免疫荧光组化操作流程石蜡切片

免疫荧光组化操作流程(石蜡切片)

1、3μm石蜡切片贴在涂有切片粘合剂的干净载玻片上,57℃烤4-18h;

2、石蜡切片常规脱蜡至水，0.01mol/L pH7.3 PBS洗3min×3;

3、抗原修复:0.02mol/L pH6.0 CB(柠檬酸盐缓冲液),微波98℃(Ⅲ档)15min,自然冷却20min;0.4%胃蛋白酶消化40min,at 37℃；

4、0.01mol/L pH7.3 PBS洗3min×3;

5、加一抗PGP9.5 1:100； 37℃温孵2h,

6、0.01mol/L pH7.3 PBS洗3min×3;

7、加二抗（FITC标记） 1:200室温温孵2h;

8、0.01mol/L pH7.3 PBS洗3min×3;

9.蒸馏水洗3min,

10、DAP-I和封片增强剂（Sigma公司）封片;-20℃保存待共聚焦观察。