冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片的制作方法 Microsoft Word 文档
冰冻切片的制作方法一、概述所谓冰冻法（Freezing method），就是先将组织块进行冰冻，水分成为包埋介质，组织块在一定温度和时间内变硬，然后使用切片机进行薄片切割的一种方法。
(一) 冰冻切片法分类一般冰冻切片机：用Co2气、液氮等，通过制冷的气体或液体冰冻组织块与切片刀，因受周围环境的影响，夏季不易操作。
半导体制冷切片机，通过半导体材料的制冷原理，使组织块和刀冷冻，并需要循环水降除半导体材料的高热，夏季不易操作。
恒冷箱式切片机，不受外界温度的影响，不需要循环水，四季都能切成非薄的切片，操作方便用时间短，用途广泛是目前最为理想的切片机。
（二）恒冷箱式切片机及切片法机器构造：（1）制冷室：有轮转式切片机，切片机的手轮在室的右外侧壁；组织托台放组织托用；速冰冷锤，是铸铁圆块，能迅速吸取组织中热量，起速冻作用。
（2）开关：电源开关；温度设定调节键；时钟键；除霜时间设定键；半导体速冻键；（按此健在十分钟里提高温度-4摄氏度）。
（3）切片机调节系统：有快慢进或退键，修整组织块时可快或慢进退机头。
组织接近刀刃时要慢进键，并不停的旋转手轮，组织修平后，松开进机头键开始切片。
恒冷箱式切片机最大的优点不受外界温度变化的影响，操作很方便，5¡ª10分钟内可切出满意的薄片，是外科病理快速诊断；酶化学的新鲜组织切片；组织化学脂质染色；免疫组化，特别是免疫荧光等技术开展必备的仪器。
（三）冷冻切片需要温度及时间在零下15——20摄氏度之间，大部分组织均能切出良好的切片。
各器官组织切片的最适温度及时间见下表：各器官组织冷冻切片的最适温度及时间表组织温度时间新鲜固定后皮肤及脂肪-26摄氏度-28摄氏度3~5min 5~8min胃肠、食管、膀胱-18摄氏度-20摄氏度3~5min 5~6min子宫、卵巢-20摄氏度-22摄氏度3~4min 4~5min腮腺、肌肉-17摄氏度-19摄氏度3~4min 4~5min脾、淋巴结、甲状腺-16摄氏度-18摄氏度2~3min 4~5min脑组织-15摄氏度-17摄氏度2~3min 4~5min注：表中温度及时间指组织厚度0.3-0.4 cm（四）冷冻温度及时间的关系制冷温度数越大对组织冰硬的时间越短，但往往是欲速越不达，组织冻过切片呈碎屑状，得不到完整切片；并出现冰晶，改变组织应有的形态，细胞呈现脂肪样细胞状态，特别是脑组织肾透明细胞癌组织最明显。
冰冻切片步骤很全面
冰冻切片步骤很全面冰冻切片是一种常用的实验技术，在生物学、医学研究、组织学观察等领域有着广泛应用。
以下是一份详细的冰冻切片步骤，旨在提供全面的指导。
注意，不同的实验目的可能会有一些差异，因此请根据实际需求调整步骤。
1.準备1.1获取你所需的样本。
这个样本可以是活体动物的组织，也可以是固定处理后的组织。
1.2准备冷冻介质。
通常使用的冷冻介质包括液氮、干冰和冷冻套。
液氮是一种非常冷的液体，可以迅速冻结样本。
干冰是固态二氧化碳，可以提供较低的温度。
冷冻套是一种装置，可以通过循环冷却剂来维持全套工具的较低温度。
1.3准备工具和设备。
这些工具和设备通常包括切片机、切片模具、刀片、显微镜片和刷子。
1.4调整工作环境。
确保实验室温度适宜、空气流通，并消毒工作台和其他工具。
2.样本取样和固定2.1根据实验目的，选择合适的样本区域。
例如，在动物研究中，你可能需要选择大脑的特定区域。
2.2切下样本。
使用手术器械，例如手术剪刀和手术刀，在样本区域周围切下足够大小的组织块。
2.3快速固定样本。
使用适当的固定液将样本固定。
常用的固定液包括10%缓冲福尔马林和4%聚乙二醇。
将样本完全浸没在固定液中，确保完全固定，避免其损伤。
3.冷冻3.1冷冻样本。
将固定的样本迅速置于冷冻介质中。
如果使用液氮，直接将样本放入液氮中。
如果使用干冰，将样本放入常温下事先准备好的干冰盒中，并立即放入冷冻套中。
3.2冷冻条件。
根据样本的性质和实验要求，选择适当的冷冻条件。
通常情况下，液氮的温度低于-150°C，而干冰的温度大约为-78°C。
3.3冷冻时间。
样本的冷冻时间取决于其大小和固定液的穿透性。
通常情况下，较小的样本需要较短的冷冻时间，而较大的组织块需要较长的冷冻时间。
一般而言，冷冻时间为几个小时到几天。
4.切片4.1为切片做准备。
在切片之前，将切片模具放在切片机上，并冷却至所需的温度。
同时，将刀片插入切片机。
4.2取出样本。
冰冻切片实验技术
实验技术：组织切片的制备点击次数：350 发布日期：2009-11-9 来源：长沙赢润仅供参考，谢绝转载，否则责任自负组织切片的制备二）切片方法-细节注意1 切片方法的选择光镜和免疫组化研究的切片一般为5μm，而神经组织切片为20-100μm，有利于追踪神经纤维的走行。
1.1 冰冻切片是免疫组织化学中最常用的一种切片方法，能够最大量的保存抗原、操作简便，主要适用于不稳定的抗原（如检测细胞膜的某些抗原成分），但标本来源受限。
冰冻切片时,组织中水分易形成冰晶,影响抗原定位。
冰晶小而多，对组织结构损害大。
因此可采用以下措施减少冰晶的形成：①速冻，缩短组织从-33～-43℃的时间。
具体方法是：⑴干冰-丙酮（乙醇）法：将150-200ml丙酮（乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不冒气泡时，温度可达-70℃。
用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（乙醇）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。
将组织（约1cm×0.8cm×0.5cm）t投入异戊烷内速冻30-60s后取出，置-80℃低温保存或置恒冷冰箱内以备切片；⑵液氮法：将组织块平放于软塑料瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾。
此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
取出组织块后立即置入-80℃冰箱贮存或作恒冷切片。
②将组织置于20%-30%蔗糖溶液中1-3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。
冰冻切片一般用恒冷切片机。
切片后如不染色，必须将切片吹干，贮存于低温冰箱内，进行短暂预固定干燥后贮存于低温。
【目的】组织标本必须首先被制成组织切片，再经过染色处理，然后才能在显微镜下进行临床诊断和科学研究。
【原理】苏木素染色结合伊红染色是常规组织学染色技术，也称为H & E染色。
冰冻切片制片实验步骤及注意事项
冰冻切片制片实验步骤及注意事项冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片制片实验步骤1、组织固定：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。
将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
2、脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底。
3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，组织周围滴上OCT包埋剂，将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。
4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚°8-10μm。
将干净的载玻片平放于切出的组织片上方即可将组织贴于载玻片上。
-20°保存备用。
注意事项1、组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2气（-78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（-80℃）③ 液氮（-190℃）④ 液氮冷却的丙烷（-19℃）。
液氮适用于组织化学，较安全。
缺点：组织块易发生龟裂。
2、为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。
但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。
故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定（10分钟左右）固定，可显示琥珀酸脱氢酶。
3、电镜出现后，需要保存细胞的超微结构，以4%缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7.）84ml；蔗糖8g）固定较好。
这些固定液主要用于水解酶，而不适于许多氧化还原酶和转移酶。
冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片制作方法与注意事项冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。
下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。
一、冰冻切片的制作方法：1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。
2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。
3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。
4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。
5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。
6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。
7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。
二、冰冻切片的注意事项：1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。
液氮和刀片冷冻架是常用的设备。
2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。
刀片的选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀片可以提高切片质量。
3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。
切片太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。
4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。
在切割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。
5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。
6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。
冷冻切片注意事项
冷冻切片注意事项冷冻切片是一项很有趣但也需要特别小心的工作呢。
一、切片前的准备。
1. 样本的处理可不能马虎。
拿到样本的时候，要像对待宝贝一样。
如果是组织样本，要确保它的新鲜度，就像你去市场买新鲜水果一样，新鲜的样本才能切出好片子。
如果样本在运输或者保存过程中有什么磕磕碰碰，或者被污染了，那可就麻烦啦，就像做饭的时候食材坏掉了，后面再怎么努力也很难做出美味佳肴。
2. 冷冻机的状态要调整好。
要把冷冻机当成自己的小宠物一样去照顾，温度要设置准确。
温度太高，样本冻不好，切的时候就会软趴趴的；温度太低呢，样本又会变得像冰块一样硬邦邦的，容易碎掉。
这就好比你穿衣服，穿多了热得难受，穿少了又冷得发抖。
3. 刀具的选择和检查也很重要。
刀具就像是战士的武器，要选一把锋利又合适的。
如果刀具钝了，那切出来的片子就会坑坑洼洼的，就像用钝刀切面包一样，切得乱七八糟。
而且在切片之前，一定要仔细检查刀具有没有损坏或者脏东西，不然这些都会影响切片的质量。
二、切片过程中的要点。
1. 操作的时候要稳。
这就像走钢丝一样，手不能抖。
一旦手抖了，切出来的片子厚度就不均匀了，可能这边厚那边薄，就像一边是小山丘，一边是小山谷。
而且在切的时候，要保持一个合适的速度，不能太快也不能太慢。
太快了容易切歪或者切坏样本，太慢了样本可能会因为局部温度升高而变形。
2. 要注意样本的摆放。
样本在切片台上要放得端端正正的，就像小朋友在课堂上坐得笔直一样。
如果样本放歪了，切出来的片子形状就会不规则，就像歪着切蛋糕，切出来的蛋糕块奇形怪状的。
3. 切片的厚度要控制好。
不同的实验或者观察需求，对切片厚度有不同的要求。
这就像做菜放盐一样，放多放少都不行。
如果切片太厚，可能会影响观察的清晰度，就像隔着一层厚玻璃看东西模模糊糊的；如果切片太薄，又可能会把样本切坏或者在后续处理过程中容易丢失。
三、切片后的注意事项。
1. 切片后的保存要得当。
切好的片子就像你精心制作的小手工一样，要好好保护。
划重点！冰冻切片流程和注意事项都在这了！快快get起来~
划重点！冰冻切片流程和注意事项都在这了！快快get起来~冰冻切片定义冰冻切片是指新鲜组织不经过任何固定、脱水、透明等处理，不需要石蜡包埋，直接在冰冻切片机上进行切片的一种方法。
冰冻切片特点：操作简单，耗时短，对组织抗原损伤小，对环境污染小。
冰冻切片流程（10-15min内即可完成）：取材→包埋（<30s）→冷冻（1-3min）→切片（2-5min）→固定（10-15s）→染色（4-5min）→封片（<1min）1、取材（1）新鲜组织取材不能遇水，如果组织自身带水较多，可用滤纸吸干（目的是为了防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生）；（2）取材的工具也要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域；（3）取材组织大小要合适，厚度尽量在3mm，最多不要超过5mm（组织过大切片时阻力加大，易产生刀痕和褶皱）。
2、包埋（1）包埋机一般使用OTC或普通胶水，OTC包埋剂质感细腻，对刀片损伤小，有利于切片；（2）包埋时要将包埋剂涂抹均匀，确定好组织的包埋方向，例如管腔、皮肤、囊壁等要竖立包埋；（3）包埋体积较小的组织，可以先挤压少许的包埋剂形成一个平台，再放入小组织进行包埋。
3、冰冻温度与时间（1）冰冻温度与时间是冰冻切片的关键步骤，要根据组织的类型和大小来调节；（2）冰冻温度过低，会造成组织过硬，切片碎裂；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片；（3）不同组织冰冻切片适宜温度：4、切片（1）在组织和包埋剂冷冻到发白后即可开始切片；（2）切片时右手摇动手轮要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度控制在5um左右，左手持毛笔在切片形成时轻按住组织边缘，使其不发生卷曲；（3）将切片展平粘贴在干净的载玻片上，应立即放入固定液中固定，如果固定不及时，会发生细胞退变，切片中细胞核模糊不清呈雾状。
5、染色流程：固定（95%乙醇）→苏木素→水洗→盐酸乙醇分化（0.5~1%）→水洗→温水返蓝→伊红→梯度酒精→二甲苯透明→封片6、注意事项（1）纤维及结缔丰富的组织，应顺着纤维纹理切片，否则容易崩裂；（2）较硬较脆的组织应尽量切的薄一些；（3）选择合适的固定液（95%乙醇、甲醛、甲醇、丙酮），且固定液要保持新鲜，及时更换固定液；（4）组织尽量快速冷冻，组织间隙的自由水易冷冻凝结形成冰晶，组织冷冻越缓慢，冰晶形成的数量越多，体积越大。
冰冻切片制作及质量控制
冰冻切片制作及质量控制冰冻切片是一种在生物组织学研究中广泛应用的技术，它可以制备出细胞和组织的高质量切片，用于后续的染色、免疫组化和显微镜观察等研究。
为了获得高质量的冰冻切片，制作过程中需要严格控制各个环节，包括样本取材、固定、冻结和切片等步骤。
同时，质量控制也是制作高质量冰冻切片的重要环节之一、下面将详细介绍冰冻切片制作及质量控制的相关内容。
1.样本取材样本取材是制作高质量冰冻切片的第一步，样本的选择和处理对后续切片的质量有重要影响。
通常情况下，应选择代表性的组织，样本必须新鲜，不宜暴露在空气中过长时间，以避免氧化和细胞坏死的发生。
此外，为了使切片更容易涂抹和切割，样本应具有一定的硬度，可以根据需要使用组织固定剂、切片缓冲液等进行处理。
2.组织固定组织固定是为了保持组织的形态结构和细胞的生物学特性，同时防止样本在切片过程中的损伤和变形。
常用的固定方法包括冷醇固定、中性缓冲福尔马林固定等。
固定时间和温度的选择需要根据不同的样本和研究要求进行优化。
3.冻结冻结是制作冰冻切片的关键步骤，它能够快速、有效地固定组织并保持组织的形态。
冻结样本时应使用冷冻剂，如液氮、干冰-酒精混合物等。
在冻结过程中，要避免组织在冻结过程中受到机械或化学损伤，因此可以使用特制的冷冻模具和刀片。
4.切片5.质量控制质量控制是确保冰冻切片质量的关键环节之一、常用的质量控制指标有切片厚度、切片完整性、目标细胞或结构的保存等。
切片厚度的一致性对于后续的显微镜观察和数据分析具有重要影响，可以使用显微镜或数字软件测量切片厚度。
切片完整性是指组织切片的连续性和无碎片断裂等情况，可以通过显微镜观察和染色评估。
目标细胞或结构的保存是评价冰冻切片质量的重要指标，可以通过免疫组化染色、细胞核染色等方法进行评估。
综上所述，制作高质量的冰冻切片需要控制好样本取材、组织固定、冻结和切片等环节，并通过质量控制手段来评估切片质量。
只有在每个环节都进行精细操作和严格控制的情况下，才能制备出适合后续研究的高质量冰冻切片。
冰冻切片制作及质量控制
冰冻切片制作及质量控制冰冻切片是一种常用的组织学研究方法，广泛应用于生物医学研究领域。
它可以保持组织的原始形态和结构，适用于光镜、电镜和免疫组化等多种研究方法。
在进行冰冻切片制作时，需要注意一些关键步骤和质量控制措施，以确保获得高质量的切片材料。
1.样品准备样品准备是冰冻切片制作的第一步。
样品可以是动物组织或细胞，也可以是植物组织。
在样品准备过程中，需要注意以下几点：-样品的自然纹理：对于动物组织，应将样品固定在适当的溶液中，以保持其自然纹理。
对于植物组织，应注意保持组织的形态和结构。
-样品的尺寸：样品的大小应适合冰冻切片仪的切片室大小。
过大的样品可能无法完全冻结，导致切片质量降低。
2.样品冷冻将样品冷冻是冰冻切片制作的关键步骤之一、样品冷冻的目的是在不损坏样品的情况下将其冷冻成脆性，以便后续切片。
以下是几种常用的样品冷冻方法：-空气冷冻：样品通过将其放置在冷冻剂中（如液氮或酒精等）迅速冷冻，使其变得脆性。
这种方法适用于较小的样品。
-次凝胶冷冻：将样品浸入液体凝胶中，使其均匀冷冻。
这种方法适用于较大的样品。
-快速冷冻机冷冻：使用快速冷冻机将样品超快速冷冻。
这种方法可以快速冷冻样品，并保持其形态和结构。
3.样品切片样品冷冻后，可以使用冰冻切片机将其切成薄片。
以下是一些注意事项：-选择合适的切片机：合适的切片机应具有良好的冷冻性能和切割能力。
切片机的刀片应尖锐，以便切割样品。
-控制切片厚度：切片厚度直接影响到后续研究结果的准确性。
根据实验需求选择合适的切片厚度，并保持在一定范围内的一致性。
-控制切片速度：切片速度应适中，过快可能导致切片不均匀，过慢可能导致切片丢失或拉长。
-冷藏切片：在切片过程中，应将切好的切片放入冷冻盒中，以防止其变形或融化。
冷藏过程中应注意避免切片受压。
4.质量控制为了确保冰冻切片的质量，需要进行一定的质量控制措施：-内外标准：在切片中加入内外标准物质，以确保切片的准确性和可比性。
冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片制作方法与注意事项一、固定：固定即借助化学试剂是组织和细胞中的有机和无机成分凝固或沉淀，停止发生死后组织变化，尽量保持其活体状态的过程。
固定的方法有浸泡固定法，注射、灌注固定法，蒸汽固定法，本实验用的是注射、关注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难流入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定，就可采用灌注或灌流固定法。
固定时将固定液直接注入动物的血管，经血管分支到达整个组织或全身，从二十只得到充分固定。
固定液分为单纯固定液和混合固定液。
单纯固定液有甲醛、乙醇、氯化汞、醋酸、苦味酸等，混合固定液包括Bouin液、Zenker液、Carnoy液、中性甲醛液等。
本实验用的固定液为4%甲醛（10%福尔马林）。
固定后的处理：用水配制的固定液固定后应用流水冲洗，可是组织中的固定液随时溢出和随时洗去。
对小动物和脑组织等，应以浸泡为主，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。
【注意事项】1.固定要及时。
2.组织块的大小要合适。
3.应有足够的固定液，一般与组织块的比例为20:1，容器勿过小，组织勿过多。
4.固定时间要合适，甲醛固定液一般固定两天左右，第一天要更换一次固定液。
5.要进行促使固定，在固定期间轻轻地搅动组织或摇动容器使组织移动有利于固定液的渗透，适当提高温度也可缩短固定时间。
6.选择合适的固定液。
7.一次取材数量过多时，应对取材部位和顺序进行编号，并及时做好记录。
二、脱水脱水就是用某些溶剂逐步将组织块内的水分置换出来的过程，使用的试剂称为脱水剂。
脱水剂有非石蜡溶剂的脱水剂如乙醇、丙酮等，和脱水兼石蜡的脱水剂如正丁醇等。
本实验所用的是乙醇脱水。
乙醇是最常用的脱水剂，其优点是脱水能力强，即能与水相混合，又能与透明剂相混，并可使组织硬化，便于切片。
缺点是穿透组织的速度快，且容易使组织收缩、变脆。
为克服这一缺点，在一般脱水中，应采用循序渐进的方法，逐步升级，经一系列不同浓度的乙醇，使组织中的水分逐渐被乙醇代替。
冷冻切片方法及注意事项
冷冻切片方法及注意事项冷冻切片是一种常用的组织学研究方法，它能够帮助研究人员观察和分析生物组织的结构和功能。
下面将详细介绍冷冻切片的方法及注意事项。
1.组织采集：首先需要选择适当的生物组织样本，可通过手术切取、尸检或动物献体等方式获得。
2.组织处理：取出组织样本后，应立即进行处理，以防止样本脱水和坏死。
可将组织放入理化盐水或生理盐水中，避免干燥、坍塌或变形。
3.固定组织：使用适当的固定剂对组织进行固定，以保持组织结构的完整性。
常用的固定剂有福尔马林、戊二醛、乙醛等。
固定时间应根据组织大小和厚度进行调节，较小的组织可以固定2-4小时，而较大的组织可能需要24小时以上。
4.预冷冻：固定后的组织应在冷冻前进行预冷冻处理，以提高冷冻切片的质量。
预冷冻的方法包括放入冷冻剂中（如液氮、干冰等）或将其放入冰盒中进行冷藏，使组织完全冷却。
5.冷冻切片：使用冷冻切片机将预冷冻的组织切成薄片。
为了获得更好的切片结果，刀片的角度和厚度需要进行适当的调整。
同时，切制时需要快速而轻柔地移动切片机，以防止组织被拉伸或损坏。
6.切片收集：将切片收集在玻片上，通常使用细长形的切片夹或切片板来收集切片。
确保切片不受损并保持平整。
7.切片保存：将切片放入适当的保存溶液中，如PBS（磷酸盐缓冲液）或甘油等，以防止切片干燥和变形。
可以根据需要选择冷藏或冷冻保存。
冷冻切片需要注意以下事项：1.样本质量：选择新鲜、完整的组织样本，避免坏死、变性或损伤的组织。
2.固定剂选择：选择适当的固定剂进行组织固定，以保持组织结构的完整性。
3.冷冻速度：组织应尽快冷却，以避免组织脱水或破坏。
冷冻速度过慢可能会导致晶体形成，影响切片质量。
4.切片机状态：保持切片机的良好状态，定期检查刀片的锋利度和调整角度，以确保切片的质量。
5.切片技巧：需要轻柔、均匀地切片，避免组织被拉伸或扭曲。
同时，切片过程中需要快速操作，以减少冰晶对组织的破坏。
6.切片收集：收集切片时要避免切片叠加或悬浮，以免影响切片的观察和分析。
冷冻切片操作指南
冷冻切片操作指南在医学、生物学和食品科学等领域中，冷冻切片是一种重要的技术，用于将样品冷冻固化后，切割成薄片以供进一步观察和研究。
本文将为读者提供一份冷冻切片操作指南，介绍冷冻切片的基本原理、实验室操作步骤和注意事项。
一、冷冻切片的基本原理冷冻切片是将样品通过快速冷冻技术使其迅速固化，然后使用切片机或显微切片机将固化的样品切割成薄片。
冷冻切片的目的是保留样品的形态和结构，避免切片过程中的伤害和变形。
冷冻切片一般适用于需要保留细胞和组织结构的实验。
二、实验室操作步骤1. 样品准备：将待切割的样品准备好，可以是细胞、组织或食物等。
样品处理过程中需要注意保持样品的完整性和活性。
2. 冷冻固化：将样品放置在冷冻剂中，例如液氮或冷冻盒中的冰水混合物中，进行快速冷冻固化。
冷冻时间需要根据不同样品的特性进行优化，一般在几分钟至数小时之间。
3. 选用切片仪器：根据实验需求，选择合适的切片仪器，可以是手动的切片机或半自动/全自动的显微切片机。
4. 切片调整：根据实验需求，调整切片仪器的切割参数，例如切片厚度和速度等。
通常，薄片的厚度在几微米至数十微米之间。
5. 切片过程：将冷冻固化的样品放置在切片仪器的切片台上，固定好，并且调整好切割参数。
使用手动或电动操作切片仪器，将样品切割成所需的薄片。
6. 切片收集：将切割好的薄片收集起来，可以使用切片刷或显微镊子等工具进行操作。
注意保持薄片的完整性和干燥，避免受到污染和损坏。
7. 切片处理：根据实验需求，进行切片的进一步处理，例如染色、免疫组化等。
三、注意事项1. 样品处理过程中需要注意保持样品的完整性和活性，避免样品受到损伤和变性。
在样品处理过程中，可以使用缓冲液或甘油等物质进行保护。
2. 冷冻固化的时间和温度需要根据不同样品的特性进行优化。
过长或过短的冷冻时间都可能导致样品质量下降。
3. 在选择切片仪器时，需要根据实验需求和预算等因素进行权衡。
手动切片机相对便宜，但操作较为繁琐；半自动/全自动的显微切片机操作更为方便，但价格较高。
冷冻切片要注意什么
冷冻切片要注意什么冷冻切片是一种常见的切片方法，常用于生物组织的切片，以便于后续的检测和分析。
在进行冷冻切片时，需要注意以下几点：1. 样品的准备样品的准备是冷冻切片的首要步骤。
样品的处理方法可能会因为样品的来源和需要的扫描方法等因素而有所不同。
总的来说，常见的样品处理方式包括特定的固定液处理、涂覆有机材料等。
如果样品过于薄或过于厚，都会对切片效果产生影响。
因此，在切片前要确保样品质量良好，且符合所需要求。
2. 切片的温度在冷冻切片的过程中，样品温度是需要进行严格控制的，同时，也要保证切片设备的温度稳定。
一般情况下，冷冻切片的温度在-20到-50之间，具体温度要根据样品的情况进行调整。
在样品切割过程中，切片机要保持足够的冷却能力，以保证切片的质量。
如果切片机温度不足，可能会导致样品破裂或切片不均匀。
3. 切片机的选择不同的样品和切片要求需要不同的切片机。
对于较硬的样品或者需要制作大量薄切片的情况，选择稍微强一点的轮廓切片机。
对于一些细胞和肌肉等柔软的样品，可以使用冷冻微扫描切片机，以获得更高清晰度的切片效果。
4. 切片后的保存切片后要进行保存，以便后续进行染色和显微镜分析等操作。
不过，一定要注意样品的保存条件。
保存时，要避免温差过大、光、氧气或潮湿等环境影响，同时要遵循防止细菌和霉菌污染的措施，以确保样品的稳定性。
冷冻切片的现代CCD摄像机和显微镜能力很大程度上depends on 选择的样品制备方法。
为了实现这种高功率，必须注意上述几点的细节。
与传统切片技术相比，冷冻切片技术有更多精确测量的优势。
但由于这项技术的复杂性，需要耗费很多时间和精力来管理。
只有在细致的样品准备、精度正确的设备和适当的卫生条件下，才能获得最佳的冷冻切片效果。
冷冻切片操作指南
冷冻切片操作指南
随着科学技术的进步，冷冻切片技术被广泛应用于多个领域，包括生物学、医学和材料科学等。
冷冻切片技术可以帮助研究人员了解物质的微观结构和特性，为相关研究提供有力的支撑。
本文将为您介绍冷冻切片的操作指南。
一、准备工作
1. 准备好所需材料
在进行冷冻切片之前，您需要准备好以下材料：
- 组织样本：可以是动物组织、植物组织或其他材料。
- 冷冻切片仪：根据需要选择适当型号的冷冻切片仪。
- 切片刀：保持切片刀的锋利度，以确保切片质量。
- 冷冻剂：例如液氮或乙醇。
- 切片架：用于放置切片。
2. 样本固定和冷冻
首先，您需要对样本进行固定和冷冻。
固定样本的方法根据研
究目的的不同而有所差异。
对于生物组织，常用的固定剂包括甲醛、乙酸乙酯等。
接下来，将固定的样本放入冷冻剂中进行冷冻。
确保
样本充分冷冻，以提高切片质量。
二、冷冻切片操作步骤
1. 准备切片仪
根据切片仪的使用说明准备切片仪，确保各项设置都正确。
如
有需要，调整刀片的角度和速度，以获得最佳的切片效果。
2. 切片样本
将冷冻的样本置于切片仪的切片架上，并将切片架放入切片仪中。
调整刀片的位置，使其与样本接触。
启动切片仪，开始切片操作。
切片时应保持手部稳定，以避免切片变形或切片质量下降。
3. 收集切片
使用显微镜观察切片，将切片以适当的方式收集起来。
可以使
用刷子、针头或切片网格等工具收集切片。
注意切片的顺序和位置，以便后续的实验操作和图像分析。
冰冻切片制作与染色过程中常见问题与处理课件
加强操作人员技能培训与交流学习
总结词
加强操作人员技能培训和交流学习可以提高冰冻切片 制作和染色技术的水平。
详细描述
操作人员的技能水平对冰冻切片制作和染色结果具有 重要影响。因此，应加强操作人员的技能培训，使其 掌握正确的操作方法和技巧。此外，组织操作人员之 间的交流和学习，可以分享经验和技巧，提高整体技 术水平。同时，鼓励操作人员积极参与学术会议和技 术研讨会，了解最新的技术和进展，也是提高技术水 平的有效途径。
04
冰冻切片染色常见问题及 处理方法
染色不均匀
总结词
冰冻切片染色不均匀可能是由于染色时间不足或过长、染色液浓度不合适、切片温度不均匀等原因引 起的。
详细描述
染色不均匀的问题可以通过控制染色时间和浓度来解决。一般来说，染色时间不宜过长或过短，应根 据染色液的浓度和切片厚度来适当调整。同时，确保切片温度保持均匀，避免局部温度过高或过低。
详细描述
在冰冻切片制作过程中，组织固定 是关键步骤之一。如果固定不当， 会导致细胞结构变形、组织结构松 散等问题。
处理方法
应掌握组织固定的最佳时间和方法 ，根据组织类型和实验要求选择合 适的固定剂，并严格控制固定时间 。
切片温度不适宜
总结词
切片温度不适宜可能引起细胞结 构破坏，影响切片质量。
详细描述
感谢您的观看
THANKS
总结词
切片温度和厚度的调整对切片质量和染色效果具有重 要影响。
要点二
详细描述
在冰冻切片制作过程中，应根据组织类型和实验需求 ，选择合适的切片机和切片刀，并调整切片温度和厚 度。一般来说，较薄的切片更容易染色和观察，但过 薄的切片可能会导致组织结构破坏和细胞丢失。同时 ，应根据染液特性，选择合适的染色时间和温度，以 确保染色效果。
冷冻切片方法及注意事项
一、试验前预备清理试验台及仪器。
开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度〔- 15~-20 ℃*〕。
预备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品。
二、取材解剖之后快速取出所需的颖组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材〔24×24×2mm*〕,以防形成冰晶造成切片中形成外形不一的空泡,使细胞内构造移位。
〔注：取材中目的标本既要明确也要确保其构造的完整性，应避开不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度最好不要超过3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。
甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。
〕三、冷冻切片1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片〔1~3 分种〕。
2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
3、调好欲切的厚度，依据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μm 间。
4、调好防卷板。
制作冰冻切片，关键在于防卷板的调整上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。
切片时，以切出完整、平滑的切片为准。
切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向略微用力轻轻一带,可避开组织摊片过程中皱折,保证组织构造的完整及切片的美观。
注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。
常用的有三种包埋剂OCT 剂、B 超藕合剂以及一般胶水。
B 超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,一般胶水或OCT 剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。
〔OCT 包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。
〕②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30 秒钟左右待胶凝固时将小组织放上, 组织四周再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。
冰冻切片的步骤及注意事项
冰冻切片的步骤及注意事项嘿，友友们！今天咱来唠唠这冰冻切片的那些事儿，可别小看它哟，这里头的步骤和注意事项那可不少呢！
先说这第一步，取材那可是相当关键呐！就好比你要做一道超级美味的菜，原料得新鲜吧！取材的时候就得眼疾手快，别磨蹭，不然那材料都不新鲜啦！而且取的位置也得准，不然切出来的片子可就不地道喽。
然后就是速冻啦，这就像是给材料来个急速冰镇。
嘿，可别慢悠悠的，得赶紧把它冻得邦邦硬，不然切片的时候可就不好玩啦。
想象一下你切个软不拉几的玩意儿，那能成啥样！
接着就是切片啦，这可是个技术活。
就跟咱削苹果似的，你得手法稳，不然切出来那一片片厚的厚，薄的薄，那可不行！我跟你说，这时候就得开启“大师模式”，每一刀都得恰到好处，别整那些歪七扭八的片子出来。
哎呀，这过程中可得注意好多事儿呢。
比如说温度得控制好，太高了不行，太低了也不行。
温度不对，那切出来的片子不是皱皱巴巴就是碎成渣，这可不是咱想要的结果嘛。
还有呢，切片机也得爱护好，就跟咱的宝贝似的，不然它捣乱起来，你可就有的愁喽。
有时候啊，这冰冻切片就跟一场战斗似的，你得和各种因素斗智斗勇。
一不小心哪里出点差错，那片子可不就给你颜色看啦！但咱也不能怕呀，就得勇敢面对，慢慢摸索，找到最佳的方法。
我还记得刚开始接触冰冻切片的时候，那真叫一个手忙脚乱啊。
不是这儿出问题就是那儿不行，简直让我哭笑不得。
不过呢，随着经验的积累，现在咱也能轻松应对啦。
总之呢，冰冻切片虽然有些麻烦，但只要咱掌握了步骤和注意事项，加上那么一点点的耐心和细心，就一定能把它搞定！友友们，加油干吧，让我们在冰冻切片的世界里闯出一片天！。
病理制片技术――冷冻切片的制作
病理制片技术――冷冻切片的制作一、概述冷冻切片是利用物理降温的方法将新鲜的组织标本冷冻使其产生一定的硬度进行切片的技术方法。
与石蜡切片相比，由于冷冻切片不需脱水包埋因此制片速度快，是为手术进行中的临床医师提供病理诊断的良好方法。
此外由于冷冻切片的标本是未经固定的新鲜组织，因此冷冻切片也是脂肪染色、酶组织化学染色以及某些免疫组织化学染色和原位分子杂交的理想制片方法。
冷冻切片的不足是组织细胞的形态略逊于石蜡切片。
二、冷冻切片的制作方法利用氯乙烷喷洒、二氧化碳喷射、半导体制冷的方法均可制作普通的冷冻切片，用于术中的病理诊断。
恒冷箱冷冻切片机可以制作适用于各种目地的冷冻切片，是目前最为常用的理想冷冻切片制片方式。
1.冷冻切片的技术操作方法(1)将恒冷箱冷冻切片机的速冻头和箱内温度调整到适宜的切温度，一般情况下为一18～一25℃。
(2)在标本冷冻托上涂布一层冷冻包埋剂一OCT，然后将取材后新鲜标本安放在标本冷冻托上并用OCT覆盖标本。
(3)标本冷冻完成后将标本托固定在切片机的机头上，调整机头位置使其恰好位于切片刀的后方。
(4)使用粗切削方式进行标本的粗切削至暴露标本的最大平面，使用自动推进方式连续切削2～3刀后用毛笔清除机头、标本托及切片刀上的组织碎屑。
(5)调整并确认切片的厚度，一般为4～8 um，染脂肪和神经组织应控制在12~25 u m。
(6)放下防卷板使防卷板的位置恰好与切片刀的刀刃完全平行并略突出于刀刃。
(7)以自动推进的方式进行切片，良好的切片将在防卷板的下方形成一张完整平整的薄片，如切片略有弯曲可用小毛笔轻轻展平切片。
(8)打开防卷板，用载玻片平稳地轻压切片使其平整地吸附到载玻片上。
三、冷冻切片的染色切好的冷冻切片立即投入丙酮中进行固定，一般固定1～2 min即可进行染色，用于免疫组化染色的冷冻切片应在切片略干时即刻投入冷甲醇中固定10~15 rmin然后进行相应的组织化学染色程序。
1．冷冻切片的HE染色程序。
冰冻切片的原理、流程和注意事项
冰冻切片的原理、流程和注意事项1冰冻切片的原理冰冻切片是指新鲜组织不经过任何固定、脱水、透明等处理，不需要石蜡包埋，直接在低温恒冷切片机冷冻后马上进行切片的一种方法。
冰冻切片具有操作简单、对环境污染小和对组织抗原损伤小的特点。
又因制作时间和材料有限，保证高质量的冰冻切片非常重要，直接影响病理诊断的正确率。
2冰冻切片的操作流程整体流程：送检和取材要求：•送检标本及时新鲜，组织无需固定，不能遇水，防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生•取材的器械要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域•所取组织块大小应合适。
组织过大切片时阻力加大，难免产生刀痕及褶皱，加大了制片的难度包埋：•包埋剂一般使用OCT或普通胶水•包埋时将包埋剂涂抹均匀，并根据组织情况和医生的要求确定包埋方向，如管腔、皮肤、囊壁等要立埋•组织体积较小，可先挤入少许胶在包埋托上形成一个”平台“，再放入小组织进行包埋冰冻温度与时间：冰冻的温度与时间时制作冰冻切片的关键因素，需要根据组织的种类、厚度和大小来调节。
如果温度过低，会造成组织过硬、切片破碎；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片切片和染色：•在组织和包埋机冻到发白后可以开始切片•是否使用防卷板可根据操作者的习惯，如使用防卷板，一般将其调整到与切片呈5度夹角•切片时右手摇轮转要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度掌握在5微米，左手持毛笔在切片形成时按住组织边缘，使其不发生卷曲•将切片展平粘贴在结晶载玻片上后，应当立即放入固定液中加以固定，如固定不及时，会发生细胞蜕变，切片中细胞核显示不清，呈”云雾状“表现冰冻切片HE染色流程：3冰冻切片的注意事项1. 组织取材要规范冰冻切片的组织要尽可能新鲜，不触碰谁，取材要及时，动作要迅速。
2.取材大小要厚薄适中在确保渠道主要病变的前提下，尽量避开钙化、坏死、脂肪等。
3. 保持取材台面和器材的干净，防止污染4. 组织表示及编号要明确5. 切片固定要及时制片过程要求快速冷冻、快速切片、快速固定。
冰冻切片制备的主要步骤
冰冻切片制备的主要步骤冰冻切片制备是一种常用的生物学和医学实验技术，用于在冷冻状态下快速切割组织样本，并进行随后的病理学诊断或研究。
以下是冰冻切片制备的主要步骤：一、准备样本在进行冰冻切片制备之前，需要准备好待检测的组织样本。
这些样本可以来自各种来源，如手术切除、活检、尸检等。
样本应该尽快放入适当的冷冻介质中，如OCT包埋剂，以保持其冷冻状态。
二、冷冻将准备好的样本放入冷冻切片机中，通常是一个恒温的金属块。
这个金属块被冷却到低于-20℃的低温，确保样本快速冷冻。
在这个过程中，需要特别注意不要让冷冻过度或不足，因为这会影响切片的品质。
三、切片使用冷冻切片机将冷冻好的样本切成薄片。
切片的厚度通常在5-10微米之间，以确保切片能够清楚地显示组织的结构和特征。
这个过程需要熟练的技术员操作，以保证切片的完整性和均匀性。
四、固定刚切好的切片非常容易受到热和湿气的影响，因此需要迅速固定。
通常使用甲醇或乙醇作为固定剂，将切片固定在载玻片上。
这一步可以防止切片在接下来的步骤中滑落或移动。
五、染色固定好的切片需要进行染色以更好地显示其结构和特征。
最常用的染色方法是hematoxylin and eosin (H&E)染色。
这一步可以在染色机中完成，也可以手工操作。
染色完成后，切片会被冲洗干净并彻底干燥。
六、观察和诊断最后一步是将制备好的切片放在显微镜下观察，并进行病理学诊断。
此时，病理学家可以根据切片的特征对疾病进行分类和分级，或者对手术切缘进行评估。
以上就是冰冻切片制备的主要步骤。
需要注意的是，每个步骤都需要严格的操作规程和技术要求，以保证制备出的切片能够准确地反映组织的结构和特征。
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冰冻切片制作方法与注意事项
一、固定：
固定即借助化学试剂是组织和细胞中的有机和无机成分凝固或沉淀，停止发生死后组织变化，尽量保持其活体状态的过程。
固定的方法有浸泡固定法，注射、灌注固定法，蒸汽固定法，本实验用的是注射、关注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难流入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定，就可采用灌注或灌流固定法。
固定时将固定液直接注入动物的血管，经血管分支到达整个组织或全身，从二十只得到充分固定。
固定液分为单纯固定液和混合固定液。
单纯固定液有甲醛、乙醇、氯化汞、醋酸、苦味酸等，混合固定液包括Bouin液、Zenker液、Carnoy液、中性甲醛液等。
本实验用的固定液为4%甲醛（10%福尔马林）。
固定后的处理：用水配制的固定液固定后应用流水冲洗，可是组织中的固定液随时溢出和随时洗去。
对小动物和脑组织等，应以浸泡为主，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。
【注意事项】
1. 固定要及时。
2. 组织块的大小要合适。
3. 应有足够的固定液，一般与组织块的比例为20:1，容器勿过小，组织勿过多。
4. 固定时间要合适，甲醛固定液一般固定两天左右，第一天要更换一次固定液。
5. 要进行促使固定，在固定期间轻轻地搅动组织或摇动容器使组织移动有利于固定液的渗透，
适当提高温度也可缩短固定时间。
6. 选择合适的固定液。
7. 一次取材数量过多时，应对取材部位和顺序进行编号，并及时做好记录。
二、脱水
脱水就是用某些溶剂逐步将组织块内的水分置换出来的过程，使用的试剂称为脱水剂。
脱水剂有非石蜡溶剂的脱水剂如乙醇、丙酮等，和脱水兼石蜡的脱水剂如正丁醇等。
本实验所用的是乙醇脱水。
乙醇是最常用的脱水剂，其优点是脱水能力强，即能与水相混合，又能与透明剂相混，并可使组织硬化，便于切片。
缺点是穿透组织的速度快，且容易使组织收缩、变脆。
为克服这一缺点，在一般脱水中，应采用循序渐进的方法，逐步升级，经一系列不同浓度的乙醇，使组织中的水分逐渐被乙醇代替。
脱水时间视组织块大小、性质和类型而定。
【注意事项】
1. 脱水必须彻底，组织块只有脱水充分才能在透明剂中有良好的透明，也有利于染色。
脱水须在
有盖子的瓶中进行，高浓度乙醇易吸收空气中的水分。
2. 脱水剂的用量不能太少，应为组织块的5~10 倍以上，并及时更换。
三、透明
在切片制作过程中有两次透明，第一次是脱水以后组织块的透明，第二次是染色以后切片的透明。
二甲苯是最常用的透明剂。
它是一种无色透明的液体，容易挥发，透其明能力强，但易使组织收缩变脆，所以组织块在二甲苯中不宜久留。
【注意事项】
1. 透明剂的用量不能太少，应为组织块的5~10 倍以上。
2. 透明过程中用的器材如镊子必须干燥，不得将水滴入二甲苯中。
3. 二甲苯是一种易挥发的有毒气体，长期接触对呼吸道粘膜等有刺激作用，所以在使用时应在盛
二甲苯的容器上加盖盖子。
四、组织切片（冰冻切片法）
操作程序：
1. 切片前先安装好刀片，调整好切片厚度及切片角度。
根据标本的组织类型，确定最佳切片温度。
2. 将待切的组织块平放在软塑瓶盖或特质小盆内，直接或涂敷包埋剂后马上放到冷冻台上冷冻。
3. 将冻好的组织块安装到组织块夹持器上，调整好刀片与组织块之间的角度和距离，调整好防卷板的
位置和角度。
4. 准备好后，转动切片机旋转轮的手柄进行切片。
将切好的切片黏附在载玻片上，室温下自然晾干
1-2 小时后可根据不同的需要进行固定、染色等制片步骤，也可用锡纸包好后封存于-20C 摄氏度冰箱中待用。
【注意事项】
1. 切片时恒冷箱内的适宜温度是-20—-15 摄氏度。
2. 为防止组织中形成冰晶而影响细胞的形态，甚至破坏细胞的结构，在组织冰冻时要采用速冻的方
法。
3. 组织块在冰冻时，应根据组织的形状和结构来放，切片也是如此。
4. 切片时，若发现冰冻过度，可将冰冻组织块取出在室温下放置片刻再切片。
五、染色（HE 染色）
（一）染色试剂配制
1.苏木精染液苏木精染液是常用的一种燃料，主要用于对细胞核的染色。
苏木精本身与组织的亲
和力很弱，HE 染色实际是通过苏木精的氧化物—苏木红对组织细胞进行染色。
苏木精可通
过自然和化学方法两种方式氧化成苏木红。
自然方法是将苏木精溶液爆率在阳光下或空气
中。
化学方法是将化学氧化剂加入苏木精溶液。
Harris苏木精配方：A液（苏木精1g,无水乙醇10ml）, B液（钾明矶20g,蒸馏水
200ml）,氧化汞0.5g，冰醋酸8ml。
配制方法：想将A液搅拌溶解，再将B液煮沸融化去火。
将A液缓缓加入B液，
混合后煮沸约1 分钟。
离火后在该混合液中加入氯化汞, 用玻璃棒充分搅拌至染液变为紫红
色,冷却后加入冰醋酸混匀,过滤后即可使用。
2.伊红染液伊红是一种煤焦油染料,是细胞质较为想的染色剂。
常用的是1%伊红
醇溶液。
其配方是在95%乙醇100ml中加入1g伊红，玻璃棒搅拌均匀。
3.1%盐酸酒精分化液36%-38%的盐酸1ml 加入75%乙醇99ml 中混匀即可。
）染色过程
1．切片进入苏木精染液5-30min （根据不同需要和颜色情况决定染色时间）。
2．自来水洗去浮色。
3．1%盐酸酒精分化数秒。
4．自来水冲洗半小时以上, 是切片蓝化。
5．蒸馏水洗。
6．如伊红染液复染1-10分钟,使细胞质染成红色。
7．按顺序经95%乙醇?、仲脱水兼分化伊红颜色各1min。
8．入无水乙醇中彻底脱水4-5min （?、/各两分钟左右）。
9．
1/2 二甲苯（无水乙醇：二甲苯=1:1 ) 1min 。
10. 二甲苯？、/透明，每次各约2-3min。
11. 封固切片
（三）染色结果
细胞核被苏木精染成鲜艳的蓝色，细胞质、结缔组织和嗜酸性颗粒等被伊红染成不同程度的红色，红蓝相应色彩鲜明，对比明显。
【注意事项】
1. 掌握好染色时间和分化时间。
2. 自来水冲洗过程中应注意不要用水直接冲自组织。
3. 切片染色后用乙醇脱水应从低浓度到高浓度进行。