香菇多糖提取作业

香菇多糖提取提取法：用物理提取的方法生产精细化学品，即通过将某一种物质按一定的要求从混合物中提取出来从而获得产品的方法。

张杨杨精化11221、认识香菇多糖(1)香菇多糖结构式分子式：〔C42H72O36〕n分子量：〔1152.9995〕n(2)香菇多糖性质香菇多糖（l e n t i n a n;L N T）是从香菇中分离纯化的一种葡聚糖，是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。

密度：1.88g/c m3；沸点：1472℃a t760m m H g。

溶于碱溶液或甲酸，微溶于热水或二甲亚砜，不溶于冷水、醇、乙醚、氯仿、吡啶或六甲基磷酰胺。

对硫酸和盐酸稳定。

(3)香菇多糖的功能香菇多糖具有激活细胞免疫、调节多种体液免疫因子、诱导α-干扰素生成，调节机体免疫应答反应，诱导白细胞对肿瘤浸润，导致肿瘤部位血管扩张、出血、坏死，阻止病毒与宿主细胞的结合，提高S O D〔超氧化物歧化酶〕活性，抑制M D A〔丙二醛〕生成，抗脂质氧化，降低胆固醇，调节糖代谢、改善糖耐量、扩张胃肠道产生饱腹感而减轻食欲，降低血糖等功能。

【丙二醛】英文名：M a l o n d i a l d e h y d e;m a l o n i c d i a l d e h y d e;P r o p a n e d i a l简称：M D A分子式O H C-C H2-C H O分子量72.0634无色针状晶体，熔点72～74℃，一般含两个结晶水，60℃下真空干燥可得无水物，易潮解，纯的丙二醛在中性条件下稳定，但在酸性条件下不稳定。

由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而得，可在高真空下升华精制，主要用于医药中间体、感光色素的原料。

与蛋白质不相容，有潜在的致癌性。

【超氧化物歧化酶】英文名：O r g o t e i n(S u p e r o x i d e D i s m u t a s e,S O D)，别名肝蛋白、奥谷蛋白。

简称：S O D。

S O D是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。

(4)香菇多糖的应用①、香菇多糖在医药领域的应用香菇多糖在治疗胃癌、结肠癌、肺癌等方面具有良好疗效。

作为免疫辅助药物，香菇多糖主要用来抑制肿瘤的发生、发展与转移，提高肿瘤对化疗药物的敏感性，改善患者的身体状况，延长其寿命。

香菇多糖与化疗剂联合使用，有减毒、增效的作用。

化疗药物杀伤肿瘤细胞的选择性较差，对正常细胞也具有杀伤作用，产生毒副作用，造成化疗不能按期按量进行；由于化疗的剂量不足，常引起肿瘤细胞的耐药性，成为难治性癌症，影响疗效。

化疗过程中服用香菇多糖，可以增强化疗的疗效，并减轻化疗的毒性作用；同时，化疗过程中患者的白细胞下降的发生率、胃肠毒性、肝功能损害及呕吐的发生明显降低。

这充分说明了香菇多糖与化疗并用可以增效、减毒，并增强患者机体的免疫功能。

香菇多糖配合其他药物治疗慢性乙型肝炎，可提高乙肝病毒标志物的转阴作用，减少抗病毒药物的副作用。

此外，香菇多糖可用于治疗结核杆菌感染。

②、香菇多糖在保健食品领域的应用香菇多糖是一种特殊的生物活性物质，是一种生物反应增强剂和调节剂，它能增强体液免疫和细胞免疫功能。

香菇多糖的抗病毒作用机制可能在于其提高感染细胞免疫力，增强细胞膜的稳定性，抑制细胞病变，促进细胞修复等功能。

同时，香菇多糖还具有抗逆转录病毒活性。

因此，香菇多糖是一种有待开发的抗流感的保健食品。

(5)香菇多糖的质量标准主要活性成分：香菇[L e n t i n u s e d o d e s（B e r k）s i n g]子实体提取、精制的多糖。

按干燥品计算，含香菇多糖应不得少于92.0%。

性状：类白色或浅黄色粉末；无味，有引湿性。

在水、甲醇、乙醇或丙酮中几乎不溶；在0.5m o l/L氢氧化钠中溶解。

比旋度：取本品，臵五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，精密称取适量，加0.5m o l/L氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1m l中含10m g的溶液，依法测定（中国药典），范围在+2～+15之间。

【比旋度】一种物理性质。

用光照射尼科尔棱镜，光波只能从一个平面振动通过。

通过后的光叫作平面偏振光，当平面偏振光通过长1d m且每1m l含旋光物质1g的溶液，在一定的波长和温度下的旋光度称为比旋度。

【引湿性】药物的一种性质。

大多数药品在湿度较高的情况下,能吸收空气中的水蒸气而引湿,其结果使药品稀释,潮解,变形,发霉等现象，叫做引湿性。

也指在一定温度及湿度条件下物质吸收水分能力或程度的特性。

液体物质也具有引湿性。

2、追根溯源(1)诞生与发展过程1968年G o r o C h i h a r a首先从香菇子实体中浸提出6种香菇多糖,并证明其中一种具有明显的抗肿瘤作用,定名为L e n t i n a n1970年C h i h a r d和S a s a k i用热水浸提结合有机溶剂沉淀从香菇中提取到另外4种多糖。

1986年获日本厚生省批准生产并外销。

1988年我国卫生部批准进口，现今我国已有几家国产L N T上市(如南京振中和福州梅峰等)。

香菇多糖由于是单一组分，质量易于控制，且具有疗效高，剂量低，毒副作用小等优点，受到医生的青睐。

自此,世界各地掀起了一股从大型真菌中寻找抗肿瘤药物的热潮。

有关香菇多糖的研究尤其活跃,包括提取工艺及分离纯化研究,香菇多糖理化性质及药用价值研究。

但对多糖理化性质、结构、药效、药理等方面仍无定论,仍须继续深入研究。

(2)各种生产方法比较主要的多糖提取方法有如下几种:热水浸提法、酸（碱）浸提法、微波提取法、超声波提取法、复合酶解法等等。

①香菇多糖提取的工艺流程的对比多糖提取的常规工艺原料预处理→水(或酸)浸提→浸提物→真空浓缩→浓缩液→酒精沉淀→沉淀物→s e v a g e法脱蛋白→水相→丙酮洗涤→多糖粗制品采用复合酶解工艺原料预处理→复合酶解→酶解液→真空浓缩→浓缩液→酒精沉淀→沉淀物→丙酮洗涤→多糖粗制品复合酶解、酸处理结合热水浸提法提取香菇多糖的改进工艺原料预处理→复合酶解→酶解液→水浸提→酸浸提→浸提物→空浓缩→浓缩液→酒精沉淀→沉淀物→s e v a g e法脱蛋白→水相→丙酮洗涤→多糖粗制品②操作要点的对比热水浸提法向香菇处理物中加入20倍体积的蒸馏水,并在40℃水浴恒温下浸泡4h。

放臵冰箱冷冻柜中冷冻过夜。

将香菇浸泡液从冰箱中取出,解冻后在恒温水浴箱内分别抽提30m i n、60m i n、90m i n,用4层纱布过滤后收集滤液。

向滤渣中加入20倍体积的蒸馏水再抽提一次,沸煮时间同上用4层纱布过滤后收集滤液,合并两次滤液。

酸浸提法向香菇处理物中加盐酸溶液使其最终浓度分别为0.3m o l/L、0.4m o l/L、0.5m o l/L,臵于60℃恒温水浴中浸提8h,加适量的N a O H中和至中性,过滤,浓缩。

微波提取法向香菇处理物中按1:25加入去离子水浸泡过夜,粉碎,在一定微波条件下提取,冷却后离心,从上清液中取样测定其中多糖含量。

超声波提取法向香菇处理物中加入蒸馏水，进行超声波处理浸提。

8000r/m i n离心五分钟，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩至10~20m l，加入两倍体积的无水乙醇，进行醇沉。

放臵过夜后再次离心，留取沉淀物，干燥至恒重。

复合酶浸提法向香菇处理物的中加0.1g纤维素酶和0.5g果胶酶,目的是为了酶解细胞表面结构及细胞间连接物,使其部分糖类物质的溶出。

往酶解后的香菇处理物中加入20倍体积的蒸馏水,并在40水浴恒温下浸泡80m i n。

迅速升温沸腾90m i n,后过滤得滤液。

离心沉淀,上清液浓缩,乙醇沉淀。

复合酶解,酸与热水相结合浸提法向香菇处理物中加0.1g纤维素酶和0.5g果胶酶,目的是为了酶解细胞表面结构及细胞间连接物,使其部分糖类物质的溶出。

加20倍体积的水在40水浴恒温下浸泡80m i n。

后再迅速升温煮沸60m i n,用4层纱布过滤后收集滤液,再调节p H分别为4.5、5.0、5.5,进行酸浸提,然后再用4层纱布过滤后收集滤液。

合并两次滤液。

浓缩。

(3)现在常用的生产方法以上几种方法均有优点和缺点，而现如今也都在被使用！在此，我以热水浸提法来介绍其生产技术。

3、生产技术(1)原料及要求:将香菇清洗干净，除去其根部，将剩下的菌伞挤压，切小块放入真空干燥箱干燥，待香菇恒质量，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的香菇粉依次通过40，60，80，100目的筛子，得到40目以下、40～60目、60～80目、80～100目、100目粒度以上的样品，过筛之后把各级香菇粉分别装到清洁干燥的烧杯中，编号贴上标签，臵于真空干燥箱中待用。

【所谓的多少目】是指在每英寸（一个规定的单位长度2.54厘米）的长度上有多少筛孔，如果有80个孔，就是80目筛，孔数越多，孔眼也就越小，经80目筛后的颗粒的直径为2.54/80=0.03175c m(2)生产原理:多糖溶于热水,不溶于60%以上乙醇,也不溶于氯仿正丁醇.热水浸提时，香菇组织膨胀破裂，多糖成分浸出，所以用热水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质;因为热水也可以将蛋白类物质提取出来,所以用氯仿正丁醇萃取除去提取液中的蛋白。

(3)工艺流程：【s e v a g e法脱蛋白】正丁醇、氯仿混合溶液（正丁醇：氯仿=1：4或1：5）和样物提取液混合并且振荡，不需要加热，利用离心机离心，直到离液面交界处无白色混悬，也就是蛋白质介于提取液与试剂交界处即可，最后分别提取即可。

(4) 工艺流程说明及主要工艺参数：热水浸提向香菇处理物中加入20倍体积的蒸馏水,并在40℃水浴恒温下浸泡4h。

放臵冰箱冷冻柜中冷冻过夜。

将香菇浸泡液从冰箱中取出,解冻后在恒温水浴箱内分别抽提30m i n、60m i n、90m i n,用4层纱布过滤后收集滤液。

向滤渣中加入20倍体积的蒸馏水再抽提一次,沸煮时间同上，用4层纱布过滤后收集滤液,合并两次滤液。

真空浓缩将上述滤液用旋转蒸发器在75℃,0.09P a大气压下进行浓缩,收集浓缩液。

并用高速离心机在6000r p m离心15m i n,目的是去除蛋白质和杂质,得上清液。

酒精沉淀分离在浓缩液中加入4倍体积的95%乙醇,使香菇多糖呈絮状凝胶物沉淀析出,而大部分蛋白质和其它成分保留在溶液中,再用高速离心机在7000r p m下离心15m i n得沉淀。

s e v a g e法脱蛋白将上述沉淀溶于适量的蒸馏水中,分别加入20%体积的氯仿和7%体积的异戊醇生成絮状凝聚物,用高速离心机在5000r p m离心15m i n得沉淀。

重复上述操作,直至无凝聚物生成。

丙酮洗涤脱水将酒精沉淀物用丙酮洗涤脱水两次,倒入放有干燥滤纸的培养皿中(滤纸重0.98g),然后将培养皿放在50℃的烘干箱中进行干燥3h,得到香菇多糖粗制品。