油茶籽油中角鲨烯含量的测定

油茶籽油中角鲨烯含量的测定

张东生;薛雅琳;金青哲;王兴国;张东;钟诚

【摘要】建立了气相色谱法测定油茶籽油中功能性成分角鲨烯含量的方法.样品经氢氧化钾-乙醇溶液皂化,再经正己烷萃取净化,气相色谱法分析测定,外标法定量.结果表明:角鲨烯含量在10.0 ～100 μg/mL范围内,方法的线性关系良好,相关系数为0.999 6,最低检出限为1.19 mg/kg;在50、100 mg/kg和150 mg/kg的加标水平下,角鲨烯在油茶籽油中的平均回收率为94.0％～ 101.9％,相对标准偏差(RSD)为1.8％～3.8％.方法分析时间短,重现性好,灵敏度高,可用于食用植物油中功能性成分角鲨烯含量的测定.

【期刊名称】《中国油脂》

【年(卷),期】2013(038)011

【总页数】4页(P85-88)

【关键词】油茶籽油;角鲨烯;皂化;气相色谱法;食用植物油

【作者】张东生;薛雅琳;金青哲;王兴国;张东;钟诚

【作者单位】江南大学食品学院,江苏无锡214122;国家粮食局科学研究院,北京100037;国家粮食局科学研究院,北京100037;江南大学食品学院,江苏无锡214122;江南大学食品学院,江苏无锡214122;国家粮食局科学研究院,北京100037;江南大学食品学院,江苏无锡214122

【正文语种】中文

【中图分类】TS225.1;TQ646

角鲨烯主要来源于海洋动物或植物，深海鲨鱼肝脏中居多，同时自然界植物油橄榄油中居多，其次是米糠油、油茶籽油;它是一种天然的萜类化合物，不饱和程度较高，是胆固醇合成的中间产物，属于脂质不皂化物。角鲨烯具有预防癌症、降低血清胆固醇、预防心血管疾病、抗氧化、很容易被皮肤吸收等特点，被广泛应用在保健食品及化妆品等领域。

目前，测定角鲨烯的方法主要有气相色谱法［1－4］、液相色谱法［5－7］、气质联用法［8－9］等。然而，气相色谱法中大多数采用有机溶剂溶解直接进样并且色谱柱使用温度较高，这不仅一定程度上污染了色谱柱，缩短了色谱柱的使用寿命，而且使得杂质峰较多，影响了目标峰的分离效果。因此，本实验旨在建立一种分析时间短，重现性好，灵敏度高的气相色谱方法。该方法采用较文献低的色谱柱温，既保护了色谱柱，又使得分析效果好，测定结果准确，非常适合食用植物油中功能性成分角鲨烯含量的测定。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 原料与试剂

油茶籽油、橄榄油、稻米油、大豆油、葵花籽油、菜籽油，均来自国家粮食局科学研究院粮油质量检验与测试中心。

氢氧化钾、乙醇、无水硫酸钠均为分析纯;正己烷为色谱纯;角鲨烯标准品(纯度

≥98%)，美国Sigma公司。

1.1.2 仪器与设备

6890N气相色谱仪，美国Agilent公司;AB304－S型电子天平，梅特勒－托利多(瑞士)公司;R－210/R－215旋转蒸发仪;HH－4数显恒温水浴锅。

1.2 实验方法

1.2.1 样品前处理

准确称取样品2 g(精确到0.000 1 g)到250 mL磨口烧瓶中，加入50 mL氢氧化钾－乙醇溶液(约1 mol/L)，在80℃恒温水浴锅中回流皂化反应50 min后，冷却至室温，将皂化液转移至250 mL分液漏斗中，加入50 mL正己烷，用力摇动2 min后静置10 min，至溶液分层后将上层有机相转移至另一个250 mL分液漏斗中，下层皂化液再分别加入30、20 mL正己烷继续萃取，将3次正己烷提取液置于同一分液漏斗中，每次加入30 mL乙醇溶液(体积分数为10%)洗涤有机相至中性，然后用无水硫酸钠脱去残余水分，在40℃水浴中旋转蒸发溶剂，最后用正己烷溶解并定容至10 mL，过0.45μm有机滤膜，上气相色谱仪测定。

1.2.2 标准储备液的制备

准确称取25 mg(精确到0.01 mg)角鲨烯标准品到25 mL容量瓶内，加入少量正己烷，使其充分溶解，然后定容至刻度，摇匀，即配成1 mg/mL的标准储备液，备用。

1.2.3 气相色谱条件

HP－5 毛细管色谱柱(30.0 m ×0.32 mm ×0.25μm);程序升温:从160℃以

15℃/min的速率升温到220℃，保持2 min，然后以10℃/min的速率升温到280℃，保持10 min;FID检测器温度300℃，进样口温度250℃;载气为高纯度氮气(纯度99.999%)，流速2.0 mL/min;氢气流速40 mL/min，空气流速 450

mL/min，尾吹气(高纯氮)，流速30.0 mL/min;进样量1.0 μL，分流比20∶1。定量方法:峰面积归一化外标法。

2 结果与分析

2.1 样品前处理条件的优化

据文献报道［3，10－11］，采用三氯甲烷或者正己烷等溶解样品后直接进样，这样不仅增加了色谱柱的负担，容易对色谱柱造成不可逆的污染，同时，在一定程度

上也降低了色谱柱的使用年限;并且干扰峰过多导致目标峰峰型不好，分离效果差，使得角鲨烯的测定结果存在较大的不准确性。由于角鲨烯是一种脂质不皂化物，因此本实验对样品进行皂化前处理，脱除样品中影响角鲨烯峰型较大的成分，然后萃取净化皂化液，从而达到了浓缩样品中角鲨烯的效果。采用正交实验考察影响皂化条件的因素:皂化时间，皂化温度，皂化液的浓度［12－13］，结果表明:皂化温度为80℃，皂化时间为50 min，氢氧化钾－乙醇浓度为1 mol/L为最佳的皂化反

应条件;而国标(GB/T 5535—2008)不皂化物的测定方法中的碱浓度也在1 mol/L

左右。对于萃取净化溶剂，丙酮毒性比较大，石油醚易挥发，对操作者影响较大，因此正己烷是不错的选择;同时，李冬梅等［14］的提取方法对茶油中活性成分角

鲨烯含量的影响结果表明，用正己烷作为提取溶剂时测得的角鲨烯含量较其他溶剂的高。

2.2 色谱条件的优化

角鲨烯是一种脂质不皂化物，不饱和程度比较高，相对分子质量大(410)，沸点高(330℃/常压、280℃ /2.27 kPa、240 ～242℃ /533 Pa)，难挥发。经验表明:温

度过高对色谱柱会造成一定的负担，在一定程度上缩短了色谱柱的使用寿命;过快

的升温速率也容易造成基线漂移，目标峰的峰型也会受到一定程度的影响，从而影响目标物质的测定结果。因此，本实验选用HP－5耐高温低流失弹性毛细管柱，

在较文献［12，15］低的温度(280℃)下保持 10 min，采用低速率的程序升温，

确保了基线稳定，从而得到了较好的角鲨烯标准品色谱图(见图1)。

图1 角鲨烯标准品气相色谱图

2.3 方法学评价

2.3.1 标准曲线及检出限

将标准储备液用正己烷分别稀释成10、20、40、60、80、100μg/mL的不同质

量浓度标准系列，按照1.2.3气相色谱条件进行测定。以峰面积Y为纵坐标，标准