实验三革兰氏染色

约24h营养琼脂斜面培养物。
2 溶液和试剂 革兰氏染色液，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，番红复染液
3 仪器或用具 夹子、滤纸 四、操作步骤 1 制片
显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶
（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、无菌生理盐水、载玻片
涂片：固体培养物，液体培养物。注意事项：载玻片要洁净 无油迹；滴加生理盐水和取菌不宜过多；涂片均匀，不宜过
用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，用滴管流加95％的乙
醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。脱色时间一般 液20－30 S。脱色不足与过度都会影响和改变染色的结果。 5 复染 用番红液复染约2min，水洗。
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革兰氏染色– 染色
6 镜检
干燥后，用油镜观察。蓝紫色为G+,红色为G-。 7 混合涂片染色 将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作混合涂片、染色、镜检进行 比较。
Procedures of Gram Staining
Gram positive or Gram negative?
实验报告
1．绘图说明经革兰氏染色后大肠肝菌和金黄色葡萄球 菌的染色结果。
2．思考题
思考题
现有一株未知杆菌，个体明显大于大肠 杆菌，请你鉴定该菌株是革兰氏阳性菌还 是革兰氏阴性菌？ 2. 为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成 假阴性？ 3. 革兰氏染色是否成功，有哪些问题需要 注意，为什么？
1.
实验三 细菌的单染色与革兰氏 染色法
1 微生物染色的基本原理
微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化学因素的作用而进 行的。物理因素如细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作 用等。化学因素则是根据细胞物质和染料的不同性质而发生的各种化 学反应。酸性物质对于碱性染料较易吸附，且吸附作用稳固；同样， 碱性物质对酸性染料较易于吸附。如酸性物质细胞核对于碱性染料就 有化学亲和力，易于吸附。
细菌的等电点较低，pH值大约在2—5之间，故在中性、碱性或弱酸 性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷；而碱性染料电离时染料离子带 正电。因此，带阴电的细菌常和带阳电的碱性染料进行结合。所以，在 细菌学上常用碱性染料进行染色。
2 染色方法
微生物染色方法一般分为单染色法和复染色法两种。前者用一种染
料使微生物染色，但不能鉴别微生物。复染色法是用两种或两种以上染
厚。
干燥：室温自然干燥。 固定：涂面朝上，通过火焰2－3次。热固定温度不宜过高， 以玻片背面不烫手为宜。
革兰氏染色– 制片
A. 加小滴水
B. 涂成薄层
C. 固定菌体
2 初染 滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）,染色1－2 min，水洗。 3 媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖菌膜约1min，水洗。 4 脱色
料，有协助鉴别微生物的作用，故亦称鉴别染色法。常用的复染色法有 革兰氏染色法和抗酸性染色法，此外还有鉴别细胞各部分结构的（如芽
胞、鞭毛、细胞核等）特殊染色法。
实验三 细菌的革兰氏染色法
一、目的要求
1 学习掌握革兰氏染色法。
2 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 二、基本原理 三、器材 1 菌种 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌