细胞活体染色技术

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吸去染液,滴一滴Ringer液 ↓
盖上盖玻片进行镜检
⑵ 用动物细胞观察线粒体的活体染色
取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块 , 放入盛有Ringer氏液的表面 皿中洗去血液。将肝组织洗净后吸 去血液,加入1/5000詹纳斯绿B染 液染色30分钟,注意不可将组织块 完全淹没。染色后撕开组织块,这 样溶液中就会有一些细胞或细胞群 。用吸管吸取溶液,放在载玻片的 Ringer氏液中。垫两根短头发,加 盖玻片,即可镜检。用油镜观察活 染色的线粒体标本,要不断地来回 转动细调焦螺旋,使盖玻片上下慢 慢移动。使材料总是得到氧气,线 粒体的染色才显得非常清楚。
细胞活体染色技术
活体染色是利用某些无毒或毒 性较小的染色剂,在不影响细胞生 命活动的情况下显示细胞的天然构 造,更具真实性。活性染色又分为 体内活体染色和体外活体染色。
活体染色分为体内活染和 体外活染两种。前者是将 染料注射于生物体内,染 色后再取材观察。后者是 取材后,对离体的活细胞 进行染色。为保持离体细 胞的正常存活,染色时需 供给细胞以正常的温度, 渗透压,PH等。
取小鼠腹腔水细胞于洁净载玻片上 ↓
滴加1%台盼蓝1滴 ↓
盖上盖玻片于显微镜下进行镜检
thanks
谢谢
詹纳斯绿B(Janus green B) 中性红 台盼蓝(trypan blue)
能够染活线粒体为蓝色,主要是由 于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染 料始终保持在氧化状态(即有色状态) ,在周围的细胞质内,这些染料被还 原为无色的色基(即无色状态)。
一定要注意,只有具有活性的细 胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧 化,从而使它显出颜色
材料:黄豆根尖、洋葱、小鼠。
器械:显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解 剖针、 表面皿、载玻片、盖玻片、吸管 、收水纸等。
试剂:Ringer氏液
1/3000中性红溶液
1/5000詹纳斯绿B
台盼蓝染色液
香柏油、二甲苯、蒸馏水等
1. 液泡系的中性红活体染色
撕取洋葱鳞茎内表皮一小块 ↓
于载玻片上的1/5000 Janus green B染色30min ↓
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的 金属板上 ↓
滴2滴1/5000 Janus green B染液 ↓
用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上 皮细胞 ↓
刮下的粘液状物放大载玻片的染液 滴中 ↓
染色10~l5min(注意不可使染液干 燥,必要时可再加滴染液)
口腔黏膜上皮细胞及线粒体
百度文库
•在实验过程中 务必保持所取的 材料的活性。通 常,需要把生物 材料置于0℃~ 4℃的冰水浴低 温中,并且操作 要迅速。
中性红是液泡系的特殊活体染
色剂,它可将不同发育时期的液 泡染成不同深度的红色,在细胞 处于生活状态下细胞质和核不被 染色,该染料对液泡系具有一定 专一性。
台盼蓝(trypan blue)是一种 偶氮类酸性染料,它可以通过 死亡细胞的质膜而使细胞着色, 但不能通过活细胞的质膜,故 可用台盼蓝鉴别活细胞与死细 胞。
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