埃博拉出血热实验室检测方案(第三版)

埃博拉出血热实验室检测方案(第三版)

埃博拉出血热实验室检测计划(第3版)

埃博拉出血热是一种严重的急性传染病，可导致人传人和医院感染，病死率高。直接接触传播是该疾病的主要传播途径。可通过接触患者或受感染动物的体液、分泌物、排泄物和污染物而被感染。埃博拉出血热的早期临床表现与其他病毒性出血热相似，需要实验室确认。在现阶段，病人的血液样本主要是测试。为了及时发现和确认埃博拉出血热病例，规范实验室检测程序，提高检测质量，为指导病例管理和出院提供依据，特制定本预案。

一、检测对象

包括观察病例、疑似病例和确诊病例。病例定义见国家卫生计生委制定的《埃博拉出血热相关病例诊疗路径》。

二、标本采集、保存和运输(一)标本采集

用分离凝胶的无菌真空凝固加速管采集静脉血，每管3mL，标记后4℃保存，填写标本采集登记表(表1)。发病3天后采集两个静脉血液管用于观察病例和疑似病例，并送至具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行埃博拉病毒检测。从确诊病例中收集恢复期血液样本，并送往国家疾病控制和预防中心进行检测。

(2)标本的保存和运输

未分离血清的全血样品应在4℃保存，并尽快送至具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行分离血清和检测。血清样本应长期保存在-70℃或以下的冰箱中，一周内可保存-XXXX年。历史上最严重的埃

博拉出血热疫情发生在几内亚、利比里亚和塞拉利昂等西非国家。为指导医疗机构和疾病预防控制机构工作人员采集、包装和运输埃博拉出血热相关标本，确保生物安全，特制定本指南。

一、生物安全保护

1.所有样本的采集或处理应符合《医院感染管理标准》和《病原微生物实验室生物安全管理规定》等相关生物安全规定。在标准预防的基础上，采取喷雾和接触隔离预防措施。

2、采集样品时，应严格按照BSL-3实验室规定做好个人防护。应穿戴医用防护服、能覆盖口鼻的医用防护面罩(N95)、双层防护手套、护目镜、防护面罩、鞋套或胶靴。

二、标本采集(一)采集时间

发病后2周内可在患者血样中检测到病毒核酸和抗原，发病后3-10天样品中核酸和抗原的检出率高。在疾病发作后的几个月内，可以在特定的分泌物中连续检测到病毒。特异性IgM抗体可以在疾病发作后最早2天从患者血清中检测到，并且IgM抗体可以维持几个月。在疾病发作后7-10天可以检测到IgG抗体，并且回收的IgG抗体可以保持几年。发病后10-14天标本中病毒特异性抗体的检出率较高。因此，应根据不同的检测目的确定采样时间，并在埃博拉病毒感染发病后3天采集血样用于观察病例和疑似病例。

(2)标本采集

1.采血点应配备手套、防护服、防护口罩等。除了用于常规病人护理的材料之外，还有洗手设备和装有消毒剂的桶。

2.采集埃博拉出血热患者的血样会给医务人员带来风险，应由受过生物安全保护培训的人员进行。采血时应该有两个人在场。

3.用分离凝胶的无菌真空促凝管采集静脉血，每管3mL，采集后用密封膜密封管口，将密封管清晰标记后放入自密封袋或50mL离心管中，自密封袋或离心管的外表面清晰标记，4℃保存，填写标本采集登记表。

4.发病3天后，应采集两个静脉血液管用于观察病例和疑似病例，并送至具有埃博拉出血热检测资质的指定实验室进行埃博拉病毒检测。

5.对确诊病例恢复期的血液样本进行采集，包括但不限于出院前的2份样本，每份2管，采集时间间隔不少于48小时。血样应送至国家疾病预防控制中心进行埃博拉病毒检测，以指导病例管理。

四、标本包装、运输

(1)所有疑似埃博拉病毒相关的感染性标本应按照《病原微生物实验室生物安全管理规定》和《人与人之间感染病原微生物名录》等相关规定进行甲类包装运输，符合UN2814的要求。按照三重包装系统包装:第一层包装为自密封袋或50毫升离心管；第二层包装是一个防水防漏的容器；第三层由运输包组成。样品应用吸水纸包裹，并固定在防漏自密封袋或离心管中。然后将其放入坚固、防水、防漏的第二层安全壳中，用吸水纸等填充物固定内有样品的自密封袋或离心管，然后将其放入第三层包装中。安全壳容器和外包装应符合国际航空运输协会危险货物法规包装系统650。

(2)填写两份样本描述，说明样本的详细信息、发送者和接收者的地

址，将样本描述密封在塑料袋中，用胶带粘贴在外包装的内外，并保存一份文件以供跟踪，以便实验室操作人员检查样本数量。

(3)样品运输前，应按照相关生物安全法规和样品接收单位的生物安全管理部门办理相关手续，运输日期确定后应立即通知接收单位运输时间和方式。

V.样品的保存和销毁

(1)埃博拉病毒阳性血液标本应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关生物安全法规进行保存，并实行“双锁”和“审批”采样管理。(2)消除埃博拉病毒感染后，应将埃博拉病毒阴性的血液样本转移至其他血清库保存或销毁。

(3)当所有传染性血清被破坏时，应在生物安全柜中自然解冻，在60℃灭活1小时，然后在生物安全柜中打开样本管，浸泡在有效消毒剂中，然后在高压下灭活。

(4)所有销毁的样品应在相应的数据库列表中标明，并记录销毁的时间和操作人员。阴性样品的销毁记录应保存1年以上，阳性样品的销毁记录应保存5年以上。

附件2

埃博拉病毒核酸的检测方法

目的

埃博拉病毒核酸的提取和聚合酶链反应检测。2适用范围

适用于检测血液样本中的埃博拉病毒核酸。实验前准备

检查测试样本，包括患者姓名、编号和测试项目。4测试设备和材料

实时定量核酸扩增检测器、常规核酸扩增检测器、核酸提取试剂盒、一步逆转录聚合酶链反应扩增试剂盒、一步实时定量逆转录聚合酶链反应扩增试剂盒等。

5实验步骤5.1实验准备

5.1.1提取埃博拉病毒核糖核酸需要在BSL-3实验室进行。

5.1.2进入实验现场前，应事先准备好所需的试剂和样品。指定一个实验地点。5.2核糖核酸提取

该试剂盒用于从血清样品中提取病毒核酸(如果使用其他试剂盒或方法提取病毒核酸，请参考相应的试剂盒说明或实验室操作手册)。5.2.1将560μl含有载体核糖核酸的A VL缓冲液(核酸提取裂解物)吸入1.5毫升离心管中。

5.2.2向上述液体中加入140μl样品，盖上盖子，轻轻倒置混合10次，室温下孵育10分钟，简单离心，使离心管顶部的液体降至底部。5.2.3向样品中加入560μL 96 ~ 100%乙醇，轻轻倒置混合10次，然后简单离心。

5.2.4小心地将630μl液体添加到QIAamp柱中，将其盖好，以8000rpm/min离心1分钟，丢弃收集管，并将柱放置在新的2ml收集管上。

5.2.5打开QIAamp色谱柱的盖子，重复步骤5.2.4，直到所有样品都被离心。5.2.6打开盖子，向柱中加入500μl AW1缓冲液，盖上盖子，以8000rpm/min的速度离心1分钟，丢弃收集管，并将柱放在新的2ml收集管上。