玉米赤霉烯酮毒素标准检测规程

玉米赤霉烯酮标准操作规程

1、目的

为了规范亲和柱净化样本中玉米赤霉烯酮的操作流程，特制订本操作规程。

2、范围

本标准适用于粮食、饲料、食品中玉米赤霉烯酮的检测。

3、检出限和定量限

项目

岛津安捷伦

样本检出限

（µg/kg）

样本定量限

（µg/kg）

样本检出限

（µg/kg）

样本定量

限（µg/kg）

ZEN 2.96 8.96 75.9 253.2 4、职责

部门名称部门职责

质量管理部1、负责本制度的实施。

2、负责本制度的监督执行。

5、程序

5.1 原理

测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱玉米赤霉烯酮，然后注入到高效液相色谱仪中用于检测。

5.2 溶液配制

5.2.1 提取液：80%乙腈

----用量筒移取800mL 乙腈，加入超纯水定容至至1L。

5.2.2 稀释液：0.01M PBST 溶液

----称取8g NaCl、0.2g KCl、0.2g KH2PO4和1.16g Na2HPO4.12H2O，加入800mL 超纯水溶解，加入2mL Tween-20，定容至1L。

5.2.3 玉米赤霉烯酮标准工作液：用色谱级甲醇将储备工作液分别稀释到1000 ng/ml、

500 ng/ml、200ng/ml、100 ng/ml、50 ng/ml。

5.3 样品前处理

----20g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛）加入100mL 提取液（80%乙腈-水溶液）混匀；

----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液；

----取10mL 滤液加入40mL 稀释液稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；

----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：1

5.4 净化

----取出免疫亲和柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上；(3mL 的免疫亲和柱去掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与注射器固定后使用)

----将柱子与气控操作架上的注射器连接固定，取适量处理后的溶液上样；

----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以1～2 滴/秒速度流出；

----待液体排干后，用10mL 去离子水洗涤2 次，流速2～3 滴/秒；

----待液体排干后，上样1mL 甲醇，流速1 滴/秒，收集洗脱液并定容至1mL；

----洗脱液用0.22μm 微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于HPLC分析。

* 每次上样前都要将上次液体完全排干。

* 谷物样本也适用于GB/T 5009.209-2008

5.5 液相测定

5.5.1 液相色谱条件

C18柱：250mm（长）×4.6mm（直径），填料粒径5μm；

流动相：60%乙腈

流速：1.0 mL/min；

柱温：40℃；

进样体积：20µL

荧光检测器：

激发波长：274nm

发射波长：440nm

5.5.2 色谱定量

分别取相同体积样液和标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试

样的响应值（峰高或峰面积），以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，将未知样本中玉米赤霉烯酮的峰面积带入标准曲线，得到试样中玉米赤霉烯酮的浓度，标准品色谱图参考下图：

数据文件名:ZEN-500ppb.lcd

样品名:ZEN-500ppb

0.0

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

6.0

7.0

8.0

9.0

10.011.012.0min

0510152025mV

检测器A Ex:274nm,Em:440nm Z E N

附图：ZEN-500ppb 标准品液相图谱

5.6 注意事项

----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）。 ----亲和柱2～8℃储存，不得冻存。 ----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变。 ----柱容量：2000ng ，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当 降低上样液的体积，重新检测。

----pH ：亲和柱的上样溶液pH 需在6～8 之间，若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调 节pH 。

----玉米赤霉烯酮可致癌，应戴手套操作。

----使用过的容器及标准品溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V ）浸泡过夜。 ----上机检测时的溶剂与流动相保持一致，可以消除溶剂效应的影响。 6、

相关文件

《免疫亲和柱检验标准》 《免疫亲和柱检验操作规程》 《岛津液相色谱仪标准操作规程》 《安捷伦液相色谱仪标准操作规程》 7、

相关记录 N/A 8、

附件 N/A

9、修改历史记录

编号变更类型修改条款及主要内容修改人修改日期

01 A N/A 魏丹丹2016.2.26

变更类型：A –新起草M - 修订