细胞培养实验室的设置及设备
细胞培养实验室建设基本要求
细胞培养实验室建设基本要求.txt
细胞培养实验室建设基本要求
细胞培养实验室是进行细胞培养研究和实验的重要场所，为确
保实验的准确性和顺利进行，以下是细胞培养实验室建设的基本要求：
1. 设备和设施：
- 实验室应具备适当的面积和布局，确保实验操作的顺利进行。
- 实验室内应配置细胞培养箱、恒温培养箱、显微镜等必要的
设备。
- 实验室内应具备合适的洗手设施，并配备必要的实验室安全
设备。
2. 环境控制：
- 实验室应具备良好的通风系统，确保空气流通和污染物的排除。
- 实验室内的温度、湿度和光照条件应适宜，以满足细胞培养
的要求。
- 实验室内应设置适当的防护措施，避免细菌和真菌的污染。
3. 材料和试剂：
- 实验室应配备高质量的细胞培养耗材，如培养基、培养皿、
培养液等。
- 实验室应储备必要的实验试剂，如抗生素、细胞凋亡试剂等，并确保其保存和使用符合规范。
4. 实验操作：
- 实验室应建立严格的实验操作规范，包括细胞培养的标准操
作流程。
- 实验人员应接受相应的培训，熟悉和掌握细胞培养实验的技
术要求。
- 实验操作过程中应注意卫生和安全，遵守实验室操作规程。
细胞培养实验室建设的基本要求对于确保实验结果的准确性和
可靠性非常重要。
建立符合标准的实验室能够为科研工作提供良好
的支持，确保实验顺利进行。
细胞实验室配置依据
细胞实验室配置依据
（原创版）
目录
1.细胞实验室的配置目的
2.细胞实验室的配置要求
3.细胞实验室的配置建议
正文
细胞实验室是进行细胞研究和实验的重要场所，它的配置直接影响到实验结果的准确性和实验人员的安全。
下面我们将从细胞实验室的配置目的、配置要求和配置建议三个方面来详细介绍。
一、细胞实验室的配置目的
细胞实验室的配置目的是为了提供一个适合细胞生长和繁殖的环境，同时确保实验过程的安全和实验结果的准确。
二、细胞实验室的配置要求
细胞实验室的配置要求主要包括以下几个方面：
1.环境要求：细胞实验室应设在清洁、安静、光线适宜、通风良好的地方，并应避免与其他实验室共用通风系统。
2.设备要求：细胞实验室应配备细胞培养箱、显微镜、离心机、PH 计、冰箱等基本设备，并应根据实验需要配备相应的高级设备。
3.材料要求：细胞实验室应准备常用培养基、培养皿、培养瓶、细胞刮刀、移液器等实验材料和工具。
三、细胞实验室的配置建议
细胞实验室的配置建议主要包括以下几个方面：
1.人员配置：细胞实验室应配备专业的实验人员，他们应具备相关的
实验技能和安全知识。
2.安全配置：细胞实验室应设立紧急喷淋、洗眼器等安全设施，并应定期进行安全培训和演练。
3.实验流程：细胞实验室应制定规范的实验流程和操作规程，以确保实验的顺利进行和实验结果的准确性。
组织细胞实验室设计
组织细胞实验室设计以下是一个组织细胞实验室的设计，用于进行细胞培养和组织工程的研究：1.实验室布局：实验室应设计为开放式的，以便研究人员可以方便地进行交流和合作。
实验室应包括多个工作台、试剂柜和储存柜。
实验室应具有良好的通风和光线条件，以及适当的温度和湿度控制系统。
2.培养室：实验室的一部分应专门用于细胞培养。
这个区域应该有一个无菌环境，并且必须配备培养箱、细胞培养罩和显微镜等设备。
培养室还应配备培养介质、培养皿、离心机和冰箱等设备，以满足细胞培养的需求。
3.流体系统：实验室应配备适当的流体系统，以便提供细胞培养所需的培养液和其他溶液。
这个系统应包括水槽、水龙头、紫外线消毒设备和净化器等设备。
4.分析设备：实验室应配备各种分析设备，以便研究人员可以分析细胞的功能和特性。
这些设备可能包括流式细胞术仪、荧光显微镜和倒置显微镜等。
5.实验台和器材：实验室应提供充足的实验台和器材，以便研究人员可以进行实验和研究。
这些工作台应具有足够的空间，以便容纳实验设备和试剂。
实验台上还应配备显微镜、离心机、冷冻离心机、电子天平、振荡器等设备。
6.数据分析和处理：实验室应配备计算机和数据分析软件，以便研究人员可以对收集到的数据进行分析和处理。
这些设备应具有高性能和高存储容量，以满足分析和处理大量数据的需求。
7.安全设备和措施：实验室应配备必要的安全设备和措施，以确保研究人员和实验品的安全。
这些设备可能包括生物安全柜、防护服、手套和眼镜等。
8.储存和管理：实验室应配备适当的储存设备和管理系统，以便存储实验数据和实验样本。
这些设备包括冰箱、液氮罐和标本柜等。
综上所述，一个组织细胞实验室的设计需要考虑到各种方面，包括实验室布局、培养室、流体系统、分析设备、实验台和器材、数据分析和处理、安全设备和措施以及储存和管理。
这些设备和措施的配备将有助于研究人员开展细胞生物学和组织工程的研究工作。
细胞培养试验室相关设备采购数量和技术要求
细胞培养试验室相关设备采购数量和技术要求背景细胞培养是现代生命科学研究中的一项重要技术，也是制备生物药物等生产流程中的关键环节。
为了顺利进行细胞培养实验，需要一系列专业的设备来支持实验的进行。
本文将介绍细胞培养试验室中各项设备的采购数量和技术要求。
培养箱培养箱是细胞培养实验室中非常重要的设备之一，主要用于维持培养物在恒定的温度、湿度、气体环境下生长。
对于细胞培养实验室而言，需要至少购买两个培养箱，一台用于非二氧化碳培养，另一台用于含二氧化碳的培养。
技术要求：•温控范围：5-50℃•恒温精度：≤ ±0.1℃•相对湿度范围：80%-95%•CO2 控制范围：0-20%采购数量：2 台倒置显微镜倒置显微镜是用于观察培养细胞状况的设备，具有观测区域广、清晰度高、非侵入性等优点。
倒置显微镜广泛应用于细胞培养和细胞学等研究领域。
技术要求：•显微镜倍率：100倍-1000倍•物镜头：10X，20X•电源：220V/50Hz采购数量：1 台离心机离心机是细胞培养实验室中必备的设备之一，主要用于分离细胞和培养物中的细胞碎片等。
细胞培养中，离心机的转速和离心时间对细胞生长的影响非常大，因此离心机的技术指标相对较高。
技术要求：•最大转速：12000 rpm•最大离心力：17000 g•转速误差：≤±10 rpm•离心时间：1-99 min•电源：220V/50Hz采购数量：1 台冰箱冰箱是细胞培养试验室中必不可少的设备，主要用于储存培养物和试剂。
在细胞培养实验室中，需要购买两台不同温度的冰箱，冰温箱用于存放常温和4℃以下的试剂和培养物，低温冰箱用于存放-20℃以下的试剂和样品。
技术要求：•冷藏温度范围：2-8℃•冷冻温度范围：-20℃•电源：220V/50Hz采购数量：2 台原位杂交仪原位杂交仪是DNA分子遗传分析中常用的设备，适用于细胞核酸分离、定量和定性分析。
原位杂交技术被广泛应用于生命科学领域，在肿瘤基因诊断、疾病检测等方面有着广泛的应用。
细胞室设计要求
细胞培养实验室设置1．基本实验室----（另加储藏室）1.1洗涤间根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30-50m2。
在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。
中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。
如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。
准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。
此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。
地面应耐湿并排水良好。
1.2培养基配制间面积60平方米左右，配备的主要仪器设备有：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。
冰箱以体积180-200L为宜，用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。
天平应有不同感量。
1.3消毒间配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。
灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。
一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。
生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。
如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。
1.4无菌操作室无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。
通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。
缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。
缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。
无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。
室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。
1.5培养室为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。
细胞培养的准备工作
细胞培养的准备工作细胞培养是生物医学研究中常见的实验技术，它是通过在培养基中提供适当的营养物质和环境条件，使体外培养的细胞可以持续生长和繁殖。
为了保证细胞培养实验的成功进行，准备工作是至关重要的。
在这篇文章中，我们将详细介绍细胞培养的准备工作，包括实验室设备准备、培养基配制以及无菌操作等关键步骤。
希望本文能够对你有所帮助。
一、实验室设备准备在进行细胞培养实验之前，首先需要准备实验室必备的设备，包括无菌工作台、培养箱、显微镜、培养皿、移液器、离心机等。
这些设备能够提供无菌、恒温、湿度适宜的环境，为细胞的生长提供良好的条件。
1. 无菌工作台：无菌工作台是进行细胞培养实验的重要设备之一，它能够为实验人员提供洁净的操作环境，防止外源微生物对培养细胞的污染。
2. 培养箱：培养箱提供了恒温和适宜的CO2浓度环境，使细胞在体外也能够保持正常的生长状态。
3. 显微镜：显微镜用于观察培养的细胞形态和数量，帮助实验人员了解细胞培养的情况。
4. 移液器：移液器用于在无菌条件下向培养皿中加入培养基、溶液和细胞悬液，是进行细胞培养实验中必备的工具。
5. 离心机：离心机用于离心培养皿中的细胞悬液，帮助实验人员收集和分离细胞。
以上设备的准备是细胞培养实验进行的基础，它们能够帮助实验人员进行规范的细胞培养操作，保证实验结果的准确性和可靠性。
二、培养基配制培养基是支持细胞生长和增殖所必需的营养物质和生长因子的混合物，其配制的质量和无菌性直接影响着细胞培养实验的成败。
通常来说，培养基包括基本培养基和添加剂两部分。
1. 基本培养基：基本培养基是细胞培养实验中不可或缺的组成部分，它提供了细胞生长所需的营养物质和生长因子，如含有丰富氧气和CO2的DMEM培养基、含有丰富营养物质的RPMI-1640培养基等。
在配制基本培养基时，需要严格按照配方比例将粉末溶解于无菌水中，再经过滤灭菌或高压灭菌处理，最终得到无菌的培养基液体。
2. 添加剂：培养基中常加入的添加剂包括胎牛血清、青霉素/链霉素、L-谷氨酸、非必需氨基酸等，这些添加剂可以增进细胞的生长和增殖，提高细胞培养的成功率。
细胞实验室建设要求和布局
细胞实验室建设要求和布局
一、实验室建筑要求
1、实验室的地面、墙面和其它部位应安装防水、防潮、防火等材料，使室内温度恒定，避免潮湿环境。
2、实验室的空气换气速率应达到规定的标准，保证室内空气新鲜。
3、室内所有活动场所应做好除尘处理，使微生物污染和尘埃污染降
至最低。
4、实验室室内有明显标识，做好室内各工作环节的管理，确保安全。
5、室内有明显的活动空间，并有充足的水源和电源，方便进行各种
实验活动。
二、实验室设备要求
1、热源设备：实验室里应有合适的热源设备，如台式恒温培养箱、
恒温恒湿培养箱等，便于完成各种实验。
2、冷源设备：实验室应有冷源设备，如冰箱、恒温冰柜等，用于存
放实验品和培养基，满足实验的需要。
3、通风设备：实验室的通风设备需要符合国家规定的标准，能够满
足实验室室内空气的新鲜度，保证实验室安全。
4、操作台：实验室操作台要有规格符合标准、可吸附尘埃的表面，
且样品操作台应有较高的护栏，防止样本洒落，影响实验结果精确度。
细胞实验室配置依据
细胞实验室配置依据细胞实验室是进行细胞生物学、分子生物学、生物化学等研究的重要场所，其合理的配置可以为科研工作提供高效便利的条件。
下面就细胞实验室的配置做一些简要的介绍。
1. 通风与洁净：细胞实验室的通风条件非常重要，可以通过安装空调新风系统、排风系统和净化器来保证实验室空气的流通和洁净度。
同时，还可以设置紫外线照射装置来杀死空气中的微生物。
2. 安全设施：细胞实验室需要配备安全设施，包括消防设备、紧急停电装置、安全疏散通道等，以应对突发事故和提供安全保障。
3. 实验台与设备：细胞实验室需要配置实验台和各种实验设备，如培养箱、离心机、显微镜、PCR仪、电泳仪等。
4. 培养室：细胞实验室需要配置培养室，用来培养和保存细胞。
培养室应具备严密无菌的条件，包括消毒装置、自来水处理设备、灭菌器等，以保证培养细胞的纯度和质量。
5. 试剂与材料储存：细胞实验室需要配置试剂储存区和材料储存区，用来存放各种试剂和实验所需的材料。
储存区应具备防火、防爆、防腐蚀等特性，保证试剂和材料的安全性。
6. 数据分析与处理：细胞实验室需要配置数据分析和处理设备，如计算机、数据处理软件等，以方便科研人员对实验数据进行整理和分析。
7. 垃圾处理：细胞实验室需要配置垃圾处理区，用于收集和处理实验产生的废弃物和污染物。
垃圾处理区应具备防臭、防滴漏等特性，以保证实验室的清洁和卫生。
8. 实验员办公区：细胞实验室需要配置实验员办公区，为科研人员提供一个舒适的工作环境，同时配置必备的办公设备，如电脑、打印机、复印机等。
9. 培训区：细胞实验室需要配置培训区，用于进行实验技术的培训和教育。
培训区应具备投影设备、展示板、多媒体设备等，以方便教学和培训。
10. 贮存区：细胞实验室需要配备样品和数据的长期贮存区，如冷冻柜、冷冻干燥机等，以保证实验数据的保存和长期使用。
细胞实验室的配置应该根据实际需要和经费限制来确定，能够满足科研工作的需求，并且具备一定的扩展性和灵活性。
细胞培养实验室的设备配置及用途
细胞培养实验室的设备配置及用途以下是一个典型细胞培养实验室的设备配置及其用途：1.生物安全柜：生物安全柜是细胞培养实验室的核心设备，用于提供无菌和安全的实验环境。
生物安全柜分为三个级别，根据需求可以选择不同级别的生物安全柜。
2.培养箱：培养箱是用于维持细胞培养所需的适宜环境条件，例如恒定温度（通常在37摄氏度），适宜的湿度和二氧化碳浓度。
培养箱通常配备有温度、湿度和CO2的控制器，以确保细胞在适宜的培养环境中生长。
3.倒置显微镜：倒置显微镜是观察和检测细胞培养过程中的细胞形态、生长状态和细胞染色等的重要设备。
4.细胞培养罐：细胞培养罐是用来培养细胞的容器，通常分为培养瓶和培养皿两种。
培养罐通常由无菌塑料材料制成，能够提供适宜的培养条件和保护细胞。
5.离心机：离心机用于离心培养细胞和沉淀物，以便进行培养基的更换、细胞分离和沉淀物的收集等操作。
6.显微镜：显微镜用于观察细胞培养的细胞形态、细胞分裂和细胞染色等。
7.细胞离心机：细胞离心机是用于从细胞培养物中分离细胞、细胞沉淀和细胞富集的设备。
8.培养箱温度计和湿度计：用于监测培养箱中的温度和湿度，以保持适宜的培养环境。
9.细菌培养箱：用于细胞培养实验室中的细菌菌种的保存和培养。
10.无菌工作台：无菌工作台是一个封闭的工作空间，提供无菌环境，用于处理无菌操作和培养物的分装、传递和传染性较强的试样的操作。
11.水培养装置：水培养装置用于提供无菌水用于培养细胞。
12.酶消化仪：酶消化仪用于将培养物中的细胞分离成单个细胞，以便后续的实验操作。
13.细胞计数仪：细胞计数仪用于计算培养物中细胞的数量。
14.PCR仪器：PCR仪器用于进行细胞培养实验中的基因表达、基因检测和基因定量等相关实验。
15.洗鼓机：洗鼓机用于将细胞从细胞培养物中剥离，以便后续操作。
动物细胞培养实验
实验一：实验器材准备【实验原理】细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。
三室既相互连接又相对独立，各自完成培养过程中的不同操作。
【实验目的】①培养室的设置和设备。
②无菌概念和无菌操作要领。
【操作步骤】1．实验室设置（1）配液室（2）准备室（3）培养室培养室内要完全密闭，保持恒定的温度，在设计上要注意以下几点：①培养室的位置最好设在阴面，阳光不能直接照射的地方，防止室内温度增高。
②天花板的高度不要超过2米，以保证紫外灯的有效杀菌效应，③门一般用拉门，以防止空气流动。
④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墙角堆积灰尘。
2．实验室常用设备（1）准备室的设备①双蒸馏水蒸馏器：制备双蒸水。
②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。
③干燥箱：洗涤完的玻璃器皿用干燥箱烘干。
④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌。
不同物品其有效灭菌压力和时间不同。
⑤储品柜1：放置未消毒物品。
⑥储品柜2：放置已消毒物品。
准备室注意事项：①预防蒸馏器被烤干。
②勿将酸液溅到衣物或地面。
③勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。
④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
（2）配液室的设备①天平（扭力天平和电子天平）：称量用②pH计。
③磁力搅拌器。
（3）细胞培养室的设备①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，徐徐通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
根据层流方式的不同，超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种，基本原理大致相同，都是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器，由此送出的洁净气流从一定的均匀的断面风速通过无菌，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
但两种净化台的气流方向不同。
010细胞工程-第一章细胞培养室的设置和准备工作
移液器 液体试剂精确 取量 电动移液器、 微量移液器、 多通道可调式 微量移液器
使用与校对 1、枪头：一次性 2、轴芯，密闭性 3、第一档、第二档（深入液体4毫米） 4、校对
培养用器皿： ①培养器皿：供细胞接种、生长等用的器皿，可由透明度好、 无毒的中性硬质玻璃或无毒而透明光滑的特制塑料制成。
精确的pH值测 定
注意事项：
1、不要用滤纸擦拭玻璃膜 2、严禁在脱水性介质如无水乙醇、重铬酸钾等中使 用
3、电极不能用于强酸、强碱或其他腐蚀性溶液
二、动物细胞工程实验室常用设备
• CO2培养箱：温度 湿度 酸度PH
CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％ CO2 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：
注意事项：压力、消毒、蒸馏水
显微操作仪
细胞核移植、染色体操作、显微注射、胚胎切割必需之设备
细胞电融合仪
采用高频交 流波，使细 胞排列成双 体或串珠状， 再使用直流 方波长脉冲 使细胞融合。
摇 床：进行细胞悬浮培养，水平往复式或回旋式
• 细胞冷冻储存器：
• 细胞培养工作中常需储存细胞，常用的是 液氮容器。液氮容器根据使用需要分为不 同的类型及多种规格。
离子交换纯水尚不能有效去除有机物，因此用水 时尚需再次蒸馏。
进行细胞培养时，配制各种培养液及试剂等均 需使用三次蒸馏水：即使是用于玻璃器皿的冲洗， 也应使用2次以上蒸馏水。
• ，使用方便、安全，蒸馏速度快。
自动双重纯水蒸馏器
纯水仪
MRO反渗透系列纯水机 ：出水量（25℃）：8升/小时，15 升/小时 瞬间出水量：1.5升/分(需选配压力储水桶) 出水水质：反渗透水 Millipore公司：MPC超纯水系列标准型水源（一馏水或自 来水）→ 预处理（PP棉滤、活性碳。去除了水中的颗粒与 降低了自来水中余氯的含量） → 反渗透膜（去除绝大部分 的细菌，离子及有机物） → 储水箱 → 4组抛光混柱(除去 残留在水中的离子与有机污染物) → UV紫外灭菌（杀灭细 菌，进一步降低TOC）或超滤UF（滤掉内毒素同时去除大 量有机物） → 终端滤器（彻底除菌、除颗粒，极低TOC的 超纯水）
细胞培养实验室的设置及设备
动物组织细胞培养实验室的设计姓名：梁洪学号：11310010214（一）环境要求组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
要求工作环境清洁，空气清新,干燥和无烟尘。
（二）面积与预算实验室总面积96用左右，大约耗资40万（不含特殊先进设备）。
（三）细胞培养实验室的布局细胞培养实验室布局大致为：无菌操作区、孵育区、制备区、清洗区、消毒灭菌处理区、储藏区。
1 •无菌操作区（1）无菌操作室：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。
无菌操作间的空气消毒：紫外线灯，空气过滤的恒温恒湿装置。
（2）超净工作台：操作简单，安装方便，占用空间小且净化效果很好。
超净工作台工作原理（大致相同）一-通常是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
2.孵育区本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。
孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行，后者费用高，一般实验室多采用孵箱进行工作。
3.制备区在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
4.储藏区主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要清洁无尘。
5.清洗和消毒灭菌区清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开，主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。
（四）细胞培养实验室的设备1.常用的基本设备（1）仪器：a显微镜：倒置显微镜一一是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。
b）培养箱：体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，大多数情况下，最适温度是37C，温差变化一般不应超过土0.5 C。
恒温培养箱一一应选隔水式或晶体管自控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。
细胞实验室配置依据
细胞实验室配置依据
细胞实验室是进行细胞生物学研究的重要场所，为了确保实验结果的准确性和可重复性，实验室的配置需遵循一定的依据。
以下是细胞实验室常见的配置依据：
1. 温度控制：细胞生长需要在稳定的温度条件下进行，一般细胞实验室的温度配置应在 37°C ± 1°C，以模拟人体体温。
温度控制设备可以采用恒温培养箱或培养箱，保持稳定的温度环境。
2. 洁净度：细胞实验室要求高度洁净，以避免细胞污染。
实验室内部应定期清洁和消毒，尽量保持无尘、无菌的环境。
工作区域的台面、仪器设备、培养皿和试剂容器都需经常清洁和消毒。
3. 生物安全：细胞实验室必须遵守生物安全规范，在进行细胞实验时确保人员和环境的安全。
实验室应设立生物安全柜，用于处理有潜在危险的细胞样品，避免细胞材料外泄和交叉污染。
4. 实验设备：细胞实验室配置一些常见的实验设备，如显微镜、培养箱、离心机、PCR仪等。
这些设备能够满足细胞实验的基本需求，提供方便和准确的实验操作。
5. 储存和处理：细胞实验室需配置适当的储存和处理设施，以确保实验材料的保存和废物的处理符合规定。
冰箱和液氮罐可用于保存细胞培养物和样本，而生物废弃物处理设备则用于安全处理实验过程中产生的废弃物。
综上所述，细胞实验室的配置依据主要包括温度控制、洁净度、生物安全、实验设备以及储存和处理设施。
严格按照这些依据进行实验室的配置和管理，可确保实验结果的准确性和可重复性，为细胞生物学研究提供可靠的基础设施。
细胞培养基本技术(3)
◆ 光照：光强、 光质、光照时间
3
一、 动植物细胞工程实验室通用仪器设备
超净工作台
n超净工作台的工作原理是 利用鼓风机驱动空气遁过高 效滤器除去空气中的尘埃颗 粒，使空气得到净化。净化 空气徐徐通过工作台面，使 工作台内构成无菌环境。
4
冰箱
■ 普通冰箱
（4℃，－20 ℃ ）
■ 低温冰箱（－20 ℃ ） ■ 超低温冰箱（－80 ℃ ）
15
一、玻璃器皿的清洗
WHY?
◆ 浸泡 新瓶使用前用自来水简单刷洗，后用稀盐酸浸泡过夜。
使用过的器皿应立即浸入水中，避免干涸难洗
◆ 刷洗 软毛刷沾洗涤剂洗涤 ◆ 浸酸 关键一环。时间不少于于小6 时，一般过夜。清洁液变
绿应重新配制。
◆ 冲洗 洗涤装置与手工
◆ 烘干、包装、高压（15磅20分钟）或干热（160度2小时）
生物安全四级(BSL—4)：处理特别危险的传染源
12
Summary：细胞培养的基本条件
无菌条件 ：净化工作室，高效过滤器 ，生物安全柜， 超净工作台， 紫外灯 ，电热干燥箱，滤器， 高压灭菌器，抗生素
细胞生长条件 ：纯水蒸馏器， 纯水仪，培养板，培养瓶， CO2培养箱， 培养基，血清
细胞检测条件 ：倒置显微镜， 酶标仪 ，微孔板震荡器， 高速离心机， 移液器
塑料 制品
橡胶 制品
＋
培养 用液
＋
布类 棉类
＋
干热
＋ ＋
＋
过滤
消毒剂
电离 辐射
＋＋
＋
＋＋
＋＋＋
＋＋＋
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重要概念
消毒与灭菌
1.消毒 2.灭菌 3.防腐
杀死物体上病原微生物的方法；并不一定能 杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 杀死物体上所有微生物的方法。
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一、细胞培养实验室的设置及设备（一）细胞培养实验室的设置组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
目前，超净工作台的广泛使用，很大程度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。
细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。
1．无菌操作区（1）无菌操作室：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。
理想的无菌操作室应划为三部分：a) 更衣室—―供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b) 缓冲间—―位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。
c) 无菌操作间—―专用于无菌操作、细胞培养。
其大小要适当，且其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。
工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示的观察。
无菌操作间的空气消毒：紫外线灯—－产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康。
空气过滤的恒温恒湿装置—－最好。
表1 洁净室（区）空气洁净度级别表洁净度级别尘粒最大允许数／立方米微生物最大允许数浮游菌／立方米沉降菌／皿100级3,500 0 5 110000级350,000 2,000 100 3100000级3,500,000 20,000 500 10300000级10,350,000 60,000 - 15无臭氧紫外线消毒器电子消毒灭菌器—－在高压电场作用下，电子管的内外电极发生强烈电子轰击，使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。
臭氧是一种强氧化剂，能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应，从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌之目的，消毒时没有死角。
消毒后空间的残留臭氧只需30～40即能自行还原成氧气，空气不留异味，消毒物体表面不留残毒。
（2）净化工作台：操作简单，安装方便，占用空间小且净化效果很好。
一般细菌培养室使用的净化工作台主要有两种：a)侧流式或称垂直式b)外流式或称水平层流式。
净化工作台工作原理（大致相同）—－通常是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
侧流式工作台—－空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向上流向对侧，形成气流屏障保持工作区无菌。
工作台结构为封闭式。
外流式（水平式）工作台—－净化后的空气面向操作者流动，因而外方气流不致混入操作，但进行有害物质实验操作则对操作者不利。
工作台结构为开放式（已少用）。
净化工作台应用注意：（1）净化工作台应安装在隔离好的无菌间或清洁无尘的房间内，以免尘土过多易使过滤器阻塞，降低净化效果，缩短其使用寿命。
（2）新安装的或长期未使用的工作台，工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，然后再采用药物灭菌法或紫外线灭菌进行灭菌处理。
（3）使用净化工作台前，应先用75％酒精擦洗台面，并提前以紫外线灭菌灯照射30～50处理净化工作区内积存的微生物。
关闭灭菌灯后应启动风机使之运转两分钟后再进行培养操作。
（4）净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流流型不受干扰。
（5）注意净化区内气流的变化，一旦感到气流变弱，如酒精灯火焰不动，加大电机电压仍未见情况改变则说明滤器已被阻塞，应及时更换。
一般情况下，高效过滤器三年更换一次。
更换高过滤器应请专业人员操作，以保持密封良好。
粗过滤器中的过滤布（无纺布）应定期清洗更换，时间应根据工作环境洁净程度而定，通常间隔3-6个月进行一次。
（6）净化工作台使用完毕应及时清理工作台面上的物品并用酒精擦洗台面使之始终保持洁净。
（7）净化工作台应定期进行功能测试，检查净化工作台各项工作指标是否达到要求，例如进行无菌试验，定期检查台面空气的洁净度是否达标。
超净工作台的无菌程度检查超净工作台在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90平皿，在超净工作台内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将平皿半开注入溶化的营养琼脂培养基约20，制成平板，在30～35℃预培养48小时，证明无菌后将平板3个，以无菌方式带入超净工作台内左、中、右各放一个；打开平皿盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将平皿盖盖好，置30～35℃培养48小时，取出检查，100级清洁度要求：3个平皿上生长的菌落数平均不得超过1个。
超净工作台应定期请有关部门检查其洁净度，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测尘埃粒径≤5祄的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.751.0m3；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况必要时置换过滤器。
2．孵育区本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。
孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行，后者费用高，一般实验室多采用孵箱进行工作。
3．制备区在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
4．储藏区主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要清洁无尘。
5．清洗和消毒灭菌区清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开，主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。
(二)细胞培养实验室的设备组织细胞培养室除一般实验室的普通常规设备外，尚有一些特殊需要的设备。
基本可分为两大类：第一类为常用的基本设备；第二类为较高级的特殊设备。
1. 常用的基本设备（1）仪器：a）显微镜：倒置显微镜——是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。
——若有条件，尚可配置带有照相系统的高质量相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等，以便随时观察、记录、摄影细胞生长情况。
a）培养箱：体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，大多数情况下，最适温度是37℃，温差变化一般不应超过±0.5℃，细胞在温度升高2℃时，持续数小时即不能耐受，40℃以上将很快死亡。
因此需要有能控制温度的培养箱，如具有较高灵敏度的恒温培养箱及2培养箱。
恒温培养箱——应选隔水式或晶体管自控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。
一般的恒温培养箱价格较便宜，其缺点是只宜于作密闭式培养。
2培养箱——目前多数的细胞培养室已广泛使用。
2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的2（常用浓度为5％），易于使培养液的保持稳定，适用于开放或半开放培养。
培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶；当使用培养瓶时，可将瓶盖略微旋松，使培养瓶内与外界保持通气状态。
由于这种培养方法培养器皿内部与外界相通，培养箱内空气必须保持清洁，应定期以紫外线照射或酒精消毒。
同时培养箱应放置盛有无菌蒸馏水的水槽，防止培养液蒸发，使箱内相对湿度始终保持为100％。
c）干燥箱：用于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。
干热消毒时，电热干燥箱升温较高，一般需达到160℃以上。
通常使用鼓风式电热干燥箱。
其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。
升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至100℃时，停止鼓风，应避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。
消毒后，不能立即打开箱门以免骤冷而导致玻璃器皿损坏，应等候温度自然下降至100℃以下方可开门。
d）水纯化装置：细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。
水纯化时可采用离子交换装置或蒸馏器。
离子交换纯水尚不能有效去除有机物，因此用水时尚需再次蒸馏。
进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸馏水：即使是用于玻璃器皿的冲洗，也应使用二次以上蒸馏水。
目前国内使用较多的是自动双重纯水蒸馏器（石英管加热），使用方便，安全、蒸馏速度快（1600）。
使用注意：○a不可采用普通自来水蒸馏，以免蒸馏器内很快结成水垢影响蒸馏效果；同时，还需视蒸馏器内存水垢程度定期彻底清洗蒸馏器。
○b正确的使用方法是将经金属蒸馏器蒸馏的蒸馏水加入玻璃蒸馏器内进行再次蒸馏。
一般配制培养液的用水应在配液前蒸馏，不宜使用存放数日的三蒸水，以免影响培养用水的质量。
目前市场上供应的是含有各种级别和类型的采用一种或多种纯化方法相结合的使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水系统可供选择。
例如：设计灵活的可以挂壁、也可为台式，也可以有储水箱、也可直接用分液枪的纯水装置；还可根据各类实验用水需求选择配备有效杀菌或去除酶、酶、蛋白酶等，甚至可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水器。
e）冰箱：细胞培养室必须配备○a普通冰箱或冷藏柜——储存培养液、生理盐水、’s液试剂等培养用的物品及短期保存组织标本。
○b低温冰箱（-20℃）、超低温冰箱——用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂，如酶、血清等。
——细胞培养室的冰箱应属专用，不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质，且应保持清洁。
f）细胞冷冻储存器：储存器常用的是液氮容器。
根据使用需要分为不同的类型及多种规格。
选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小，取放使用方便及液氮挥发量（经济）三种因素。
液氮容器的大小可自25L～500L，可以储存1的安瓿250～15000个左右。
液氮温度可低达-196℃，使用时应防止冻伤。
由于液氮不断挥发，应注意观察存留液氮情况，及时定期补充液氮，避免挥发过多而致细胞受损。
目前，国内各类实验室已广泛使用新型的细胞冷冻储存器。
市场所提供的各种新型的细胞冷冻储存器具有性能优异，使用方便等特点。
例如：——可通过先进的电子控制器实现冻存自动化并监测液氮水平和样品温度，确保样品温度始终处于设定温度点；——可配备先进的报警系统，分别警报液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况：——同时具备热气体旁路系统，防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐，从而更有效地保护样品，防止升温。
另外，多种规格的先进液氮运输，供应罐系列不仅移动方便，还可通过连接管给储存罐补充液氮，提高工作效率，保证样品安全。
g）离心机：进行细胞培养时，常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用离心机。
○a一般可常规配置4000的国产台式离心机，例如细胞沉降，使用80～10 0g的离心机即可，离心力过大有时可能引起细胞的损伤。
○b另外，可根据需要添置其他类型如大容量或可调节温度的离心机等○c若需特殊用途，例如某些细胞的分离制备需梯度离心，则需另行配置实验所需的具备其他特殊功能的离心机。