体内药物分析技术的研究进展

体内药物分析技术的研究进展

发表时间：2011-08-30T15:01:25.343Z 来源：《中外健康文摘》2011年第19期供稿作者：乔忠王继平任景文

[导读] 体内药物分析是药物分析的重要分支，具有自身独特的理论体系。

乔忠王继平任景文（内蒙古北方重工集团医院药剂科 014030）

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）19-0199-03

【摘要】本文通过查阅近年来国内外有关体内药物分析理论的文献，结合个人的实践经验和认识，对其测定前样品的处理以及测定的基本程序等方面进行了综述。

【关键词】体内药物分析样品处理样品测定

体内药物分析是药物分析的重要分支，具有自身独特的理论体系。该理论是研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学，从而获得药物代谢动力学的各种参数、及代谢的方式、途径等信息，有助于药物的研究和临床合理应用[1]。

1 体内药物分析中的样品预处理

体内药物分析的样品成分复杂，被测组分含量低。因此，测定前样品需经过分离、纯化、富集、改变属性等处理后，方可进行测定。根据样品的种类、所用的测定手段、被测药物的种类及浓度等不同，预处理方法各异。

1.1 预处理的基本理论[2]

1.1.1 预处理的一般原则

体内药物分析中的样品预处理方法的选择，主要依据生物样品的类型、药物的结构及性质及测定方法的种类等。例如，血浆或血清需除蛋白，使药物从蛋白结合物中释出；唾液样品主要采用离心去除粘蛋白沉淀等。药物的酸碱性（PKa）与溶解性涉及到药物的萃取手段；药物在样品中的浓度相差悬殊，浓度大的样品对前处理要求稍低，浓度越低则样品前处理要求越高等。放射免疫测定法由于具有较高的灵敏度和专属性，生物样品只需经初步处理去除主要干扰物质后即可直接用于测定；而高效液相色谱法，为防止蛋白质等物质在色谱柱上沉积，上柱前需对生物样品进行去蛋白或进行溶剂萃取或制备衍生处理等。

1.1.2 预处理的基本方法

1.1.

2.1 蛋白质的去除

沉淀蛋白的方法有多种，依据沉淀试剂种类的不同，析出的蛋白质的形状亦不同，且所得上清液的pH值也稍有差别。例如，加入与水混溶的有机溶剂可使蛋白质分子内及分子间的氢键放生变化而使蛋白质凝聚；加入中性盐，使溶液的离子强度发生变化，蛋白质脱水而沉淀；加入强酸及含锌盐及铜盐的沉淀剂，使溶液的pH值异于蛋白质的等电点，蛋白质以不溶性盐形式析出；此外，测定一些与蛋白结合牢固或形成缀合物的药物时，常采用有机破坏、酶解、酸水解或酶水解等方法，使被测药物得以释出。

1.1.

2.2 样品的分离与纯化

萃取法是应用最多的分离、纯化方法，包括液—液萃取法（LLE）和液—固萃取法（LSE）。多数药物是亲脂性的，而生物样品中大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质。LLE基于该溶解行为的差异，药物能与多数内源性物质分离，适用于非专属性的波谱法分析；LSE 是规模缩小的柱色谱法，具有所需样品量少、不易引入杂质、萃取效率高等优点，尤其适用于处理挥发性及对热不稳定的药物。

1.1.

2.3 样品的浓集

样品分离纯化后，其微量的组分分布在较大体积的萃取溶剂中。因此，常需要使被测组分浓集后再测定。浓集的方法有两种：一是在末次萃取时加入的萃取液尽量少，使被测组分萃取到小体积溶剂中，然后直接吸出适量供测定；二是挥去萃取容积法。

1.1.

2.4 样品的化学衍生化

该处理可使样品中的药物转变成具有可被分离的性质，从而增强药物的稳定性，提高检测的灵敏度和对光学异构体分离的能力等。药物分子中含有活泼H者，如含—COOH、-OH、-NH2、-NH、-SH等官能团的药物都可被衍生化。

1.2 预处理的新技术

上述方法虽还在广泛使用，但它们存在离线处理、手动化、有毒试剂消耗量大及危害人体健康等特点。近年来，随着多种新技术新方法的采用，使得生物样品的处理技术向着低污染、低用量、高选择、高通量、自动化、在线化方向发展。

1.2.1 固相萃取技术(SPE)

SPE基本原理是基于样品在两相之间的分配差异,即在固相和液相之间的分配不同。新一代的聚合物吸附剂，如Waters的0asis HLB，不需活化，也不怕溶剂流干，简化了样品制备过程，而且有很宽的pH范围，能萃取亲水、疏水、酸性、碱性或中性组分，特别适用于血浆、尿液等生物样品的制备。

1.2.2 固相微萃取技术(SPME)

该技术基于气-固吸附、液-固吸附平衡的原理，利用待测物对活性固体表面有一定的吸附亲和力而达到分离富集的目的。王琦玮等[3]采用固相微萃取-气相色谱质谱法测定血浆中氯氮平的浓度，结果表明，该法灵敏度高、准确度好、操作简便；李弘韬等[4]采用甲基苯基乙烯基硅氧烷/羟基硅油复合涂层固相微萃取器，顶空萃取头孢匹胺钠中甲醇、乙醇、丙酮、乙腈和N，N一二甲基乙酰胺的残留量，避免了直接进样对色谱系统的污染。

1.2.3 微透析取样技术(MD)

MD以透析原理作为基础，通过测定透析液中待测物的浓度来研究组织中待测物水平，为一种动态连续的取样方法。应用该技术可以采集真皮组织间液样本，结合现代检测技术，如酶联免疫法、高效液相色谱法等，研究皮肤局部生理代谢或疾病发生发展规律以及药动学。

1.2.4 柱切换(CS)技术

柱切换高效液相色谱技术，就是利用多通路切换阀，改变进样阀与色谱柱、色谱柱与色谱柱、色谱柱与检测器之间的连接关系，通过改变流动相的走向，或改变流动相系统，使洗脱液在特定的时间从一级柱进入二级柱，达到样品的预净化、富集、分离等目的。季卫荣[5]应用柱切换高效液相色谱(HPLC)技术直接测定血浆中左氧氟沙星的浓度，直接进样分析测定，简便易行。秦永平等[6]采用CS-HPLC法测

定血浆中那格列奈的浓度，结果表明，该法具有快速简便，灵敏准确的特点。

1.2.5 浊点萃取法(CPE)

CPE为液-液萃取技术，以表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础，通过改变实验参数引发相分离，从而将目标化合物与基质分开。石志红等[7]采用CPE-HPLC检测尿中丹参酮类化合物，首次将该法应用于尿中待测化合物的提取；耿晓梅[8]利用CPE-UV测定硫酸阿米卡星，优化了浊点萃取条件，结果显示，该法可用于市售药物及人体尿液中硫酸阿米卡星含量的测定。

2 体内药物分析中的样品测定

2.1 分离

体内药物分析中的样品经预处理后，大多需要再分离。其主要以色谱技术为主，包括高效液相色谱(HPLC)、整体色谱、亲水型色谱(HILIC)，其次还有高效毛细管电泳(HPCE)、毛细管电泳(CE)等。

2.2 检测

2.2.1 光谱法

2.2.1.1 荧光分析法

荧光分析法是利用物质发射荧光的特性进行分析的光学分析法。肖艳[9]研究了在人血清白蛋白存在下，用一阶导数荧光光谱法同时直接测定卡维地洛和氨苄西林钠。利用该方法不仅消除了人血清白蛋白的背景干扰，而且使卡维地洛和氨苄西转钠的谱圈完全分开，达到了同时测定的目的。

2.2.1.2 紫外分光光度法

白小红等[10]利用紫外分光光度法测定柳氮磺胺吡啶及其代谢物磺胺吡啶浓度，以空白血浆作参比，表明该法精确；李静[11]利用该法测定血清中葡萄糖的含量，选择540.5nm作为测定波长，由标准曲线求出血清中葡萄糖的含量。

2.2.2 色谱法

随着色谱技术不断发展和完善, 在灵敏度和选择性等方面都有了很大提高,其中以高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）最常用。新型色谱技术有超临界流体色谱、手性色谱、胶体色谱、分子生物色谱(MBC)等。

2.2.3 色谱联用技术

液相色谱-核磁共振联用（LC—NMR）能一次性地完成从样品分离纯化到峰的检测、结构测定和定量分析。

液相色谱-质谱联用(LC—MS)集LC的高分离能力与MS的高灵敏度、高专属性于一体。杨蓓[31]首次采用了LC-MS法测定犬血浆中微量的阿扑吗啡。

气相色谱-质谱联用(GC—MS)具有灵敏度高、分析速度快、鉴别能强等特点，可同时完成待测组分的分离和鉴定，特别适用于多组分混合物中未知组分的定性定量分析，化合物的分子结构判别，化合物分子量测定。

2.2.4 免疫分析法

免疫分析法分为放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析法(EIA)、化学发光免疫分析 (CLEIA)、荧光免疫分析(FIA)等。适用于色谱法难以分析的药物，如蛋白质、多肽等分子量大的药物，免疫分析法一般可直接分析小样品的生物体液，样品不需制备。

3 展望

体内药物分析具有完善的理论体系和丰富的实践经验。随着样品处理和测定的方法、新技术不断增加，特别是各种新方法、新技术的联合使用，将会使体内样品预处理手段更加完善有力，并推动着体内药物分析的发展, 热切地希望体内药物分析会受到越来越多的关注与重视。同时，体内药物分析体内药分的研究工作了精准的数据和有关信息，为正确评价临床药学的有效性和安全性提供更有价值的参考。参考文献

[1] 汤建林,周世文．体内药物分析技术的研究现状及展望[J]．重庆医学，2008，37(8)：876-879.

[2] 李好枝．体内药物分析[M]．北京：中国医药科技出版社，2003.

[3] 王琦玮，莫耀南，周海梅，等．固相萃取一气相色谱质谱法测定血浆中的氯氮平浓度[J]．中国法医学杂志，2007，22(2)：100-103.

[4] 李弘韬，杨敏，万江陵，等．顶空固相微萃取一气相色谱法测定头孢匹胺钠中多种有机溶剂残留量[J]．药物分析杂志，2005，25(1)：37-40.

[5] 季卫荣．柱切换高效液相色谱法测定血浆左氧氟沙星浓度[J]．医药导报，2008，27(2) ：174-175.

[6] 秦永平，余勤，梁茂植，等．柱切换RP—HPLC测定血浆中那格列奈的浓度[J]．华西药杂志，2006，21(5) ：456-458.

[7] 石志红，何建涛，常文保．浊点萃取-高效液相色谱法检测尿中丹参酮类化合物[J] ．广西师范大学学报(自然科学版)，2003，21(3)：72-73.

[8] 耿晓梅．中药材有制剂中活成成分的新型萃取检测方法的研究[D]．河北：河北医科大学，2010.

[9] 肖艳．同步荧光分析法荧光分析法在药物分析中的研究与应用[D]．山东:山东师范大学，2005.

[10] 白小红，付永丽．分光光度法测定柳氮磺胺吡啶及其代谢物磺胺吡啶浓度[D]．山西医科大学学报，2003，34(3)：278-280.

[11] 李静．光分析法在测定肝素-辅酶A及血清葡萄糖中的应用[D]．成都：华西医科大学，2007.