肺炎链球菌的分离和鉴定PPT

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肺炎链球菌的分离和鉴定

血琼脂培养基
将样本接种在含有血液和琼脂的培养基上，适宜的温度下培养，观察是否有肺炎链球菌的生长。
分离步骤
增菌
将采集的样本在适宜的温度和环境下进行增菌培养，使细菌增殖。
纯化
对单个菌落进行纯化培养，确保分离得到的菌株为纯培养物。
ABCD
分离
将增菌后的样本划线接种在选择性培养基上，使肺炎链球菌在培养基上形成单个菌落。
需要加强临床医生和微生物实验室之间的合作，提高肺炎链球菌的早期诊断和治疗效果。
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鉴定
通过形态学观察、生化试验和分子生物学方法对纯化的菌株进行鉴定，确认为肺炎链球菌。
04
鉴定方法
形态学鉴定
总结词
通过观察细菌的形态、染色特性及排列方式，初步判断是否为肺炎链球菌。
详细描述
在显微镜下观察细菌的形态，肺炎链球菌通常呈双排列或四排列，呈革兰氏阳性染色。
生化鉴定
要点一
总结词
通过细菌的生化反应来进一步确定是否为肺炎链球菌。
鉴定准确性
分子生物学鉴定和血清型鉴定的结果一致，表明实验鉴定方法的准确性较高。
临床意义
了解分离菌株的血清型和抗生素敏感性，对于指导临床合理用药、控制感染和预防疾病传播具有重要意义。
06
结论与展望
研究结论
01
肺炎链球菌是引起肺炎的重要病原菌，具有多重耐药性，给临床治疗带来挑战。
02
分离和鉴定肺炎链球菌的方法不断改进，包括传统的培养法、免疫学方法和分子生物学方法等。
详细描述
肺炎链球菌是一种需氧或兼性厌氧的细菌，在培养基中生长迅速。在血琼脂平板上，肺炎链球菌形成中等大小、灰白色、半透明、圆形、凸起的菌落，表面光滑，周围有明显

小儿肺炎链球菌肺炎诊断与治疗PPT

05 注意事项
治疗过程中的注意事项
及时就医：出现症状后应及时就医，避免延误治疗时机遵医嘱用药：严格按照医生处方用药，不得擅自增减药量或停药保持呼吸道通畅：保持呼吸道通畅，避免痰液阻塞气道饮食调理：注意饮食调理，多吃清淡易消化的食物，避免刺激性食物休息与活动：保证充足的休息，适当进行活动，增强体质定期复查：定期复查，了解病情变化，调整治疗方案
呼吸困难等
肺炎链球菌肺炎的治疗包括抗生素治疗、
支持治疗等
肺炎链球菌肺炎的发病机制
病原体：肺炎链球菌
传播途径：呼吸道传播
感染部位：肺部
发病过程：细菌侵入肺部，引起炎症反应，导致肺炎
肺炎链球菌肺炎的症状表现
发热：体温升高，可达39℃ 以上
咳嗽：干咳或伴有痰液，痰液可能呈黄色或绿色
预防性治疗
抗生素：使用抗生素进行预防性治疗，如青霉素、头孢菌素等
免疫接种：接种肺炎链球菌疫苗，提高免疫力
保持卫生：保持良好的个人卫生习惯，避免接触感染源
加强营养：加强营养，提高身体抵抗力
04 预防措施
疫苗接种
接种时间：出生后2-3个月接种次数：共需接种4次接种方式：肌肉注射疫苗类型：肺炎链球菌疫苗
预防复发和并发症的注意事项
保持良好的生活习惯，如饮食、睡眠、运动等
避免接触感染源，如避免接触呼吸道感染患者
定期复查，及时发现并治疗并发症
遵医嘱用药，避免擅自停药或减量
感谢您的观看
汇报人：
提高免疫力
均衡饮食：保证营养均衡，多吃蔬菜水果
适量运动：增强体质，提高免疫力
充足睡眠：保证充足的睡眠时间，有助于提高免疫力

临床微生物学肺炎链球菌检验PPT课件

由各种典型特性建立的方法来进行的抓特性、去共性
（３）注意新动向。
68
第一篇微生物学
细菌学总论
69
一、细菌(bacterium)的形态与结构
（一）形态：个体微小、形态各异
球菌（coccus）杆菌 (Bacillus) 弧菌与弯曲菌螺旋菌及螺旋体不规则形。
70
（二）结构：
2. 所致疾病
存在于正常人上呼吸道。仅在人体抵抗力下降时才引起疾
病。如大叶性肺炎，支气管炎等。
17
三、微生物学检验
(一) 标本采集痰、脓液、血液等。
18
(二) 检验方法及鉴定
1. 直接涂片革兰氏色染色，荚膜染色
19
2. 分离培养。 ① 胆汁溶菌试验。 ② 菊糖发酵。 ③ Optochin试验。
致病性球菌
葡萄球菌属金黄色葡萄球菌
表皮葡萄球菌
链球菌属链球菌
肺炎链球菌
奈瑟菌属脑膜炎奈瑟菌
淋病奈瑟菌
1
肺炎链球菌 (S.pneumoniae)
属链球菌科，链球菌属。广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。
2
一、生物学性状
1．形态结构 2．培养特性 3．生化反应 4．抗原结构 5．抵抗力特点 6剂不合
标准 C、细菌毒力发生了变异
D、采标本时间过早
14
二、致病性 1．致病物质 2．所致疾病
15
1. 致病物质
荚膜：肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。
溶血毒素“O”：自溶后释放，能溶解人和动物的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。
16
血平板：半透明，灰褐色，圆形，湿润光滑露滴样菌落。
易自溶。

肺炎链球菌的分离和鉴定

❖ 也有例外，我们在实际工作中检出过耐optochin 的肺炎链球菌，并发现大多数的缓症链球菌和部分口腔链球菌对optochin的抑菌环直径>=14mm 。应注意鉴别。
❖ 但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（Oxacillin,OX ）是敏感的(除外PRP)，而缓症链球菌和口腔链球菌对OX耐药。这可作为辅助鉴别点。
肺炎链球菌的分离和鉴定
概述
肺炎链球菌（S.pneumoniae），俗称肺炎球菌（pneumococcus）。经常寄居于正常人的鼻咽腔中，一般不致病，只形成带菌状态。当机体免疫力下降时才致病。尤其在呼吸道病毒感染后或婴幼儿、老年体弱者易发生肺炎链球菌性肺部感染。
肺炎链球菌不产生外毒素，主要靠荚膜侵袭力致病。肺炎链球菌主要引起人类大叶性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、脓胸，也可引起中耳炎、乳突炎、副鼻窦炎、支气管炎、心内膜炎、腹膜炎、关节炎、脑膜炎和败血症等。
3. 胆汁溶菌试验
自溶酶是一种L-丙氨酸--N-乙酰胞壁酰胺酶，能切断肽聚糖上L-丙氨酸与N-乙酰胞壁酸间的连接键，从而破坏细胞壁，使菌溶解。
自溶酶在菌生长的稳定期被激活，也可被胆汁或胆盐等活性物质激活，从而促进培养物中的菌体溶解。肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳性，甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性。
肺炎链球菌鉴定要点
❖ 革兰阳性双球菌，矛头状，不呈链；
❖ 血平皿菌落呈草绿溶血，湿润，菌落表面无小白点；
❖ 培养时间长出现脐窝状； ❖ 胆汁溶解试验阳性； ❖ 荚膜肿胀试验阳性； ❖ 乳胶单克隆抗体凝集阳性。
谢谢！！！
（1）试管法:

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2. 培养特点
（1）培养基
肺炎链球菌对营养要求较高，需采用质量好的哥伦比亚血液平板（ 5％马血或羊血）。
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（2）分离培养
1）标本处理
及时将采集标本接种到适当的培养基上是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离开机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率十分低，不及时接种适当培养基是导致分离率低的主要原因。
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4.肺炎链球菌感染的治疗
青霉素G敏感均可直接用青霉素G进行治疗; 青霉素G中度耐药株可用大剂量青霉素G进
行治疗；如重度耐药可选用三代头孢菌素加万古霉
素或利福平进行治疗。
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总结
1. 肺炎链球菌寄居于人的上呼吸道中，是条件致病菌；
2.肺炎链球菌对营养要求较高，在含有新鲜血液的培养基中生长良好；
敏感溶菌七叶苷肉汤酮酶
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肺炎链球菌
+ +— —
—
—
——
牛链球菌
— —+
—
—
—
—D
无乳链球菌
— ——
d
—
—
+
B
草绿色链球菌 — — — —
—
—
——
营养变异链球菌 — — — —
+
+
——
————————————————————————————————————
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也有例外，我们在实际工作中检出过耐optochin 的肺炎链球菌，并发现大多数的缓症链球菌和部分口腔链球菌对optochin的抑菌环直径>=14mm。应注意鉴别。
但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（Oxacillin, 菌对OX耐药。这可作为辅助鉴别点。
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（1）试管法:
取新鲜培养物分装于两支试管内（每支 1ml），其中一支加入10%的去氧胆酸钠溶液 0.1ml或纯牛胆汁0.2ml，另一支加入无菌盐水两滴（对照），15min后，阳性者细菌被溶解，试管内液体呈透明状，阴性者无变化。
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（2）平皿法:
加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链球菌作阳性对照。
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4.乳胶凝集试验
结果准确、快速、特异性高。
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5. 荚膜肿胀试验
取一滴抗血清与一滴菌悬液混匀，加少量
美蓝液混合后加盖片，室温10~20min后，用油
镜检查，如查到菌体呈兰色，周围绕有界限明
显未染色的膨大空白圈为阳性。可用于肺炎链
球菌的分型。
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6. 凝集试验
包括血清凝集试验、SPA（葡萄球菌蛋白
A）协同凝集试验、反向乳胶凝集试验等方法。
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表1 非β溶血链球菌的鉴别
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菌种
Optochin 胆汁胆汁 6.5%NaCl 吡咯烷卫星现象 CAMP 血清群
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3.抗原结构
（1）种属特异性抗原：为菌体多糖抗原，存在于肺炎链球菌的细胞壁。
（2）型特异性抗原：是存在于肺炎链球菌荚膜中的一种多糖多聚体，可溶于水，据此抗原可将肺炎链球菌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……等个型，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型致病性最强。
3.以optochin 试验和胆汁溶菌试验将肺炎链球菌与其他－溶血链球菌相区别；
4. 血清学鉴定特异性高； 5. 要注意对PRP和MDR的检测。
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谢谢！！！
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细菌学检验不仅对疾病的病原学诊断有重要价值，同时对临床治疗的药物选择也具有十分重要意义。
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一、生物学性状
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1. 形态与染色
肺炎链球菌革兰染色呈阳性。球形或矛头状，成双排列，少呈链状。在组织中可形成荚膜（人工培养荚膜逐渐消失），无鞭毛及芽孢。
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肺炎链球菌鉴定要点
革兰阳性双球菌，矛头状，不呈链；血平皿菌落呈草绿溶血，湿润，菌
落表面无小白点；培养时间长出现脐窝状；胆汁溶解试验阳性；荚膜肿胀试验阳性；乳胶单克隆抗体凝集阳性。
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2）选择性分离培养基
培养基中添加5μg/ml庆大霉素有利于肺炎链球菌的分离。
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3）培养环境 5～10％CO2、35℃培养24～48h。
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（3）肺炎链球菌的菌落形态在营养丰富的培养基上，肺炎链球菌形
成扁平、中间有凹陷的典型菌落，少数菌可呈粘液型菌落。
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1. 溶血性检查
肺炎链球菌在厌氧或二氧化碳环境中溶血能力大大加强，草绿色溶血环很大，可与其他草绿色链球菌相区别。
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2. Optochin(OP，奥普托欣)敏感试验
该药对肺炎链球菌的作用机制是干扰其叶酸的合成。
optochin敏感试验方法是药敏试验。挑取被检菌，密涂于血平板上，贴上含 5气μ中g（/片或的烛op缸to）chi，n纸35片℃，孵置育5过~1夜0%。C抑O菌2的环大直径>=14mm为敏感，推断为肺炎链球菌。抑菌环直径<14mm时参照胆汁溶菌试验。肺炎链球菌的抑制圈直径常在20mm以上，甲型溶血性链球菌（约98%）小于12mm。
肺炎链球菌的分离和鉴定
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概述
肺炎链球菌（S.pneumoniae），俗称肺炎球菌（pneumococcus）。经常寄居于正常人的鼻咽腔中，一般不致病，只形成带菌状态。当机体免疫力下降时才致病。尤其在呼吸道病毒感染后或婴幼儿、老年体弱者易发生肺炎链球菌性肺部感染。
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肺炎链球菌不产生外毒素，主要靠荚膜侵袭力致病。肺炎链球菌主要引起人类大叶性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、脓胸，也可引起中耳炎、乳突炎、副鼻窦炎、支气管炎、心内膜炎、腹膜炎、关节炎、脑膜炎和败血症等。
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3. 胆汁溶菌试验
自溶酶是一种L-丙氨酸--N-乙酰胞壁酰胺酶，能切断肽聚糖上L-丙氨酸与N-乙酰胞壁酸间的连接键，从而破坏细胞壁，使菌溶解。
自溶酶在菌生长的稳定期被激活，也可被胆汁或胆盐等活性物质激活，从而促进培养物中的菌体溶解。肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳性，甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性。
（3）菌体核蛋白抗原：存在于菌体深部，为蛋白质，无特异性。
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二、肺炎链球菌鉴定
肺炎链球菌的鉴定，主要应与甲型溶血性链球菌鉴别。其中以胆汁溶菌试验、菊糖发酵和optochin试验最为常用。必要时可作荚膜肿胀试验或小鼠毒力试验加以鉴别。在上述试验中，肺炎链球菌均应阳性，而甲型溶血性链球菌为阴性。也可用特异性单克隆乳胶或自动化仪器等相应鉴定卡作鉴定。
*d.不同菌株
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三、肺炎链球菌的药敏试验
K-B法：采用Mueller-Hinton琼脂＋5％羊血培养基。直接菌落悬液法(0.5麦氏单位菌液，在15分钟内接种完)作为接种液。
稀释法：包括琼脂稀释法、肉汤稀释法和 Etest法。
培养条件：为35℃ 、5％CO2培养20～24小时。质控菌株ATCC 49619。