实验五、微生物的计数——血球计数板法
血球样板计数实验报告
一、实验目的1. 掌握血球样板计数法的基本原理和操作步骤。
2. 学习利用血球样板计数法对微生物进行计数。
3. 提高对微生物计数结果的分析能力。
二、实验原理血球样板计数法是一种利用显微镜直接计数微生物数量的方法。
该方法适用于各种微生物的计数，如细菌、酵母、真菌等。
计数原理是将一定稀释度的微生物悬液滴加到血球样板计数室中，在显微镜下直接观察并计数。
血球样板计数室由一块特殊的载玻片构成，其上有四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短横槽隔成两半。
每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格。
每个大方格分为16个中方格，每个中方格又分为25个小方格。
每个大方格中的小方格总数为400个，每个大方格的边长为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm³。
计数时，通常只计数四个四周大方格内的细胞数。
然后求出每个大方格的平均值，即可得出一个大方格中的平均细胞数。
再根据菌液稀释倍数，计算出1ml菌液中的总细胞数。
三、实验材料1. 血球样板计数室2. 显微镜3. 试管4. 吸管5. 微量移液管6. 细胞悬浮液7. 稀释液8. 滤纸四、实验步骤1. 准备工作：将血球样板计数室及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。
2. 制备细胞悬液：将细胞悬浮液吸取少许，注入试管中，加入适量的稀释液，搅拌均匀。
3. 稀释：根据细胞悬液的浓度，将细胞悬液进行适当的稀释，以便在计数时细胞数适中。
4. 计数：将稀释后的细胞悬液吸取少许，滴加到血球样板计数室的盖片边缘，使培养液自然渗透填满计数室。
等待一段时间，让细胞全部沉降到计数室底部。
5. 观察：将计数板放在显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在的位置，然后转换到高倍镜观察。
计数四个四周大方格内的细胞数，记录下来。
6. 计算结果：根据计数结果和菌液稀释倍数，计算出1ml菌液中的总细胞数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过血球样板计数法，得到酵母菌的计数结果为N个细胞/ml。
微生物大小测定及计数
2、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一菌体大小时，其测定结果是否相同，为什么？
答：测定结果不相同。因为在不同倍数的目镜下，细菌大小发生变化，而目镜测微尺每格大小不变，所以测定结果不同。
四、仪器和其他用品：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、接种环、血球计数板、显微测微尺、滴管、酒精灯
五、操作步骤：
1、微生物大小的测定
（1）取下显微镜右目镜，将目镜测微尺放在目镜镜筒内的隔板上，然后放上目镜透镜，将目镜装回镜筒。
（2）校正目镜测微尺：在低倍镜下调节焦距，当清晰看到镜台测微尺的刻度后，用推进器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别输出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。
（2）将血球计数板盖上盖玻片，用无菌毛细管吸取少量摇匀的酿酒酵母菌液，滴在盖玻片的一个顶点，待菌液从盖玻片另一对角流出为满。
（3）先在低倍镜下找到计数室，再用高倍镜计数。每小格内的菌数不能超过8个为宜。当每小格内的菌数过多时，适当稀释。
（4）任选5个中格计数（5个中格不可以挨着；酵母菌出芽计1个菌体；计数时，位于边线上的细胞，记上不记下，计左不计右）
（3）用同样的方法在高倍镜下和油镜下进行校正。并计算目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
（4）制酵母菌玻片：用接种环取菌在蒸馏水中涂抹，加热干燥，用美兰染色1’30”，流水脱色，自然干燥。
（5）先在低倍镜和高倍镜下找到菌株，再在油镜下测出酵母菌的长度和宽度。重复3次并记下平均值。
2、酵母菌的显微计数
（1）将血球计数板洗净，再用95%乙醇棉球擦洗，自然干燥。
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微生物大小及数量测定
一、实验目的：
实验五 霉菌的形态观察
实验五霉菌的形态观察、微生物的测微与计数一．实验目的1。
学习并掌握观察霉菌形态的基本方法,初步了解霉菌的形态特征及鉴别依据。
2.学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。
3.了解血球计数板的构造和使用方法。
学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。
4.总结并掌握细菌、放线菌和霉菌的鉴别方法.二、实验原理1。
霉菌定义及用途⏹霉菌不是真菌分类中的名词，而是丝状真菌的统称。
⏹霉菌在自然界中广泛分布,与食品的关系密切，是人类在实践活动中最早利用的一种微生物,如早期进行的酱和酱油的制作等。
⏹霉菌也可以使食品发生腐败变质或产生毒素，影响人体健康甚至危及生命。
2.霉菌特征⏹霉菌可产生分支的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子.⏹菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
⏹霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗的多(约3-10um），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。
因此,用低倍镜即可观察。
3。
霉菌的菌落⏹松：由于霉菌的菌丝较粗较长，菌丝体疏松,因而形成的菌落也比较疏松,呈绒毛状、棉絮状或蜘蛛网状;⏹大：菌落形态较大,一般比细菌和放线菌的菌落大几倍到几十倍,有时会长满整个培养皿；⏹干：外观干燥,不透明;⏹挑：菌落与培养基间的连接紧密，不易挑取;⏹颜色：由于基内菌丝、气生菌丝、孢子颜色不同，不同的霉菌菌落表面呈现不同的颜色，菌落正反面、边缘与中心颜色常不一致。
同一种霉菌在不同的培养基上或不同的培养条件下所形成的菌落特征可能有所不同.但同一种霉菌在相同的培养条件下和培养基上所形成的菌落特征相对稳定。
菌落特征是霉菌鉴定的重要依据之一.4、霉菌的菌丝形态⏹构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。
菌丝的宽度一般为3-10μm，比放线菌菌丝宽很多倍，其菌可伸长并产生分枝。
许多分枝的菌丝相互交织在一起，称为菌丝体。
⏹一部分菌丝存在于培养基质中吸收营养，称为基内菌线或营养菌丝。
细胞数的测定(血球计数板的使用方法)
、目的与要求了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。
二、原理用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。
血球计数板是一块特制的厚载玻片，其上由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小格（即16x25），另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分为16个小方格（即25X 16），但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个，每一个大方格边长为 1 mm则每一个大方格的面积为 1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm,所以计数室的容积为0.1 mm3实磴圈-石血球计弦板杓构jfi三、血球计数板的使用方法（一）菌悬液的制备为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5〜10个酵母为宜，可采用10倍系列稀释法。
（二）加菌悬液样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。
由盖玻片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。
静置5-10分钟。
（三）显微镜计数在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。
位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。
如数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。
当芽抱菌体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。
（四）计数时若使用刻度为25X 16 （大格）的计数板，则数四角的4个大格（即100小格）内的菌数。
如用刻细胞数的测定D申決甌裕牧我度为16X 25 （大格）的计数板，除数四角的4个大格外，还需数中央1个大格的菌数（即80 小格）。
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法血球计数板是临床实验室中常用的一种设备，用于进行血细胞计数。
正确的计数方法对于获得准确的结果至关重要。
下面将介绍血球计数板的计数方法，以便能够正确操作并获得可靠的结果。
首先，准备工作。
在进行血球计数之前，需要准备好所需的材料和设备，包括血球计数板、显微镜、血液样本、稀释液、计数计。
确保所有设备都经过清洁消毒，并且处于良好的工作状态。
接下来，进行稀释。
取一定量的血液样本，加入适量的稀释液进行稀释。
稀释的目的是使血液细胞在显微镜下能够清晰可见，并且数量适中，便于计数。
然后，装载计数板。
将稀释后的血液样本吸入到血球计数板的计数室中，填满计数室的深度。
注意避免气泡的产生，以免影响计数的准确性。
接着，进行计数。
将计数板放置在显微镜下，选择合适的倍率进行观察。
通过目镜和物镜的调节，使细胞能够清晰可见。
然后，在计数室的方格中进行血细胞的计数。
通常情况下，我们会选择若干个方格进行计数，然后取平均值作为最终结果。
最后，计算结果。
根据所选取的方格数目和计数结果，进行计算得出血液细胞的浓度。
根据浓度和稀释倍数，最终可以得出原始血液样本中细胞的数量。
需要注意的是，进行血球计数时，要保持专注和耐心，避免疏忽和错误。
另外，在进行计数前后，要对设备和材料进行清洁和消毒，以确保实验结果的准确性和可靠性。
总之，血球计数板的计数方法是一项重要的实验操作，正确的操作方法能够保证实验结果的准确性。
希望以上介绍能够帮助大家正确使用血球计数板，并获得准确可靠的实验结果。
微生物学实验5 酵母菌细胞总数和大小的测定
2022/9/12
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三．实验原理
➢ 利用血球计数板进行微生物计数的原理？ 总菌数（个/ml）＝5×104 A·B A：5个中方格中的总菌数，B：稀释倍数（＝1） ；
➢ 利用接目测微尺测定微生物大小的原理？
接目测微尺每格长度（mm）=10n/m n：两重合线间镜台测微尺格数 m：两重合线间接目测微尺格数
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四．实验内容
1. 利用血球计数板对所给酵母培养液进行计数：上下两 个计数室各计数一次
2. 微生物大小测定 ➢ 40 ×10放大系统下对接目测微尺进行标定； ➢ 在同样放大系统下测定所给酵母细胞大小：要求测定
10个细胞长和宽
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五. 实验结果报告与思考题
1. 计数：将2个计数室结果分别填入P14的表中，并按公式 计算菌体细胞浓度：
2. 大小测定
➢ 接目测微尺标定结果：高倍镜下两重合线间镜台测微
尺 格、目镜测微尺
格；
目镜测微尺每小格实际长度为
μm。
➢ 10个细胞测定结果填入 P17的表中，计算酵母细胞大小 的范围及平均值（宽×长）
3. 思考题：讲义P14 2，3； P17 3
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实验五 酵母菌细胞总数和大小的数板进行微生物计数的方法。 2. 学习并掌握接目测微尺的标定方法及微生物大小的测
定方法，增强微生物细胞大小的感性认识。
二．实验材料
1. 菌种：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液 2. 其他：血球计数板，接目测微尺，镜台测微尺，显微
血球计数实验报告
一、实验目的1. 了解血球计数板的使用方法及原理。
2. 掌握血细胞计数的实验操作流程。
3. 学会计算血细胞数量，为后续生物学实验提供数据支持。
二、实验原理血球计数板是一种用于计数血细胞或其他细胞群体的实验器材。
其原理是将一定体积的细胞悬液加入计数板中，在显微镜下观察计数板中的细胞数量，然后根据计数板的结构和悬液稀释倍数计算出细胞总数。
血球计数板由盖玻片和计数室两部分组成。
计数室是一块特制的载玻片，上面有四个长方形槽，槽内各有三个平台，每个平台上有九个大方格。
大方格又分为16个中方格，每个中方格又分为25个小方格。
每个大方格的体积为0.1mm³，其中包含400个小方格。
三、实验材料1. 血球计数板2. 显微镜3. 试管4. 吸管5. 微量移液管6. 细胞悬液7. 蒸馏水四、实验步骤1. 准备计数板：将计数板及盖玻片用擦镜纸擦拭干净，并将盖玻片放置在计数板上。
2. 稀释细胞悬液：将细胞悬液用微量移液管吸取适量，加入试管中，用蒸馏水稀释至适当浓度。
3. 加样：用吸管吸取稀释后的细胞悬液，滴加在计数板盖玻片的边缘，使细胞悬液自行渗入计数室。
4. 观察计数：将计数板放置在显微镜载物台上，调节焦距，使细胞清晰可见。
按照从左上角开始，逐个中方格进行计数，注意观察四个大方格内的细胞数量。
5. 计算细胞数量：根据计数结果，计算出每个大方格的平均细胞数，再根据计数板的结构和悬液稀释倍数，计算出细胞总数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：本次实验中，四个大方格内的细胞数量分别为120、150、130、140个。
2. 结果分析：根据计数板的结构，每个大方格包含400个小方格，因此每个大方格的平均细胞数为（120+150+130+140）÷4=135个。
根据实验原理，1ml菌液中的总细胞数为135×10000×M（M为悬液稀释倍数），例如，若悬液稀释倍数为100倍，则1ml菌液中的总细胞数为135×10000×100=1.35×10⁷个。
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法
血球计数板是一种常用的实验仪器，用于计算血球数量。
具体的计数方法如下：
1. 准备工作：首先，确保血球计数板干净，无污染。
可用洗涤剂和双蒸水进行清洗和冲洗，然后用无纹纸巾擦干。
2. 取血样：使用无菌针头采集一定量的血液样本，通常使用的样本量为0.02毫升。
3. 加样：将血液样本滴入血球计数板的计数区。
滴落的血液应均匀地分布在计数区的每个小方格内。
4. 观察：视觉放大镜或显微镜的帮助下，通过目镜观察计数区的血球数量。
5. 计数：随机选择若干个小方格，计算这些方格中血球的数量。
一般使用的计数面积为3个或4个方格。
6. 计算：将所选方格中的血球数量相加，然后乘以血球计数板的稀释倍数和倒干涉系数。
根据计算公式，可得出血球的浓度，常用单位为每立方毫米的血液中血球的数量。
7. 结果：将最终计算出的血球浓度记录下来，并报告给相关的医务人员或研究人员。
使用血球计数板进行血球计数时，需要严格按照操作规程进行，
避免出现污染或操作错误。
在完成计数后，要及时清洗血球计数板，以备下次使用。
利用血球计数板对酵母菌计数的
• 4．活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时， 即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个 酵母细胞。
酵母菌的血球计数板 计数技术
1 实验目的 利用血球计数板对酵母菌数量进行液、吕氏碱性美蓝（亚甲蓝） 染液） 2.2 器材和仪器：显微镜、血球计数板、镊子、厚盖玻 片（血盖片）、移液枪、吸水纸、擦镜纸4
• 3 实验原理及方法
• 血球计数板计数是一种常用的细胞计数法
血球计数板的使用注意事项
结果记录：
• 微生物名称
总菌数
个/ml
第一个 第二个 第三个 第四个 第五个
第一次 测定 第二次 测定
平均
中格
中格
中格
中格
中格
二、血球计数板的使用方法步骤
• 1．镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行镜 检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数；
• 2．加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专 用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻 片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防 止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与盖 玻片之间的矩形边缘为宜。多余培养液可用滤纸吸去；
• 1．16×25型的计数板 将计数室放大，可见它含16中格， 一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格） 计数 。 zxxk细胞个数／1mL＝100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数
微生物大小与数量的测定实验报告
微生物大小与数量的测定实验报告一、实验目的本次实验旨在掌握使用显微镜测量微生物大小的方法，以及学会运用血球计数板对微生物数量进行测定。
通过实验操作和数据处理，深入了解微生物的形态特征和种群密度，为后续的微生物学研究打下基础。
二、实验原理（一）微生物大小的测定微生物细胞的大小是微生物的基本特征之一。
使用显微镜测微尺可以较为准确地测量微生物细胞的长度、宽度和直径等参数。
显微镜测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形小玻片，上面刻有刻度；镜台测微尺是一块特制的载玻片，中央有精确的刻度，用于校正目镜测微尺。
（二）微生物数量的测定血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的工具。
它由一块特制的厚玻璃片制成，玻片上有四个槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每半边上面各刻有一个方格网。
方格网上刻有 9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。
但无论哪种规格，每个大方格的边长均为 1 毫米，盖上盖玻片后，计数室的容积是一定的。
因此，在一定体积的菌液中，通过计算微生物在计数室中的数量，就可以换算出菌液中微生物的数量。
三、实验材料与仪器（一）材料枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的菌悬液。
（二）仪器显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、盖玻片、滴管、擦镜纸、吸水纸等。
四、实验步骤（一）微生物大小的测定1、安装目镜测微尺将目镜测微尺装入目镜的隔板上，注意有刻度的一面朝下。
2、校正目镜测微尺（1）将镜台测微尺置于载物台上，先用低倍镜观察，找到镜台测微尺的刻度线。
（2）移动镜台测微尺，使镜台测微尺与目镜测微尺的刻度线平行，并使两者的“0”刻度线重合。
（3）换用高倍镜观察，找出两尺再次重合的刻度线。
分别记录目镜测微尺和镜台测微尺在重合线段内各自的格数。
微生物实验显微镜直接计数法
3.计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；
4.如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，作
为两个菌体计算；
5.清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用
水柱清洗，直到洗净为止。 6.一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。
特别注意
血球计数板均有编号，一人一 个，务必小心使用，若损坏，需 原价赔偿或赔偿原物！
25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。
计数室
（3）计数和计算方法
我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总
菌数。如图：
5个方格的总菌数
计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。
将酵母菌稀释液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），
4.显微镜计数 静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低
倍镜找到计数室，再换成高倍镜进行计数。
5.清洗血球计数板
计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净后自
行晾干，镜检观察每小格内无残留物为止。
五、注意事项
1.加样前先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；
三、实验材料
1.菌种：酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液(已
稀释100倍)
2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四、实验步骤
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物， 则需清洗后才能进行计数。
3.加样品
在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管 让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般
血球计数板计数实验
环工综合实验血球计数板计数实验实验报告环境科学与工程学院实验中心使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。
2.血球计数板计算微生物数量的优缺点是什么？血球计数板与平板稀释法对细菌个数进行测定，结果往往差别很大。
分析原因。
答：⑴将细菌（或其他微生物）以染料（例如结晶紫）染色后，直接以显微镜观察的方式计数，再推算回细菌数，所得即为总菌数，即死菌、活菌一并计算。
优点：简单、快速、重复性高。
不足：不能区分死细胞和活细胞，应用范围较窄；一些小的细胞在显微镜下很难看到；样品中菌液浓度不能低于106个/mL；不能用于菌丝体或呈链状而不分散的微生物测定⑵血球计数板计量时所得到的结果为死菌与活菌的总数，而平板稀释法培养得到的为活菌数目，因此结果差异较大。
四、实验步骤1.稀释：取接种酵母菌的斜面一支，加入5ml无菌水，摇晃试管一分钟，使形成菌液；将菌液倒入洁净的150ml锥形瓶中，加结晶紫三滴，摇晃2分钟，再加入无菌水至50ml。
2.镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗后才能进行计数。
2.加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。
注意不可有气泡产生。
4.显微镜计数：静止5分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。
在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。
一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。
每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的中格）中的菌体进行计数。
位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。
如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。
计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。
实验五微生物细胞大小的测定及显微镜下直接计数
主要实验内容：
一 显微镜下细菌细胞大小的测定 二 血球计数板测定微生物细胞的数量 （显微镜下直接计数）
一 显微镜下细菌细胞大小的测定
1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告
1 实验目的
学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法★ 学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小 的方法★★ 巩固显微镜油镜的使用方法
5 实验报告
（1） 目镜测微尺标定结果记录
物镜 低倍镜 油镜 物镜放大倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 目镜测微尺每格 代表长度（um）
100
×
×
0.5um
（2） 在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录
菌体 编号 1 2 3 4 5
….
宽 目尺 格数
长
菌体宽 平均值 目尺格 菌体长 平均值 （um） （um） 数
计数方法
在计数时，用含16个中方格的计数板，要按对角线方位 计数左上、左下、右上、下等四个中方格（100个小方格） 所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数 的平均值， 计数室每个小方格容积为： 0.1×10-3÷400＝1／4×106 (ml) 计算公式：
每ml菌液含菌数 = N ×K ×d
菌体大小 （平均值） 宽 ×长（um）
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二 血球计数板测定微生物细胞的数量
1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告
1 实验目的
掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。 学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。
2 实验原理
利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液 放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微 镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推 算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。
血球计数板的计数方法
血球计数板的计数方法1. 什么是血球计数板？血球计数板（hemocytometer）是一种用于血细胞计数的实验室设备。
它是一个有规定格数和深度的方形玻璃片，可以用于准确计算血液中红细胞、白细胞和血小板的数量。
2. 血球计数板的结构血球计数板通常由两个玻璃板组成，其中底板具有一个中心深度为0.1毫米的四方形计数室，该计数室被细致刻划成若干方格。
玻璃板上的一个或多个分格中的每个小格通常被标记为N个正方形小方格，每个小方格都具有已知的面积和深度。
3. 使用血球计数板进行计数的步骤步骤一：预处理•必须将计数室灭菌，以确保精确的计数结果。
•清洁和干燥两个玻璃板。
•准备所需的工作液，如盐水溶液。
步骤二：装填血液和计数室•使用大口针头在计数室的两个较深的边缘处，各自放入几滴血液样本。
•使用吸引力将血液吸入计数室中。
步骤三：均匀分布血细胞•轻轻倾斜和旋转计数室，以确保血液在计数室中均匀分布。
•这有助于避免细胞堆积，确保一个合适的血样。
步骤四：开始计数•将计数室放在显微镜上，并使用10倍或40倍增大放大率观察计数室中的血细胞。
•确保血细胞清晰可见，并避免过大的增大放大率，以免难以计数。
步骤五：计数规则•在计数室的每个小方格中计数所选的细胞类型，例如红细胞、白细胞和血小板。
•进行计数时，只计数完全在所选小方格内或者仅靠着四角的细胞。
•对每个细胞类型重复计数多个小方格，以获得更准确的统计结果。
步骤六：计算计数结果•根据所选细胞类型，确定每个小方格中的细胞数。
•使用统计公式计算细胞浓度：细胞数/已知的标定小方格数/标定小方格的面积。
4. 使用血球计数板的注意事项和技巧•需要精确的盖玻片技巧，确保计数室中没有气泡。
•观察血细胞时，确保不受外界因素干扰，如光线、尘埃等。
•避免在计数室内使用过多的血液，以免细胞重叠。
•进行计数时，要细心、耐心，并进行多次重复计数以确保准确性。
•定期校准计数室，以确保精确的计数结果。
5. 血球计数板的应用血球计数板广泛应用于临床诊断、疾病监测和实验室研究等领域。
血球计数板实验报告
一、实验目的1. 熟悉血球计数板的使用方法。
2. 学习微生物计数的基本原理和操作技巧。
3. 通过计数，了解酵母菌种群数量的变化规律。
二、实验原理血球计数板是一种常用的微生物计数工具，其计数原理是将一定稀释度的微生物悬液滴入计数室中，在显微镜下直接计数。
血球计数板通常由厚玻璃制成，中间有两个计数池，每个计数池内画有9个大方格，大方格内再分为25个中方格，每个中方格又分为16个小方格。
通过计数大方格内的微生物数量，可以计算出单位体积内微生物的总数。
三、实验材料1. 血球计数板2. 显微镜3. 酵母菌悬液4. 稀释液5. 移液器6. 试管7. 玻璃棒四、实验步骤1. 将血球计数板和盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。
2. 用移液器吸取适量酵母菌悬液，滴入计数池边缘，使悬液自行渗入计数池中。
3. 待悬液稳定后，将计数板置于显微镜载物台上，调整显微镜焦距，使计数室清晰可见。
4. 选择计数室中的一个大方格，按照从左上角到右下角的顺序，依次计数大方格内的微生物数量。
5. 计数完成后，计算每个大方格的平均微生物数量。
6. 根据稀释倍数，计算出单位体积内微生物的总数。
五、实验结果与分析本次实验共计数了5个大方格，每个大方格的平均微生物数量分别为：200、250、300、350、400。
根据稀释倍数，计算出单位体积内酵母菌的总数约为2.5×10^6个/mL。
从实验结果可以看出，酵母菌种群数量在一定时间内呈现增长趋势，这与酵母菌的生长特性相符。
六、实验总结1. 血球计数板是一种简单、方便、准确的微生物计数工具。
2. 在进行微生物计数时，应注意操作规范，避免误差。
3. 通过本次实验，加深了对微生物计数原理和操作技巧的理解。
七、注意事项1. 计数前应确保血球计数板和盖片干净、无尘。
2. 滴加悬液时，应避免产生气泡。
3. 计数时，应尽量保持显微镜焦距不变。
4. 计数过程中，应避免人为误差。
通过本次实验，我们掌握了血球计数板的使用方法，并了解了酵母菌种群数量的变化规律。
实验—血球计数板的使用
一、血球计数板的使用原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。
血球计数板是常用的计菌器之一。
血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。
在血球计数板上，刻有一些符号和数字，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。
但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数。
将每一中格放大，可见25个小格。
计数重复3次，取其平均值。
计数完毕后，依下列公式计算：酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100 ×400×10000×稀释倍数2．25×16型的计数板中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。
实验：应用血细胞计数板对酵母菌进行计数
为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某同学
进行了如下操作。其中操作不正确的是： C
A.吸出培养液进行计数之前将试管轻轻震荡几次 B.用滤纸吸去血球计数板边缘多余的培养液 C.在血细胞计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片 D.待酵母菌沉降到计数室底部，将计数板放在载物台 中央，在显微镜下观察
④需要做重复实验吗? 需要，可采取全班汇总的办法。
⑤怎样记录结果?记录表怎样设计? 时间、每个中格数量、中格平均班值、班级平均。。。
⑥如果一个小方格内酵母菌过多,难以数清,应采取怎 样的措施? 稀释培养液后再计数 ⑦对于压在小方格界线上的酵母菌,应当怎样计数?
应计上不计下，计左不计右的酵母菌
6、实验操作
次数
12345678
时间(天) 0 1 2 3 4 5 6 7
酵母菌 A 0.8 5.2 5.6 4.8 2 0.8 0.4 0.08
数
B 0.8 1.2 2 2.8 3.2 3.6 3.2 3
（106/m
l） C 0.8 0.4 0.1 0
0
0
0
0
1.请写出此小组研究的课题名称 _________________________。 此实验组设计的变量是:___________________________。
随着营养消耗、pH变化？、代谢产物的积累，使条件恶化，使
酵母菌的死亡率增加。
两个计数室
中
格
个 数每 数个 即中 样格 方酵 数母
菌
数
第0天 第一天 第二天 第三天 第四天 第五天 第六天 第七天
1212121212121212 1 2 3 4 5
5个中格 中酵母 总数
平均值
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实验五、微生物的计数——血球计数板法测定微生物细胞数量的方法很多，有分光光度法、显微直接计数法和平板计数法。
分光光度法比较简便，易操作，但是会使数据严重偏大。
而平板计数法则会使实验数据严重偏小。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。
两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。
本实验采用血球计数板法，主要目的是了解血球计数板法的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。
一、实验目的与要求
1、了解微生物计数常用的三种方法：分光光度法；平板计数法；血球计数板法。
2、了解血球计数板的构造和使用方法。
3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。
二、基本原理
利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。
此法的优点是直观、快速。
将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。
由于计数室的容积是一定的（0.1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。
由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。
血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方
格数都是相同的，即16×25=400小方格。
每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。
在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。
下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数
因1ml=1cm3=1000mm3，
=50000A·B（个）
同理，如果是16个中方格的计数板，设五个中方格的总菌数为A＇，则
三、实验材料
1）菌种：酿酒酵母菌
2）用品：显微镜、血球计数板、酒精灯、盖玻片、接种环、番红染液、胶头滴管。
四、实验方法
1、实验流程图
制备稀释液→加样→找计数室→计数
2、实验步骤
1）镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗后才能进行计数。
2）将酿酒酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。
3)取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
然后在显微镜下找到计数室。
若计数室沾有杂质或者菌体，要用蒸馏水冲洗计数板，用滤纸吸干其上的水分。
然后再放到显微镜下找到计数室。
4)将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。
5)静置片刻，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
6)计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。
如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个大方格的菌数（即80个小格）。
如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
本实验采用25格×16格的血球计数板。
计数时应数5个大方格。
7)计数。
每个样品重复计数2—3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），求出每一个小格中细胞平均数（N），按公式计算出每ml（g）菌悬液所含酵母菌细胞数量。
8)测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。
洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。
9）计算结果。
可用以下公式进行计算
（1）16格×25格的血球计数板计算公式：
细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数（2）25格×16格的血球计数板计算公式：
细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数五、实验结果
计算次数
各大格中细胞数
大格中
细胞总
数
稀
释
倍
数
总菌数
（CFU/mL或
g)
左上右上左下右下
中
间
第一次
第二次
第三次
第四次
六、结论与分析
1、用血球计数板计数时，那些步骤容易造成误差？应如何减少误差，力求准确？
2、如何判断所计数的酵母菌为活菌体？怎样计算样品中的活菌率？。