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1.顶端结构域 位于圆柱两端的顶端开口处,是底物的结 合位点 2.赤道结构域 含有ATP的结合位点 3.铰链结构域 在顶端结构域和赤道结构域间传递构象变化
GroELMC的制备
GroEL的突变 体GroELCys
经部花青 修饰的分 子伴侣 GroELMC
解决问题的具体过程 纳米管NT 的组装
MC Mg2+ MC
每个NT中平均含20个重复的GroELMC单元
每个NT的长度可长达2.5µm
二、ATP对纳米管的作用机制探究
纳米管在细胞内ATP的激发下裂解
ATP的作用 位点在 GroELCys上
在细胞内 ATP的激 发下,NT 的确发生 了裂解
影响细胞内ATP激发下纳米管裂解的因素
SH/MC-conversion =82%
基于细胞内外ATP的浓度差异的相关应用 生物体内的不同部位ATP的分布具有很大的差异 如: 细胞内ATP浓度:1-10 mM 细胞外ATP浓度:<5 uM
肿瘤组织中细胞外ATP浓度:700 uM 肿瘤组织中细胞外ATP浓度:<5 uM
另外发炎的组织中的ATP浓度以及正在分化的细胞内的ATP的浓度都 会较正常细胞内ATP浓度高很多
纳米管的进一步修饰
BA:2-羟甲基苯基硼酸的环脂衍生物
修饰后的NT对ATP的浓度仍保留响应活性
解决问题的具体过程
BANT进入细胞的实验表征
BANT载药进入细胞的概念验证
BANT载药进入细胞的概念验证
BANT载药进入细胞的概念验证
胞内外酶切实验的对比
BANT⊃α-AlexaLA
denat在生物体内的分布
Biomolecular robotics for chemomechanically driven guest delivery fuelled by intracellular ATP
由细胞内ATP激发导致客体释放的生物分子机器人 作用的化学机制
汇报人:李 涛
汇报时间:2013年12月21日
文章概要
——引自陈佩红、都恒华《高效液相色谱法测定Mg2+ 与腺嘌呤核苷三磷酸和 腺嘌呤核苷二磷酸的表观稳定常数》
ATP
目录
纳米管(NT)是怎么组装的 ATP对纳米管的作用机制探究 纳米管的运载性能 纳米管的应用前景 我对这篇文献的整体评价
一、纳米管(NT)是怎么组装的?
NT的结构单元:一类重要的蛋白——分子伴侣
1.概念:分子伴侣是指能够结合和稳定另外一种蛋白质的不稳定构象,并能通过 有控制的结合和释放,促进新生多肽链的折叠、多聚体的装配或降解及细胞器蛋 白的跨膜运输的一类蛋白质 。作为伴侣蛋白的一种,GroEL是研究比较深入的 存在于细菌内的一种伴侣蛋白。 2.GroEL的结构: GroEL蛋白是同型 寡聚复合物,由 14 个相对分子质 量58 ×103 的亚 基组成,形成两层 垛叠的背靠背双 环组成的中空圆 柱结构,每个环由7 个亚基组成。 3.GroEL具有别构效应 ——引自张经余、赵志虎、蔡民华《GroEL 分子伴侣研究进展》2001年5月
GroELCys (GroEL mutant) GroELMC 两性的部花青单元
影响纳米管长度的因素
GroELCys顶端结构 域中-SH残基被 MC功能化的程度 是影响NT长度的 重要因素。
尺寸排阻色谱
影响纳米管长度的因素
SH/MC-conversion=82%
SH/MC-conversion=100%
NT载客实验初探 以GFPdenat作为实验客体
ATP
客体GFPdenat
解决问题的具体过程 成功装载于NT的表征
解决问题的具体过程
客体GFPdenat成功释放的表征
解决问题的具体过程
客体释放的动力学影响因素——ATP的浓度
ATP的浓度与客体释放情况的定量关系 ——S形曲线
四、纳米管的应用前景
ATPபைடு நூலகம்
裂 解 效 果 优 于 SH/MC-conversion =100%
ATP
解决问题的具体过程
ATP类似物与NT作用的探究
CTP和UTP作为ATP的类 似物,与GroEL作用时, 能够引起其构象变化, 而ITP和GTP却不能。
NT另一种断裂机制的比较
EDTA
EDTA的这种作用机制虽然也能使NT解离,但是 这种解离机制明显比之前说到的ATP作用的解离 机制效率要低很多,因为实验发现要达到同等程 度的解离,EDTA的浓度要是ATP浓度的250倍。 而lgKMg-ATP=4.06,lgKMg-EDTA=8.7,因此排除了 ATP的作用位点在Mg2+这一可能机制
ATP激发下的NT断裂机制深究
解决问题的具体过程
ATP激发下的NT的裂解机制:即ATP结合到GroEL赤道结构域的ATP结合位点, 引起GroEL构象发生变化,这一构象变化会产生5-60pN的微弱张力,这一张力虽然 微弱,但足以切断GroEL间的非共价相互作用,导致NT裂解。
三、纳米管的运载性能
五、我对这篇文献的整体评价
这篇文献的亮点
1.这篇文献的创新之处在于首次设计出对生物体内ATP浓度有响应 活性的纳米管,并且将其进行修饰,使其能够穿透细胞膜,分散 到细胞质中
2.本篇文献逻辑论证缜密,每个结论都有相关的表征结果作依托,
并且每个作为表征结果的数据图表都很清晰准确。位置分配非常 规范,使整篇文献的条理十分清晰。
这篇文献的不足之处
Fig.S2,blue curve
这篇文献的不足之处
另外,在查阅其他文献时发现ATP与Mg2+之间也存在着螯合作用并且 lgKMg-ATP=4.06也比较大(虽然不及lgKMg-EDTA=8.7)而本篇文献在排 除ATP的作用位点不在Mg2+时,根本没有提及这一点;应该把这一点 提到,并把相关文献中的数据引用上可能会更完善些。