L磷酸氢二钾溶液，调节pH至7.0～7.5，加入8 mL正己烷漩涡混匀后放入离心机离心10 min（6 000 r/min），分层后取下层水相待过柱，固相萃取柱（HLB，3 mL，60 mg）依次用3 mL甲醇，6 mL水活化，取备用液过柱，采用在大气压力下自然过柱.过完样品后，加入3 mL水淋洗并抽干.用4 mL乙酸乙酯分2次洗脱，洗脱液于40 ℃氮气吹干后，加入1.0 mL流动相溶解残渣，再加入2.0 mL正己烷放入离心机离心5 min（5 000 r/min），取下层液体过0.22 μm滤膜，滤液供液相色谱质联用仪测定.2结果与讨论2.1前处理条件的选择及优化考察了甲醇与2 mmol/L的乙酸铵溶液不同体积比例（5∶95、10∶90、15∶85、20∶80）的混合液作为流动相时对目标物分析的影响，综合考虑目标物的响应值和出峰的时间、峰形的尖锐性，本文选择2 mmol/L的乙酸铵溶液：甲醇（V∶V=80∶20）为本实验的最佳流动相.由于水产品成分比较复杂，基质中含有大量的脂肪、蛋白质、碳水化合物以及色素等杂质.本文比较了在调节pH后加入8 mL正己烷离心和加入流动相后再加入2 mL正己烷离心2种不同的净化方式，这2种方式去脂的效果均不错，溶液也较澄清，但是第二种净化方式，回收率较低，在60%以下，第一种净化方式的回收率满足试验要求.2.2固相萃取实验固相萃取是一种色谱分离的前处理方法，主要依靠固相萃取柱来进行净化，不同的基质选择不同材料的固相萃取柱，填料的类型决定了吸附能力的大小以及回收率的高低，本文比较了4种不同的固相萃取柱（C18 500 mg/3 mL，HLB 60 mg/3 mL，MCX 150 mg/6 mL，AluminaN 60 mg/ 3 mL）对硝基呋喃类代谢物的净化效果，其回收率的结果见图1，本实验选用HLB柱作为硝基呋喃类代谢物的固相萃取柱，回收率均满足要求.固相萃取过程中的洗脱液一般选择甲醇、乙腈或者乙酸乙酯，本实验采用乙酸乙酯作为洗脱液，得到良好的洗脱效果.洗脱方式主要考察了一次4 mL、4 mL分2次以及9 mL分3次的3种洗脱方式，从实验结果（表3）来看，当用4 mL乙酸乙酯溶液进行洗脱时，目标物洗脱不完全，还有部分目标物在组合SPE 柱上没有被洗脱下来；当用分2次洗脱时（2×2.0 mL），目标物被完全洗脱，回收率良好；当用洗脱液分3次洗脱时（3×3.0 mL），回收率与2次洗脱淋洗时差不多，因此本实验选择操作简单、节约试剂的2×2.0 mL分2次洗脱的方式.2.3色谱条件的选择及优化流动相的pH值会影响目标物在色谱柱中的分离.本实验考虑采用挥发性电解质乙酸铵来做为流动相，同时加入0.1%甲酸控制流动相pH值，采用合适的梯度洗脱程序，不但很好地实现了各种目标物的分离，并且得到了比较理想的色谱峰，峰形尖锐且对称性好，增大了分子离子峰的峰强度.在8 min内，各种硝基呋喃类代谢物均得到了较好的分离.色谱图见图2.2.4质谱条件的选择及优化根据硝基呋喃类代谢物的结构特征，采用ESI正离子电离模式，以流动注射泵连续进样对1.0 mg/L的标液进行Q1全扫描，扫描范围为200～400 m/z之间，得到每种组份的分子离子，分别向其分子离子施以碰撞能量形成子离子，接着进行子离子全扫描，找出丰度最强的碎片离子为定量离子，丰度次强的碎片离子为定性离子.同时优化锥孔电压、碰撞能量、鞘气与辅助气流量等质谱条件，使母离子和子离子组成的特征离子的丰度和比例达到最佳.得到1.2中最佳质谱条件.2.5线性范围和灵敏度配置0.5、1.0、5.0、20.0、50.0 μg/L的系列标准工作溶液，采用内标法定量，以待测物的质量浓度X（μg/L）为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值Y为纵坐标制作标准曲线，得到硝基呋喃类代谢物的回归方程和相关系数（见表2）.由表2可知，硝基呋喃类代谢物在0.5～50.0 μg/L在范围内其标准曲线的线性关系良好，相关性系数R2在0.997以上.在方法规定的取样质量条件下，在阴性样品中添加2种混合标准溶液（添加水平为0.25 μg/kg）经测定信噪比（S/N）均大于3，表明这4种物质的检测下限（LOD）为0.25 μg/kg，在阴性样品中添加2种混合标准溶液（添加水平为0.5 μg/kg）经测定信噪比（S/N）均大于10，表明其定量下限（LOQ）可为0.5 μg/kg.2.6回收率与精密度向草鱼、中华鳖和对虾阴性样品中分别添加5、20、100 ng/g 3个水平的添加实验，每个添加水平进行3次实验，每次平行测定6次，按1.2节所述条件进行加标回收率实验，所得结果为回收率为68.6%～106.2%，相对标准偏差为1.2%～10.3%，符合国内外有关标准和法规的要求，结果见表4.3小结通过对前处理条件、色谱条件以及质谱条件的优化，建立了水产品中硝基呋喃类代谢物残留的检测方法.结果表明，该方法在0.5～50.0 μg/L范围内，硝基呋喃类代谢物检测下限（LOD）为0.25 μg/kg，其定量下限（LOQ）可为0.5 μg/kg；在3个不同的添加水平下，其回收率为68.6%～106.2%，相对标准偏差为12%～10.3%.本方法前处理步骤简单、回收率稳定、精密度好，满足我国以及欧盟等国家的限量要求，可以作为水产品中硝基呋喃类代谢物的检测方法，并可为该类药物在水产品中的消除规律及毒理评价提供灵敏、准确的分析手段，对水产品中硝基呋喃类代谢物的溯源和卫生监督提供了技术支撑.。

高效液相色谱-质谱法检测水产品中硝基呋喃及其代谢物的研究

多数国家已将其列为禁用药物，水产品中硝基呋喃类药物的再加入 50 μL 混合内标溶液（100 ng/mL）、10 mL 盐酸
检测方法也很多，但因液相色谱 - 串联质谱法能够充分发（0.2 mol/L）、300 μL 的 2- 硝基苯甲醛溶液（0.05 mol/L），
挥超高效液相色谱的高分离度、高速以及串联质谱的高特异涡旋混匀 1 min，置于避光、37 ℃空气摇床中衍生 16 h。取性和高灵敏度的作用，在水产品检测硝基呋喃时尤为常用 [5]。出样品，加入约 5 mL 磷酸氢二钾，调节 pH 值 7.0 ～ 7.5，
三重四级杆液相色谱质谱联用仪 API 4000+（AB SCIEX 涡旋溶解，加入 3 mL 乙腈饱和的正己烷两次液液分配，
公司）；超高效液相色谱仪 LC-30A（日本岛津公司）；pH 去除脂肪，下层水相过 0.22 μm 滤膜后装瓶。另取阴性草
计（美国奥豪斯上海公司）；空气摇床（上海喆图科学仪器）；鱼肉样，分别加入硝基呋喃类标准品，使添加浓度分别为
本试验采用内标法定量，回收率较高且结果稳定，适用于实加入 10 mL 乙酸乙酯，涡旋振荡提取 5 min，9 000 r/min 离
验室批量处理水产品硝基呋喃类代谢物的检测。
心 5 min，提取全部上清液置于无刻度试管中，再加入 10 mL
1 材料与方法 1.1 仪器与设备
乙酸乙酯重复一遍，合并上清液于 40 ℃下氮气吹干。往吹干的试管中加入 1.0 mL 的 0.1% 甲酸水溶液 + 乙腈（9 ∶ 1），
关键词：水产品；硝基呋喃类代谢物；超高压液相色谱 - 串联质谱
自从 1944 年 M.C.Dodd 和 W.B.Stillman 发现 5- 硝基呋酸（分析纯）。喃衍生物有抑菌作用后 [1]，大量的硝基呋喃类药物被合成并 1.3 试验方法

南美白对虾体内硝基呋喃代谢物药残来源与消除规律的研究

中国首届渔药研制与规范使用专题学术大会暨中国水产学会渔药行业协作网成立大会论文(摘要)集南美白对虾体内硝基呋喃代谢物药残来源与消除规律的研究丁雪燕张海琪薛辉利何中央何丰黄福勇(浙江省水产技术推广总站，浙江杭州310012)摘要：应用液相色谱一串联质谱技术(HPLC．MS／MS)，对硝基呋喃代谢产物在南美白对虾体内残留的主要来源、残留部位、药代特征、消除规律进行了研究。

结果表明：南美白对虾体内硝基呋喃代谢物残留主要来自苗种期不规范用药；在水温204-2℃条件下，连续5天按30mg／kg．d投喂药饵，呋喃唑酮代谢物在虾体内的血淋巴、肝胰腺和肌肉组织中运转过程方程分别为：C血液--414．107x一舰，+124．45l×一舯卯，C肝胰奠=1625．563xe加。

019％125．700，C肌内=120．434xe旬’019％71．579x一肿¨，符合二室模型，吸收半衰期tu2a分别为：36．206h、36．484h、7．497h，消除半衰期t】／2B分别为132．525 h(6d)、1000479．217h(41686d)和505．637 h(22d)，说明硝硝基呋喃代谢物在虾体内消除缓慢，残留严重：药物残留浓度C 全虾>C去头虾>C肌内，给药20d后肝胰腺、肌肉、血淋巴中药物浓度比值分别为11．6：4．13：l，以肝胰腺残留最为显著；苗种期用药养殖2个月左右能达到安全范围，养殖期用药可能导致肝胰腺内永久残留，且熟化处理不能改变残留量。

建议苗种期用药至少养殖2个月后上市，养殖期用药至少休药45天以上且加工成去除头部的产品。

关键词：南美白对虾，硝基呋喃代谢物，残留来源，消除规律Study on the Residual Sources and Eliminative Rules of Nitrofuran Metabolites in Litopenaeus vannamei BooneAbstract：Main r es i du al s our ces，targ et s i te s，p h a r m a co k i n et i c s ch ar act er is ti cs a nd el i m in a t iv e ru le s of ni t ro f u ra n s metabolites，whic h effects th e s hri mp expo rt seriously,were st u d ie d by u s i ng APl3000high-performance l iqu id chromatography-tandem mass spectrometry．The results in d i ca t ed thaL th e ma i n re s id u al s o u r c e of me t a b ol i t e s o f ni t ro f u ra n s in Lit ope nae us v an na m eiB oo n e Was miusing during the larv e c u lt u r e．A ft e r multiple orall y administration at dose of30mg．kg叫we igh t b od y p e r d a y fo r fiv e days at(20-a：2)。

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