微生物标本采集及处理

血培养 Blood Culture
微生物实验室的一项重要功能是诊断血液系统感染 （blood stream infections, BSIs）。大多数引起BSIs的病原菌应常规血 培养48 h检出，少数病原菌培养时间超过5 d，这些病原菌培养常需要复 杂的营养环境，如嗜血菌属、心杆菌属、艾肯菌属、金氏杆菌属和布鲁杆 菌等。 常规培养可检测多数引起心内膜炎感染的病菌，但巴尔通体属和考 克斯体属常规培养多为阴性，需要血清学或分子生物学辅助诊断。 在少 数培养为阴性的感染者中，对有价值的标本进行分子生物学检测（包括 16S-RNA和DNA测序）有助于诊断。
尿液标本 采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外生
殖器，然后用清水冲洗
长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。
做厌氧培养时应耻骨上膀胱穿刺采集尿。
如不能及时送检，需冷藏（冷藏保存的标本 不能用于淋病奈瑟菌培养）。 4小时延迟送检，须废弃标本。
评价尿培养的标准
病人 无症状者 标本特征 清洁留取 有意义菌落形成单位/ml（非皮肤污染） 100,000


标本应在抗生素使用前采集，以避免因抗生素 使用造成的假阴性结果。 药敏试验应针对临床典型分离株，不必对所有 培养获得的微生物进行药敏试验。 应避免“背景干扰”，躯体很多部位的正常寄 生菌群很容易污染标本，下呼吸道标本（痰）、 副鼻窦、暴露伤口等标本的采集应特别小心。 微生物实验室报告结果应准确并与临床密切相 关，具有临床价值。
采集方法
自然排便采集标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部分的 粪便1-3g。液体粪便择取絮状物，1-3ml，直接装入无菌、 带盖、广口的培养杯中送检，送检的标本中不能加入防腐 剂。 不易获得粪便患者及幼儿：用直肠拭子采集后置保存液 或输送培养基中送检。
呼吸道标本 Respiratory Cultures
咽拭子运送培养基
可以运送需氧、厌氧、苛养菌 4℃或RT 24或48小时
鼻拭子
深部鼻拭子一般与咽拭子的信息等值。 相对于诊断深部感染，鼻拭子更适用于侦测
健康携带者。
深部鼻拭子可用于诊断化脓链球菌和白喉棒
状杆菌感染，或金黄色葡萄球菌与化脓性链球 菌暴发感染时调查用。
痰液标本
采集时间：用抗生素前，采集标本以清晨为佳，采集前应
先用冷开水充分漱口，以免口腔正常菌群污染标本。
采集方法：
自然咳痰：必须用清水漱口3次，应包括咽喉部，立即用力 咳出痰，于灭菌容器或输送培养基中。 支气管镜或支气管毛刷 : 由医生采集，建议直接种入输送 培养基。 对于痰量少或无痰的患者可进行诱导咳痰，及采用雾化 吸入加温至45°C的100g/LNaCl溶液，使痰液易于排出。
许多不着色的有折射的杆状 细菌 可能是肺结核，抗酸杆菌不能被革兰氏染色 所染色。
尿培养标本 Urine Culture
用于尿液培养的标本
肾活检或肾抽吸物（外科） 耻骨上膀胱抽吸物（孕妇，婴儿，全膀胱）
微导管尿（内部导管和外部导管）-老年人
中段尿，清洁留取——急诊成年人 留置导尿管中采集的标本（经常被三种以上细菌污染）
拭子标本采集后应立即送检，室温 运送时间小于2小时，如果不能立即接 种，必须装在无菌运送培养基中，避免 由于干燥而使某些细菌死亡。检测淋病 奈瑟菌或脑膜炎奈瑟菌的拭子应放人含 碳的转运培养基，采集后2小时内接种 平板，以防细菌死亡。
下呼吸道标本
Lower Respiratory Tract Specimen
尿常规结果 WBC － PRO － WBC >+ PRO >+ WBC >+ PRO >+
尿培养结果 计数 < 105 计数 < 105
可能原因 无泌尿系统感染 重复送检，检查取样和保存条件 是否符合要求，通知实验室为重 复检查。 预示患者泌尿系统感染。按药敏 结果选择性用药。
计数 > 105 培养出一种致病菌
微生物结果的影响因素
针对性的检验申请
病人准备 标本的采取 标本的运输 标本的保存和处理
标本检验 分析中 分析前
结果审核和批准
危急值报告
分析后
研究显示，影响检验结果准确性的因素 中检验前标本质量好坏约占70%。
临床微生物学检测结果须要综合分析和解读， 为临床提供指导，包括检测前标本质量、微生 物代谢、生长和死亡、宿主的反应及抗生素的 影响等。 检测前标本质量包括标本的采集、 运输、储存和处理，其直接影响实验室检测结 果的准确性，也关系到患者的诊断、治疗、预 后乃至医院感染控制，可导致患者住院时间延 长、费用增加及实验室诊断错误。
血培养阳性瓶数量对判断血培养污染的价值：
心内膜炎或血流感染患者所有或大部分血培养瓶为阳 性，相反，血培养污染经常只有一瓶为阳性，这是血 培养操作指南 中推荐血培养应两套四瓶（双瓶双侧） 的一个重要原因。可以用以下公式解释两份以上血培 养的临床价值：如果一所医院血培养的污染率为3%， 则某患者两个血培 养（不同部位采血）均为阳性且污 染同一种细菌的可能性为0.09%（3% X 3%）。
有症状者
有症状,女性 有症状,男性 任何人 任何人 任何人 任何人 任何人
清洁留取
清洁留取 清洁留取 内置导尿管 通过直接导管获得 外科手术从肾脏获得 经皮穿刺膀胱吸取 任意标本
10,000 1-2种机会致病菌。若多于2种则认为尿 液被污染
100个纯菌落肠杆菌科菌 1000个，机会致病菌 100,000任意数量机会致病菌 100任意数量机会致病菌 任意数量（肉汤增菌，厌氧菌） 任意数量（肉汤增菌，厌氧菌） 任何数量金黄色葡萄球菌
但就目前来说，判断血培养污染的金标准并不 存在，比如凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）既是最 常见的污染菌，也是现在常见的菌血症病原菌 之一，其临床意义的判 定仍是一个世界性难题， 需要临床医生和实验室人员相互沟通，综合分 析。血培养污染的鉴别主要依靠以下几个方面： 微生物鉴定、阳性检出时间、重复培养结果以 及临床特征等。



拒收不符合实验要求的标本，微生物学工作者 应准确、负责地向临床科室阐明和解释标本拒 收条款和正确采集方法。 临床医师不应要求微生物报告包罗万象，因为 提供不相干的信息可能导致不准确或不恰当的 治疗。 标本信息应准确、完整，以便于准确地进行临 床解释，包括详尽的采集部位和临床信息


实验室必须严格依照既定的标准操作手册并接 受法律监督。 实验室应建立技术规范，这种规范并不是狭义 地单纯为实验人员设立权限，而是建立更好的 相互交流与尊重，以及良好的协作关系。 实验室需要的标本多样，体液、组织及提取物 是外伤等微生物学常需采集的标本；而拭子一 般用于鼻、咽部和病毒性呼吸道感染标本的采 集。
保存。
采集另外一个血培养标本，以帮助阳性结果判 读。
血培养的运送
采集后血培养瓶应立即送往实验室（2小时内） 接种前后的血培养瓶不得冷藏或冷冻。 任何延误送入自动连续监测血培养仪的行为将 会延误或阻止细菌生长的检测； 血培养瓶保留在室温不得超过数小时；
血培养污染
污染导致的血培养假阳性是一个较为普遍的问 题，即使采用最好的血培养标本采集方法也很 难将污染率降至2%以下。血培养假阳性结果将 导致不必要的抗生素治 疗，延长住院时间，增 加患者负担和细菌耐药性的选择性压力。准确 辨别污染能极大减少相应的花费，并有利于降 低以后的污染率。
标本质量
脓痰
粘液样痰
唾液or诱导痰
带血痰
用革兰氏染色来评估呼吸道标本是否 合格
痰标本>10鳞状上皮细胞/每低倍视野 =拒收
呼吸道标本的涂片评估模式
肺炎-可接受的
很少的鳞状上皮细胞 <10个每低倍视野 很多的中性粒细胞
不合格标本
许多鳞状上皮 >10个/低倍视野 很少有或没有中性粒细 胞 免疫抑制的病人也会出 现中性粒细胞减少
采集时间
根据研究表明细菌通常在寒战和发烧前1小时入血 考虑到可操作性，血培养标本应同时采集或在尽量短的间隔期内采
集。
间隔式采血法仅适用于确诊持续性菌血症
如：细菌性心内膜炎或其他脉管内感染
虽然血培养阳性率与体温变化看上去相关性不大， 但临床仍应遵从“（下一次）用药前”或“停药24 小时后”采血！
WBC >+ PRO >+
WBC <++*/－ PRO －
计数 > 105 培养出大于两种致病菌
计数 > 105 培养出大于两种致病菌
患者泌尿系统可能感染，但标本 可能被污染，应重复送检。
标本污染
粪便标本
采集时间 腹泻患者应在用药前、急性期采集； 沙门菌感染、肠热症应在2周内采； 厌氧菌出现症状即采集。
微生物标本采集及处理
临床微生物学在近20年取得了全面进步，向 着自动化、基因组学、蛋白质组学技术快速发 展并在临床诊治中发挥着重要作用。 临床实 践中标本采集质量在微生物学检测中的意义越 来越重要，合格的标本是获得准确检验结果的 先决条件，检测前标本的留取和运输环节的质 量控制是实验室和临床之间良好的沟通和衔接 的关键。
许多或中等量的中性粒细胞， 酵母菌样，酵母菌是一 成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌 种很少引起肺炎的细菌， 革兰氏阳性菌成群排列=金黄色葡萄球菌 以一种形态的细菌为主 常由口腔污染 革兰氏阴性球杆菌（小）=流感嗜血杆菌 革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或 其他肠道菌 革兰氏阴性双球菌=卡他莫拉菌
评述
可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明 在采集时受到了上呼吸道分泌物的污染或口 水的污染。 中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培 养
很多中性粒细胞混合有形态 多样的细菌（革兰氏阴性杆 菌，纺锤形，革兰氏阳性球 菌）
吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培 养只会培养出正常菌群，所以革兰氏染色是 用于诊断的方法。
微生物菌种鉴定对判断血培养污染的价值： 当分离出的微生物为金黄色葡萄球菌、肺炎克 雷伯菌、大肠埃希菌以及其他肠杆菌科细菌、 铜绿假单胞菌、白色假丝酵母 菌时，90%以上 是血流感染病原菌。分离出化脓性链球菌、无 乳链球菌、产单核李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、 淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌、脆弱拟杆菌、其 它假丝酵 母菌和新型隐球菌时污染的可能性更 低。相反，棒状杆菌、微球菌、气球菌、芽胞 杆菌、丙酸杆菌、草绿色链球菌和凝固酶阴性 葡萄球菌等很少是菌血症的病原菌。
成年患者：推荐的采血量为每套不少于10ml，每
瓶 不少于5ml；
婴幼儿患者：推荐的采血量，每瓶不少于2ml。
备注：如果实验室收到采血量不足的标本仍需进 行培养，则需在报告单上注明：“送检血液标本 量未达到要求，会影响结果的灵敏度”。
血培养的采集
从静脉取血； 不宜从静脉导管或静脉留置口取血； 如必须从留置导管内采血，应同时从外周静脉 不主张换针头入瓶 有血的培养瓶不可放入冰箱
血培养次数
怀疑菌血症的成人患者：采集2-3套血培养标本（不同
部位） 。
婴幼儿患者：采集2次血培养标本（不同部位） 除特殊情况外，在采取血培养后的2-5天内，无需重复
采取血培养。
可疑为持续性菌血症：如心内膜炎、导管相关血流感染，
间隔(1--24h)几次取血监测、捕捉、指导治疗。
采血量
运送要求



标本采集后尽快（小于2小时）送至实验室，不及时 运送可导致肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌由 于不适应外界环境和自溶现象而死亡。 延迟送检或待处理标本应置于4°C冰箱保存（疑肺 炎链球菌感染、流感嗜血杆菌等苛养菌感染标本不 能冷藏），以免杂菌生长，但保存标本应在24小时 内处理。 对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠 疫等）的患者检验标本，在采集、运输或保存过程 中必须注意生物安全防护！
自然咳痰 诱导痰 气管内吸取物 肺部组织
支气管肺泡灌洗液
支气管灌洗液
下呼吸道标本收集
所有病人的下呼吸道标本应在采集后立即送至
微生物室，并于1小时内接种 室温下放置 >1h 会降低肺炎链球菌、流感嗜血 杆菌的分离率而定植于上呼吸道的非致病菌则会 过度生长。
下呼吸道标本勿放冰箱或运输时勿置于冰块中
临床微生物实验室要获得准确的结果，须要 临床科室进行合理的标本选择和正确的标本采 集及运输；检验科应用适宜的检测方法，并进 行恰当的结果解释，为临床医生提供感染原因、 微生物病原种类和药物敏感性（药敏）结果； 同时须临床医生、护士和ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ生物实验室实验员 之间的密切配合。
标本处理 10原则
----《感染性疾病微生物学实验室诊断应用指南（2013年）》