T细胞检测技术
T细胞检测技术
贯穿全篇，却有两个句子别出深意，不单单是在写乐，而是另有所指，表达出另外一种情绪，请你找出这两个句子，说说这种情绪是什么。明确：醉翁之意不在酒，在乎山水之间也。醉能同其乐，醒能述以文者，太守也。这种情绪是作者遭贬谪后的抑郁，作者并未在文中袒露胸怀，只含蓄地说：“醉能同其乐，醒能述以文者，太守也。”此句与醉翁亭的名称、“醉翁之
2、分子生物学检测
（1）Realtime-PCR （2）分子杂交
三、T细胞介导的细胞毒实验
特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）识别靶细 胞表面特异性抗原，通过Fas途径及颗粒酶途径， 介导靶细胞溶解。
1、51Cr释放实验
铬酸钠（Na251CrO4）中的六价铬能被活 细胞摄取，并在细胞溶解后以三价铬的形 式被释放。
化，使文章越发显得音调铿锵，形成一种骈散结合的独特风格。如“野芳发而幽香，佳木秀而繁阴”“朝而往，暮而归，四时之景不同，而乐亦无穷也”。(2)文章多用判断句，层次极其分明，抒情淋漓尽致，“也”“而”的反复运用，形成回环往复的韵律，使读者在诵读中获得美的享受。(3)文章写景优美，又多韵律，使人读来不仅能感受到绘画美，也能感受到韵律美。
1.朝而往，暮而归；2.杂然而前陈者表转折
1.而不知人之乐；2.而不知太守之乐其乐也虚词“之”的用法用法
• 方法学评价 优点：灵敏、特异，是CTL活性测定的经典方法； 缺点：操作繁琐；放射性；靶细胞51Cr自发释放；
2、IC Assay（In vivo cytotoxicity Assay）
表达特定抗原的肿瘤细胞系经CFSE标记后， 皮下注射入小鼠，被小鼠体内抗原特异性CTL作用 24小时后，取出肿瘤细胞，检测其CFSE含量。
西)人，因吉州原属庐陵郡，因此他又以“庐陵欧阳修”自居。谥号文忠，世称欧阳文忠公。北宋政治家、文学家、史学家，与韩愈、柳宗元、王安石、苏洵、苏轼、苏辙、曾巩合称“唐宋八大家”。后人又将其与韩愈、柳宗元和苏轼合称“千古文章四大家”。
结核感染T细胞检测技术
2014/6/13
Tuberculosis
14
MTB感染的诊断技术
血清抗体检测：由于MTB的抗原性较弱，且与其它分支杆菌具有较强
的交叉免疫，其血清抗体检测的灵敏度和特异性均较低，不适合临床应用
结核菌素实验（TST）：原理为通过皮试检测机体对MTB的T细胞
免疫反应，所用抗原主要为结核菌提取物（PPD）
受机体免疫力抑制 没有临床症状
5%
再次激活
有临床症状 具有传染性
终身处于感染状态
潜伏感染
2014/6/13 Tuberculosis
活动性结核
18
结核感染T细胞检测技术背景
γ-干扰素释放实验
• 结核杆菌特异抗原
早期抗原靶6（ESAT-6） early secreted antigenic target 6 培养滤液蛋白10（CFP 10） culture filtrate protein 10
Good micrper ml of sputum
Slide Courtesy: Van Deun A, Nov 2003
2014/6/13
Tuberculosis
11
MTB培养速度缓慢
－－生长缓慢：增代时间为18－20小时，从1CFU到肉眼可 见的菌落需3－5周
乙肝 肺结核 痢疾 梅毒
5000 4000 3000 2000 1000 0
肺结核 狂犬病 乙肝 艾滋病
结核病在法定传染病报告中发病率和病死率始终占据前2的位置
2014/6/13 Tuberculosis 5
我国的结核病防治遭遇瓶颈
5次全国流行病学调查结核病患病率变化曲线
900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 1979年 1984-1985年 1990年 2000年 2010年
第十五章 免疫细胞功能检测技术
第十五章免疫细胞功能检测技术第一节淋巴细胞的功能检测免疫细胞是指参与机体免疫应答的细胞，大致可分为两类，一类能识别特异性抗原，主要指淋巴细胞群，包括T细胞、B细胞、NK细胞、K细胞等；另一类能捕获抗原，处理抗原，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。
淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。
体内试验主要是进行迟发型超敏反应，借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定。
一、T细胞功能检测（一）T细胞增殖试验1.原理：T细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后，细胞增殖，并转化为淋巴母细胞。
因此，淋巴细胞增殖反应又称淋巴母细胞转化。
2.刺激物：植物血凝素（PHA）、刀豆素A（ConA）和美洲商陆（PWM）、白喉类毒素、破伤风类毒素、纯化蛋白衍生物（PPD）和白色念珠菌等。
3.方法学：检测T细胞增殖反应的方法有：（1）形态学检查法：运用普通光学显微镜，简便易行。
缺点是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。
（2）3H-TdR掺入法：敏感性高，客观性强，重复性好，但需一定设备条件，及存在放射性核素污染问题。
（3）MTT比色法：本方法的敏感性虽不及3H-TdR掺入法，但操作简便，无放射性污染。
较常采用。
（二）T细胞分泌功能测定通过对于T细胞分泌细胞因子的含量、生物学活性和基因表达水平，以反映T细胞功能。
（三）T细胞介导的细胞毒试验常选用可传代的已建株的人肿瘤细胞，与待检淋巴细胞混合，观察肿瘤细胞杀伤的情况。
是评价机体细胞免疫水平的常用指标，特别是测定肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力，常作为判断预后和观察疗效的指标之一。
（四）体内实验1.特异性抗原皮肤试验：常用结核菌素皮肤试验。
其他皮试抗原还有白色念珠菌素、皮肤毛癣菌素、腮腺炎病毒等。
若受试者从未接触过该抗原，则不会出现阳性反应，因此阴性者也不一定表明细胞免疫功能低下。
【新技术、新项目】结核感染T细胞检测TB-IGRA的临床应用
【新技术、新项目】结核感染T细胞检测TB-IGRA的临床应
用
结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性肉芽肿性炎。
以肺结核最常见，死亡人数仅次于艾滋病。
肺外结核占整个发病率的10%-20%，死亡率占结核病全部死亡率的14.1%-17.6%。
全球三分之一的人群感染结核分枝杆菌，而中国近半感染，远高于世界平均水平。
一、T细胞免疫原理
使用全血样本，可检测所有结核感染；
采用体外检测方法及体外抗原刺激，保证安全性。
二、适应人群
1.辅助诊断结核杆菌的感染情况。
2.结核病高危人群的筛查。
三、结核病高危人群
免疫介导性疾病患者糖尿病患者;
HIV/AIDS患者; 器官移植患者;
肿瘤患者;
终末期肾病、血液透析的患者;
胃大部切除术后患者;
结核病密切接触者。
四、结核与其他疾病
1.类风湿性关节炎患者和接受TNF blocker治疗会增高结核病发病率；
2.强直性脊柱炎患者和接受TNF blocker治疗会增高结核病发病
率；
3.移植者的结核病发病率是普通人群的 20 - 74 倍；
4.糖尿病中肺结核的发病率是非糖尿病患者的2.27-4.26倍；
5.结核杆菌感染容易引起生殖器结核至不孕不育。
t细胞检测原理
T细胞检测是一种用于检测人体内T细胞数量和活性的方法。
T细胞是一种免疫细胞，能够识别和攻击感染机体的病原体，包括病毒、细菌、真菌等。
T细胞检测的原理主要基于以下两个方面：
1.免疫细胞分离和富集：T细胞是一种免疫细胞，可以通过分离和富集的方法从人体内提取出来。
常用的方法包括外周血T细胞分离、淋巴组织分离等。
2.T细胞活性检测：T细胞的活性可以通过多种方法进行检测，包括细胞因子检测、ELISPOT检测、流式细胞术检测等。
其中，细胞因子检测是一种常用的T细胞活性检测方法。
细胞因子是一类由免疫细胞分泌的小分子蛋白质，可以通过检测细胞因子的分泌量来判断T细胞的活性。
常用的细胞因子包括干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）等。
ELISPOT检测是一种常用的细胞因子检测方法，可以通过检测细胞因子在ELISPOT板上的分泌量来判断T细胞的活性。
流式细胞术检测则是一种通过荧光标记的细胞表面分子来检测T细胞活性的方法。
T细胞检测可以用于多种临床应用，包括感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤免疫治疗等领域。
t淋巴细胞亚群测定检测内容
t淋巴细胞亚群测定检测内容
淋巴细胞亚群检测主要包括以下内容：
1. T细胞亚群测定：T细胞是淋巴细胞中的一类重要的免疫细胞，根据表面标志物的不同，可以将其分为多个亚群。
常见的T细胞亚群包括CD4+ T细胞和CD8+ T细胞，它们在免疫调节和杀伤病原体方面起着重要作用。
2. B细胞细胞亚群测定：B细胞是淋巴细胞中的另一类免疫细胞，可以分泌抗体并参与体液免疫反应。
B细胞亚群测定可以确定不同类型的B细胞数量及功能状态。
3. 自然杀伤细胞（NK细胞）测定：NK细胞是淋巴细胞中的一类重要细胞，具有自然杀伤、分泌细胞因子等免疫功能。
NK细胞亚群测定可以了解NK细胞数量和杀伤活性。
4. 调节性T细胞（Treg细胞）测定：Treg细胞是T细胞中的一种特殊亚群，具有免疫抑制和免疫调节功能。
Treg细胞测定可以评估免疫调节的状态。
这些淋巴细胞亚群测定可以通过流式细胞术（Flow Cytometry）等实验方法进行。
这些检测内容可以帮助评估患者的免疫功能状态、了解免疫细胞亚群的数量及活性，对于诊断和治疗免疫相关疾病具有重要意义。
结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)
1520文档结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)
一.临床意义：
结核病临床表现复杂多样，可累及全身各个系统，给临床诊断带来很大困难。
本项目检测通过将分离标本中的单个核细胞加入结核分枝杆菌特异性抗原A、B分别进行细胞培养后，分别检测分泌γ干扰素的特异性淋巴细胞的数量诊断结核感染。
本检测诊断结核感染的敏感性为90%-95%，特异性为93%-100%。
对临床诊断或排除结核病具有重要的参考价值。
二.标本类型、采集及运送要求：
1.采集要求：标本采集后4小时内必须送到实验室，标本采集后如果超过4小时未送检将严重影响检测结果。
2.静脉血：肝素钠（绿头管）抗凝管采集静脉血4ml，立即颠倒数次，充分混匀，以免血液凝固。
采血后向试管中注入血液时请缓慢进行，避免用力过猛造成细胞破坏影响检测结果。
三．标本采集时间、结果发放时间及检测频率
1.标本采集时间：每周一上午12点之前采血；并于4小时之内送到临床微生物实验室。
（必要时可与临床微生物实验室联系）
2.结果发放时间：周二下午4点半检验报告发出。
3.检测频率：暂定每周检测一次。
. 1。
t细胞功能检测指标
t细胞功能检测指标
T细胞功能检测通常涉及一系列指标，这些指标可以帮助评估T细胞的活性、功能和免疫应答。
这些检测通常在免疫学和临床诊断中使用，以评估个体的免疫系统状态。
一些常见的T细胞功能检测指标包括：
1. 细胞表面标记物：通过检测T细胞表面的特定蛋白标记物（如CD3、CD4、CD8等），可以确定T细胞的亚群类型和数量。
2. T细胞激活标志物：比如CD25和CD69等，这些标志物能显示T细胞是否处于激活状态。
3. 细胞因子产生：如干扰素γ（IFN-γ）、白介素（IL-2、IL-4、IL-10等）和肿瘤坏死因子（TNF-α）等，检测T细胞分泌的细胞因子来评估其功能状态。
4. 细胞增殖能力：通过测定T细胞的增殖能力，可以评估其对外部刺激的反应。
5. 细胞毒性和杀伤功能：用于评估T细胞对肿瘤细胞或感染细胞的毒杀作用。
6. T细胞记忆功能：评估T细胞的记忆功能，包括对抗原的记忆反应和长期免疫记忆的形成。
这些指标在研究和临床实践中有不同的应用，可用于评估免疫系统的健康状况、对疾病的应答以及免疫治疗的有效性。
针对特定的疾病或治疗方法，可能会选择不同的T细胞功能指标进行检测和评估。
t细胞因子检测步骤
t细胞因子检测步骤以下是T细胞因子检测步骤：一、基本动作要领1. 样本采集这里要注意啦，样本可以是外周血或者组织来源的细胞。
比如，如果是采外周血呢，要用合适的抗凝采血管，像肝素抗凝管就经常用。
采血过程要严格按照无菌操作来，我之前就做错过，没注意消毒就采血，结果可能混入杂菌，影响后面结果呢。
采血量也要准确，按照实验需求来，一般来说几毫升就够了。
2. 细胞分离从采集的样本里把T细胞分离出来。
一种比较常用的方法是密度梯度离心法。
先在离心管里小心地加入像淋巴细胞分离液那样分层液，然后沿着管壁缓慢地把血液样本加进去，千万别搞混顺序，一混就白做了。
这一步就像把不同颜色的珠子分开一样，要慢要稳。
然后把离心管放到离心机里，转速和时间设定好，比如1500转每分钟，离心20分钟左右。
离心完就可以看到分层了，中间那层白色的就是我们想要的淋巴细胞啦。
用移液器小心地把这层细胞吸出来。
有时候细胞的量不够我们检测的要求，所以采集样本的时候量可以适当多一点，在允许范围内嘛。
3. 细胞培养把分离出的T细胞铺到培养板里，提前要在培养板里加好合适的培养液，培养液里各种营养成分要齐全，像氨基酸啊，葡萄糖啊之类的一个都不能少。
这一步我试过好多次，不同细胞株对培养液的偏好有点差别，要根据自己用的T细胞类型来选择。
接种的细胞数量也要合适，太密或者太稀都不利于后面的检测。
这个过程要在超净台里操作，避免细胞污染，我就有次在普通台面上操作，结果细胞长了好多杂菌。
4. 刺激细胞产生细胞因子为了检测细胞因子，有时候要对细胞进行刺激。
可以用一些有丝分裂原，比如植物血凝素（PHA）或者刀豆蛋白A（ConA）。
把这些刺激剂按照一定浓度加到细胞培养体系里，搅拌均匀，注意这个浓度不能随便定哦，我之前随便定了个浓度，结果细胞因子产量要么太多，检测不出来准确值，要么太少，测不到。
这个我都是查很多文献，根据自己的细胞类型找到一个合适的刺激浓度的范围。
一般来说，像PHA的话，可能每毫升培养液里加1 - 10微克就差不多。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，对免疫细胞功能的检测是一项至关重要的工作。
免疫细胞就像是我们身体内的“卫士”，它们时刻守护着我们的健康，抵御着各种病原体的入侵。
而了解这些“卫士”的工作状态和能力，对于诊断疾病、评估治疗效果以及探索新的治疗方法都具有极其重要的意义。
接下来，让我们一起深入了解一下免疫细胞功能检测技术。
免疫细胞包括多种类型，如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞（自然杀伤细胞）、巨噬细胞等。
每种免疫细胞都有其独特的功能和作用机制，因此针对不同类型的免疫细胞，检测技术也有所不同。
T 细胞功能检测是免疫细胞功能检测中的重要部分。
其中一种常见的方法是淋巴细胞增殖实验。
这就好比是观察 T 细胞在受到刺激后是否能积极“生长壮大”。
通过在体外给 T 细胞特定的刺激物，比如植物血凝素（PHA）等，然后观察细胞的增殖情况。
如果 T 细胞能够迅速增殖，说明它们具有较强的反应能力，反之则可能提示免疫功能存在异常。
细胞毒性 T 细胞（CTL）杀伤活性测定也是评估 T 细胞功能的重要手段。
想象一下 CTL 就像是训练有素的“杀手”，专门攻击被病原体感染的细胞或者癌细胞。
检测它们的杀伤活性，可以通过放射性核素释放法、乳酸脱氢酶释放法等。
这些方法能够直观地反映出 CTL 消灭“敌人”的能力。
再来说说 B 细胞功能检测。
B 细胞的主要功能是产生抗体。
检测血清中各类免疫球蛋白（Ig）的水平，如 IgG、IgA、IgM 等，能够间接反映 B 细胞的功能状态。
另外，通过检测 B 细胞对抗原的反应能力，比如测定抗体产生的量和亲和力，也可以评估B 细胞的功能是否正常。
NK 细胞作为机体天然免疫的重要组成部分，其功能检测也不容忽视。
NK 细胞具有直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的能力。
常用的检测方法有放射性核素标记法、流式细胞术等。
这些方法可以帮助我们了解 NK 细胞的活性和数量，从而判断其在免疫防御中的作用是否正常发挥。
除了上述针对单个免疫细胞类型的检测方法，还有一些综合性的检测技术。
结核感染T细胞检测
T-SPOT.TB高灵敏度
种类
活动性结核/ 灵敏度
内容摘要
将T-SPOT.TB的检测结果与最后通过涂片和培养确诊的结 果进行比较。包括牛型结核杆菌和非洲型结核杆菌感染的 患者。T-SPOT.TB的灵敏度为97.2%。（CI 90.3-99.7%）
在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度 为94%。
87
Lee et al.
ERJ 2006; 28:24–30
30
Clark et al. Clin. Exp.
Imm.
2007; 150(2):238-44
140
Kang et al Chest.
2007 Sep;132(3):959-65
抗原刺激后分泌γ 干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放γ 干扰素的T淋巴
细胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统 对斑点进行计数，1个斑点代表一个分泌细胞，计算出抗 原特异性细胞的频率。
空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数 大于20时视为试验有效
Immunol 2008; 15;168-
71
T-SPOT.TB高特异性 检测所用的ESAT-6＆CFP 10抗原均来自结核
分枝杆菌基因组RD1区域，RD1区基因仅存在于结 核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）。 卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区基因 因此 T-SPOT.TB不会受卡介苗或者非结核分枝杆 菌影响。
32
Kim et al. Arch Intern
Med.
t细胞数量检测方法
t细胞数量检测方法
T细胞数量检测方法通常使用流式细胞术或PCR技术进行。
以下是常用的方法之一：
1. 流式细胞术（Flow cytometry）：该方法利用荧光标记的抗
体来检测和计数T细胞。
首先，采集血液样本或其他组织细胞，然后将细胞表面标记上抗体。
这些抗体与T细胞的特定
标记物结合，使其在流式细胞术仪器中可以被检测到和计数。
通过对标记T细胞数量的统计，可以得出T细胞的数量。
2. PCR（Polymerase Chain Reaction）：PCR是一种广泛应用
于分子生物学的技术，可用于检测和定量特定基因片段的数量。
对于T细胞数量检测，可以使用PCR方法来放大和检测与T
细胞相关的基因片段，例如T细胞受体基因。
通过将这些基
因片段的数量进行放大和检测，可以推断T细胞的数量。
以上是常见的T细胞数量检测方法之一，可以根据实际需要
选择适合的方法进行检测。
结核感染T细胞检测方案
32
Kim et al. Arch Intern
Med.
2007; 167;20:2255-2259
186
Kim et al. Am J Med
2009；122, 189-195
58
Janssens et al ERJ
2007；30(4):722-8
32
Dominguez et al Clin
Vacc
结核特异性T细胞，这些淋巴细胞在受到结核特异
抗原刺激后分泌γ 干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放γ 干扰素的T淋巴细
胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统 对斑点进行计数，1个斑点代表一个分泌细胞，计算出抗原 特异性细胞的频率。
空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点 数大于20时视为试验有效
Diseases
2009,9:60
6.结论
T-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感 性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今 天， T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参考。
基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点 ， T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，支气 管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用 于对肺内及肺外结核的诊断。
受试者数 量
72
文献发表
Meier et al Eur J Microbiol Infect Dis (2005)；24: 529-536
在经培养确诊的活动性结核受试者中，T-SPOT.TB的灵敏 度为96.6%。其中29例免疫力低下患者，T-SPOT.TB的灵 敏度为100%
在确诊病例（涂片或培养阳性）和临床诊断病例（有临床 症状和抗痨治疗有效）中，T-SPOT.TB的灵敏度为90.3% ，并且不受CD4细胞数量影响。
评价t淋巴细胞功能的试验
评价t淋巴细胞功能的试验
淋巴细胞是免疫系统中的重要细胞，能够识别和攻击入侵体内的病原体。
而评价淋巴细胞功能的试验就是通过检测淋巴细胞的不同功能来评估免疫系统的活性和健康程度。
其中，最常用的试验包括：
1. T细胞反应试验：通过检测T细胞对特定抗原的反应来评估其功能状态。
例如，用特定抗原刺激T细胞，观察其是否能够产生足够的细胞因子和分泌物，从而反映出其活性。
2. B细胞功能试验：通过检测抗体水平、抗体产生速度等指标来评估B细胞的功能。
例如，用不同的抗原刺激B细胞，观察其是否能够迅速产生足够的抗体，反映其活性和敏感性。
3. NK细胞活性试验：通过检测NK细胞对靶细胞的杀伤作用来评估其活性状态。
例如，用靶细胞刺激NK细胞，通过检测杀伤率来反映NK细胞的功能状态。
除了以上试验，还有其他一些用于评估淋巴细胞功能的试验，如细胞增殖试验、淋巴细胞亚群分析等。
这些试验能够帮助医师准确地评估免疫系统的活性和健康状况，为临床诊断和治疗提供重要参考。
- 1 -。
tcr测试方法
tcr测试方法TCR测试方法TCR（T-cell receptor）测试方法是一种用于研究和分析T细胞受体的技术。
T细胞受体是T细胞表面的一种蛋白质，它在机体的免疫应答中起着重要的作用。
TCR测试方法通过分析T细胞受体的结构和功能，可以帮助科研人员深入了解T细胞的免疫应答机制，以及相关疾病的发生和发展过程。
一、TCR测试的原理TCR测试方法主要包括克隆、测序和功能分析等步骤。
首先，科研人员从体内或外源性样本中获取T细胞，然后通过克隆技术将T细胞分离为单个细胞。
接下来，利用PCR（聚合酶链反应）技术扩增T细胞受体基因的DNA片段，并进行测序分析。
通过测序数据，可以确定T细胞受体的基因序列和变异情况。
最后，科研人员可以利用功能分析方法，如细胞培养和功能实验，评估T细胞受体的功能和效应。
二、TCR测试的应用领域TCR测试方法在免疫学、肿瘤学和传染病学等领域具有广泛的应用价值。
在免疫学研究中，科研人员可以利用TCR测试方法深入研究T细胞的抗原识别和免疫应答机制，从而揭示免疫系统的调控机制和疾病发生的原因。
在肿瘤学领域，TCR测试方法可以用于研究肿瘤免疫逃逸机制，并开发新的免疫治疗策略。
此外，TCR测试方法还可以用于传染病的诊断和治疗，如艾滋病和乙肝等病毒感染。
三、TCR测试的优势和挑战与传统的免疫学方法相比，TCR测试方法具有一些明显的优势。
首先，TCR测试方法可以通过高通量测序技术，同时分析大量的T细胞受体序列，从而获得更全面和准确的信息。
其次，TCR测试方法可以直接从体内样本中获取T细胞，并进行分析，避免了对动物模型的依赖。
然而，TCR测试方法也面临一些挑战。
例如，T细胞受体的高度多样性和变异性使得数据分析变得复杂，需要开发适用的分析工具和算法。
此外，TCR测试方法在样本处理、数据分析和结果解释等方面也存在一定的技术难题。
四、TCR测试在个体化医疗中的应用个体化医疗是近年来兴起的一种医疗模式，旨在根据个体的基因组信息和疾病特征，为患者提供定制化的治疗方案。
结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义
THANKS
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与免疫学指标关联
分析TB-IGRA检测与免疫学指标（如CD4+T细胞计数、干扰素-γ释放等）的关系，发现这些 指标在结核病患者中异常表达，且与TB-IGRA检测结果相互印证。
与临床表现及预后关联
探讨TB-IGRA检测结果与结核病患者临床表现及预后的关系，发现阳性结果与患者病情严 重程度、治疗反应及预后密切相关。
完善相关法规和政策支持
01
制定行业标准
建立TB-IGRA检测技术的行业标 准和质量管理体系，确保检测结 果的准确性和可靠性。
02
加强政策扶持
03
完善医保报销政策
政府应加大对TB-IGRA检测技术 的投入和支持力度，推动相关产 业的发展和创新。
将TB-IGRA检测技术纳入医保报 销范围，减轻患者的经济负担， 提高检测的可及性。
05
临床案例分析与解
读
不同类型结核病患者案例分析
活动性结核病案例
通过对比活动性结核病患者的TB-IGRA检测结果，发现其 阳性率较高，表明该检测对于活动性结核病的诊断具有较 高敏感性。
潜伏性结核病案例
分析潜伏性结核病患者的TB-IGRA检测结果，可见部分患 者呈现阳性反应，提示存在结核分枝杆菌感染，但无明显 临床症状。
加强国际间合作与交流
分享经验与技术
加强与其他国家和地区的交流与合作，分享TB-IGRA检测技术的研 发和应用经验，共同推动技术的进步和发展。
参与国际标准制定
积极参与国际标准的制定和修订工作，推动TB-IGRA检测技术的国 际化和标准化进程。
加强科研合作
鼓励科研机构和企业加强合作，共同开展TB-IGRA检测技术的基础 研究和应用研究，推动技术的不断创新和发展。
t淋巴细胞亚群测定检测内容
t淋巴细胞亚群测定检测内容淋巴细胞是免疫系统中的重要细胞群，包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等。
其中，T淋巴细胞又可分为多个亚群，如辅助性T细胞（CD4+ T细胞）、细胞毒性T细胞（CD8+ T细胞）等。
这些不同的淋巴细胞亚群在免疫应答中发挥着不同的作用，具有重要的生理功能。
T淋巴细胞亚群的检测对于研究免疫功能的状态、诊断某些免疫相关疾病、评估治疗效果等具有重要意义。
通过测定T淋巴细胞的各个亚群的比例和数量，可以了解机体的免疫状态及炎症程度。
例如，在免疫抑制治疗后，CD4+ T细胞数量减少，容易导致感染的发生。
而在某些自身免疫性疾病中，CD8+ T细胞可能异常激活，导致炎症反应增加。
T淋巴细胞亚群的检测方法有多种，常用的包括流式细胞术、酶联免疫吸附法等。
这些方法在具体的实验室操作中都有一定的局限性，需要严格控制实验条件，确保检测结果的准确性和可靠性。
此外，对于正常值的确定和不同实验室之间的结果比对也是一个重要的问题，需要更多的研究和标准化操作的制定。
除了在科研领域中的应用，T淋巴细胞亚群的检测在临床诊断和治疗中也有着广泛的应用。
例如，在HIV感染者的监测中，CD4+ T细胞计数是评估疾病进展和治疗效果的重要指标之一。
通过监测CD4+ T细胞的数量，可以及时调整治疗方案，有效控制病情发展。
在肿瘤的免疫治疗中，T淋巴细胞亚群的检测也可以辅助判断患者的免疫状态，选择最合适的治疗方案。
在未来，随着免疫疗法的发展和个体化治疗的需求增加，T淋巴细胞亚群的检测将变得越来越重要。
我们需要进一步深入研究不同T淋巴细胞亚群在免疫反应中的作用机制，发现新的治疗靶点，并开发更加灵敏、准确的检测技术。
通过不断地探索和创新，我们可以更好地利用T淋巴细胞亚群的信息，为免疫相关疾病的诊断和治疗提供更好的支持。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫细胞功能检测技术是指通过对免疫细胞（如淋巴细胞、单核细胞等）进行活力和功能评估，以了解免疫系统的状态和功能水平，为临床治疗和预防提供有价值的参考和支持。
目前，常用的免疫细胞功能检测技术主要包括以下几种：1. T细胞亚群分析T细胞是人体免疫系统中重要的细胞类型之一，可被分为CD4+ T 细胞和CD8+ T细胞两类。
通过分析不同亚群T细胞数量和比例的变化，可以判断免疫系统是否受到某些疾病或感染的影响。
T细胞亚群分析的方法主要包括流式细胞术、荧光素标记实时定量PCR、酶联免疫吸附法等。
其中，流式细胞术是最常用的方法之一，其优点在于可以同时对多种细胞亚群进行快速定量分析。
2. 细胞因子测定细胞因子是一类分泌性蛋白质，可在免疫细胞之间传递信号和调节免疫反应。
通过测定细胞因子的水平和类型，可以判断免疫系统是否处于某种状态，如感染、炎症、肿瘤等。
常用的细胞因子测定方法包括酶联免疫吸附法、流式细胞术、ELISPOT技术、荧光素标记实时定量PCR等。
其中，酶联免疫吸附法是最常用的方法之一，其优点在于具有高灵敏度和良好的专一性。
3. 免疫活性物质检测免疫活性物质是指免疫细胞释放的能够杀死或抑制病原微生物的物质，如抗体、溶菌酶、淋巴因子等。
通过测定免疫活性物质的水平和类型，可以评估免疫系统对不同病原微生物的防御能力和效果。
常用的免疫活性物质检测方法包括酶联免疫吸附法、荧光素标记实时定量PCR、免疫印迹等。
其中，酶联免疫吸附法是最常用的方法之一，其优点在于具有高灵敏度和良好的专一性。
4. 免疫细胞功能测定免疫细胞功能测定是通过对免疫细胞的活力和功能进行评估，了解其对不同刺激物的反应能力和效果。
常用的免疫细胞功能测定方法包括：细胞增殖和细胞毒性检测、淋巴细胞转化试验、淋巴细胞功能检测、NK细胞活性检测等。
其中，淋巴细胞转化试验是一种常用的方法，其原理是通过刺激免疫细胞，如蛋白质抗原、细菌和病毒等，来评估其对不同刺激物的响应能力。
医学检验技术：T细胞增殖试验及其类型
医学检验技术：T细胞增殖试验及其类型
T细胞增殖试验的含义：
T细胞增殖试验又称T细胞转化试验。
T细胞在体外经某种物质刺激，细胞代谢和形态相继发生变化，在24～48h内细胞内蛋白质和核酸的合成增加，产生一系列增殖的变化，如细胞变大、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等，由淋巴细胞转变为淋巴母细胞。
因此，这种淋巴细胞增殖又称为淋巴细胞转化。
据此可判断出淋巴细胞对有关刺激的反应性与功能状态。
(1)非抗原性刺激物：如植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)、美洲商陆(PWM)、脂多糖(LPS)，通称促有丝分裂原。
其中LPS刺激B细胞，PWM可刺激T和B类细胞，PHA和ConA刺激T 细胞增殖。
(2)抗原性刺激物：如结核菌素、葡萄球菌毒素、破伤风类毒素、链球菌激酶、肿瘤抗原、同种异型组织抗原等。
T细胞增殖试验的类型：
(1)T细胞增殖试验形态法：其原则是将外周血液或分离的单个细胞与适量的植物血凝素(PHA)混合，置37℃培养72h，取培养细胞作涂片染色镜检。
据细胞的大小、核与胞浆的比例、胞浆的染色性和核结构以及有无核仁等特征，分别计数淋巴母细胞、过渡性母细胞和核有丝分裂相以及成熟的小淋巴细胞，以前三者为转
化细胞，每份标本计数200个细胞，计算转化率。
(2)核素法：绝大多数外周血T细胞通常处于细胞周期的G0期，受特异性抗原或促有丝分裂原激活后，从G0期进入G1期，开始合成蛋白质、RNA和DNA前体物质等，为DNA复制准备物质基础，然后进入S期，细胞合成DNA量倍增，此时若在培养液中加入3H标记的TdR，后者掺入新合成的DNA中，据掺入的多少推测细胞增殖程度。
结核感染T细胞检测
140 32
在免疫力正常和免疫力低下的受试人群中，T-SPOT.TB的 灵敏度分别为94%和95%。所有受试者中，42%为肺外结 核患者。
经培养确诊、抗痨治疗不超过2周的结核患者用TSPOT.TB检测，阳性率98%（57/58）。 在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度 为94%。
1新检验项目结核感染特异性结核感染特异性tt细胞细胞tspottb检测技术检测技术1结核病的疫情结核病的疫情结核病是一种慢性传染病可在身体各个器官发病其中以肺结核最为常见因此肺结核病是一种严重危害人类健康的传染病得了肺结核病如果不能彻底治疗就会完全丧失劳动能力而且还会传染他人对个人家庭和社会都是极大的危害
受试者数 量 72
文献发表
Meier et al Eur J Microbiol Infect Dis (2005)；24: 529-536 Lee et al. ERJ 2006; 28:24–30
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T-SPOT.TB高特异性 检测所用的ESAT-6＆CFP 10抗原均来自结核
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（2）3H-TdR掺入法（MTT法） PHA 淋巴细胞（54h） 3HTdR掺入 （MTT被还原） 收集细胞，检测β射线（490nm吸光度）
SI
试验孔cpm(A490nm )均值 对照孔cpm(A490nm )均值
➢优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。 ➢缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。
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2、表面标志CD107a/b的检测
CD107a/b表达于T细胞内的质膜上，随着脱颗 粒作用，一过性表达于细胞表面；T细胞表面 CD107a/b的检测可反应T细胞的溶解靶细胞效应。 方法学评价 ➢优点：简便，快速，敏感，不受HLA型别的限制 ➢缺点：脱颗粒作用的非特异性
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谢谢
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（3）CFSE（PKH26等）染色法 原理：
CFSE等染料可连结到细胞内蛋白的氨基酸群 （PKH26能插入脂膜），并随细胞分裂而分配到子 代细胞中，每分裂一次，荧光强度减少一倍。
• 方法学评价 ➢优点：操作简单；重复性强；安全； ➢缺点：CFSE可能干扰细胞增殖
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二、T细胞分泌功能的检测
• 方法学评价 ➢优点：灵敏、特异，是CTL活性测定的经典方法； ➢缺点：操作繁琐；放射性；靶细胞51Cr自发释放；
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2、IC Assay（In vivo cytotoxicity Assay）
表达特定抗原的肿瘤细胞系经CFSE标记后， 皮下注射入小鼠，被小鼠体内抗原特异性CTL作用 24小时后，取出肿瘤细胞，检测其CFSE含量。 方法学评价 ➢优点：反应体内杀伤效果； ➢缺点：影响因素多；
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四、T细胞表面标志的检测
特异性T淋巴细胞活化需要第一信号和第二信号。 因此检测CTL表面特异性受体或相关的表面标志可 以反映CTL的活化状态。
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1、Tetramer技术
模拟T细胞活化的第一信号，构建荧光标记的 MHC-肽复合物，被特异性T细胞识别。通过检测 标记的荧光，反应活化的特异性T细胞。 方法学评价 ➢优点：简便，快速，敏感 ➢缺点：成本高，受HLA型别的限制
T细胞经各种丝裂原或特异性抗原刺激后, 分泌的各种细胞因子,可借助免疫学、细胞 生物学及分子生物学技术分别检测细胞因 子含量、生物学活性或基因表达水平，从 而间接反映T细胞功能。
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1、生物活性检测 • 对于依赖于该细胞因子而增殖的细胞，
细胞增殖程度与细胞因子含量呈正相关。
• 方法学评价 ➢优点：敏感（pg）；显示细胞因子的活性； ➢缺点：影响因素多（同一细胞分泌多种细胞因子， 多种细胞因子呈现相同功能，细胞因子及其相应受 体同时分泌）；
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2、分子生物学检测 （1）Realtime-PCR （2）分子杂交
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三、T细胞介导的细胞毒实验
特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）识别靶细 胞表面特异性抗原，通过Fas途径及颗粒酶途径， 介导靶细胞溶解。
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1、51Cr释放实验
铬酸钠（Na251CrO4）中的六价铬能被活 细胞摄取，并在细胞溶解后以三价铬的形 式被释放。
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2、免疫学检测 （1）ELISA: 操作简单，非特异性影响大； （2）ELISPOT: 高度的敏感性，可重复性强，
抗原特异性精确； （3）ICS：可同时检测产生细胞因子的细胞表
型；需要样本量大于ELISPOT，破膜后的细 胞不能做进一步功能检测；
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方法学评价
➢优点：简单，适用性广，应用特异的单克隆抗体， 可检测单一细胞因子的含量； ➢缺点：无法反应细胞因子的生物活性；不同单克 隆抗体检测的结果不同；敏感性稍差（100pg）
一、淋巴细胞增殖实验
1、原理
淋巴细胞
刺激物
DNA合成
分化
母细胞
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细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松
2、检测方法 （1）形态学检测
转化率
转化的淋巴细胞数
100%
转化和未转化的淋巴细 胞数
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方法学评价
➢优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能 观察结果，适于基层实验室应用。 ➢缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受