植物根系活力测定

实验三植物根系活力测定

植物根系的作用主要有:(1)对地上部分支持和固定(2)物质的贮藏(3)对水分和无机盐类的吸收(4)合成氨基酸、激素等物质。因此，根系活力是植物生长的重要生理指标之一,其测定方法主要有a-萘胺氧化法和氯化三苯基四氮唑(TTC)法。

实验目的：了解根系活力的生理意义；掌握a-萘胺氧化法,测定根系活力的原理与方法;

实验原理：植物的根系可通过过氧化物酶氧化吸附在根表面的a-萘胺，生

成红色的α-羟基-1-萘胺，沉淀于有强氧化力的根表面，使这部分根染成红色，

该反应如右图。根对α-萘胺的氧化力与其呼吸强度有密切关系。据认为α-萘胺

氧化过程是在过氧化物酶的催化下进行的，该酶的活力愈强，对α-萘胺的氧化力

就愈强，染色也就越深。所以可根据染色深浅半定量地判断根系活力大小。

如需对根活力进行定量测定，可根据α-萘胺溶液与根系接触一定时间后，α-

萘胺的减少量来确定。Α-萘胺在酸性环境中与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成红

色的偶氮染料,可用比色法测定α-萘胺含量，其反应如图。在520nm波长处测定所

生成的染料的吸光度值，即可求出a-萘胺的含量。求出与根接触前后a-萘胺的含

量，就可以求出根系对a-萘胺的氧化活力，从而测定出植物根系的氧化活力大小。

实验内容：

1.定性观察（不做）

从田间挖取水稻植株，用水冲洗根部所附着的泥土，洗净后再用滤纸吸去附在水稻根上的水分。然后将植株根系浸人盛有25 μg/mL的a-萘胺溶液

的容器中,容器外用黑纸包裹,静置24~36 h后观察水稻根系着色状况。着色深者，其根系活力越大。

2.定量测定

(1)a-萘胺的氧化

挖出水稻植株，并用水洗净根系上的泥土，剪下它的根系，再用水洗，待洗净后用滤纸吸去根表面的水分，称2 g根放在100 ml三角烧瓶中。然后加50 μg/ml的a-萘胺溶液与PBS(pH 7.0)等量混合液50 ml，轻轻振荡，并用玻璃棒将根全部浸入溶液中，静置10分钟，吸取2 ml溶液，测定α-萘胺含量[测定方法见下面(2)]，作为试验开始时的数值。再将三角烧瓶加塞，放在25℃恒温箱中，经一定时间后（10min），再进行测定。另外，还要用一只三角烧瓶置同样数量的溶液，但不放根，作为α-萘胺自动氧化的空白，也同样测定，求它自动氧化量的数值。

(2)a-萘胺含量的测定

吸取2 ml溶液，加入约10 ml蒸馏水，再在其中加入1%对氨基苯磺酸溶液1 ml和NaNO2溶液1 ml，在室温中放置5分钟，待混合液变成红色，再用蒸馏水定容到25 ml。在20~60分钟内510nm处比色，读取吸光度，查对标准曲线得相应的α-萘胺浓度。从实验开始10min时的数值减去自动氧化的数值，即为溶液中所有a-萘胺的量。被氧化的a-萘胺的量以ug/(g.h)表示。

(3)绘制α-萘胺标准曲线

以浓度为50 μg/mL的a-萘胺溶液为母液。配制浓度为50、45、40、35 、30、25、20、15、10、5 μg/mL的系列溶液，各取2 mL放入试管中，加蒸馏水10 mL，1%对氨基苯磺酸溶液1mL和亚硝酸钠溶液1mL,室温放置5min 待混合液变成红色，再用去离子水定容到25 mL。在20~60 min内510 nm处比色，读取OD。然后以OD值作为纵坐标，a-萘胺含量为横坐标，绘制标准曲线。

实验仪器：

1.实验仪器:分光光度计、分析天平、烘箱、三角烧瓶、量筒、移液管、容量瓶。

2.实验试剂:a-萘胺溶液(50 ug/mL),0.1 mol/L磷酸缓冲液(PBS)( pH7.0),1%对氨基苯磺酸，NaNO2溶液。

3.实验材料:蒜根。