临床生化检验方法的选择和评价
临床生物化学检验质量控制流程图
临床生物化学检验质量控制流程临床生化检验室全面质量控制（TQC）是利用现代科学管理的方法和技术检测分析过程中的误差，控制与分析有关的各个环节，确保实验结果的准确可靠。
一、分析前质量保证(一) 人员的素质和稳定性凡进入生化专业的工作人员上岗前应培训，了解本专业的实验室工作流程，掌握各种设备的操作、维护、保养，熟练应用实验室LIS系统，掌握各项目检测原理及影响因素，熟练应用比对方法。
(二) 实验室的设置和工作环境实验室布局合理，环境整洁，仪器间应进行防尘处理，温度15~30°C，相对湿度<65%。
(三) 实验仪器的质量保证1. 分析仪器的性能检查1.1 波长校正在更换光源灯、重新安装、搬运或检修后，以及仪器工作不正常时，都要进行波长校正。
就是正常工作的仪器，每隔一个月也要检查一次，这样才能保证读数与通过样品的波长符合，保证仪器的最大灵敏度。
1.2 线性检查包括仪器线性及测定方法线性两个方面的检查。
线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关系，出现正偏离或负偏离的现象。
这种偏离，一是溶液本身不符合比耳定律，此现象叫做化学偏离；二是仪器本身各种因素的影响，使吸光度测定值与浓度之间不成线性关系，这种现象叫做仪器偏离。
仪器偏离的因素很多，如杂光、有限宽带、检测器噪声、环境条件的变化、波长的变动、比色杯的误差、辐射光的非平行性、检测器本身的非线性等。
1.3 稳定性检查当电源电压在220~230V围变化时，仪器读数漂移不应超过透光度标尺上限值的±1.5%。
在电源电压不变的条件下，在3分钟其读数漂移不应超过标尺上限值的±0.5%。
1.4 重复性检查在波长、工作状态、电源电压、比色杯等合格的前提下，可进行重复性检查。
用重铬酸钾溶液（30、60、90、190mg/L）在波长440nm，将各浓度管连续测3~5次，各浓度管中最大差值误差小于1%T为合格。
1.5 灵敏度检查将重铬酸钾液配制成30和32.5mg/L及120和122.5mg/L的4种应用液（浓度差两组各为2.5mg/L）。
临床生化检验试题库
一、名词解释1、抗凝剂：应用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。
阻止血液凝固的化学试剂称为抗凝剂。
2、决定性方法：准确度最高，系统误差最小；经过详细研究未发现产生误差的原因，其测定结果与“真值”最为接近的方法。
主要有重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）等。
3、参考方法：是指准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。
这类方法干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的随机误差可以忽略不计。
4、常规方法：具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围，经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要的方法。
5、标准品：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，可用以校正仪器和某种测定方法的物质。
6、一级标准品：已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高度准确的若干方法确定，所含杂质已经定量。
主要用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品”定值。
7、二级标准品：这类标准品可以是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相似基质中。
可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定。
主要用于常规方法的标化和控制物的定值。
8、控制物：控制物用于常规质量控制，以控制病人标本的测定误差。
有定值血清和未定值血清两种。
控制物不能用于标定仪器或方法。
9、实验误差：简称误差，是量值的给出值与其客观真值之差。
10、系统误差：是指一系列测定值对真值存在同一倾向的偏差。
它具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向；一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复出现。
当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系统误差能提高测定的准确度。
11、随机误差：是指在实际工作中，多次重复测定某一物质时引起的误差。
方法学评价
方法学评价文件（3）
• EP10-A：定量实验室方法的初步评价 核准 指南（Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Laboratory Methods; Approved Guideline），提供了用于分析方 法和设备操作的初步评价的实验设计和数 据分析。
三、方法选择的步骤
•1.提出要求 •2.获取资料 •3.选定候选方法 •4.候选方法的初步试验 •标准曲线的线性范围和重复性； •重复试验——精密度； •对比试验——准确度；
评价临床方法的文件
• 核准（approved），编号为A ：核准文件是 修改后的最终文件。
• 提议（proposed），此类文件编号为P ：“ 提议文件”的内容通常要接受广泛、细致、 全面的评论；
• 它在发展相关的标准和指南时采取了特有的一致化 过程（consensus process）。
• NCCLS的自愿一致化过程是一个建立正式标准的过 程，包括：方案的认可；建立和公开对有关文件的 评论；根据使用者的意见修改文件。
方法学评价文件（1）
• EP5-A：临床化学设备操作精密度评价 核准指南（ Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices; Approved Guideline）。用于 临床化学设备进行精密度评价的实验设计及如何与 生产厂声明的精密度进行比较。
• 2．二级标准品（次级参考物， secondary reference material ） 包括用于 常规分析的标准液。这类标准品可由实 验室自已配制或为商品，它的示值必须 用一级标准品和参考方法并由训练有素 的，能熟练掌握参考方法的操作者确定 ；主要用于常规方法的评价或为控制物 定值和常规测定的结果计算。
生化检验各项目参考范围及临床意义
生化检验各项目参考范围及临床意义目录一、生物化学检验 (2)1.1 血糖测定 (4)1.2 血脂测定 (5)1.3 电解质测定 (6)1.4 血清铁蛋白测定 (7)1.5 肌酐测定 (8)1.6 尿素氮测定 (9)1.7 胆红素测定 (10)二、免疫学检验 (11)2.1 肝功能检查 (12)2.2 乙肝病毒表面抗原测定 (13)2.3 丙肝病毒抗体测定 (14)2.4 甲状腺功能测定 (15)2.5 肿瘤标志物测定 (16)三、分子生物学检验 (17)3.1 基因检测 (18)3.2 药物代谢酶测定 (19)3.3 病毒抗体测定 (20)四、血液学检验 (22)4.1 血细胞计数 (23)4.2 出血时间测定 (24)4.3 血块收缩时间测定 (25)4.4 血小板计数 (25)五、尿液检验 (26)5.1 尿液常规分析 (27)5.2 尿沉渣分析 (29)5.3 尿液生化分析 (30)六、体液检验 (31)6.1 脑脊液检验 (32)6.2 精液检验 (34)6.3 阴道分泌物检验 (35)七、其他生化检验项目 (36)7.1 血清蛋白电泳 (38)7.2 免疫球蛋白测定 (39)7.3 血清酶学测定 (41)一、生物化学检验生物化学检验是指通过检测人体内的生化指标，如酶、蛋白质、糖类、脂质、电解质等，来了解人体生理功能和病理变化的一种检验方法。
生物化学检验在临床诊断中具有重要的参考价值，可以帮助医生判断患者的病情、制定治疗方案以及评估治疗效果。
酶是生物体内催化生化反应的重要物质，其活性水平的异常可能反映出机体的病理变化。
常见的酶类指标包括：谷丙转氨酶(ALT):主要存在于肝细胞，当肝细胞受损时，ALT会释放到血液中，其水平升高提示肝损伤。
谷草转氨酶(AST):同样主要存在于肝细胞，当肝细胞受损时，AST 也会释放到血液中，其水平升高也提示肝损伤。
乳酸脱氢酶(LDH):存在于各种组织细胞中，其水平升高可能与组织坏死、缺氧、炎症等有关。
(整理)检验医学专业实验IV临床生物化学检验部分
自动生化分析仪实际K值测定实际K值：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是ε的影响。
ε在波长和温度等不同时有所不同，故有必要获得用户所用分析仪的实际ε，再计算K值，此为~。
一、340nm波长实际K值测定【实验原理】：通过有NAD+（NADP+）参与的反应途径，用NADH或NADPH标准液来校正仪器。
用己糖激酶（HK）方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。
葡萄糖有标准纯品，当反应达到终点时，NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。
在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数，计算出实际K值。
【注意事项】1．减少偶然误差重复测定10次，当CV>5％时，则重新测定10次。
2．减少系统误差使用实际K值计算酶活性。
3．如果实际ε值与理论ε值偏差过大，需对仪器检修和校正。
二、405nm波长实际K值测定【实验原理】：许多酶活性测定时，以人工“色素原”为底物，经酶作用后可释放出在405nm 波长具有吸收峰有色的反应产物，如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。
他们在405nm波长时的理论ε分别为18 700、9 870、9 490。
可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε，计算出实际K值。
以ALP实验(产物为4-NP) 为例测定实际K值。
【注意事项】1．4-NP标准品纯度要求较高，必要时需纯化。
2．其他注意事项参见340nm K值校正。
三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下，测定某标准品的含量，若测得的结果偏低，则需要把测得的结果调整至原标准品的含量，此时调整的数值称为校正因子，则校正K值=理论（实际）K值×校正因子=理论（实际）K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为：L-乳酸+ NAD+（LD）→丙酮酸+ NADH + H+在反应过程中，乳酸被氧化生成丙酮酸，同时NAD+还原为NADH。
临床生物化学检验
临床生物化学检验：既是一门研究人体健康和疾病时的医学基础理论学科，又是一门应用各种技术和方法检验机体健康和疾病的医学应用学科。
量值溯源：用参考测量程序或参考物质建立或验证常规检验结果的准确性。
实验室信息管理系统：是对实验室日常工作、科室管理、学科建设和实验发展等方面所产生及所需求的信息，通过计算机收集、处理、存储、输送和应用的系统。
临床诊断试验：是指临床上用于确定或排除疾病的方法或项目。
临床生物化学诊断试验：是指临床生物化学实验室中用于疾病诊断、筛查和监测的方法或项目。
参考值区间：指所有参考值剔除离群值并补充数据后在95%的分布范围。
金标准：指当前为临床医学界公认的诊断某种疾病最可靠的诊断方法，可通过活检、尸检、外科手术、随访等所作出的决定性诊断，又称确诊试验。
临界值：指划分诊断试验结果正常与异常的界值，又称阈值、分界值等。
医学决定水平：临床上按照不同病情给予不同处理的指标阈值。
ROC曲线：以真阳性率为纵坐标，假阴性率为横坐标，将相对应的各临界值连接起来的折线图。
国际单位（IU）:是指在特定条件下，将1min 内能转化1umol底物的酶量定为一个国际单位。
定时法：是将酶与底物在特定条件下孵育一定时间后，用终止夜终止反应，通过化学或生物化学的方法测出底物或产物的总变化量，除以时间后，计算出底物消耗速度或产物生成速度。
连续监测法：是将酶与底物在特定条件下孵育，每隔一定时间连续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化，从而计算出每分钟的信号变化速率。
最适条件：是指能满足酶发挥最大催化效率所需的条件。
代谢物酶法分析技术：是指用酶法分析的方法来测定人体内的代谢物或代谢产物的技术。
酶法分析：是以酶为试剂测定酶促反应的底物、辅酶、辅基、激活剂或抑制剂，以及利用酶偶联法测定酶活性的一类方法。
肿瘤标志物：是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或是由机体对肿瘤反应而异常产生和升高的，反映肿瘤存在和生长的一类物质。
检测系统的评价与验证
详见教材P8 为了实用的目的，初试应该包括
（三）侯选方法的初步试验：
①标准曲线及其重复性； ②质控血清或新鲜标本的重复试验；
③分析待测物浓度不同的标本，与公认的参考方
法的测定值作对比；
21
④要有足够的试验证明仪器与试剂能符合要求。
第二节 实验方法的评价
初步试验 判断符合实验要求
系统评价 分析评价试验测得结果和 比较方法性能判断的标准
❖ ①在进行临床化学常规方法的评价时，最好 选择参考方法作为比较方法
❖ ②若采用已知偏差法，则有部分误差来自比 较方法（与已知偏差 一致的那部分误差）， 剩余的则属于侯选方法。
❖ ③若采用未知偏差法，分析误差可能来源于 二者之一或两者都有，难以分析。
39
方法学评价实验小结
重复性试验：
测定候选方法的偶然误差，衡量精密度。
可直接测定
误差
方法评价试验
28
(二)方法评价步骤
评价前实验:研究候选方法的最适条件。
初步评价:批内和日内重复性试验、回收试验、干扰试验
随机误差
系统误差
最后评价:依顺序作日间重复性试验，方法比较试验和总体判断方法
是否可接受 。
方法性能
判断
评价后实验:如方法可接受，则进行临床相关研究.
诊断学评价
（五）线性范围
实验方法所能检测标本中某物质的浓度范围。
31
四、评价试验
评价试验包括
❖ 重复性试验 ❖ 回收试验 ❖ 干扰试验 ❖ 方法比较试验
32
（一）重复性试验
试验的目的:
检测候选方法的随机误差
试验的方法:
对同一材料（标准液、质控液、标本等）分成数份试验标本进行多次分 析测定，并计算其均数、标准差与变异系数。
临床化学分析方法选择与评价
临床化学分析方法选择与评价本文将就临床生化检测中的试剂选择，试验方法的选择，以及实验结果的评价方法进行简单的阐述。
使大家对试验方法的各种评价指标和评价方法有充分的了解，同时能让大家充分认识到实验室的检测方法评价的重要性。
一、对试剂及试剂盒的选择（一）对试剂的要求为了保证一定质量，对生化试剂的要求，首先实验室使用的检验试剂应通过国家食品药品监督管理局 SFDA 的批准，拿到批准文号；第二，产品的名称，应参照 SFDA 颁布的“体外诊断试剂分类目录”确定产品的名称；三，规格型号，应规定可进行测试的次数，也可用包装规格表示。
（二）对试剂盒的要求对试剂盒的要求都有哪些？第一，检测原理，即方法学原理，简单扼要说明测定原理及名称；第二，试剂组份，要明确说明试剂中组份，组成成份的数量、比例及浓度，应采用国际标准或法定单位；第三，所用校准品应该符合国家食品药品监管管理局（ SFDA ）的标准和要求；第四，试剂的稳定性，应该标明试剂盒的贮存条件与有效期，同时还要注意开瓶后试剂的贮存条件与有效期。
有特殊要求时应该明确说明；第五，检测程序，包括校准和质控的程序；第六，参考区间及其参考人群的说明，实验室给临床发报告时候，必须要给出参考区间，结果的参考区间切忌不要直接使用国外人群的参考值，不能代表中国人群的实际情况。
第七，诊断性试剂的性能评估，它的准确性对临床诊治疾病非常重要。
评估包括试剂的敏感性、特异性、精密度、线性范围或可报告范围、抗干扰能力、准确性、溯源性、方法对比结果等；第八，注意事项，应该注明是体外诊断用，以及化学品危害的说明等。
二、实验方法和标准品的选择实验方法根据准确度与精密度的不同，可以分为三级，即：决定性方法（一级参考方法）、参考方法（二级参考方法）和常规方法（厂家选定方法和终用户实验室常规方法）。
（一）标准品的分级标准品可以分为一级标准品（一级参考物质）、二级标准品（二级参考物质）和校准品，前两级是国家认可的，它有标准物质证书。
临床生化检验临床应用性能评价
注意事项：
①正确选择受检对象，以受检对象的确对所反映的总体具有 代表性和不存在对指标具有影响的因素为原则；
②合理规定参考人群的条件，如年龄、性别、民族、职业、 女性的月经期、妊娠和哺乳，以及标本采集的时间和地区 因素等；
③保证一定数量的受检人数，一般应有100例以上，若指标分 布呈偏态时应在120例以上，特殊情况至少也应30例以上；
通常用于
①拟诊为严重但疗效好的疾病，以防漏诊；
②拟诊为有一定治疗效果的恶性肿瘤，以便 早期确诊及时治疗；
③存在多种可能疾病的诊断，可排除某一诊 断；
④普查或定期健康体检，能筛选某一疾病, 以防漏诊。
2、诊断特异度与误诊
用诊断试验检出的阴性结果的百分率，表示非患病者中诊断 试验正确确定非患病者的能力，又称为真阴性率。
“金标准”
是指当前临床医学界公认的，诊断疾病最可靠的、在 临床上能获得肯定结论的方法。
使用金标准的目的就是准确区分受试对象是否为某病 患者。
临床上常用的金标准包括组织病理学检查（活检、尸 体解剖）、外科手术发现、病原体分离培养鉴定、特 殊检查和影像学检查（CT、核磁共振、彩色B超）、 生物学标志检查和长期随访所得的结论等。
确认试验：确诊试验主要是指在实验如果是阳性（定性）的情况下，需要做的一种
确诊实验，以肯定对疾病的诊断。
筛查实验与诊断实验的区别
一、检验项目临床应用性能评价的意义
1.检验项目临床应用面临的问题 2.临床生物化学检验学科发展的需要 （1）决定新检验项目的临床应用 （2）合理选择检验项目的适用范围 （3）为制定临床检验实践指南提供依据 3.临床生物化学检验工作的基本任务之一
例如，诊断冠心病的标准诊断方法是冠状动脉造影， 诊断肾炎的标准方法是肾组织活检和尸体解剖，诊断 胆结石的标准方法是手术所见。
临床生化诊断试验的诊断性能评价
临床生化诊断试验的诊断性能评价第一节概述临床诊断试验(diagnostic test)是指临床上用于某种疾病诊断的诊断方法。
广义上讲，临床诊断试验不仅包括各种实验室检查、影像诊断和仪器诊断，也包括一些病史及临床检查提供的资料。
随着科学技术的进步与发展，用于疾病诊断的临床诊断试验层出不穷，但是，并不是所有的新的临床诊断试验均比常规方法或旧的方法好。
新的临床诊断试验的性能如何，必须用合理的评价方法进行评价确定。
临床诊断试验的性能评价内容包括技术性能评价、诊断性能评价、临床效应评价和经济效益评价。
诊断性能评价的方法是基于有关流行病学调查为基础，对某种疾病的诊断方法进行评价的临床试验。
它侧重于对一种新的诊断方法，包括症状、体征、检查和检验等进行临床试验评价。
临床生化诊断试验是指临床生化实验室中用于某种疾病诊断、筛查和监测的检查方法或项目。
临床生化诊断试验的诊断性能评价，不同于技术性能的方法学评价，它以流行病学调查为基础，评价某种临床生化诊断项目在某种疾病诊断方面的诊断价值。
一、临床诊断试验的数据与患病情况的关系诊断试验分定性试验和定量试验。
定性试验的结果分为阳性和阴性结果，定量试验的结果为一系列连续的计量数据，这些数据可被分界值将其分为两个部分，也可判断为阳性和阴性结果。
一般情况下，由quot;正常人"与"病人"的诊断试验的结果的分布有部分重叠，因此，诊断试验的结果和患某病的情况之间可能出现四种关系：①真阳性（True positive，TP）指经试验而被正确分类的患者的数目。
②假阳性（False positive，FP）指经试验而被错误分类的非患者的数目。
③真阴性（True negative，TN）指经试验而被正确分类的非患者的数目。
④假阴性（False negative，FN）指经试验而被错误分类的患者的数目。
结果见图8-1。
二、临床诊断试验的诊断性能评价的层次（一）诊断试验对疾病诊断的准确性、有效性和可靠性诊断试验提供的数据有两个方面的作用：①对疾病的状态识别，即鉴别有无疾病。
临床生物化学检验-第4章 方法与试剂盒
1
1
2
1
…
1
1
1 … Sums
1
1
22
2 1
22
(1)
(2)
2
1-
2 2
(3)
18
4. 统计分析 ② 统计计算：首先计算参数A、B和Sr，然后计算批内、批间、天间和总变异系数。
A
I:
Xi1 •
i1
Xi2 •
i2
(Xi1 • − Xi2 • )2 A=
2I
B
Xi••
i
X•••
(Xi•• − X•••) 2
1
… 40
Xi1/2表示第i号样品第1次/第2次用比较方法测定的结果 Yi1/2表示第i号样品第1次/第2次用候选方法测定的结果
24
2. 统计分析 ② 离群点的检查
1 2
25
2. 统计分析 ③ 候选方法（Y）与比较方法（X）相关回归分析
r = σ σ(Xij − X)(Yij − Y) σ σ ( Xij − X ) 2 σ σ ( Yij − Y ) 2
28
3. 统计分析 (1) 数据整理与离群点的检查： 4次重复测定结果由高到低排序（见表5）。 (2) 多项式线性回归分析： 首先假设数据是非线性的。 (3) 组内变异试验：计算各组内变异均方差 (SS组内)，判断组内变异是否可接受
计算公式： SS组内 = ∑Y2 – ( ∑Y)2/4； P = 最大SS组内/总SS组内 若 P> P0.05 ，则组内变异可接受。
16
2. 评价步骤 用2个样品每天测定2批， 批间测定间隔不得少于2h。每批测定均作2份，至少共测
定20天。每批测定至少做一个质控。
3. 批内精密度计算公式
临床生化方法学评价
仪器、试剂误差
• 偶然误差：
定义：指以偶然的和不可预料的方式出现的不易测定 的偏差。 特点：
误差的大小或正负相等，在均数两侧对称分布，增加测定次 数可以减小，可以控制在一定范围内，但不可避免。表示不精 密度。
主要见于：操作误差
方法的线性范围不够宽 实验条件随机改变 注：引起SE与RE的因素是相对的。
4、回收试验注意事项：
① 准确吸量 ②作高、中、低三个浓度（线性范围内）的回收实验， 计算平均回收率。 ③分析样品终浓度最好达医学决定水平。 ④加入标准液的体积要在10％以内。 ⑤ 一般标准液浓度比欲增加的浓度至少高10倍。 ⑥最好重复测定几次。 ⑦病人样品数视具体情况而定。 ⑧最好同时用对比方法测回收。
回收率计算，以测定血清钙为例：
(1)样品制备：
①基础样品：血清2ml＋蒸馏水0.1ml
②分析样品：血清2ml＋4mmol/L钙标准液0.1ml
③分析样品：血清2ml＋ 25mmol/L钙标准液0.1ml
(2)计算公式及计算结果：
加入浓度=
标准液浓度×
标准液量(ml) 血清量(ml)+标准液量(ml)
(1)系统误差(SE)： 恒定系统误差(CE)：误差大小与被测物浓度无关。 比例系统误差(PE)：误差大小与被测物浓度有关。
(2)偶然误差/随机误差(RE)
允许误差
• 系统误差：
定义：指一系列测定结果与真值或靶值 相比存在同一倾向的偏离。
特点：重复检验时，按一定规律重复出 现，增加测定次数不可消除，但改进方法 等可以校正。表示不准确度。
指经过充分证实认为精密度与准确度稍低于决 定性方法，其各种轻度干扰因素为已知的分析方 法。用于鉴定常规方法与二级标准品，及为质控 血清定值，评价商品试剂盒。
--临床生化检验方法学评价试验
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
7
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验27 临床生化检验方法学评价试验
计算
用Grubbs检验准则，检验离群值的统 计学公式是：
G d S
式中，Xd为离群值； X为包括离群值在内 的测定值的均数；s为包括离群值在内的测 定值的标准差
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
8
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验27 临床生化检验方法学评价试验
计算
如计算的G值大于系数表中相应显著水平的a和 测定次数n时的临界值Ga.n，则将Xd作为异常值舍弃， 可按下列三种情况来处理：
（1）只有一个离群值的情况：设有n个测定数 （X1<X2<X3<X4<……<Xn）其中X1为离群值，即可 利用上述公式，直接对X1进行检验。
2
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验27 临床生化检验方法学评价试验
一、重复性实验 二、回收试验 三、干扰试验 四、方法比较试验 五、方法性能决定图绘制 六、最低检测限实验
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临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验27 临床生化检验方法学评价试验
一、重复性实验
实验原理
批内重复性试验是指在同一条件下（用同样的 方法，同一种试剂和标准品，同一台仪器，在同一 实验室由同一人操作，并保持实验期间准确度不变） 对同一标本在尽可能短的时间内进行m轮，每轮n 次重复测定，以获得批内精密度数据的试验方法。 其结果能反映测定方法的随机误差大小。
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实验27 临床生化检验方法学评价试验
操作步骤
临床生化检验方法与试剂盒评价 医学课件
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（二）检测系统比对的实施步骤
①制订分析质量目标 ②仪器性能评价
③确定对比检测系统 ④初步评价检测系统
⑤比对
步内 骤容
可接受性判断
第23页
允许不精密度、允许 偏倚和允许总误差
准确度和精密度
参考系统或 公认的测定系统
性能指标
40-100例
测定系统的关键要素
第19页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
2.对仪器性能进行评价 保证仪器处于良好 的工作状态，具备可接受的精密度和准确 度。 3. 确定对比检测系统 比如具有溯源文件 的HK法测定血糖的配套检测系统，并对该 检测系统的性能进行验证，核实其准确度 和精密度。
第20页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
第29页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
三 方法学评价实验
美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）于2005年更 名为临床和实验室标准研究院（CLSI）。制订了一系列评 价方案（evaluation protocols，EP），包括: 临床化学设备精密度评价（EP5-A） 定量分析方法的线性评价（EP6-A） 干扰试验（EP7-A） 方法对比评价及偏差评估（EP9-A2） 定量方法的初步评价（EP10-A2） 定性方法的评价（EP12-A） 基质效应评价（EP14-A）、。 EP不仅可用来评价临床生物化学检验方法性能，也可用以 评价试剂盒和分析仪器的性能。
标准计量局、参考实验室、试剂盒供应
商、临床实验室
3
保证仪器良好的工作状态、严格的操作
规程和质量控制、实验室内部测定系统
的比对、实验室间的比对
第25页
临床生化检验方法的选择和评价课件
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测定方法结果 差异（试验－比较）
零 线
比较方法结果
差异分析图
比较方法结果
对比分析图
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❖2．回收试验 所谓回收即分析方法正确 测定加入常规分析样品中的纯分析物的 能力。目的是测定比例系统误差，以衡 量候选方法的准确度。 （1）方法：将被分析的纯品标准液加 入样品中，成为分析样品，原样品加入 同量的无分析物的溶液作基础样品，然 后用实验方法分析，两者测定结果的差 值为回收量。
2种方法分别作双份测定，如临床标本 的量太少可将2份含量相近的标本混合。 ❖ ②每天测定8个标本，双份测定时第一 次按顺序1，2……7，8，第二次8， 7……2，1，共测试5天。
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结果分析
(1)作图分析 1)差异分析 2)对比分析
–– 差异图: Y轴:试验方法与比较方法之差 X轴:比较方法的测定值 –– 对比图:
❖方法学评价（evaluation of methodology）通过实验途径测定分析 方法的技术性能，并评价其是否能接 受。 评价实验的过程就是对误差的测定。
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主要的方法技术性能指标： 准确度(accuracy) 灵敏度(sensitivity) 特异度(specificity) 分析测量范围(analytical measure range, AMR)评价实验的过程就是对误 差的测定。
④干扰可能是造成误差的一个重要原因， 如果干扰物是恒定的将引起恒定误差， 如干扰物随病理生理因素影响，将引起 随机误差。
因此，实验室应了解各种测定方法的干扰 情况
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❖ 2．试验前准备 ❖ ①应做的主要干扰物为病人标本中常常
出现的黄疸，脂血和溶血；某些药物如 维生素C等；实验常用的抗凝剂，防腐 剂和稳定剂。 ❖ ②质量保证，不存在系统误差；批内精 密度在可接受范围内；应不存在前后结 果的交叉污染；实验过程有质控监督。
干扰实验
一、前言-基础知识
方法学评价（evaluation of methodology）：
的基本内容是通过实验途径，测定并评价方法
的准确度和精密度。无论是精密度还是准确度， 强调的都是误差，评价的过程就是对误差的测 定。 评价准确度的方法有回收实验、干扰实验、线 性实验等。
二、干扰实验
干扰实验：是测定非特异性和干扰两者引起的
误差，既用于检测某方法的特异性，也用于检
测干扰物质对方法的干扰作用，以评价某临床
检测方法的准确度。加入一定浓度的干扰物后 会产生误差，误差的大小与干扰物浓度相关。
二、干扰实验
特异性？
正干扰？
负干扰？
三、干扰实验原理
葡萄糖GOD—POD法测血清葡萄糖
葡萄糖 + O2 + H2O
GOD
葡萄糖酸内酯 + H2O2
1. 标准血清
6.7mmol/L
2. 维C标准液 1000mg/L
3. 血糖测定试剂盒
4. 722分光光度计
四、干扰实验实验步骤
1. 标样品制备
（1）基础样品： 血清0.9mL + 蒸馏水 0.1mL （2）干扰样品1：血清0.9mL + 250mg/L维C标准液 0.1mL
（3）干扰样品2：血清0.9mL + 500mg/L维C标准液 0.1mL
POD
H2O2 + 4-氨基安替比林 + 酚
红色醌类化合物 + H2O
葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸
内酯，并释放过氧化氢。过氧化物酶（POD）将过氧化氢分解释
放的氧使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌 类化合物，颜色的深浅与标本中葡萄糖含量成正比。
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二级参考物 用途： 用途：常规方法的工作 标准及为控制物定值
各级实验方法与参考物的相互关系
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二 常规方法选择的原则
（一）适用性
微量快速 方法简便 安全可靠 成本低廉
（二）可靠性
较高精密度、 较高精密度、准确度 较好检测范围
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随机误差
试 验 方 法 结 果
恒定系 统误差
比例系统误差
比较方法结果
误差类型示意图
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揭示误差类型的实验
误差类别 随机误差（RE） 随机误差（RE） 比例误差（PE） 比例误差（PE） 恒定误差（CE） 恒定误差（CE） 系统误差（SE） 系统误差（SE） 总误差
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2．二级标准品（次级参考物， 二级标准品（次级参考物，
secondary reference material
） 包括用于
常规分析的标准液。 常规分析的标准液。这类标准品可由实 验室自已配制或为商品， 验室自已配制或为商品，它的示值必须 用一级标准品和参考方法并由训练有素 的，能熟练掌握参考方法的操作者确定； 能熟练掌握参考方法的操作者确定； 主要用于常规方法的评价或为控制物定 值和常规测定的结果计算。 值和常规测定的结果计算。
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三级方法的相互关系
应 用 范 围
常规方法
准 确 度 增
参考方法
增 加
加
方法
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8
7
（二）标准品的分级 国际标准化委员会将标准品（参考物） 国际标准化委员会将标准品（参考物） 定义为 一类具有一种或多种成分、 的定义为：一类具有一种或多种成分、 且含量均匀确定的物质。 ；被用于校正 且含量均匀确定的物质。 仪器或用于评价一种测定方法的物质， 仪器或用于评价一种测定方法的物质， 并将其分成三级。 并将其分成三级。
（二）方法选择的步骤
（一）提出要求 （二）获取资料 （三）选定候选方法 （四）候选方法的初步试验 标准曲线的线性范围和重复性； 标准曲线的线性范围和重复性； 重复试验——精密度 精密度； 重复试验——精密度； 对比试验——准确度 准确度； 对比试验——准确度；
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实验 重复性 回收 干扰 方法对比 重复性和方法对比
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（TE） TE）
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一、方法评价方案
（一）精密度评价 1．目的要求 反映精密度好坏的指标是变异系数CV，CV越 小精密度越好，反之则差，故有人称其为不 精密度。 变异系数CV包括：批内、批间、日间和总CV， 其中总CV最重要，它代表整个分析体系的可 重复程度。
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一 检验方法和标准品的分级
（一）方法的分级 临床生化检验方法根据其准确度与精密 度的不同可以分为决定性方法、 度的不同可以分为决定性方法、参考方 法、常规方法等三级。 常规方法等三级。
第二节 临床生化检验方法学评价
一、方法学评价的意义和内容
方法学评价（ 方法学评价（evaluation of methodology） methodology）通过实验途径测定分析 方法的技术性能， 方法的技术性能，并评价其是否能接 受。 评价实验的过程就是对误差的测定。 评价实验的过程就是对误差的测定。
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2．评价前的准备 ①对于评价对象和评价方案均应熟悉。 ②实验试剂应是同批次配制，或同一批号的商品 试剂盒和参考物，仪器也应处于良好的工作状态 ③实验用标本一般选择2个（亦可更多），一个 在正常范围或在医学决定水平附近，另一个为异 常值，实验标本的介质应与临床标本一致。 ④先作一个初步的批内精密度测定，即一个标本 重复测定20次，计算出均值，标准差和变异系数
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三、误差的分类和表示
3.随机误差（RE） 3.随机误差（RE） 随机误差 定义： 定义： 多次重复测定某一物质时出现的误 误差无一定的大小和方向， 差，误差无一定的大小和方向，数据 呈正态分布。 呈正态分布。
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(2)比较前准备 (2)比较前准备 实验者应熟悉所用的仪器、试验方法、 ①实验者应熟悉所用的仪器、试验方法、 比较方法和评价方案。 比较方法和评价方案。 ②实验标本应收集新鲜的正常和异常的 临床标本，应有足够宽的浓度范围， 临床标本，应有足够宽的浓度范围，各 浓度应有合适的比例。如不能及时测定， 浓度应有合适的比例。如不能及时测定， 标本应妥善保存并应在分析物的稳定期 内测定。 内测定。
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method） 3．常规方法（routine method） 指性 常规方法（ 能指标符合临床或其他目的的需要， 能指标符合临床或其他目的的需要，有 足够的精密度、准确度、 足够的精密度、准确度、特异性和适当 的分析范围，而且经济实用。 的分析范围，而且经济实用。这类方法 经有关学术组织认可后可称为推荐方法 method）， ），推荐方法应 （recommended method），推荐方法应 具有足够的实验证据
临床生化检验方法的选 择和评价
临床生化检验方法的选择和评价， 临床生化检验方法的选择和评价， 是临床生化检验质量控制的重要基础工 当建立一个新的方法， 作。当建立一个新的方法，或引进新的 方法、都应对它们的技术性能作出评价， 方法、都应对它们的技术性能作出评价， 以便科学的选择和应用。 以便科学的选择和应用。
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method） 1．决定性方法（definitive method） 决定性方法（ 是指准确度最高，系统误差最小， 是指准确度最高，系统误差最小，经过 详细的研究，没有发现产生误差的原因 详细的研究， 或在某些方面不够明确的方法。 或在某些方面不够明确的方法。用于发 展及评价参考方法和一级标准品。 展及评价参考方法和一级标准品。
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（二）标准品的分级 1．一级标准品（原级参考物，primary 一级标准品（原级参考物， reference material ） 是一种稳定而均一 的物质，它的数值已由决定性方法确定， 的物质，它的数值已由决定性方法确定， 或由高度准确的若干方法确定， 或由高度准确的若干方法确定，所含杂 质也已经定量，且有证书； 质也已经定量，且有证书；用于校正决 定性方法， 定性方法，评价及校正参考方法以及为 二级标准品定值。 二级标准品定值。
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决定性方法 用途： 用途：评价参考方法 及为一级参考物定值
一级参考物 用途：发展和评价参考方法， 用途：发展和评价参考方法， 校正决定性方法和参考方法， 校正决定性方法和参考方法， 产生二级参考物
参考方法 用途：为二级参考物及控制物定值， 用途：为二级参考物及控制物定值， 评价常规方法（标准化、偏差、 评价常规方法（标准化、偏差、干扰 因素） 因素）
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method） 2．参考方法（reference method） 是 参考方法（ 指准确度与精密度已经充分证实的分析 方法，干扰因素少， 方法，干扰因素少，系统误差与重复测 定的随机误差相比可以忽略不计， 定的随机误差相比可以忽略不计，有适 当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。 当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。 这类方法在条件许可的实验室中应经常 使用。用于评价常规方法和试剂盒， 使用。用于评价常规方法和试剂盒，鉴 定二级标准品。 定二级标准品。
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主要的方法技术性能指标： 主要的方法技术性能指标： 准确度(accuracy) 准确度(accuracy) 灵敏度(sensitivity) 灵敏度(sensitivity) 特异度(specificity) 特异度(specificity) 分析测量范围(analytical 分析测量范围(analytical measure AMR)评价实验的过程就是对误 range, AMR)评价实验的过程就是对误 差的测定。 差的测定。
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三、误差的分类和表示
2.系统误差分类 系统误差分类 恒定系统误差（ ） 恒定系统误差（CE） 指测定值与真值之间存在恒定的 误差，其大小与干扰物浓度相关， 误差，其大小与干扰物浓度相关，而与 被测物浓度无关。 被测物浓度无关。 比例系统误差（ ） 比例系统误差（PE） 误差大小与被测物浓度成正比。 误差大小与被测物浓度成正比。
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三、误差的分类和表示
1.系统误差（SE） 1.系统误差（SE） 系统误差 定义： 定义： 指测定值与真值存在的同一倾向的偏 系统误差或正或负，即具有单向性， 差。系统误差或正或负，即具有单向性， 一般由恒定的因素引起， 一般由恒定的因素引起，并在一定条件 下多次测定中重复出现。 下多次测定中重复出现。