中药药理学实验

中药药理研究方法学实验讲义

药理实验室

第一章作用于消化系统的中药药理实验

消化系统由消化道和与其相连的许多消化腺组成，消化道通过运动将消化道内容物得到混合并向消化道远端推送，消化腺通过分泌消化液消化食物，使食物被分解为小分子物质有助于吸收。统消化系统药物研究主要包括消化器官运动实验、消化器官分泌实验、抗溃疡、抗肝损伤、利胆等药理实验方法。

消化器官运动实验方法分为离体消化道器官标本运动实验和在体消化道器官运动实验。离体器官标本运动实验: 一般选用兔、豚鼠和大鼠的胃、肠、胆囊等器官的肠段或肌片,在恒温及充氧的营养液中通过拉力传感器与记录仪连接,将药物直接加入浴柄槽内，描记胃肠平滑肌收缩振幅、收缩频率、收缩张力的变化。②在体器官运动实验:胃排空,肠推进,压敏传感器测定囊内压,贴壁传感器测定胃、肠壁平滑肌或胆囊舒缩运动,以及生物电研究消化器官电生理变化等方法。

消化器官分泌实验主要通过插管或造瘘等方法收集胃液、肠液、胰液及胆汁,然后对上述消化液进行分析。胃酸测定可用酸碱滴定法或酸度计测定法,胃蛋白酶测定可用凝乳法、麦特(Mett)毛细玻管法、hmon-Mimhy 改良法等, 糜蛋白酶测定可用分光光度法、合成多肽法等。

抗溃疡实验是在建立实验性溃疡模型的基础上,观察药物对胃黏膜损伤的保护作用。引起实验性溃疡的方法分为急性溃疡与慢性溃疡两大类。急性溃疡模型有：幽门结扎性溃疡、应激性溃疡(水浸、寒冷、失血性休克)、药物诱发必型溃疡( 非甾体类抗炎药、组胺、利血平等) 、黏膜坏死物质型溃疡(100%乙醇、0.6N HCｌ、25%NａCｌ)等；慢性溃疡模型有：醋酸烧灼性溃疡，热烧灼性溃疡等，使用动物多为大鼠。同时还可测定胃组织中相关活性物质的含量,如前列腺素、氨基己糖、CAMP、5- 羟色胶、组胺、胃黏膜血液量等物质，可对药作用机制进行研究。

引起实验性肝损伤的方法有:①急性中毒性肝炎、肝坏死模型：四氯化碳肝损伤模型、扑热息痛肝损伤模型、D-半乳糖胺肝损伤模型等。②脂肪肝、肝纤维化、肝硬化模型:乙硫氨酸脂肪肝模型、二甲基亚硝胺肝纤维化模型、四氯化碳反复给予肝硬化模型等。③阻塞性黄疸模型:α一茶异硫氨酸醋或胆管结扎均可致胆汁郁积型黄疸模型。④免疫性肝损伤模型:取异种或同种动物的肝提取物作为抗原免疫纯系小鼠可制备该模型。可检测的指标有血清或肝脏AST 、AIT 活性,P-450 活性,肝糖原、血清总蛋白、白蛋白含量,血NH3、胆红素浓度等。作为抗脂肪肝、肝硬化药物,还可检测肝脏胶原蛋白含量、凝血酶时间等,同时可进行病理组织学观察。

利胆实验主要有正常大鼠的胆汁流量测定,离体胆囊肌片舒缩活动描记、整体动物的胆道内压测定, 由细菌造成化脓性胆管炎后对模型动物的胆汁流量、胆汁成分含量、odｄｉ氏括约肌张力等指标进行测定,对胆石标本进行胆固醇、钙、胆红素等成分的含量测定等。

涉及消化系统药理实验方法研究的常见中药有理气药、温里药、补气健脾药。

第一节药物对小鼠胃肠运动的影响

一、药物对小鼠胃排空的作用

【目的】①学习小鼠胃排空的实验方法。

②观察胃动力药及健脾行气药物对胃排空功能的影响。

【原理】

胃排空是指胃内食糜由胃排入十二指肠的过程。进食后近端胃可通过迷走神经调节而出现受容性舒张，起到暂时容纳与储存食物的作用，然后通过缓慢持续地收缩，压迫其内容物向胃窦方向移动，再依赖胃窦收缩及胃和十二指肠协调运动而排空。通过观察胃动力药吗丁琳及健脾行气药枳术丸对小鼠定量灌服营养性半固体糊剂20分钟后，胃全重和胃净重之差的胃内残留物重量,计算胃内残留物占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率，可了解药物对胃排空运动的影响。

【材料】

动物:小鼠,体重18～22g。

药品:lmg/ml吗丁琳混悬液、1g/ml枳术丸水煎剂。

营养性半固体糊剂:16g奶粉、8g葡萄糖、8g淀粉，搅拌均匀，加以蒸馏水至300ml搅拌均匀。主要器材:手术器械、电子天平、小烧杯、小鼠灌胃器。

【方法】

取小鼠, 禁食不禁水18h 后,称重, 编号,随机分成三组。各组均按0.2 ml/10g体积灌胃给药，空白对照组给予等容积蒸馏水，50 min后各组均ig给予营养性半固体糊0.6 ml/只。20min 后脱颈椎处死动物，剖开腹腔，结扎胃贲门和幽门后，取胃，用滤纸拭干后称全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物后拭干，称净重。以胃全重和胃净重的差值为胃内残留物重，胃内残留物重占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率。

胃中残留率(%)=胃中残留物/所灌半固体糊X100%

实验结束后数据作全班统计,计算各组胃中残留率的平均数(X) 和标准差(s), 以t检验统计法进行组间比较。

【结果】将结果填入表1-1-1 中。

表1-1-1 吗丁啉对小鼠胃排空的影响

组别剂量(g/kg)动物数(n)胃中残留率(%)

空白对照组

吗丁琳组

枳术丸组

【注意事项】①实验前小鼠必须严格禁食18h, 最好将小鼠置于能漏出粪便的代谢笼内。②解剖分离胃体的部位应尽量仔细, 以胃内容物漏出影响实验结果。③如是观察浓度较大中药煎剂的作用要注意药物殘留也会影响实验结果。④胃内容物的性状与化学成分均可影响胃排空和速度。

【思考题】①吗丁琳的主要药理作用有哪些? 其促进胃排空的作用机制是什么?

②从药理学的角度解释枳术丸组为什么常用于功能性消化不良的治疗？

二、药物对小鼠小肠运动的影晌

【目的】①学习用炭未推进法测定动物小肠运动的实验方法。

②观察M受体阻断药阿托品和泻下药芒硝对小肠运动的影响。

【原理】

消化管内容物的移动速度与胃排出时间、小肠的运动及消化管内容物的流动性有关。小肠的运动受肠神经及外来神经的控制，当机械和化学的刺激作用于肠壁感受器时，可通过局部的壁内反射而引起小肠蠕动增加，而副交感神经兴奋时可增强小肠运动，交感神经兴奋则产生抑制作用。利用口服炭末在肠道不被吸收的原理,以炭末作为指示剂,测定在一定时间内炭末在肠道的推进距离,可观察M受体阻断药和泻下药对小肠推进的作用。

【材料】

动物: 小鼠,体重18～22g 。

药品:用含有2%阿拉伯胶的水溶液制成12%活性炭末混悬液、生理盐水、盐酸阿托品、100%芒硝水溶液。

主要器材: 手术剪、眼科慑、直尺、注射器、灌胃针。

【方法】

取禁食不禁水20h 的小鼠, 随机分组, 称重,编号。各给药组动物分别皮下注射阿托品(10ｍｇ/ｋｇ)，灌胃给予200%芒硝水溶液(0.2ｍｌ/10ｇ)，空白对照组给予等容积蒸馏水。灌胃体积均为0.2ml/10g，20min后各组均灌胃给予10%的炭黑混悬液0.6 ml/只。20min后脱颈椎处死动物，剖开腹腔，分离肠系膜，剪取上端至幽门,下端至回盲部的肠管，轻轻将小肠拉直，准确量取小鼠幽门至炭黑推进前沿的长度以及小鼠小肠总长，按下式计算推进百分率。

炭黑推进百分率＝(炭未从幽门部到推进前沿的移动距离/小鼠小肠总长)×100%

实验结束后数据作全班统计, 计算各组炭末推进百分率的平均数(X) 和标准差(s), 以t检验统计法进行组间比较。

【结果】将结果填入表1-2-1 中。

表1-2-l 阿托品、芒硝对小鼠小肠运动作用的影响

组别剂量(g/kg)动物数(n)碳末移动距离(ｃｍ)小肠全长(ｃｍ)碳末推进率(%)空白对照组

盐酸阿托品组

芒硝水溶液组

【注意事项】①给药至处死动物的间隔以及处死至取出肠管的时间时间必须一致。②剪取肠系膜、肠管以及拉直肠管时动作轻柔,不可用力牵拉。③当因禁食不完全肠道内可能出现食物残留或与药物颜色难于分辨时,可剪破一点肠管, 挤出肠内容物,炭末为黑色颗粒状,食物等残留则为褐色软糊状,可加以区别。

【思考题】①中药泻下药根据泻下作用机制可分为几类? 芒硝属于哪一类?

②阿托品的药理作用、临床运用及不良反应是什么？