细胞生物学实验 PPT
合集下载
细胞生物学实验技术一 ppt课件
– 体内：神经和体液的调节、细胞间相互影响 – 体外：缺乏动态平衡的稳定环境 – 发生的变化
• 分化现象减弱 • 形态功能趋于单一化 • 一定时间后死亡或者转化获得不死性
细胞生物学实验技术一
• 体外培养的细胞仍具有研究的意义
– 许多性状仍与体内相同
• 如体外培养的心肌细胞仍可博动，
– 细胞在培养中的表现，存在相应基因关闭／ 开启引起的现象，在培养的细胞中某些特定 功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供 线索。
细胞生物学实验技术一
• 成纤维细胞型
– 梭型或不规则三角形，生长时呈放射状。 – 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，
如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。 – 凡培养中形态与成纤维类似时皆可称为成纤维细胞。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
– 上皮型细胞： • 扁平不规则多角形，彼此紧密相连。生长时呈膜状移动， 细胞很少单独行动。 • 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化 管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
组织块接种：牛胎儿成纤维细胞
细胞生物学实验技术一
• 传代期：
– 原代培养细胞一经传代后便改称做细胞系 （Cell Line）。此期的持续时间最长。
– 在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并 能维持二倍体核型。
– 为保持二倍体细胞性质，细胞应在原代培养 期或传代后早期冻存。
• 特点
– 细胞群是异质的（Heterogeneous） – 细胞克隆形成率（Cloning Efficiency）低，即细胞独立生
存性差。 – 由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很
• 分化现象减弱 • 形态功能趋于单一化 • 一定时间后死亡或者转化获得不死性
细胞生物学实验技术一
• 体外培养的细胞仍具有研究的意义
– 许多性状仍与体内相同
• 如体外培养的心肌细胞仍可博动，
– 细胞在培养中的表现，存在相应基因关闭／ 开启引起的现象，在培养的细胞中某些特定 功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供 线索。
细胞生物学实验技术一
• 成纤维细胞型
– 梭型或不规则三角形，生长时呈放射状。 – 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，
如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。 – 凡培养中形态与成纤维类似时皆可称为成纤维细胞。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
– 上皮型细胞： • 扁平不规则多角形，彼此紧密相连。生长时呈膜状移动， 细胞很少单独行动。 • 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化 管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
组织块接种：牛胎儿成纤维细胞
细胞生物学实验技术一
• 传代期：
– 原代培养细胞一经传代后便改称做细胞系 （Cell Line）。此期的持续时间最长。
– 在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并 能维持二倍体核型。
– 为保持二倍体细胞性质，细胞应在原代培养 期或传代后早期冻存。
• 特点
– 细胞群是异质的（Heterogeneous） – 细胞克隆形成率（Cloning Efficiency）低，即细胞独立生
存性差。 – 由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很
细胞生物学实验PPT课件
细胞生物学实验ppt课件
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
细胞生物学实验课-76页PPT资料
显微镜下可发现细胞回缩变圆，细胞间隙增大，此时应立 即终止消化
加入完全培养基5mL，用吸管反复吹打 计数板计数 分瓶培养
细胞的消化传代方法
生长细胞形态
四、作业与思考
1．简述细胞传代培养的操作程序及注意事项。 2．细胞培养获得成功的关键要素是什么? 3．简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。 4．绘制细胞生长曲线图。 5．绘制细胞分裂指数图。
4、金属器材的清洗处理方法 金属器材的清洗处理方法 纸擦去表面的油脂
洗衣粉煮沸或用1%碳酸氢钠化传代方法
吸除或倒掉旧培养液
加入2mL，无钙、镁PBS，漂洗一次后倒掉 加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液）
肉眼可观察到“薄膜”现象时，倒掉消化液 继续作用2～3分钟
分别在5min、15min、20min观察细胞融合
细胞融合
2、PCC诱导和观察
90分钟后离心弃上清 加入0.075mol/lKCl8ml
混匀37℃25分钟 加入1ml固定液混匀离心弃上清
加7ml固定液固定20min 离心弃上清加0.5ml固定液 滴片（冰、高、烤）Giemsa染色12min
水冲、晾干、镜检
细胞工程实验
新乡医学院生命科学实验教学中心
课程组成员：杨慈清 、李虎、王红霞、许重洁
办公电话：3029114
目录
实验一 动物细胞的培养 实验二 细胞融合技术与染色体提前凝集标本制 备实验三 小鼠MEF饲养层的制备 实验四 MS培养基的配制和愈伤组织诱导 实验五 原生质体的分离、纯化和活力鉴定
实验一 动物细胞的培养
显微镜下的培养细胞
三、实验方法
方法
1、玻璃器材的清洗处理方法 2、塑料器材的清洗处理方法 3、橡皮器材的清洗处理方法 4、金属器材的清洗处理方法 5、细胞的消化传代方法
加入完全培养基5mL，用吸管反复吹打 计数板计数 分瓶培养
细胞的消化传代方法
生长细胞形态
四、作业与思考
1．简述细胞传代培养的操作程序及注意事项。 2．细胞培养获得成功的关键要素是什么? 3．简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。 4．绘制细胞生长曲线图。 5．绘制细胞分裂指数图。
4、金属器材的清洗处理方法 金属器材的清洗处理方法 纸擦去表面的油脂
洗衣粉煮沸或用1%碳酸氢钠化传代方法
吸除或倒掉旧培养液
加入2mL，无钙、镁PBS，漂洗一次后倒掉 加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液）
肉眼可观察到“薄膜”现象时，倒掉消化液 继续作用2～3分钟
分别在5min、15min、20min观察细胞融合
细胞融合
2、PCC诱导和观察
90分钟后离心弃上清 加入0.075mol/lKCl8ml
混匀37℃25分钟 加入1ml固定液混匀离心弃上清
加7ml固定液固定20min 离心弃上清加0.5ml固定液 滴片（冰、高、烤）Giemsa染色12min
水冲、晾干、镜检
细胞工程实验
新乡医学院生命科学实验教学中心
课程组成员：杨慈清 、李虎、王红霞、许重洁
办公电话：3029114
目录
实验一 动物细胞的培养 实验二 细胞融合技术与染色体提前凝集标本制 备实验三 小鼠MEF饲养层的制备 实验四 MS培养基的配制和愈伤组织诱导 实验五 原生质体的分离、纯化和活力鉴定
实验一 动物细胞的培养
显微镜下的培养细胞
三、实验方法
方法
1、玻璃器材的清洗处理方法 2、塑料器材的清洗处理方法 3、橡皮器材的清洗处理方法 4、金属器材的清洗处理方法 5、细胞的消化传代方法
《细胞生物学》ppt课件(2024)
叶绿体
主要功能是进行光合作用，将光能转化为化学能储存在有 机物中。其结构包括外膜、内膜和类囊体，类囊体上附有 大量与光合作用有关的色素和酶。
高尔基体
主要功能是参与蛋白质的加工、分类和包装，形成分泌泡 或分泌颗粒，将其运输到细胞表面或分泌到细胞外。其结 构包括扁平囊泡、大泡和小泡。
2024/1/30
核糖体
2024/1/30
01 02 03 04
推动医学发展
细胞生物学在医学领域有着广泛 的应用，如研究疾病的发病机理 、开发新的治疗方法和药物等。
探索生命起源与进化
通过研究细胞的起源、进化和多 样性，可以深入了解生命的起源 和进化过程，探索生命科学的奥 秘。
6
02
细胞的基本结构与功能
Chapter
2024/1/30
能量代谢的调节机制
受到细胞内能量状态、激素水平、神经调节等多 种因素的影响。
2024/1/30
14
细胞的信号传导与调控
信号传导的基本概念
信号传导的主要途径
信号传导是指细胞通过特定的信号分子和 信号通路，将外界刺激转化为细胞内生物 化学反应的过程。
包括G蛋白偶联受体信号通路、酶联受体信 号通路、离子通道受体信号通路等。
7
细胞膜的结构与功能
2024/1/30
细胞膜的主要成分
01
脂质、蛋白质和糖类
细胞膜的结构特点
02
流动性、选择透过性
细胞膜的功能
03
物质运输、信息传递、能量转换、细胞识别等
8
细胞质的结构与功能
2024/1/30
细胞质的主要成分
水、无机盐、脂质、蛋白质、糖类等
细胞质的结构特点
胶态、不均一性
主要功能是进行光合作用，将光能转化为化学能储存在有 机物中。其结构包括外膜、内膜和类囊体，类囊体上附有 大量与光合作用有关的色素和酶。
高尔基体
主要功能是参与蛋白质的加工、分类和包装，形成分泌泡 或分泌颗粒，将其运输到细胞表面或分泌到细胞外。其结 构包括扁平囊泡、大泡和小泡。
2024/1/30
核糖体
2024/1/30
01 02 03 04
推动医学发展
细胞生物学在医学领域有着广泛 的应用，如研究疾病的发病机理 、开发新的治疗方法和药物等。
探索生命起源与进化
通过研究细胞的起源、进化和多 样性，可以深入了解生命的起源 和进化过程，探索生命科学的奥 秘。
6
02
细胞的基本结构与功能
Chapter
2024/1/30
能量代谢的调节机制
受到细胞内能量状态、激素水平、神经调节等多 种因素的影响。
2024/1/30
14
细胞的信号传导与调控
信号传导的基本概念
信号传导的主要途径
信号传导是指细胞通过特定的信号分子和 信号通路，将外界刺激转化为细胞内生物 化学反应的过程。
包括G蛋白偶联受体信号通路、酶联受体信 号通路、离子通道受体信号通路等。
7
细胞膜的结构与功能
2024/1/30
细胞膜的主要成分
01
脂质、蛋白质和糖类
细胞膜的结构特点
02
流动性、选择透过性
细胞膜的功能
03
物质运输、信息传递、能量转换、细胞识别等
8
细胞质的结构与功能
2024/1/30
细胞质的主要成分
水、无机盐、脂质、蛋白质、糖类等
细胞质的结构特点
胶态、不均一性
细胞生物学实验ppt课件
nuclei
28
四、作业
1．绘制口腔上皮细胞(点线绘图法) 2．低倍镜、高倍镜下测微尺的标定方法及结果 3．计算核质比
29
镜台测微尺
30
目镜测微尺（200小格）
31
实验二、细胞生理活 动的实验观察
32
实验目的
通过制片与观察加深理解细胞吞噬等生理活动 掌握死活细胞鉴别的原理及方法
许多酸性染料不易穿过活细胞的质 膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞 内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
8
9
(一)临时制片——口腔上皮细胞标本的制备
取载玻片一张(揩净)→加一滴生理盐水→取材(口腔内颊 部上皮细胞)→涂于生理盐水中→盖盖玻片→染色(甲基 蓝)1’→观察
10
(二)显微测量
1．显微测量计
目镜测微尺 镜台测微尺
11
(1) 目镜测微尺
1.外形是一圆形玻片，装入目镜镜筒中。 用于测量标本用。 2.刻度标记0~100，实际分为200等份，每一个格的长
度需用镜台测微尺标定。
12
(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。 2.总长度为1mm，分为100等份，每一个格的长度为
0.01mm(10μm)。
13
(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且
左端对齐(0刻度重合)。
using of the microscope
(I) Use of low objective lens (II) Use of high objective lens
7
Structure of the microscope Mechanical part Optics part Lighting part
28
四、作业
1．绘制口腔上皮细胞(点线绘图法) 2．低倍镜、高倍镜下测微尺的标定方法及结果 3．计算核质比
29
镜台测微尺
30
目镜测微尺（200小格）
31
实验二、细胞生理活 动的实验观察
32
实验目的
通过制片与观察加深理解细胞吞噬等生理活动 掌握死活细胞鉴别的原理及方法
许多酸性染料不易穿过活细胞的质 膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞 内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
8
9
(一)临时制片——口腔上皮细胞标本的制备
取载玻片一张(揩净)→加一滴生理盐水→取材(口腔内颊 部上皮细胞)→涂于生理盐水中→盖盖玻片→染色(甲基 蓝)1’→观察
10
(二)显微测量
1．显微测量计
目镜测微尺 镜台测微尺
11
(1) 目镜测微尺
1.外形是一圆形玻片，装入目镜镜筒中。 用于测量标本用。 2.刻度标记0~100，实际分为200等份，每一个格的长
度需用镜台测微尺标定。
12
(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。 2.总长度为1mm，分为100等份，每一个格的长度为
0.01mm(10μm)。
13
(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且
左端对齐(0刻度重合)。
using of the microscope
(I) Use of low objective lens (II) Use of high objective lens
7
Structure of the microscope Mechanical part Optics part Lighting part
《细胞生物学实验》PPT课件
35
备注
36
实验四 叶绿体的分离与荧光观察
一、实验目的：
1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器 分离的一般原理和方法；
2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟 悉荧光显微镜的使用方法。
37
二、 实验原理
组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是 分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降 速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以 及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一 时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依 次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中 的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部， 分批收集即可获得各种亚细胞组分。
53
实验内容与实施过程
4、植物原生质体的分离和培养（ 课内完成，180min） ①取充分展开的嫩叶，用自来水冲洗干净； ②将叶片在0.1%升汞溶液中浸泡灭菌10min，然后用无 菌蒸馏水漂洗5次； ③用镊子撕去叶的下表皮，然后将叶放有酶液的培养 皿或带盖三角瓶，每10ml酶液放2g叶片；
49
②原生质体分离纯化或融合后，在适当的 培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞 壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团， 长成愈伤组织或胚状体，再分化发育成苗。其 中，选择合适的培养基及培养方法是原生质体 培养中最基础也是最关键的环节。
50
三、实验仪器
台式离心机、 高压灭菌锅、 倒置显微镜、 超净工作台
26
③詹纳斯绿B：詹纳斯绿B能专一的对线粒 体进行活体染色。线粒体中细胞色素氧 化酶使染料保持氧化状态，即有色状态， 呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被 还原，成为无色状态
27
三、实验仪器
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、 双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
备注
36
实验四 叶绿体的分离与荧光观察
一、实验目的：
1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器 分离的一般原理和方法；
2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟 悉荧光显微镜的使用方法。
37
二、 实验原理
组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是 分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降 速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以 及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一 时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依 次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中 的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部， 分批收集即可获得各种亚细胞组分。
53
实验内容与实施过程
4、植物原生质体的分离和培养（ 课内完成，180min） ①取充分展开的嫩叶，用自来水冲洗干净； ②将叶片在0.1%升汞溶液中浸泡灭菌10min，然后用无 菌蒸馏水漂洗5次； ③用镊子撕去叶的下表皮，然后将叶放有酶液的培养 皿或带盖三角瓶，每10ml酶液放2g叶片；
49
②原生质体分离纯化或融合后，在适当的 培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞 壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团， 长成愈伤组织或胚状体，再分化发育成苗。其 中，选择合适的培养基及培养方法是原生质体 培养中最基础也是最关键的环节。
50
三、实验仪器
台式离心机、 高压灭菌锅、 倒置显微镜、 超净工作台
26
③詹纳斯绿B：詹纳斯绿B能专一的对线粒 体进行活体染色。线粒体中细胞色素氧 化酶使染料保持氧化状态，即有色状态， 呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被 还原，成为无色状态
27
三、实验仪器
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、 双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖 玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。
细胞生物学全套ppt课件(共277张PPT)
激光共聚焦显微镜
结合激光扫描和共聚焦技术，实现三 维重建和动态观察，用于研究细胞内 分子定位和相互作用。
电子显微镜
利用电子束代替光束，通过电磁透镜 成像，可观察细胞的超微结构，如透 射电子显微镜和扫描电子显微镜。
分子生物学技术在细胞生物学中应用
DNA重组技术
通过体外操作DNA片段，实现基因克隆、表达和调控研究，用于 解析基因功能和调控网络。
细胞周期调控异常可能导致细胞增殖失控和肿瘤发生。因此，深入研究 细胞周期调控因子和机制对于理解细胞增殖、分化和癌变等生物学过程 具有重要意义。
06
细胞分化、衰老与凋亡
细胞分化类型和影响因素
细胞分化类型 多能干细胞分化
专能干细胞分化
细胞分化类型和影响因素
01
终末分化细胞
02
影响因素
基因表达调控
03
系。
蛋白质组学技术
利用质谱技术、蛋白质芯片等方 法，研究细胞内蛋白质组成、相 互作用和修饰等，揭示蛋白质在
细胞生命活动中的作用。
生物信息学分析
运用生物信息学方法对基因组学 和蛋白质组学数据进行挖掘和分 析，发现新的基因、蛋白质和调 控网络及其与细胞生物学过程的
关系。
THANKS
胞内外环境的稳定。
物质跨膜运输方式及机制
被动运输
01
包括简单扩散和易化扩散两种方式，不需要消耗能量，物质顺
浓度梯度进行运输。
主动运输
02
包括原发性主动转运和继发性主动转运两种方式，需要消耗能
量，物质逆浓度梯度进行运输。
膜泡运输
03
包括出胞和入胞两种方式，通过膜泡的形成和移动来实现物质
的跨膜运输。
膜蛋白功能及其调控
细胞生物学课件(共137张PPT)
DNA存在细胞核和线粒体内，携带和传递遗传信息， 决定细胞和个体的基因型（gene type)。
RNA存在于细胞质和细胞核内，参入细胞内DNA 遗传信息的表达。
病毒中，RNA也可作为遗传信息的载体。
Section 1 DNA的结构与功能
一、DNA的一级结构
4种核苷酸的连接及排列顺序 四种脱氧核糖核苷酸分别表示为：
(6)核小体沿DNA的定位受不同因素的影响，进 而通过核小体相位改变影响基因表达 。
核小体的性质及结构要点示意图（引自等）
在用微球菌核酸酶降解染色质时，反应早期可得到166bp的片段，但不稳定；进一步降解则得到146bp片段，
比较稳定。推测可能原因是失去H1后，DNA两端各有10bp的DNA，易被核酸酶作用而降解。
Chromatin Packing
Chromatin Packing
Section 3 基因与基因组
• 基因：表达一种蛋白质或功能RNA的基 本单位。
• 基因组：是指某种生物所包含的全套基
因。
人类基因组的C值在3＊109 bp ； 病毒含 103~105bp；细菌含105~107bp；
基因与蛋白质
（１）铺展染色质的电镜观察
Isolated from interphase nucleus: 30nm thick Chromatin unpacked, show the nuclesome
(2)用非特异性微球菌核酸酶消化染色质,部分酶解片
段检测结果
（３）应用X射线衍射、中子散射和电镜三维重建 技术研究染色质结晶颗粒
五、分子及细胞生物学研究技术
基因组的维持
真核基因组的结构
染色质结构及其调控 DNA的复制 、修复和转座
1
RNA存在于细胞质和细胞核内，参入细胞内DNA 遗传信息的表达。
病毒中，RNA也可作为遗传信息的载体。
Section 1 DNA的结构与功能
一、DNA的一级结构
4种核苷酸的连接及排列顺序 四种脱氧核糖核苷酸分别表示为：
(6)核小体沿DNA的定位受不同因素的影响，进 而通过核小体相位改变影响基因表达 。
核小体的性质及结构要点示意图（引自等）
在用微球菌核酸酶降解染色质时，反应早期可得到166bp的片段，但不稳定；进一步降解则得到146bp片段，
比较稳定。推测可能原因是失去H1后，DNA两端各有10bp的DNA，易被核酸酶作用而降解。
Chromatin Packing
Chromatin Packing
Section 3 基因与基因组
• 基因：表达一种蛋白质或功能RNA的基 本单位。
• 基因组：是指某种生物所包含的全套基
因。
人类基因组的C值在3＊109 bp ； 病毒含 103~105bp；细菌含105~107bp；
基因与蛋白质
（１）铺展染色质的电镜观察
Isolated from interphase nucleus: 30nm thick Chromatin unpacked, show the nuclesome
(2)用非特异性微球菌核酸酶消化染色质,部分酶解片
段检测结果
（３）应用X射线衍射、中子散射和电镜三维重建 技术研究染色质结晶颗粒
五、分子及细胞生物学研究技术
基因组的维持
真核基因组的结构
染色质结构及其调控 DNA的复制 、修复和转座
1
细胞生物学试验课件
小鼠的脱臼处死法
3．给药方法： 小自鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、
尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。 我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住 小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱 和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方 向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿 腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。 针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或 肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／ 10克体重。
[作业] 一、比较四种特殊的光学显微镜。 二、为什么说倒置相按显微镜是观察培养活细胞的最有效
显微镜? 三、荧光显微镜的两种滤光片各起什么作用? 四、描述在特殊光镜观察到的盐藻形态。
实验三、显微摄影技术
『目的要求』： 掌握显微摄影原理、装置及其操作技术，能独立完
成全过程
『实验用品』: 复式光学显微镜、摄影装置、各色滤光镜、胶片、
小白鼠
小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。
1．捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉， 小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶 部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
2．处死方法：
处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速死亡。 常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧化碳吸入法等。 断头法需用特殊的断头器，二氧化碳吸入法则将小鼠放 入盛有二氧化碳的容器内即可。颈椎脱位法的具体方法 是：左手拇指和食指按住小白鼠的头部，左手捉住其尾 巴迅速向后猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。
完整和正常，并进行必要的清洁工作，然后将显微镜放置 在自己左肩前方的实验台上，离桌子边缘3—6cm为宜，以 便观察。
(一)低倍镜的使用方法 1．对光 2．放置玻片标本 3．调节焦距
细胞生物学实验技术(PPT)
• 分辨力为6~10nm，因人眼的分辨力〔区别荧光屏上距 离最近两个光点的能力〕为，扫描电镜的有效放大倍 率为。
第三十七页，共八十四页。
Scanning electron microscope〔 SEM〕
第三十八页，共八十四页。
• 工作原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品外表激发出次级电 子，次级电子的多少与样品外表结构有关，次级电子由探测器收集，信 号(xìnhào)经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步 的扫描图像。
• 用于观察能激发出荧光的结构。用途：免疫荧光观察、 基因(jīyīn)定位、疾病诊断。
Fluorescence image, DNA in blue and Microtubules in green
第十三页，共八十四页。
〔三〕激光共聚焦(jùjiāo)扫描显微境 Laser confocal scanning microscope, LCSM
〔七〕微分(wēi fēn)干预差显微镜 Differential interference contrast microscope 〔DIC〕
• 1952年Nomarski创造，利用两组平 面偏振光的干预，加强影像的明暗 效果，能显示结构的三维立体投影。 标本可略厚一点(yī diǎn)，折射率差异 更大，故影像的立体感更强。
第二章 细胞生物学实验(shíyàn)技术
METHODS AND TECHNIQUES
第一页，共八十四页。
本章 内容提要 (běn zhānɡ)
• 第一节 显微技术
• 一、光学显微镜 • 二、电子显微镜
• 三、显微操作技术
• 第二节 生物化学(shēnɡ wù huà xué)与分子生物学技术
第三十七页，共八十四页。
Scanning electron microscope〔 SEM〕
第三十八页，共八十四页。
• 工作原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品外表激发出次级电 子，次级电子的多少与样品外表结构有关，次级电子由探测器收集，信 号(xìnhào)经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步 的扫描图像。
• 用于观察能激发出荧光的结构。用途：免疫荧光观察、 基因(jīyīn)定位、疾病诊断。
Fluorescence image, DNA in blue and Microtubules in green
第十三页，共八十四页。
〔三〕激光共聚焦(jùjiāo)扫描显微境 Laser confocal scanning microscope, LCSM
〔七〕微分(wēi fēn)干预差显微镜 Differential interference contrast microscope 〔DIC〕
• 1952年Nomarski创造，利用两组平 面偏振光的干预，加强影像的明暗 效果，能显示结构的三维立体投影。 标本可略厚一点(yī diǎn)，折射率差异 更大，故影像的立体感更强。
第二章 细胞生物学实验(shíyàn)技术
METHODS AND TECHNIQUES
第一页，共八十四页。
本章 内容提要 (běn zhānɡ)
• 第一节 显微技术
• 一、光学显微镜 • 二、电子显微镜
• 三、显微操作技术
• 第二节 生物化学(shēnɡ wù huà xué)与分子生物学技术
细胞生物学实验课件实验课件2
有1mol/L HCL的染色缸中 清洗，然后将载玻片放入已温浴至60℃的1mol/L HCL溶液中水解8分钟，水解后很快将标本取出， 放入室温1mol/L HCL溶液中。
注意：水解是本实验成败的关键之一。 重要的是温度，应保持在60±0.5℃之间。如果温 度过高或时间过长，造成水解过度，糖与醛基之间的键被 破坏，醛基流失到水解液中，不能呈现颜色反应。
1.用carnoy固定液固定的鱼肝脏切片； carnoy液：（纯酒精：冰醋酸：氯仿＝6:1:3) 2.显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、香柏油， 擦镜纸，盖玻片； 3. Schiff试剂、1mol/L盐酸、1%亮绿、酒精、二甲 苯、 亚硫酸水（洗涤剂）: 在200ml蒸馏水中，加入 10ml 1N HCl 和10ml 10%偏亚硫酸氢钠水溶液 （或1.0g固体）。此液在临用前配制。
注意：时间切忌过长，以免染色过深，影响对DNA的观察。
11、水洗、脱水与封片 用蒸馏水洗两次，每次5 min，再经过30%， 50%，70%，85%，95%，100%（Ⅰ），100% （Ⅱ）的酒精各3~5分钟；二甲苯透明Ⅰ和Ⅱ， 各8~10 min。中性加拿大树胶封片。 12 镜检
五、实验结果
细胞核中的DNA呈鲜亮的紫红色反应，细 胞质被亮绿复染成绿色，核仁通常为负反 应。 -反映出DNA存在的部位 -从颜色反应的深浅，可以判断DNA的相对 含量。
四、实验步骤
1、取材和固定： 取材要小，一般以2-3mm的厚度为宜， 固定剂通常用Carnoy溶液，固定后放4℃ 冰箱中4-6小时。 2、脱水：依次经过95%酒精两次(每次20-30 min); 100%酒精两次(分别用30min、 40min)。
3、制片 二甲苯透明，石蜡包埋，切片6-7 µ m，明 胶贴片，烘干。在贴片时应加入1-2滴10% 甲醛予以固定，否则很易脱片。 4、脱蜡 （本次实验开始） 将制片经二甲苯Ⅰ（20 min）和二甲苯Ⅱ （10 min）将石蜡脱净，再经过100%， 95%，85%，70%，50%，30%的酒精各 8~10 min, 最后放入蒸馏水中5~10 min。
注意：水解是本实验成败的关键之一。 重要的是温度，应保持在60±0.5℃之间。如果温 度过高或时间过长，造成水解过度，糖与醛基之间的键被 破坏，醛基流失到水解液中，不能呈现颜色反应。
1.用carnoy固定液固定的鱼肝脏切片； carnoy液：（纯酒精：冰醋酸：氯仿＝6:1:3) 2.显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、香柏油， 擦镜纸，盖玻片； 3. Schiff试剂、1mol/L盐酸、1%亮绿、酒精、二甲 苯、 亚硫酸水（洗涤剂）: 在200ml蒸馏水中，加入 10ml 1N HCl 和10ml 10%偏亚硫酸氢钠水溶液 （或1.0g固体）。此液在临用前配制。
注意：时间切忌过长，以免染色过深，影响对DNA的观察。
11、水洗、脱水与封片 用蒸馏水洗两次，每次5 min，再经过30%， 50%，70%，85%，95%，100%（Ⅰ），100% （Ⅱ）的酒精各3~5分钟；二甲苯透明Ⅰ和Ⅱ， 各8~10 min。中性加拿大树胶封片。 12 镜检
五、实验结果
细胞核中的DNA呈鲜亮的紫红色反应，细 胞质被亮绿复染成绿色，核仁通常为负反 应。 -反映出DNA存在的部位 -从颜色反应的深浅，可以判断DNA的相对 含量。
四、实验步骤
1、取材和固定： 取材要小，一般以2-3mm的厚度为宜， 固定剂通常用Carnoy溶液，固定后放4℃ 冰箱中4-6小时。 2、脱水：依次经过95%酒精两次(每次20-30 min); 100%酒精两次(分别用30min、 40min)。
3、制片 二甲苯透明，石蜡包埋，切片6-7 µ m，明 胶贴片，烘干。在贴片时应加入1-2滴10% 甲醛予以固定，否则很易脱片。 4、脱蜡 （本次实验开始） 将制片经二甲苯Ⅰ（20 min）和二甲苯Ⅱ （10 min）将石蜡脱净，再经过100%， 95%，85%，70%，50%，30%的酒精各 8~10 min, 最后放入蒸馏水中5~10 min。
细胞生物学实验ppt课件
ppt课件完整
6
镜普 通 复 氏 显 微
镜相 差 显 微
ppt课件完整
镜暗 视 野 显 微
镜荧 光 显 微
7
3、如何提高显微镜 分辨率
ppt课件完整
8
1、数片孔径：孔径愈大，显微镜能力俞强。 2、分辨率：分辨率以分辨俩点之间的最小距离表示。 目镜与显微镜的分辨率无关，物镜的分辨率即为显微 镜的分辨率，照明光线波长越短，物镜的数值孔径越
大显微镜的分辨率的越大。 3、放大率：总放大率超过物镜数值孔径的1000倍时， 细微结构分辨不清，为空的放大， 低于500倍时由于放大率过低，肉眼难以分辨。 4、焦点深度：焦深加大，总放大率提高。
ppt课件完整
9
三、实验器材
观察材料（草履虫，洋葱内表皮，紫鸭趾 草等花粉，菠菜叶），普通光学显微镜， 暗视野显微镜，相差显微镜，荧光显微镜， 载玻片，盖玻片，吸管，镊子，剪刀等。
观察。
3．紫鸭趾草花粉外形、表面突起的观察在载玻片
上滴一滴水，取紫鸭趾草雄蕊在其中沾几下，然后
盖片观察。
ppt课件完整
12
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
实验一、几种光学显微镜的使用
ppt课件完整
1
一、实验目的：
了解几种光学显微镜的结构、使用 方法、工作原理等。 掌握使用普通光学显微镜提高分辨 率的方法。
ppt课件完整
2
二、实验原理ห้องสมุดไป่ตู้
ppt课件完整
3
1、基本原理
一般光学显微镜主要是由目镜、物镜、 聚光器以及反光镜等构成。 各种光学显微镜的放大原理基本相同， 各种特殊用途的显微镜只是在主要器 件上进行了稍微改动而已。
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
9
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
10
三、实验器材
观察材料（草履虫，洋葱内表皮，紫鸭趾 草等花粉，菠菜叶），普通光学显微镜， 暗视野显微镜，相差显微镜，荧光显微镜， 载玻片，盖玻片，吸管，镊子，剪刀等。
11
四、实验方法
12
1．观察草履虫的外形、运动、纤毛、食物泡等。 取少许棉花纤维或擦镜纸纤维，放于载玻片上，在 其上滴一滴草履虫悬液，然后加盖玻片观察。 2．洋葱表皮细胞和菠菜叶的细胞核、叶绿体的观 察在载玻片上滴一滴水，撕洋葱鳞茎内表皮或菠菜 下表皮一小块放于其中，使其展开，然后加盖玻片 观察。 3．紫鸭趾草花粉外形、表面突起的观察在载玻片 上滴一滴水，取紫鸭趾草雄蕊在其中沾几下，然后 盖片观察。
6
普
暗
通
视
复
野
氏
显
显
微
微
镜
镜
相 差 显 微 镜
荧 光 显 微 镜
7
3、如何提高显微镜 分辨率
8
1、数片孔径：孔径愈大，显微镜能力俞强。 2、分辨率：分辨率以分辨俩点之间的最小距离表示。 目镜与显微镜的分辨率无关，物镜的分辨率即为显 微镜的分辨率，照明光线波长越短，物镜的数值孔 径越大显微镜的分辨率的越大。 3、放大率：总放大率超过物镜数值孔径的1000倍时， 细微结构分辨不清，为空的放大， 低于500倍时由于放大率过低，肉眼难以分辨。 4、焦点深度：焦深加大，总放大率提高。
实验一、几种光学显微镜的使用
1
一、实验目的：
了解几种光学显微镜的结构、使用 方法、工作原理等。 掌握使用普通光学显微镜提高分辨 率的方法。
2
二、实验原理
3
1、基本原理
一般光学显微镜主要是由目镜、物镜、 聚光器以及反光镜等构成。 各种光学显微镜的放大原理基本相同， 各种特殊用途的显微镜只是在主要器 件上进行了稍微改动而已。
13
Hale Waihona Puke 42、几种光学显微镜
5
1、普通复式光学显微镜：其重要的性能参数是分辨率。
2、暗视野显微镜：具有特殊的聚光器。光源中心束不直 入物镜，所以视野灰暗。而被检测细胞由于光的衍射及 反射而较亮
3、相差显微镜：利用光的干涉原理。在物镜与聚光器上 做了改动。把肉眼看不见的相位差改为可见的振幅差， 使人能够看清楚。 4、荧光显微镜：是在光镜水平上对细胞内特异的蛋白质、 核酸、糖类、脂质以及某些离子等组分进行定性定位研 究的有利工具。
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
10
三、实验器材
观察材料（草履虫，洋葱内表皮，紫鸭趾 草等花粉，菠菜叶），普通光学显微镜， 暗视野显微镜，相差显微镜，荧光显微镜， 载玻片，盖玻片，吸管，镊子，剪刀等。
11
四、实验方法
12
1．观察草履虫的外形、运动、纤毛、食物泡等。 取少许棉花纤维或擦镜纸纤维，放于载玻片上，在 其上滴一滴草履虫悬液，然后加盖玻片观察。 2．洋葱表皮细胞和菠菜叶的细胞核、叶绿体的观 察在载玻片上滴一滴水，撕洋葱鳞茎内表皮或菠菜 下表皮一小块放于其中，使其展开，然后加盖玻片 观察。 3．紫鸭趾草花粉外形、表面突起的观察在载玻片 上滴一滴水，取紫鸭趾草雄蕊在其中沾几下，然后 盖片观察。
6
普
暗
通
视
复
野
氏
显
显
微
微
镜
镜
相 差 显 微 镜
荧 光 显 微 镜
7
3、如何提高显微镜 分辨率
8
1、数片孔径：孔径愈大，显微镜能力俞强。 2、分辨率：分辨率以分辨俩点之间的最小距离表示。 目镜与显微镜的分辨率无关，物镜的分辨率即为显 微镜的分辨率，照明光线波长越短，物镜的数值孔 径越大显微镜的分辨率的越大。 3、放大率：总放大率超过物镜数值孔径的1000倍时， 细微结构分辨不清，为空的放大， 低于500倍时由于放大率过低，肉眼难以分辨。 4、焦点深度：焦深加大，总放大率提高。
实验一、几种光学显微镜的使用
1
一、实验目的：
了解几种光学显微镜的结构、使用 方法、工作原理等。 掌握使用普通光学显微镜提高分辨 率的方法。
2
二、实验原理
3
1、基本原理
一般光学显微镜主要是由目镜、物镜、 聚光器以及反光镜等构成。 各种光学显微镜的放大原理基本相同， 各种特殊用途的显微镜只是在主要器 件上进行了稍微改动而已。
13
Hale Waihona Puke 42、几种光学显微镜
5
1、普通复式光学显微镜：其重要的性能参数是分辨率。
2、暗视野显微镜：具有特殊的聚光器。光源中心束不直 入物镜，所以视野灰暗。而被检测细胞由于光的衍射及 反射而较亮
3、相差显微镜：利用光的干涉原理。在物镜与聚光器上 做了改动。把肉眼看不见的相位差改为可见的振幅差， 使人能够看清楚。 4、荧光显微镜：是在光镜水平上对细胞内特异的蛋白质、 核酸、糖类、脂质以及某些离子等组分进行定性定位研 究的有利工具。